University of Yaounde I

Université de Yaoundé I
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Faculty of sciences
Faculté des sciences
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Department of Microbiology
Département de Microbiologie

EVALUATION D’UN NOUVEAU TEST RT-PCR

POUR LE DIAGNOSTIC DU PALUDISME à
Plasmodium falciparum
Présenté par
OTAM ATEBA Esther Epiphanie
étudiante Master II Microbiologie médicale

Directeurs:

Dr AYONG Lawrence Pr BOYOMO ONANA

Directeur de recherche au Centre Pasteur Maître de conférences Yde I
 PLAN

1-Introduction

2-Methodologie

3-Résultats attendus

4-Discussion et conclusion
Introduction 1/6
2022:
- 241 millions de cas
- 627000 décès
(rapport OMS, 2021).

Espèces plasmodiales :

Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
Plasmodium malariae
Plasmodium ovale
Plasmodium knowlesi
 Introduction 2/6
DIAGNOSTIC DU PALUDISME
Diagnostic clinique

Diagnostic biologique
• TDR
• Microscopie
• PCR(« nested » muliplexe
PCR)
 Introduction 3/6
Méthode Microscopie TDR Biomol
Cible parasite pHRP-2 ,LDH 18S rRNA
et aldolase
Sensibilité 95% 85% - 94,8% 98% - 100%
Spécificité 97% 88% - 94% 95,2% - 99%
Limite de 50 - 200 50 – 100 0,5 – 5
détection parasites/µl parasites/ µl parasites/ µl
de sang de sang de sang
Avantages Identification Rapide et Petite limite
du parasite, facile à utiliser de détection
stade , et ainsi
morphologie perçoit même
et espèces une faible
parasitémie

Limites Personnel Mutation qui Instruments

qualifié donne de faux chers
négatifs
Temps 2 heures 15 – 20 2 heures (Afoma Mbanefo , 2020)
minutes
 Introduction 4/6
Approches moléculaires
- Ciblent le plus souvent 18S rRNA/DNA.
- Plus sensibles lorsque l’ARN est
utilisée.

PfEXP1
-plus exprimée dans les stades asexués.

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Introduction 5/6

(plasmo DB)

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Hypothèse Introduction 6/6
La RT-PCR ciblant le gène Pf EXP1 aurait une
meilleure performance comparée la ‘’nested’’
multiplexe PCR et la PCR ciblant le gène PfEXP1 .

Objectif Général:

Déterminer les performances diagnostiques du

test RT-PCR ciblant le gène PfEXP1 dans le sang.
Objectifs Spécifiques :

Déterminer la sensibilité et spécificité

analytique du test .

Déterminer la sensibilité et spécificité

clinique puis les valeurs prédictives .

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 Matériels et Méthodes 1/3

Extraction ADN
 Selon le protocole du QIAamp® DNA Mini kit (250)

Extraction ARN
 Utilisant un protocole basée sur le trizol.

Échantillons cliniques
 134 enfants (5-15 ans) dans 3 écoles publiques d’Esse .

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 Détermination de la sensibilité analytique
Limite de détection en terme de parasitémie
50µl

sang infecté ( 450µl dans chaque tube)

(parasitémie connue) sang non infecté

Pour chaque dilution

200µl 200µl
extraction ADN extraction ARN
 Limite de détection en termes de concentration du matériel génétique:

5µl

ARN
(Concentration
connue)
Pour la RT-PCR 45µl DEPC water

5µl

ADN
(Concentration
connue) pour la PCR et
la nested multiplex PCR 45µl nuclease free water
Détermination de la spécificité analytique

But: vérifier si le test est spécifique à

Plasmodium falciparum.

 Faire une RT-PCR en ciblant la portion Pf EXP1

et faire une RT-PCR avec échantillon positif à
une autre espèce plamodiale et comparer.

 Faire une RT-PCR en utilisant l’ARN d’autres

parasites comme Leishmania donovani et
Trypanosoma brucei .
Détermination de la sensibilité clinique et la
spécificité clinique

But: Évaluer le nombre d’individus malades

réellement détecté positif par le test et le nombre
d’individus non-malade détecté négatif par le test.

 Faire une RT-PCR et une « nested » multiplexe PCR

et comparer les résultats.
THANKS FOR YOUR
KIND ATTENTION

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