Etalement de crachat

Les crachats devant être considérés comme hautement contaminants et tous

pouvant être tuberculeux, il est conseillé de se fabriquer un petit écran de
protection derrière lequel on pourra se protéger.
Il est obligatoire de porter masque et lunettes.
Attention : Le matériel biologique manipulé étant hautement contaminable : évitez
tout courant d’air jusqu’au séchage complet des lames. Il est conseillé de
manipuler le soir avant de fermer le laboratoire et de laisser sécher la nuit quand le
labo est vide.
Il est impératif de connaitre tout d’abord les fiches consacrées aux prélèvements de
crachat / expectoration.
S’il y a possibilité d’effectuer une mise en culture elle sera toujours effectuée avant
toute autre manipulation de l’échantillon.

Principe :
Confection d’un frottis mince des zones les plus significatives d’un crachat, en vue
du diagnostic de la tuberculose pulmonaire (BK).
On peut aussi réaliser des étalements de crachat pour rechercher des champignons
filamenteux (Aspergillus), une pneumocystoses (Pneumocystis) ou pour confirmer
une pneumonie bactérienne.
Matériel :
Lames neuves et propres, flambées elles aussi juste avant l’étalement, pipette
Pasteur coupée courte (vers le bas de la partie évasée), poire à aspiration, masque
de protection, lunettes, gants si lésions des mains.

Éviter au maximum l’utilisation d’une öse : il y a formation d’aérosols,

extrêmement dangereux, de bactéries vivantes à chaque passage dans la flamme
lorsque l’öse n’est pas chauffée suivant une technique soigneuse et lente à
exécuter, c’est à dire progressivement, en commençant 5-8 cm avant l’extrémité et
en laissant sécher avant de flamber franchement.

Mode opératoire :
Le choix de la parcelle à étaler a une importance capitale : on prélèvera de
préférence le pus ou à défaut le mucus.

Lorsque l’on n’a pas l’habitude, on peut s’aider en mettant le crachat dans une
boite à crachats, translucide ou transparente, et la poser sur un fond noirsur un fond
noir. Y ajouter un peu d’eau stérile puis remuer : les petites particules de pus se
séparent et se voient plus facilement.
Prélever une ou plusieurs particules de pus avec la pipette Pasteur coupée courte et
une poire d’aspiration puis les déposer sur la lame par de petits mouvements de va
et vient afin d’étaler le crachat sur les 2/3 de la lame.

Pour la recherche de BK, le frottis ne doit pas être trop épais, il serait illisible ; il
ne doit pas être trop fin, ce qui diminuerait les chance de trouver les bacilles.

Il ne faut pas procéder par écrasement standard violent, c’est à dire superposer
deux lames et les serrer brusquement l’une contre l’autre, ce qui a tendance à
projeter des gouttelettes de crachats dans la pièce.
Cependant on peut uniformiser l’épaisseur de l’étalement avec une deuxième lame
mais sans trop appuyer pour éviter les projections.
Les lames sont ensuite soigneusement séchées à l’air libre pendant au moins 1 ou 2
heures, protégées des insectes par une petite cage en moustiquaire (si possible
métallique pour être stérilisable : chinois de cuisine). Il est bon de pouvoir les
chauffer un peu pour assurer le séchage (60-70°), par exemple en les mettant sur
une plaque noire, au soleil.
Si le frottis n’est pas parfaitement sec, il se décollera à la coloration. Il peut
sembler sec en surface et pourtant ne pas l’être au niveau de la lame. Si vos frottis
se décollent, laissez les sécher 24 ou 36 heures de plus.
On peut ensuite colorer les lames d’étalement, refroidies, par la technique de Ziehl
ou de Gram, selon la recherche effectuée.

Qualité
Il faut conserver les lames pour recherche de BK jusqu’aux prélèvements suivants,
pour pouvoir comparer.
Les lames pour d’autres recherches seront conservées au moins une semaine après
le rendu du résultat.
Sécurité
Attention : Une lame comportant des BK peut rester contagieuse après séchage et
même après coloration ! Il faut donc tout d’abord les désinfecter avec de la Javel
avant de les incinérer.
Aucune lame suspecte d’avoir porté des mycobactéries ne doit être réutilisée.