LA PCR

Ce nouveau-n est sropositif pour un virus (HIV par exemple).

Sagit-il des anticorps de sa mre ou bien est-il rellement infect ?
Pour le savoir, il faut rechercher la prsence du virus lui-mme,
qui peut tre prsent en quantit trs faible dans lorganisme.
La PCR va permettre damplifier un indice de sa prsence, lADN (ou lARN)
viral.

La raction de polymrisation en chane ou PCR permet d'amplifier une quantit infime de matriel gntique pour obtenir des doses aisment dtectables
par des mthodes classiques (lectrophorse, spectrophotomtrie). Cette technique bouleverse le diagnostic de nombreuses maladies gntiques ou infectieuses.

ADN polymrase (enzyme de

rplication thermorsistante
provenant dune bactrie vivant
dans des sources chaudes).

Globules blancs
tester

Principe : reprer et multiplier

Amorces synthtiques
qui pourront sassocier
spontanment
lADN viral recherch.

Nuclotides

Un cycle trois temps

Un cycle de PCR comporte
trois temps : dnaturation,
amorage, longation.
Les cycles se succdent
automatiquement dans une
machine temprature
programmable (94C - 60C 72C, par exemple), au
rythme dun cycle toutes les
cinq minutes environ.

Temps : Dnaturation
La dnaturation est un simple
chauffage (vers 94C) qui
spare les deux brins de la
double hlice dADN cible.
Cette dnaturation rend
chacun deux accessible
aux amorces choisies par
lexprimentateur pour
leur complmentarit aux
brins cibles.

Temps : Amorage
Lamorage, ou
appariement des amorces,
se fait spontanment,
ds que la temprature
est abaisse vers 60C.
Quand le mlange
ractionnel est port
72C, lappariement
amorce/ADN
( loriginal ) fixe
spontanment une ADNpolymrase ( la
photocopieuse ).

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Contrairement aux molcules habituellement doses dans l'exercice du diagnostic mdical, l'ADN, porteur de l'information gntique, est une molcule naturellement capable de se rpliquer. Cette proprit a t exploite pour provoquer la multiplication de l'ADN dans un tube essai. On utilise pour cela des
enzymes qui catalysent habituellement la rplication de l'ADN (ADN polymrase).
De plus, la PCR amplifie une cible spcifique au sein du matriel gntique
prsent dans l'chantillon. On exploite le fait que les polymrases ncessitent pour
fonctionner une amorce, c'est--dire un dbut de copie dj ralise. Il suffit de placer dans le tube une copie synthtique correspondant aux extrmits du gne que
l'on veut amplifier. Ainsi, on peut utiliser des amorces qui correspondent aux extrmits d'un gne viral et la PCR n'amplifiera que l'ADN viral prsent dans l'chantillon, sans agir sur le reste du matriel gntique des cellules.

Perspectives : toutes dtections de gnes

La PCR a ouvert des perspectives quasi illimites dans le domaine du diagnostic. On peut citer la dtection d'un gne mut (cancrologie, maladies hrditaires) ou celle du gne d'un micro-organisme (virus bactrie ou parasites).
Le typage HLA est galement ralisable par PCR. La PCR est aussi un outil indispensable la biologie molculaire.

Sparation
Elongation
Amorce

Temps : Elongation
LADN-polymrase ralise alors llongation, ou synthse
dun brin complmentaire du brin initial. Elle allonge
lamorce en lui ajoutant successivement les nuclotides
complmentaires du brin copi.
Lespacement entre les amorces va finalement
dterminer la taille de la zone amplifie.
On rvle ensuite lADN obtenu, souvent par
lectrophorse, afin de mesurer sa taille et de vrifier
quelle correspond effectivement celle de la cible
comprise entre les amorces.

Nuclotides
Nuclotides

Amorce

ADN
polymrase

Pour en savoir plus : AIM n 11, Gros plan sur la PCR

A.I.M. 88 - 2003