Enzymologie Appliquée: - Biocapteurs Enzymatiques

Université Batna 2
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Microbiologie et de Biochimie
Master 1 Microbiologie Appliquée
Enzymologie Appliquée
(Chapitre 5)
- Biocapteurs enzymatiques
Chargé de cours : BENAMMAR Leyla
Année universitaire 2019-2020

Enzymologie Appliquée Master1 Microbiologie Appliquée
Chargé de cours : BENAMMAR Leyla Année universitaire 2019-2020
1. Historique
Le professeur Leland C. Clark est le père des biocapteurs. En 1956, il a construit une
électrode à oxygène pour mesurer la concentration d’oxygène dissous dans le sang. En 1962,
ce même biocapteur a été adapté afin de quantifier la concentration de glucose dans le sang.
Il a immobilisé la glucose-oxydase à une électrode à oxygène en utilisant une membrane de
dialyse et a estimé la concentration de glucose en surveillant la diminution de la concentration
d'oxygène. En 1973, Guilbault et Montalvo ont décrit un capteur d'urée basé sur l'uréase
immobilisée sur une électrode à membrane liquide sélective de l'ammonium pour doser l'urée
dans le sang et l'urine. Finalement, en 1975, le premier biocapteur commercial pour la
détection du glucose a été développé par Yellow Spring Instruments (YSI).
Depuis, des progrès remarquables ont été réalisés dans la construction des biocapteurs.
Ce domaine est désormais un domaine de recherche multidisciplinaire qui fait le pont entre les
principes des sciences fondamentales (physique, chimie et biologie) et les bases de la
micro/nanotechnologie, de l'électronique et de la médecine appliquée. Diverses enzymes
appartenant aux classes des oxydo-réductases, hydrolases et lyases ont été intégrées pour
construire des biocapteurs destinés à des applications dans le domaine de la santé, la médecine
vétérinaire, l'industrie alimentaire, la surveillance de l'environnement et la défense.
2. Définition
Les biocapteurs sont des dispositifs analytiques fondés sur le couplage d’une
substance bioactive, spécifique de l’espèce à détecter ou à doser, que l’on appelle « ligand »
ou biorécepteur, avec un transducteur physico-chimique fournissant un signal électrique de
sortie qui peut être ultérieurement amplifié, stocké et visualisé.
Un biocapteur typique est représenté dans la figure 1 ; il se compose des éléments

suivants :
1. L’analyte : l’échantillon ou la substance d'intérêt qui doit être détectée. Par

exemple, le glucose est un "analyte" dans un biocapteur conçu pour détecter le
glucose.
2. Biorécepteur (ligand): Une molécule biologique qui reconnaît spécifiquement

l'analyte. Les enzymes, les cellules animales ou végétales, les bactéries, une
protéine membranaire réceptrice, l'acide désoxyribonucléique (ADN) et les
2
anticorps sont quelques exemples de biorécepteurs. Le processus de génération

de signaux (sous forme de lumière, de chaleur, de pH, de changement de
charge ou de masse, etc.) lors de l'interaction du biorécepteur avec l'analyte est
appelé bioréception.
3. Transducteur : Le transducteur est un élément qui convertit une forme

d'énergie en une autre. Dans un biocapteur, le rôle du transducteur est de
convertir l'événement de bio-reconnaissance en un signal mesurable. Ce
processus de conversion d'énergie est connu sous le nom de signalisation. La
plupart des transducteurs produisent des signaux optiques ou électriques qui
sont généralement proportionnels à la quantité d'interactions analyte-
biorécepteur.
4. L'électronique : C'est la partie d'un biocapteur qui traite le signal transduit et

le prépare pour l'affichage. Il est constitué d'un circuit électronique complexe
qui effectue le conditionnement du signal, comme l'amplification et la
conversion des signaux de la forme analogique à la forme numérique. Les
signaux traités sont ensuite quantifiés par l'unité d'affichage du biocapteur.
5. L’afficheur (indicateur) : L'affichage consiste en un système d'interprétation

par l'utilisateur tel que l'affichage à cristaux liquides d'un ordinateur ou une
imprimante directe qui génère des nombres ou des courbes compréhensibles
par l'utilisateur. Cette partie consiste souvent en une combinaison de matériel
et de logiciel qui génère les résultats du biocapteur de manière conviviale. Le
signal de sortie sur l'écran peut être numérique, graphique, tabulaire ou une
image, selon les exigences de l'utilisateur final.
3. Caractéristiques d'un biocapteur

Chaque biocapteur possède certains critères. L'optimisation de ces propriétés se reflète
sur les performances du biocapteur.
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Figure 1. Principes de fonctionnement d’un Biocapteur.
3.1. Sélectivité
La sélectivité est la caractéristique la plus importante d'un biocapteur. La sélectivité
est la capacité d'un biorécepteur à détecter un analyte spécifique dans un échantillon
contenant d'autres mélanges et même des contaminants. Le meilleur exemple de sélectivité est
représenté par l'interaction d'un antigène avec l'anticorps. Classiquement, les anticorps
agissent comme des biorécepteurs et sont immobilisés à la surface du transducteur. Une
solution (généralement un tampon contenant des sels) contenant l'antigène est ensuite exposée
au transducteur où les anticorps n'interagissent qu'avec les antigènes. Pour construire un
biocapteur, la sélectivité est la principale considération lors du choix des biorécepteurs.
3.2. Reproductibilité
La reproductibilité est la capacité du biocapteur à générer des réponses identiques pour
un dispositif expérimental dupliqué. La reproductibilité est caractérisée par la précision et
l'exactitude du transducteur et de l'électronique d'un biocapteur. La précision est la capacité
du capteur à fournir des résultats identiques chaque fois qu'un échantillon est mesuré et
l'exactitude indique la capacité du capteur à fournir une valeur moyenne proche de la valeur
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réelle lorsqu'un échantillon est mesuré plus d'une fois. Les signaux reproductibles offrent une
grande fiabilité et robustesse à l'inférence faite sur la réponse d'un biocapteur.
3.3. Stabilité
La stabilité est le degré de susceptibilité aux perturbations ambiantes dans et autour du

système de biodétection. Ces perturbations peuvent provoquer une dérive des signaux de
sortie d'un biocapteur en cours de mesure. Cela peut entraîner une erreur dans la concentration
mesurée et peut affecter la précision et l'exactitude du biocapteur. La stabilité est la
caractéristique la plus cruciale dans les applications où un biocapteur nécessite de longues
étapes d'incubation ou une surveillance continue.
La réponse des transducteurs et de l'électronique peut être sensible à la température, ce

qui peut influencer la stabilité d'un biocapteur. Par conséquent, un réglage approprié de
l'électronique est nécessaire pour assurer une réponse stable du capteur. Un autre facteur qui
peut influencer la stabilité est l'affinité du biorécepteur, qui est le degré de liaison de l'analyte
au biorécepteur. Les biorécepteurs ayant une grande affinité favorisent soit une forte liaison
électrostatique, soit une liaison covalente de l'analyte qui renforce la stabilité d'un biocapteur.
Un autre facteur qui affecte la stabilité d'une mesure est la dégradation du biorécepteur sur
une certaine période de temps.
3.4. Sensibilité
La quantité minimale d'analyte pouvant être détectée par un biocapteur définit sa
limite de détection (LOD= Limit Of Detection) ou sensibilité. Dans un certain nombre
d'applications de surveillance médicale et environnementale, un biocapteur est nécessaire
pour détecter une concentration d'analyte aussi faible que ng/ml ou même fg/ml(*) afin de
confirmer la présence de traces d'analytes dans un échantillon.
Par exemple, une concentration supérieure à 4 ng/ml d'antigène spécifique de la

prostate (PSA) dans le sang est associée au cancer de la prostate pour lequel les médecins
suggèrent des tests de biopsie. La sensibilité est donc considérée comme une propriété
importante d'un biocapteur.
(*)
1fg= 10−15 g.
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3.5. Linéarité
La linéarité est l'attribut qui indique la précision de la réponse mesurée (pour un
ensemble de mesures avec différentes concentrations d'analyte) à une ligne droite,
mathématiquement représentée par y=mc, où c : est la concentration de l'analyte, y : est le
signal de sortie, et m : est la sensibilité du biocapteur. La linéarité du biocapteur peut être
associée à la résolution du biocapteur et à la gamme des concentrations de l'analyte testé. La
résolution du biocapteur est définie comme le plus petit changement de la concentration d'un
analyte qui est nécessaire pour modifier la réponse du biocapteur.
Selon l'application, une bonne résolution est nécessaire car la plupart des applications
de biocapteurs nécessitent non seulement la détection de l'analyte mais aussi la mesure des
concentrations de l'analyte sur une large gamme de travail. Un autre terme associé à la
linéarité est la plage linéaire, qui est définie comme la plage des concentrations d'analyte pour
laquelle la réponse du biocapteur change de façon linéaire avec la concentration.
4. Classification des biocapteurs

Les biocapteurs sont généralement classés en fonction de :
 La nature des biorécepteurs : la reconnaissance moléculaire
 Le transducteur : type de transducteur utilisé.
4.1. Classification des biocapteurs en fonction du biorécepteur

Le biorécepteur est l’élément principal du biocapteur, il sert à identifier l’espèce à
détecter grâce à son site sélectif. Le biorécepteur assure ainsi la reconnaissance moléculaire,
associée ou non à la transformation de l’espèce à mesurer.
On peut distinguer divers types de biocapteurs, classés en fonction de l’élément

sensible mis en œuvre comme biorécepteur : les capteurs enzymatiques, les capteurs
immunologiques, les capteurs à ADN et les capteurs cellulaires ou bactériens.
On distingue également 3 types de biorécepteur en fonction du mode d’association:
 Les biorécepteurs d’affinité ; qui fixent simplement l’analyte sans le modifier

ou le transformer comme les anticorps, les récepteurs membranaires, et les
acides nucléiques.
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 Les biorécepteurs métaboliques ; qui possèdent une activité catalytique dans

laquelle l’analyte cible est le substrat comme c’est le cas des enzymes, des
micro-organismes, et des tissus végétaux ou animaux.
 Les biorécepteurs biomimétiques ; sont des biorécepteurs synthétiques qui
miment le comportement des biorécepteurs naturels avec les mêmes affinités
et spécificités comme les aptamères et les Polymères à Empreintes
Moléculaires (MIPs).
Le choix du matériel biologique utilisé comme biorécepteur (ligand) dépend de

plusieurs critères comme :
 Sa spécificité,
 Sa stabilité,
 Sa durée de vie,
 La nature des substances chimiques ou biologiques à analyser.
Dans le tableau I, un ensemble de biorécepteurs (ligands) et leurs analytes

correspondants.
Tableau I. Différents biorécepteurs et leurs analytes de reconnaissance
Biorécepteurs Analytes
Enzyme Substrats (gamme très large).
Immunoglobulines Antigènes, toxines, haptène,…
Récepteur cellulaire Hormones, toxines, neurotransmetteurs,….
Protéine A IgG, IgM, IgA
ADN ADN, ARN
Protéine de transport Ions, substances divers
Ils existent différents types de biorécepteur :
 Les enzymes : les biocapteurs enzymatiques sont les plus utilisées et les plus
commercialisées. La réaction enzymatique assure donc la transformation d'un substrat,
par exemple la choline, le glucose, l'urée, etc. en produit de réaction détectable par le
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capteur chimique. En effet, elles présentent un grand nombre d’avantages notamment

la reproductibilité des lots mais par contre il peut y avoir une instabilité de leur
fonctionnement et la nécessité d’utiliser un cofacteur ou plusieurs enzymes associées
pour un même biocapteur on parle alors de biocapteurs multienzymatiques.
 Les anticorps : également appelés immunoglobulines (Ig), sont une classe de

protéines globulaires (~150 kDa) qui se lient à des structures antigéniques spécifiques
formant un complexe anticorps-antigène, et ils ont de nombreuses applications dans le
diagnostic clinique et la biotechnologie. Les anticorps sont utilisés comme
biorécepteurs dans la conception des immunocapteurs. Leurs principaux avantages
sont leur très grande sélectivité et spécificité vis-à-vis de l’agent à détecter.
 Les acides nucléiques : les biocapteurs nucléique sont basés sur les acides
nucléiques, ils utilisent les brins complémentaires des acides nucléiques comme
élément de reconnaissance biologique, par exemple en utilisant la réaction de liaison
entre deux chaînes d'ADN simple brin (ADNs) pour constituer un ADN double brin
(ADNd). Les séquences qui sont complémentaires d'une séquence d'acide nucléique
cible reconnue peuvent être générées, suivies et éventuellement immobilisées sur le
capteur.
 Les cellules : Les biocapteurs cellulaires utilisent des cellules vivantes comme
capteurs bio-spécifiques pour mesurer les conditions du microenvironnement
intracellulaire et extracellulaire, les paramètres physiologiques, puis produisent une
réponse par l'interaction entre les stimuli et la cellule. Les capteurs cellulaires peuvent
également être composés de dérivés d'organismes vivants (organelles…etc.). Au cours
des dernières années, des progrès importants ont été réalisés dans le domaine des
capteurs cellulaires pour le diagnostic précoce du cancer de la bouche et
l’identification des agents pathogènes. Apparemment, la principale limite des capteurs
cellulaires est la viabilité des cellules, qui peut être remarquablement affectée par des
facteurs tels que la durée de vie des cellules, la stérilisation et la biocompatibilité du
dispositif. Un autre facteur qui limite l'application des capteurs cellulaires est leur
faible sélectivité.
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 Les aptamères : sont de courtes molécules d'ADN ou d'ARN simple brin (ssADN
ou ssARN)(*) qui peuvent se lier sélectivement à une cible spécifique, y compris les
protéines, les peptides, les glucides, les petites molécules, les toxines et même les
cellules vivantes. Les aptamères prennent des formes variées en raison de leur
tendance à former des hélices et des boucles à un seul brin. Ils sont extrêmement
polyvalents et se lient à des cibles avec une grande sélectivité et spécificité (Figure 2).
Les aptamères sont utilisé comme biorécepteur biomimétique appelé souvent

Aptasensors (Biocapteurs à aptamère = Biopuce à aptamère). Ces derniers sont
chimiquement apparentés aux biocapteurs d'acide nucléique mais basé sur le
principe de l'anticorps et de l'antigène.
Un aptamère présente quelques avantages par rapport aux biocapteurs à base

d'anticorps, notamment une grande efficacité de liaison, moins cher, de petite taille et
évite les composants d'origine animale (car les anticorps utilisé sont d’origine
animale).
Figure 2. Structure d’un aptamère et modalité de fixation sur la cellule cible.
(*): ssADN et ss RNA, ss= single-stranded =simple brin=mono brin.
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 Les Polymères à Empreintes Moléculaires (MIPs) : sont des matériaux

synthétiques permettant de concevoir des biorécepteurs artificiels ayant des sites
récepteurs spécifiques d'un analyte donné. En raison de leur sélectivité, spécificité
prédéterminées, meilleure stabilité chimique et mécanique ainsi que leur faible coût de
production, les MIPs sont de bons matériaux alternatifs dans la production de
biocapteurs.
La synthèse de polymères à empreintes moléculaires (MIP) implique la
copolymérisation suite à une irradiation sous UV ou par effet thermique d'un
monomère fonctionnel et d'un agent de réticulation (dit « cross-linker », autour
d'une molécule modèle sélectionnée (molécule cible) et, après enlèvement de la
matrice, on obtient un polymère tridimensionnel avec des cavités imprimées
(molécules 3D) (Figure 3). Ces cavités sont complémentaires à la molécule matrice et
servent de sites de liaison pour la matrice ou de sites de liaison sélectifs pour les
analytes ayant une structure et une disposition de groupes fonctionnels analogues.
Figure 3. Représentation schématique du principe de la synthèse d’un polymère à empreintes

moléculaires (MIPs).
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4.2. Classification des biocapteurs en fonction du transducteur
Le transducteur est l’élément physique dans le biocapteur qui sert à traduire la

modification biochimique émis par le biorécepteur au contact de l’analyte à doser pour la
convertir en un signal électrique mesurable. Le type de transducteur est choisi en fonction :
 Des transformations biochimiques au niveau du biorécepteur (le type de réaction et les

substances libérées ou consommées : modification de charge, de pH, fluorescence,
changement de température,….etc.) ;
 Domaine d’utilisation : un biocapteur pour les analyses biomédicales doit être à usage
unique alors qu’un biocapteur pour les analyses environnementales doit être robuste.
La conception du transducteur devrait répondre aux exigences de la réalisation d'un

biocapteur:
 Ayant un temps de réponse court (inférieur à 3-5 mm);

 Susceptible d'être miniaturisé ;
 Compense les phénomènes d’interférences qui peuvent être causés par la température,
la lumière ou d'autres facteurs ;
 Fiable et robuste pour des applications pratiques;
 Facilement fonctionnalisable;
 De faible prix.
L'élément transducteur peut être classé selon leur mode de transduction (principe de
détection) en biocapteurs électrochimique, optique, thermique, gravimétrique …..etc.
4.2.1. Biocapteur électrochimique

Ces transducteurs sont basés généralement sur une électrode fonctionnalisée par un
ligand et fonctionnent le plus souvent dans un milieu liquide. Ces électrodes doivent être
stables en termes de conductivité et de propriétés chimiques pour être fiables, c'est pourquoi
les composés de platine, d'or, de graphite ou de silicium sont les plus couramment utilisés
pour les électrodes de bio-reconnaissance.
Le principe des biocapteurs électrochimiques repose sur l’immobilisation d’un

biorécepteur sur une électrode. Le contacte avec l’analyte provoque une réponse
biochimique, transformée en un signal électrique qui sera amplifié et mesurer.
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Les transducteurs électrochimiques restent parmi les plus utilisés grâce à leurs
multiples avantages liés à leur simplicité, leur faible coût et leur rapidité de réponse.
Quatre types de transducteurs électrochimiques sont utilisés pour la construction des

biocapteurs : potentiométrique, ampérométrique, conductométrique et impédimétrique.
A. Transducteur potentiométrique
Un biocapteur potentiométrique mesure la différence de potentiel entre l'électrode
active et l'électrode de référence dans une cellule électrochimique. Ce potentiel est considérée
comme un signal mesuré dans des conditions d'équilibre (dans lesquelles il n'y a pas de
circulation de courant= un flux de courant pratiquement nul), afin de ne pas provoquer
d'interférence avec la réaction. Les signaux mesurés sont en fonction de la concentration de
l'analyte cible calculé de manière logarithmique et sont utilisés pour la quantification de ce
dernier. En d'autres termes, la potentiométrie fournit des informations sur l'activité ionique
dans une réaction électrochimique.
Parmi les exemples d'applications des sondes enzymatiques potentiométriques, on peut

citer la détection de l'urée, du glucose et de la créatinine. Le grand avantage des biocapteurs
potentiométriques est leur sensibilité et leur sélectivité lorsqu'une électrode de référence très
stable et précise sera utilisée. Parmi les biocapteurs électrochimiques, les plus utilisés sont les
Electrode Sélective d'Ions (ISE) (Consulter le TD N°2).
B. Transducteur ampérométrique
Les biocapteurs enzymatiques ampérométriques constituent la majorité des
biocapteurs commerciaux disponibles sur le marché aujourd'hui. Ces biocapteurs fonctionnent
à un potentiel fixe par rapport à une électrode de référence dont la surface est recouverte d'un
matériau dans lequel sont immobilisées des biomolécules, des enzymes, par exemple et le
courant généré par l'oxydation ou la réduction des espèces à la surface de l'électrode active
qui sera mesuré et dont l'intensité est proportionnel à la concentration en solution de l’analyte
à doser.
Les biocapteurs ampérométriques sont basés sur des enzymes d’oxydo-réduction ;

leur attrait est donc dû à la disponibilité d'un grand nombre d'enzymes oxydo-réductases qui
peuvent agir sur les acides gras, les sucres, les acides aminés, les aldéhydes et les phénols.
Ces enzymes utilisent l'oxygène moléculaire comme accepteur d'électrons et produisent du
peroxyde d'hydrogène lors de la réaction avec leurs substrats. La consommation d'oxygène ou
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la production de peroxyde d'hydrogène peuvent être suivies comme mesure de la

concentration du substrat (analyte).
Figure 4. Représentation schématique d’un biocapteur ampérométrique.
C. Transducteur conductimétrique
Les réactions enzymatiques impliquent souvent des changements dans la concentration

ionique, qui modifient la conductivité électrique de la solution d'électrolyte. Cette
conductivité de la solution peut être mesurée par un biocapteur conductométrique en
appliquant une différence de potentiel entre deux électrodes parallèles (cathode et anode). En
conséquence, la mobilité des ions est augmentée en raison du mouvement des ions chargés
négativement vers l'anode, et des ions chargés positivement vers la cathode. La conductivité
de la solution d'électrolyte dépend uniquement de la concentration et de la mobilité des ions.
Un exemple des biocapteurs conductimétrique est le biocapteur d’urée, où l’enzyme

urease est immobilisé sur l’électrode pour catalyser l’hydrolyse de l’urée en produisant un
ensemble d’ions selon la réaction suivante :
La migration des ions induite par un champ électrique, permet la mesure de la

conductivité qui nous donne une indication sur la concentration initiale de l’analyte.
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4.2.2. Transducteurs optiques

Dans les biocapteurs basés sur des méthodes optiques, on mesure les changements des
propriétés optiques, telles que l'absorption de la lumière, la bioluminescence, la réflectance
(facteur de réflexion) et la fluorescence apportées par l'interaction du biocatalyseur avec
l'analyte cible.
A. Absorbance et réflectance
Dans un biocapteur enzymatique basé sur l'absorption de la lumière, les réactions qui
se produisent à la surface du transducteur entraînent des changements dans l'environnement
chimique, qui pourraient modifier les propriétés d'absorption de la lumière de l'élément de
bio-reconnaissance à des longueurs d'onde spécifiques.
Une seule fibre ou un faisceau de fibres est généralement utilisé pour apporter de la
lumière à la surface du transducteur du catalyseur d'analyse. Tout au long des réactions
enzymatiques, la lumière transmise ou réfléchie est renvoyée au détecteur par
l'intermédiaire de la ou les fibres, et est mesurée sous forme de signal pour surveiller les
modifications induites par l'élément de reconnaissance, l'analyte ou le produit des réactions
enzymatiques. Donc l’interaction entre le biorécepteur et l’analyte se traduit par l’apparition
d’une coloration dans le milieu réactionnel détectable à une longueur d’onde bien déterminée
provoquant une modification de l’absorbance.
B. Fluorescence
De nombreux biocapteurs optiques à base d'enzymes ont reposé sur la détection d'un
signal fluorescent provenant d'une réaction enzymatique dans laquelle les modifications du
signal de fluorescence peuvent être le résultat de :
 La consommation d'une substance fluorescente : nous avons une détection du type

light off (diminution de la fluorescence après contact avec la molécule cible).
 La formation d'un produit fluorescent : soit une détection de type light on

(augmentation de la fluorescence après contact avec la molécule cible).
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4.2.3. Transducteurs thermiques

Les capteurs enzymatiques thermiques sont basés sur le principe que la chaleur
dégagée par une réaction enzymatique peut être utilisée pour déterminer de manière
calorimétrique la quantité de substrat ayant réagi. Ainsi, les transducteurs thermométriques ne
nécessitent qu'une seule étape de réaction produisant une chaleur suffisante ou mesurable. Les
enthalpies molaires des réactions catalysées par des enzymes vont de <5 à 100 kJ/mol
Dans les capteurs enzymatiques thermiques, l'enzyme est immobilisée directement au

transducteur de température. Dans ce système, des changements de température aussi faibles
que 10-4°C peuvent être mesurés. Les principaux inconvénients de ce système sont les effets
thermiques non spécifiques et une dérive de base résultant du chauffage de l'appareil.
Le problème des effets thermiques non spécifiques est surmonté en soustrayant le

changement de température causé par l'écoulement du fluide à travers une colonne contenant
la matrice d'immobilisation (transducteurs thermométriques) sans l'enzyme des changements
de température observé avec l’enzyme immobilisée.
Le problème de la dérive est atténué en installant l'unité complète dans un bloc

d'aluminium à contrôle thermostatique. Ces exigences supplémentaires augmentent le coût
global du système.
5. Application des biocapteurs enzymatiques
Les biocapteurs ont un très large éventail d'applications qui visent à améliorer la
qualité de la vie. Cette gamme couvre leur utilisation pour la surveillance de l'environnement
et l’agriculture, la détection des maladies, la sécurité alimentaire et les industries alimentaires,
la défense et la découverte de médicaments.
5.1. Domaine de l’industrie alimentaire

Dans l'industrie alimentaire, la qualité et la sécurité, l'entretien des produits
alimentaires et la transformation sont des questions épineuses. Les techniques traditionnelles
d'expérimentation chimique et de spectroscopie présentent des lacunes dues à la fatigue
humaine, sont coûteuses et prennent beaucoup de temps. Des alternatives d'authentification et
de contrôle des aliments avec une mesure objective et cohérente des produits alimentaires, de
manière rentable, sont souhaitables pour l'industrie alimentaire. Ainsi, le développement de
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biocapteurs en réponse à la demande de techniques simples, en temps réel, sélectives et peu

coûteuses semble propice.
L'utilisation de biocapteurs dans les industries alimentaires peut être subdivisée en

différents groupes :
1. Détection de la qualité des nutriments : par mesure de la concentration ou la

détection de certains molécules utilisées comme additifs alimentaires comme : les
édulcorants (faire la différence entre détecter les édulcorants naturels et artificiels),
glutamate,….etc.
Exemple :
 Des biocapteurs ont été mis au point pour détecter et analyser les quantités des
édulcorants dans les aliments, et même pour différencier les édulcorants
naturels comme le saccharose et le glucose des édulcorants artificiels comme
le cyclamate et la saccharine.
 De multiples biocapteurs ont été développés pour mesurer les niveaux de
glutamate dans les aliments. Le glutamate est un additif alimentaire populaire
utilisé pour améliorer la saveur et réduire l'apport en sel des aliments, mais
l'ajout de glutamates n'est pas autorisé dans le lait, les huiles et les émulsions
de graisse, les pâtes, le cacao et les produits chocolatés, les jus de fruits.
Cependant, il a été constaté qu'il était nocif pour le corps humain et les
produits agricoles. Même si le glutamate est un neurotransmetteur naturel dans
notre cerveau, à des concentrations élevées, il peut induire une neurotoxicité,
causant des dommages aux muscles, aux reins, au foie et au cerveau. Sa
libération par le corps humain peut contaminer les sources d'eau pour inhiber
l'élongation des racines et la germination des semences dans les produits
agricoles.
2. Détection des agents pathogènes : Les biocapteurs ciblant la détection de pathogènes

tels que les bactéries et les champignons ont commencé il y a plus de deux décennies.
Dans les pathogènes bactériens, Salmonella sp. Staphylococcus aureus, et Escherichia
coli sont les plus importants agents pathogènes d'origine alimentaire en raison leur
taux plus élevé de contamination alimentaire et d'épidémies dans le monde.
Exemple : La présence d'Escherichia coli dans les légumes est un bio-indicateur de la
contamination fécale dans les aliments. E. coli peut être mesurée en détectant la
variation du pH causée par l'ammoniac (produit par la dégradation de l’urée par
l’uréase) à l'aide de systèmes de biodétection potentiométriques alternés. Le lavage
des légumes coupées en tranches avec de l'eau peptonée nous fournit la phase liquide.
Ce liquide sera utilisé pour effectuer les mesures.
3. Détection des toxines, produits chimiques toxiques et métaux lourds : Les métaux
lourds, tels que Ag+, As3+, Cd2+, Hg2+, Pb2+ et Zn2+, sont classés dans la catégorie des
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produits toxiques ; les contaminants forment des états d'oxydation stables et interfèrent
avec les voies métaboliques, ce qui conduit à des problèmes de santé.
4. Les procédés de fermentation : Les biocapteurs peuvent être utilisés pour surveiller
la présence de produits (enzymes, d'anticorps, antibiotiques, hormones ou de sous-
produits) ou de biomasse afin de mesurer indirectement les conditions du processus.
Les biocapteurs contrôlent avec précision l'industrie de la fermentation et produisent
des résultats reproductibles grâce à leur instrumentation simple, leur formidable
sélectivité, leur faible coût et leur automatisation aisée. Aujourd'hui, plusieurs types de
biocapteurs commerciaux sont accessibles ; capables de détecter des paramètres
biochimiques (glucose, lactate, lysine, éthanol, etc.) et sont largement utilisés en
Chine, occupant environ 90% de son marché.
5.2. Domaine médical

Dans le domaine des sciences médicales, les applications des biocapteurs se
développent rapidement. Les biocapteurs de glucose sont largement utilisés dans des
applications cliniques pour le diagnostic du diabète, qui nécessite un contrôle précis des
niveaux de glucose dans le sang. L'utilisation des biocapteurs de glucose dans le sang à
domicile représente 85 % du gigantesque marché mondial (Consulter le TD N°2).
L’une des principales applications des biocapteurs est la détection de biomolécules qui
sont soit des indicateurs d'une maladie soit des cibles d'un médicament. Par exemple, les
techniques de bio-détection électrochimique peuvent être utilisées comme outils cliniques
pour détecter les biomarqueurs protéiques du cancer.
Quelques exemples pour des molécules à détecter par biocapteurs enzymatiques :
 Le diagnostic du taux de cholestérol dans le sang est important dans les applications
cliniques dans domaine les maladies cardiovasculaires.
 La troponine cardiaque est le seul marqueur actuellement utilisé couramment dans le
cadre de diagnostic des maladies cardiovasculaires, car il est spécifique du tissu
myocardique, facilement détecté, et utile pour la prise de décision thérapeutique.
 La CRP, qui reflète différents aspects du développement de l'athérosclérose ou de
l'ischémie aiguë, est l'une des protéines plasmatiques connues sous le nom de
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protéines de phase aiguë et ses niveaux augmentent de façon spectaculaire au cours

des processus inflammatoires qui se produisent dans l'organisme.
 L'analyse des biomarqueurs dans les fluides corporels tels que le sang, l'urine et
autres est l'une des méthodes appliquées dans la détection des maladies et
principalement celle du cancer (PSA, PAP sont les principaux biomarqueurs du cancer
de prostate).
 Détection d'agents viraux (HIV, COVID-19, HSV-1,…….. .etc.).
5.3. Domaine environnemental

Le deuxième domaine dans lequel les biocapteurs enzymatiques devraient jouer un
rôle majeur est la surveillance de l'environnement. Il existe une demande croissante pour la
mesure de plusieurs classes de substances, y compris :
 Les produits chimiques toxiques, tels que les biphényles polychlorés, les
hydrocarbures polyaromatiques, les phénols, les dioxines, les peroxydes
organiques, etc. ;
 Les pesticides ;
 Les métaux lourds ;
 Les phosphates ;
 Les nitrates ;
 Les bactéries pathogènes ;
 DBO5 (Demande biochimique en Oxygène) ;
 DCO (Demande Chimique en Oxygène).
Les biocapteurs enzymatiques permettront d'effectuer des tests rapides, faciles à

utiliser et rentables sur place. Bien que les perspectives soient bonnes, le développement de
ces types de biocapteurs doit être approuvé par les organismes de réglementation avant qu'ils
ne soient largement appliqués. Cette approbation nécessitera de nombreuses démonstrations
réussies, dans des conditions très diverses rencontrées sur le terrain.
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Enzymologie Appliquée: - Biocapteurs Enzymatiques

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Université Batna 2

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Microbiologie et de Biochimie

Master 1 Microbiologie Appliquée

Chargé de cours : BENAMMAR Leyla

Année universitaire 2019-2020

Un biocapteur typique est représenté dans la figure 1 ; il se compose des éléments

1. L’analyte : l’échantillon ou la substance d'intérêt qui doit être détectée. Par

2. Biorécepteur (ligand): Une molécule biologique qui reconnaît spécifiquement

anticorps sont quelques exemples de biorécepteurs. Le processus de génération

3. Transducteur : Le transducteur est un élément qui convertit une forme

4. L'électronique : C'est la partie d'un biocapteur qui traite le signal transduit et

5. L’afficheur (indicateur) : L'affichage consiste en un système d'interprétation

3. Caractéristiques d'un biocapteur

Figure 1. Principes de fonctionnement d’un Biocapteur.

La stabilité est le degré de susceptibilité aux perturbations ambiantes dans et autour du

La réponse des transducteurs et de l'électronique peut être sensible à la température, ce

Par exemple, une concentration supérieure à 4 ng/ml d'antigène spécifique de la

4. Classification des biocapteurs

4.1. Classification des biocapteurs en fonction du biorécepteur

On peut distinguer divers types de biocapteurs, classés en fonction de l’élément

On distingue également 3 types de biorécepteur en fonction du mode d’association:

 Les biorécepteurs d’affinité ; qui fixent simplement l’analyte sans le modifier

 Les biorécepteurs métaboliques ; qui possèdent une activité catalytique dans

Le choix du matériel biologique utilisé comme biorécepteur (ligand) dépend de

Dans le tableau I, un ensemble de biorécepteurs (ligands) et leurs analytes

Tableau I. Différents biorécepteurs et leurs analytes de reconnaissance

Enzyme Substrats (gamme très large).

Immunoglobulines Antigènes, toxines, haptène,…

Récepteur cellulaire Hormones, toxines, neurotransmetteurs,….

Protéine A IgG, IgM, IgA

ADN ADN, ARN

Protéine de transport Ions, substances divers

Ils existent différents types de biorécepteur :

capteur chimique. En effet, elles présentent un grand nombre d’avantages notamment

 Les anticorps : également appelés immunoglobulines (Ig), sont une classe de

Les aptamères sont utilisé comme biorécepteur biomimétique appelé souvent

Un aptamère présente quelques avantages par rapport aux biocapteurs à base

Figure 2. Structure d’un aptamère et modalité de fixation sur la cellule cible.

(*): ssADN et ss RNA, ss= single-stranded =simple brin=mono brin.

 Les Polymères à Empreintes Moléculaires (MIPs) : sont des matériaux

Figure 3. Représentation schématique du principe de la synthèse d’un polymère à empreintes

4.2. Classification des biocapteurs en fonction du transducteur

Le transducteur est l’élément physique dans le biocapteur qui sert à traduire la

 Des transformations biochimiques au niveau du biorécepteur (le type de réaction et les

La conception du transducteur devrait répondre aux exigences de la réalisation d'un

 Ayant un temps de réponse court (inférieur à 3-5 mm);

4.2.1. Biocapteur électrochimique

Le principe des biocapteurs électrochimiques repose sur l’immobilisation d’un

Quatre types de transducteurs électrochimiques sont utilisés pour la construction des

Parmi les exemples d'applications des sondes enzymatiques potentiométriques, on peut

Les biocapteurs ampérométriques sont basés sur des enzymes d’oxydo-réduction ;

la production de peroxyde d'hydrogène peuvent être suivies comme mesure de la

Figure 4. Représentation schématique d’un biocapteur ampérométrique.

Les réactions enzymatiques impliquent souvent des changements dans la concentration

Un exemple des biocapteurs conductimétrique est le biocapteur d’urée, où l’enzyme

La migration des ions induite par un champ électrique, permet la mesure de la

4.2.2. Transducteurs optiques

 La consommation d'une substance fluorescente : nous avons une détection du type

 La formation d'un produit fluorescent : soit une détection de type light on

4.2.3. Transducteurs thermiques

Dans les capteurs enzymatiques thermiques, l'enzyme est immobilisée directement au

Le problème des effets thermiques non spécifiques est surmonté en soustrayant le