Expose de Biochimie Clinique - Dosage Du Glucose, Uree, Mycoglobine, Creatinine - PDF - Électrophorèse - Drépanocytose

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Expose de Biochimie Clinique - Dosage Du

Glucose, Uree, Mycoglobine, Creatinine
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Biochimie Clinique_ Dosage Du Glucose, Uree, Mycoglobine, Creatinine 
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UNIVERSITE DE NGAOUNDERE UNIVERSITY OF NGAOUNDERE
FACULTE DES SCIENCES FACULTY OF SCIENCES
Département des Sciences Biomédicales Department of Biomedical Sciences
Filière Sciences Biomédicale-Opon : Biomedical Sciences-Opon: Medical

Bactériologie et Virologie médicale Bacteriology and Virology
UE : BIOCHIMIE CLINIQUE
TRAVAIL PERSONNEL DE L’ETUDIANT
THEMES A DEVELOPER :
1. Principe et méthode de l’électrophorèse

2. Principe de méthode de dosage du glucose
3. Technique et principe de dosage de la créatinine,
4. Technique et principe de dosage de l’urée
5. Technique et principe de dosage l’acide urique
6. Les méthodes immunométriques dans le dosage de la myoglobine
Rédigé par :
KAGNING TSINDA Emmanuel

Matricule: 08N042FS
Niveau : Etudiant en Master 1
Option : Bactériologie et virologie médicale
Enseignant
Dr Jules Clément Nguedia Assob
Année académique : 2011-2012

:
:
Travail Personnel de l’Etudiant Kagning Tsinda Emmanuel
SOMMAIRE
SOMMAIRE ...........................................................................................................................................1
INTRODUCTION GENERALE ............................................................................................................3
THEME 1 : LE PRINCIPE ET LA PROCEDURE DE REALISATION DE .........................................4
I. INTERET DE L’ELECTROPHORESE .................................................................................4
II. PRINCIPE GENERAL (1) ...................................................................................................4
III. PROCEDURES DE REALISATION DE L’ELECTROPHORESE : méthode avec les
Instruments MIDIGEL© .................................................................................................................6
IV. APPLICATIONS DE L’ELECTROPHORESE ...............................................................12
VI.1 Application de l’Electrophorèse à l’identification des phénotypes moléculaires et des
génotypes ; cas de la drépanocytose (3).....................................................................................12
VI.2 Applicaon de l'électrophorèse en immunologie : séparaon des ancorps sériques .........14
Thème 2 : PRINCIPE ET PROCEDURE DE DOSAGE DU GLUCOSE ...........................................18
I. Intérêt clinique de la mesure de la Glycémie ........................................................................18
II. Méthode de Dosage : ...............................................................................................................18
II.1 Principe se basant sur la méthode enzymatique de Trinder ...........................................18
II.2 Procédure ..............................................................................................................................19
THEME 3 : PRINCIPE ET DOSAGE DE L'UREE PAR LA METHODE CINETIQUE ....................22
I. Intérêt du dosage .....................................................................................................................22
II. Principe du dosage enzymatique ......................................................................................22
III. Méthode de dosage ..............................................................................................................22
THEME 4 : PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE DE LA CREATININE ..................................25
I. INTERET CLINIQUE (10)..................................................................................................25
II. PRINCIPE ET METHODE DU DOSAGE : méthode photométrique colorimétrique selon la
réaction de JAFFE.............................................................................................................................25
II.1 Principe .....................................................................................................................................25
II.2 Méthode de dosage (8) ............................................................................................................25
THEME 5 : PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE DE L’ACIDE URIQUE (10) .........................30
I. INTERET DU DOSAGE ........................................................................................................30
II. PRINCIPE ET METHODE DE DOSAGE ........................................................................30
II.1 Principe .................................................................................................................................30
II.b Méthode Uricase de dosage ....................................................................................................30
THEME 6 : TECHNIQUES IMMUNOMETRIQUES DU DOSAGE DE LA MYOGLOBINE .........34
I. Généralités et Intérêt clinique du dosage de la myoglobine (11) .......................................34
Principe et méthode de dosage de la Créatinine Page 1/39

:
:
II. Méthodes du dosage ............................................................................................................34

1. Immunoprécipitation..............................................................................................................35
2. Immuno-turbidimetrie et immuno-néphélométrie...............................................................35
a. Immuno-turbidimetrie............................................................................................................35
b. immuno-néphélométrie : Cas particulier de la néphélémétrie (2) ......................................36
c. Méthode du dosage via l’Immuno-turbidimetrie et immuno-néphélométrie ....................37
CONCLUSION GENERALE ...............................................................................................................38
BIBLIOGRAPHIE ................................................................................................................................39
Principe et méthode de dosage de la Créatinine Page 2/39

:
:
INTRODUCTION GENERALE
La Biochimie clinique est l’application des aspects chimiques de la vie de l’homme

sain ou malade et l’application des méthodes chimiques employées au laboratoire pour le
diagnostic, le control d’un traitement, et la prévention des maladies. Pour ce faire, la
connaissance des principes et procédures de diagnostic des différents composés marqueurs
de pathologies est indispensable. Le cours sur la grande majorité de méthodes de dosages
biochimiques nous a été dispensé par le Dr Jules Clément Assob Nguedia. Cependant, il nous
est demande, dans le cadre d’un travail Personnel de l’étudiant, de présenter le principe et
méthode de réalisation de l’électrophorèse, le principe de méthode de dosage du glucose, la
technique et principe de dosage de la créatinine, de l’urée, de l’acide urique, et enfin, le
principe et méthode immunométriques dans le dosage de la myoglobine.
Introduction Générale Page 3/39

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:
THEME 1 : LE PRINCIPE ET LA PROCEDURE DE REALISATION DE

L’ELECROPHORESE
I. INTERET DE L’ELECTROPHORESE
De nos jours, l’électrophorèse est devenue une technique de routine dans les laboratoires
où on l’utilise pour séparer notamment les protéines et les acides nucléiques.
L’électrophorèse des protéines peut être réalisée sur des supports variés, notamment sur gel
de polyacrylamide ou sur gel d’agarose selon les informations recherchées. L’électrophorèse
de protéines sur gel d’agarose est la technique la plus aisée et la moins coûteuse à mettre en
œuvre dans un établissement d’enseignement avec un matériel limité. Elle nécessite
simplement une cuve à électrophorèse et une alimentation continue. (1)
Durant notre présentation, tout en précisant que l’électrophorèse peut aussi s’employer
pour séparer les acides nucléiques, nous tacherons de parler du principe général de
l’électrophorèse ensuite, nous présenterons ses applications selon qu’on se trouve en
hématologie et en immunologie.
II. PRINCIPE GENERAL (1)
L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des
molécules portant des charges électriques différentes migrent à des vitesses différentes
lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique.
L’électrophorèse sur support ou électrophorèse de zones permet de stabiliser la phase

liquide grâce à l’utilisation d’un support poreux imprégné d'un solvant tamponné.
Principes de la migration électrophorétique : la migration dépend de plusieurs facteurs :
 de la mobilité électrophorétique U, qui est fonction de la charge et de la géométrie de
la particule. Une particule de charge électrique Q, placée dans un champ électrique E,
est soumise à une force F qui l'entraîne vers l'électrode de signe opposé :
 Des forces de frottement f, dues à la viscosité du milieu , s'opposent à la migration

de la particule, et ce d'autant plus que la particule est grosse (r = rayon) et que la
vitesse de migration (v) est grande :
Principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse Page 4/39

:
:
(N.B. Le coefficient de viscosité dépend de la température)
Il arrive un moment où ces deux forces s'équilibrent, et la particule se déplace

alors à vitesse constante; on peut alors écrire:
On définit pour chaque particule sa mobilité µ, de manière indépendante du champ électrique,

par la relation :
La mobilité est une caractéristique de chaque particule; il est donc possible d'effectuer une
séparation en se basant sur cette propriété.
La charge Q est fonction du pH isoélectrique de la particule et du pH du solvant : on

appelle pH isoélectrique d'une particule (pHi ou pI) le pH pour lequel cette particule ne migre
pas dans un champ électrique (ceci est une définition expérimentale). Pour les molécules de
petite taille, on peut prévoir la valeur du pHi en calculant le pH isoionique, pH pour lequel la
charge nette est nulle, à partir des pKa des différents groupements ionisables de la molécule;
mais cela n'est pas possible pour les macromolécules, car leur environnement ionique modifie
notablement leur charge réelle. La différence pH - pHi détermine le signe de la charge Q
d'une particule. (1)
A chaque acide aminé correspond une valeur de pH isoélectrique, (pHi auquel les acides
aminés sont électriquement neutres). En dehors de ce " point isoélectrique " les acides aminés
sont globalement chargés et migrent sous l'effet d'un champ électrique. Ainsi, en travaillant à
un pH fixé (dans une solution tampon), on peut séparer différents acides aminés par
Principe et méthode de réalisation de l’électrophorèse Page 5/39
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II. Méthodes du dosage ............................................................................................................34

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THEME 1 : LE PRINCIPE ET LA PROCEDURE DE REALISATION DE

II. PRINCIPE GENERAL (1)

L’électrophorèse sur support ou électrophorèse de zones permet de stabiliser la phase

 Des forces de frottement f, dues à la viscosité du milieu , s'opposent à la migration

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(N.B. Le coefficient de viscosité dépend de la température)

Il arrive un moment où ces deux forces s'équilibrent, et la particule se déplace

On définit pour chaque particule sa mobilité µ, de manière indépendante du champ électrique,

La charge Q est fonction du pH isoélectrique de la particule et du pH du solvant : on

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