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Les plasmides
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• Qu'est ce qu'un plasmide ?
http://acces.ens- • Principe de l'utilisation des plasmides
lyon.fr/biotic/biomol/outilsbm/html/pl • Le plasmide pBR329
asmide.htm • Le plasmide Ti

Qu'est ce qu'un plasmide ?

De nombreuses bactéries contiennent un ou plusieurs

plasmides (exemple : le plasmide Ti d'Agrobacterium
tumefaciens)
La plupart des plasmides sont des molécules
d'ADN circulaires double-brin, beaucoup plus petite
qu'un chromosome : de 3000 à 100000 paires de bases
(N.B. : il existe des plasmides linéaires)
Ce sont des unités de réplication autonome. Ils
possèdent leur propre origine de réplication et se
répliquent en général de manière indépendante du
chromosome bactérien. C'est cependant la machinerie de
la cellule qui assure leur réplication.
Ils sont optionnels pour la cellule hôte, c'est à dire qu'il
ne sont pas indispensables au métabolisme de la cellule
dans des conditions normales de croissance (ils peuvent
être alors perdus).
Les plasmides peuvent coder pour diverses fonctions.
Certains codent pour des enzymes qui inactivent des
antibiotiques bien définis. De tels plasmides
R (plasmides portant un gène de résistance) rendent
habituellement la cellule hôte résistante à l'antibiotique
considéré.
Le facteur F est un plasmide particulier qui joue le rôle
dans la sexualité des bactéries. Il peut-être soit absent
des cellules (F-) soit présent sous deux états possibles :
autonome et indépendant du chromosome (cellules F+)
ou intégré dans le chromosome bactérien (cellules HFR).
Certains plasmides (mais pas tous) possèdent
l'information nécessaire pour se transférer eux-mêmes
d'une cellule à l'autre par le processus de conjugaison.
Les plasmides sont largement utilisés dans les techniques
de l'ADN recombinant. Un plasmide
recombinant (manipulé génétiquement) est souvent
désigné par le préfixe "p" (par exemple pBR329).
Principe de l'utilisation des plasmides

Les plasmides sont utilisés comme vecteur de clonage

Par des expériences de recombinaison in vitro, on sait
intégrer dans la molécule d'un plasmide un fragment
d'ADN provenant d'une autre source. On obtient ainsi un
plasmide recombiné ou plasmide chimère.
On peut faire pénétrer ces molécules recombinées dans
des cellules de Escherichia coli dépourvues de plasmide
(transformation).
On peut repérer les cellules qui ont reçu une molécule de
plasmide grâce aux gènes du plasmide qui sont
sélectionnables (résistance à une drogue).
Parmi ces cellules, on pourra, dan certains cas,
reconnaître (ou sélectionner) celles qui portent un
plasmide ayant intégré un fragment particulier de l'ADN
étranger.
L'ensemble des descendants d'une telle cellule constitue
un clone. On dit que l'on a cloné un fragment d'ADN.
Ce fragment sera beaucoup plus facile à obtenir, à
purifier, et à étudier dans un clone Escherichia coli que
dans son contexte d'origine (noyau d'une cellule de
mammifère par exemple).

Les plasmides sont utilisés comme vecteur

d'expression
Une fois un fragment d'ADN cloné dans un plasmide on
peut réussir à faire exprimer les gènes qu'il porte dans les
cellules d'Escherichia coli. Cette expression nécessite la
transcription de ce fragment et la traduction du
messager. On peut ainsi faire fabriquer à Escherichia
coli des protéines étrangères (par exemple, l'insuline
humaine, l'hormone de croissance humaine).

Les plasmides sont utilisés comme vecteur pour la

transformation de cellules eucaryotes
On sait depuis quelques années introduire et faire
exprimer de l'ADN dans des cellules eucaryotes (levure,
cellules de Mammifères en culture, cellules résultant des
premières divisions de l'oeuf d'un mammifère par
exemple). On peut ainsi après un clonage
dans Escherichia coli réintroduire le gène cloné dans des
cellules eucaryotes et le faire exprimer.
Exemples de plasmides

Plasmi
Descriptions Cartes géniques
des
ADN circulaire
pBR32 bicaténaire.
Taille : 4150 pb.
9 Utilisation : vecteur
biologique.

C'est un plasmide
artificiel (constructio
n génique) fabriqué à
partir de plasmides
naturels bactériens -
essentiellement Esch
erichia coli.
Il est constitué de
4150 paires de bases
dont la séquence est
connue. Il porte outre
une région
indispensable à sa
propre réplication,
trois gènes capables
de conférer la
résistance à un
antibiotique.
- AmpR, résistance à
l'ampicilline
- TetR, résistance à la
tétracycline ;
- CamR, résistance au
chloramphénicol.
L'action de ces gènes
se fait par
l'intermédiaire
d'enzymes qui
détruisent ou
modifient les
molécules de
l'antibiotique
(exemple
pénicillinase codée
par le gène Ar ).
Le plasmide pBR329
se maintient dans les
cellules hôtes
(environ 15 copies
par cellule) si celles-
ci sont cultivées en
présence
d'ampicilline, de
tétracycline ou de
chloramphénicol
(pression de sélection
indispensable pour le
maintien du
 plasmide).
ADN circulaire
Ti bicaténaire
Taille : 200000 pb
Utilisation : vecteur
biologique

C'est un plasmide
bactérien, présent
chez Agrobacterium
tumefaciens
Nommé Ti-
DNA pour Tumor
inducing-DNA., ce
plasmide est
responsable de la
virulence
d'Agrobacterium
tumefaciens. Il est
composé de deux
parties principales.
La première est
appelée le Ti-T-
DNA pour Tumor
inducing-
Transferred
DNA.. C'est le Ti-T-
DNA qui est inséré
dans le génome
végétal et qui code
des gènes permettant
la synthèse des
opines et provoquant
l'apparition de
tumeurs cancéreuses.
La deuxième partie
est composé de gènes
impliqués dans les
mécanismes
cellulaires du
transfert du Ti-T-
DNA et est appelée
zone vir. D'une taille
de 35 kb, elle
contient les gènes
responsables de
l'activation de la
virulence
d'Agrobacterium
tumefaciens, de
l'excision du Ti-T-
DNA et de son
transport au sein de
la cellule végétale
infectée. Le Ti-T-
DNA a une structure
particulière. En plus
des gènes codant
pour la synthèse des
opines (locus ocs),
d'auxines (locus
tms), de cytokinines
(locus tmr) et autres
facteurs provoquant
la tumeur (locus tml),
il est bordé par des
séquences répétitives
de 25 paires de bases
qui délimitent sur le
Ti-DNA la région
qui doit être excisée.