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Gntique 2

Hrdit cytoplasmique
1866 : Mendel publie ses lois de l'hrdit partir d'tudes menes chez le Pois Pisum salivum : Premire loi : uniformit des hybrides en premire gnration Deuxime loi : sgrgation des caractre en seconde gnration Troisime loi : Disjonction indpendante de caractre en F2 Les chromosomes, support de l'hrdit... Dans les annes 1950-1960, on a dcouvert de l'ADN et des ribosomes dans les mitochondries et les chloroplastes Comment expliquer la prsence d'ADN dans les mitochondrie et chloroplaste ? Selon Margulis et Taylor, les cellules eucaryotes proviennent de l'association de plusieurs procaryotes : on parle de thorie endosymbiotique Absorption d'une bactrie par une cellule eucaryote primitive et formation d'une cellule eucaryote htrotrophe. Les bactries absorbes deviennent des mitochondries et pratiquent la respiration Ralisation d'une cellule eucaryote autotrophe par absorption d'une bactrie photosynthtique par une cellule eucaryote htrotrophe. Ces bactries deviennent des chloroplastes, ses membranes internes ont une origine bactrienne

Quels sont les faits qui tayent cette thorie ? La taille des mitochondries et des chloroplastes est semblable celle des bactries Chacun de ces organites possde un matriel gntique (ADN) qui lui est propre Chacun de ces organites possde le matriel ncessaire pour la synthse protique(ARNt, ribosomes, polymrases) Chacun de ces organites peut se diviser par tranglement mdian (aprs avoir dupliqu le matriel gntique) La ressemblance entre un chloroplaste de cellule eucaryote actuelle et d'une bactrie photosynthtique (cyanobactrie) est conforte par plusieurs caractres : L'ADN du chloroplaste est circulaire et non associ des histones comme chez les bactries Cet ADN code pour une partie des protines des chloroplastes (organites semi autonomes) Une partie de la synthse de protines chloroplastiques s'effectue dans le chloroplaste, grce a la prsence de ribosomes qui prsentent des analogies avec les ribosomes bactriens La division des chloroplastes suit un rythme indpendant de la division du noyau Tour chloroplaste provient d'un plaste prexistant Chez les plantes suprieurs, les deux membranes de l'enveloppe du chloroplaste sont diffrentes : la membrane interne ainsi que la membranes des thylakodes prsentent des analogies avec les membranes bactriennes

Gntique 2 Certains gnes contenue dans l'ADN des plastes ou des mitochondries peuvent tre transfrs au gnomes nuclaire, mais les gnes ne sont jamais perdus Conclusions Il existe un gnome nuclaire et des gnomes extra-nuclaires ! Il existe une hrdit mendlienne et une hrdit non mendlienne ! DOLLY : Le fait que le clonage de Dolly ait eu un tel succs est d au fait que ce fut le premier mammifre n sans une fcondation d'un ovule par un spermatozode ait eu lieu, par la technique de la constitution d'un embryon par fusion en laboratoire d'un noyau cellulaire et d'un ovule nucl : la brebis ainsi ne possde un patrimoine nuclaire identique un individu dj existant. Cependant, Dolly n'est pas le clone parfait de Belinda. En effet, dans l'ovule utilis, comme dans toutes les cellules, se trouvaient des organites, les mitochondries (les usines nergtiques de la cellule), qui possdent leur propre patrimoine gntique. Dolly est donc aussi le fruit de la brebis qui a donn son ovule. Les chercheurs se sont vite aperus qu'elle vieillissait rapidement. L'arthrite prmature de Dolly a t attribue au fait que la cellule prise sur Belinda alors ge de 6 ans disposait de tlomres raccourcis. Cela est d au fait que la longueur des tlomres est rduite aprs chaque division cellulaire. De fait, Dolly avait un patrimoine gntique vieux de 6 ans ds sa naissance. 3 thmes seront abords dans le cours : - Les strilits mles cytoplasmique chez le vgtaux - L'hrdit chloroplastique - Les pathologies mitochondriales humaines

Chapitre 1 : Les strilits mles cytoplasmique chez le vgtaux


Qu'est ce la strilit mle cytoplasmique ? C'est un systme de strilit mle qui met en cause la fois le cytoplasme par des gnes mitochondriaux et le noyau par des gnes nuclaires particuliers (de strilit ou de restauration fertilit). Le mcanisme de strilit est port par le gnome mitochondrial. Si dans le noyau appartient des gnes de restauration de la fertilit, alors la plante sera fertile La SMC (strilit mle cytoplasmique) a donc un dterminisme nucleo-cytoplasmique Plante monocie : sur le mme pied, prsence de fleur mle et femelle SMC : Elle existe l'tat naturel ! Des individus mles striles et des individus hermaphrodites peuvent, par exemple, coexister au sein d'une population naturelle : on parle de gynodiocie Elle concerne aujourd'hui plus de 150 espces

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Elle peut galement tre observe lors de croisements inter spcifique ou intra spcifique. Des plantes rgnres issues de fusion de protoplastes peuvent prsenter une SMC Le dterminant de la SMC a toujours t identifi comme tant un dterminant mitochondriales. Sa transmission la descendance n'est donc pas mendlienne mais uniquement maternelle (cas des angiospermes ou les mitochondries sont hrites du parent maternel)

L'ADN mitochondriales (ADNmt) des vgtaux : L'ADNmt se prsente sous la forme d'une molcule circulaire (vgtaux et animaux) Sa transmission est de type maternel (angiospermes) Sa taille est importante : 200 2400 kpb (respectivement pour le chou et les cucurbitaces). titre de comparaison, ADNmt de levure : 68-75 kpb Outre sa taille, le gnome mitochondriales des plantes suprieures se caractrisera sa plasticit et son organisation Il existe des chromosomes maitres en perptuel remaniements. Ces remaniements s'expliquent par la prsence de squences de squences rptes directes ou indirectes et aboutissent la formation d'un gnome multipartite. des recombinaisons inter et intra molculaire sont possible

Gntique 2 Le gnome mitochondriales code : - 3 ARNr (26S, 18S, 5S) - plusieurs protines ribosomales - plusieurs ARNt - les sous units nad1 et nad7 du complexe NADH deshydrogenase ou complexe I - l'apocytochrome b du complexe bc1 ou complexe III - 3 sous units du complexe Cyt C ou complexe IV - au minimum 4 sous units du complexe ATP synthse f0-f1 ou complexe V

Quelques rappels s'imposent ... La respiration se divise en 3 grandes phases : 1. Glycolyse (se droule dans le cytosole) 2. Le cycle de Krebs (se droule dans la matrice mitochondriale) 3. La chane de transport d'e- et la phosphorylation oxydative (se droule dans la membrane interne mitochondriale) Dans le cycle de Krebs, le rendement par molcules de Glc : 2 ATP, 2 FADH2, 6 NADH transpoteurs d'e-

Gntique 2 Le gnome mitochondrial code, notamment, diverses sous units de la chane respiratoire (elle mme composs de 4 complexes et de l'ATP synthase) L'altration de ces gnes ou d'autres gnes mitochondriaux, peut conduire la SMC Intrt de la SMC dans les schmas de slection : Il est intressant, en amlioration vgtales, de crer des varits de type hybrides, lesquelles prsentent souvent des performances agronomiques suprieures au meilleur de leur parent (par exemple un rendement ou une rsistance accrue)

On parle de vigueur hybride ou d'effet htrosis La plante fille aura une meilleur rsistance que les 2 parents L'effet d'htrosis se traduit par la supriorit pour de nombreux caractres de l'individu hybride (vigueur, rendement, rsistance aux maladies, prcocit...) sur la moyenne des 2 parents ou sur le meilleur des 2 parents Il faut viter l'autofcondation des plantes on castre donc les fleurs mles du mas qui est cens tre la "femelle" la technique fonctionne bien mais fastidieuse car il faut arracher les fleurs Schma de slection "classique" chez le mas : Parent 1 Parent 2 Slection des parents gniteurs Slection des descendants en vrifiant qu'ils possdent le caractre intressant des parents Obtention de lignes pures (autofcondation) Hybridation (croisement des lignes pures) La SMC peut tre utilis dans les schmas de slection pour raliser des croisements contrls et viter, par exemple, la castration de la plante

Gntique 2 1re tape : produire suffisamment de graines du gniteur mle strile cytoplasme S rf/rf SMC donc plante femelle X N rf/rf

ligne mainteneuse hermaphrodite

S rf/rf

S rf/rf

S rf/rf

(plantes femelles)

S = Strilit N = Normal Le cytoplasme est de type strile Gne rf = gne de la restauration de la fertilit Le cytoplasme induit la strilit et le noyau ne rinstaure pas la fertilit car rf est rcessif La fleur mle avorte systmatiquement car il y a strilit mle Le gnome mitochondrial est transmis par la mre 2me tape : restauration de la fertilit S rf/rf Plante femelle X N Rf/Rf

Plante hermaphrodite

S Rf/rf

S Rf/rf

S Rf/rf

(plantes hermaphrodites)

Si l'hybride est cultiv pour ses graines, la restauration de la fertilit est souhaitable pour permettre une autofcondation de ces plantes lors de la production agricole L'hybride gnr est htrozygote pour le gne Rf (dominant) et donc mle fertile malgr son cytoplasme inducteur de strilit Que savons-nous des gnes responsables de SMC ? Ils sont tous diffrent en squence (d'un systme l'autre) c'est dire qu'il n'existe pas un gne particulier qui soit pour la SMC Ils ne prsentent pas d'homologie part 2 exceptions Tous les gnes responsables de SMC peuvent tre considrs comme des orf chimrique rsultant des nombreuses recombinaisons du gnome mitochondriale 6

Gntique 2 Ces gnes sont co-transcrits avec un gne mitochondrial essentiel. Cette contrainte reste une caractristique essentielle du maintien de la SMC dans les populations naturelles

Que savons-nous des polypeptides cods par ces gnes ? La plupart du temps, ils sont prsents dans tous les tissus de la plante Les protines de SMC sont gnralement associes aux membranes mitochondriales 4 exemples : SMC Texas SMC IS112C (gramine) SMC PET-1 (tournesol) SMC Ogura (radis)

La SMC Texas chez le Mas Le cytoplasme T (T pour Texas) confre : La SMC La sensibilit des toxines de champignons toxine BmT de Bipolaris maydis toxine PmT de Phyllasticta maydis La sensibilit une insecticide le mthomyl

13 kDa Individu strile Individu fertile

La protine T-URF 13 est code par un gne mitochondrial chimrique compose de : la partie 3' non codante de l'ARN ribosomique 26S 9 codons d'origine inconnue une partie de la rgion codante de l'ARN ribosomique 26S Le gne T-URF 13 est co-transcrit avec l'orf221 identifi comme codant une protine spcifique de la mitochondrie vgtale La protine T-URF 13 est localise dans la membrane interne des mitochondries et s'associe en oligomres. Chaque monomre de la protine T-URF 13 est constitu de 3 hlices alpha. L'association de 6 8 monomres de T-URF permettrait la formation d'un pore Il est tablit que la toxine de Boipolaris maydis interagit spcifiquement avec la protine T-URF 13 conduisant l'altration du potentiel membranaire par l'ouverture de ce pore Bmt

Gntique 2 Chez les plantes mles striles, il doit y avoir un facteur inconnu x (spcifique des tissus de l'anthre et similaire la toxine BmT) viendrait se fixer sur le pore form par T-URF 13 Cette association provoquerait l'ouverture du pore aboutissant la destruction du potentiel lectrochimique de protons et ainsi la mort cellulaire STERILITE (mle) Plusieurs gnes de restauration de fertilit (=rf) ont t identifis chez le mas (gne nuclaire) Rf1, Rf8, Rf* Rf2 La restauration du phnotype mle fertile ncessite la prsence des gne Rf1 (ou Rf8, Rf*)et Rf2 Les gnes Rf1, Rf8, Rf* affectent chacun le profil de la transcription (ADN ARNm) du gne TURF 13 d'une faon diffrente, mais conduisant tous la diminution de la quantit de transcrits (on aura donc moins de protines T-URF, donc moins de formation de pore au niveau de la membrane interne de la mitochondrie donc moins de chance de voir les pores s'ouvrir) L'effet le plus drastique est celui de Rf1 qui permet une diminution de 80 % de la quantit de transcrits du gne T-urf13 dans les tissus vgtatifs Le gne Rf2 code une enzyme, un aldhyde dshydrognase. Cette protine jouerait un rle important dans la dtoxification des intermdiaires de raction issus de la fermentation alcoolique comme l'actaldhyde dans les anthres. Cette donne suggre que le compos X soit l'actaldhyde BmT X = Actaldhyde La protine Rf2 empcherait donc la fixation de l'actaldhyde sur la protine T-urf13 permettant de garder l'intgralit mitochondriale pendant la gamtognse

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La SMC IS112C chez le sorgho Plus de 7 SMC diffrentes ont t identifies chez le sorgh. La SMC IS112C est la mieux caractrise d'un point de vue molculaire

Gntique 2 La comparaison des profils d'ADN mitochondriaux a permis de rvler l'existence de plusieurs orf additionnelles chez les plantes striles Une d'entre elles, l'orf107 prsente un profil de transcription diffrent en fonction du contexte nuclaire mainteneur ou restaurateur Deux copies rarranges de l'atp6 (appeles atp 6-1 et atp 6-2) ont galement t observs Dans les plantes mles striles, les deux transcrits issus de ces gnes prsentent un degr d'dition trs faible, voir nul, dans les anthres atp6 - 1 et 2 transcription (plante femelle) orf 107 dition

La protine code par l'orf107 empche l'dition des transcrits atp6 conduisant un dysfonctionnement de la chane respiratoire dans l'anthre ce qui provoque la strilit mle 2 gnes de restauration ont t identifis : Rf3 et Rf4 Ces 2 gnes sont diffrents de ceux d'avant car pas de correspondance entre gne restaurateurs, ils agissent respectivement sur le profil de transcription et d'accumulation des ARNm de l'orf107 et sur l'dition des ARNm des gnes atp6 spcifiquement dans les anthres

La SMC PET-1 chez le tournesol Identifie lors d'un croisement interspcifique entre 2 espces de tournesol : Heliantus anuus x Heliantus petiolaris

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Gntique 2 La comparaison des gnomes mitochondriaux a permis des modifications dans une rgion de 17kb autour du gne codant pour la sous-unit alpha de l'ATPase (atp1). Cette rgion comprends une inversion de 12kb et une insertion de 5kb Ces modifications touchent la rgion 3' du gne atp1 donnant naissance une orf supplmentaire : l'orf H522 Cette orf est co-transcrite avec l'atp1. Par ailleurs, ses premiers codons sont homologues avec l'orf B alors que le reste de la squence est d'origine inconnue L'orfH522 code une protine de 15KDa intrinsque aux membranes mitochondriales La prsence de la protine ORFH522 induit une diminution d'environ 30% de l'activit ATP synthase (complexe V) dans les extraits mitochondriaux de plantules de tournesol mle striles La protine ORFH522 (comportant 18 rsidus de l'ORFB en position N-terminale) entre en comptition avec la protine ORFB dans l'assemblage ou le fonctionnement du complexe F1-F0 synthase La SMC Ogura Cette SMC a t dcouverte en 1968 par Ogura au Japon chez une varit asiatique de Radius (Raphanus sativus) Les observations cytologiques ralises sur les plants de radis mles striles ont montr que : Certaines structures avortes dont les microspores Une dgnrescence prmature de l'assise taptale Les selectionneurs du chou et du colza, qui recherchaient un systme fiable de production des semences hybrides, ont entrepris le transfert de la SMC Ogura, dans ces Brassica cultives, par des croisements interspcifiques

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Gntique 2 Ils ont russi ce qu'ils voulaient mais : - dficience en chlorophylle basse temprature - faible production de nectar - fertilit femelle altre donc plantes inintressantes Le problme vient des chloroplastes qui sont d'origine maternelle (du radis) Pour liminer ces caractres dltres, des fusions de protoplastes ont t entreprises (car on peut pas retirer les chloroplastes alors oblig de faire cette fusion pour gnrer non pas des hybrides mais des cybrides) Parmi les plantes obtenues aprs rgnration (on parle de cybrides) les plantes mles striles ne prsentant plus les caractres indsirables ont t slectionnes De nombreuses diffrences entre les gnomes mitochondriaux des cybrides ont t observs, suggrant qu'un grand nombre d'vnement de recombinaison avait eu lieu entre les gnomes parentaux

Une fusion + n'est pas un croisement x La comparaison des profits de restriction d'ADNmt des cybrides obtenus a montr que de nombreuses diffrences pouvaient tre observes Un de ces cybrides prsentait un comportement particulier : une forte proportion de sa descendance montrait une rversion vers la fertilit (interprte comme une instabilit de son gnome mitochondrial) L'absence de transcrits de l'orf138 chez les rvertants fertiles a confirm la corrlation entre l'orf138 et la SMC ogura

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Chapitre 2 : Hrdit cytoplasmique


Le proplastide est l'organisme d'o drive le chloroplaste. Dans les cellules mristmatiques (cellules de croissance), le chloroplaste existe sous une forme rduite le proplastide Les thylakodes sont issus de la membrane interne du proplastide qui s'invagine et s'assemble en vsicule Exprience de CORRENS (1909) sur la panachure des feuilles de Mirabilisjalapa (La belle de nuit) Chez le parent femelle, une structure est transmise par celle-ce. Transfert du chloroplaste du parent femelle vers l'hybride F1, ce transfert donne la couleur. L'hybridation F1 a le mme phnotype que celui du parent femelle Le chloroplaste et la mitochondrie du seigle sont hrits des 2 parents (hrdit biparentale) Chez Actinidia : chloroplaste hrdit paternelle et mitochondrie hrdit maternelle Grande diversit, l'hrdit dpend de la plante prise en compte ADN chloroplaste : Petit (environ 150 kb) et circulaire Nombreuses copies(50-100) Peu de gne (environ 120) .ARNr .ARNt pour la traduction plastidiale .Gnes pour le ribosome chloroplastique .4 gnes codant des sous-units de l'ARN polymrase .Un gne pour la grande sous unit de la RUBISCO .9 gnes pour les photosynthses I et II .6 gnes pour l'ATP synthase Les gnes de l'ADNcp du Mas : Gne codant pour la grande sous unit de la RUBISCO = Rbc L Le gnome chloroplastique du mas : IRA et IRB = 2 rgions rptes (diffre d'une plante l'autre) Il y a toujours le mme nombre. Ces 2 rgions donnent lieu des taille de gnomes diffrents 2 sous gnome : un petit et un grand L'hrdit des chloroplastes pouvait tre paternel, maternelle ou biparental Les chloroplastes sont prsent dans les tissus verts, mais ils sont absents dans les pollens (gamte mle). Les chloroplastes sont gnralement hrits par voie maternelle Cette caractristique a suggr la possibilit de crer des plantes transgniques en insrant le gne dintrt dans le gnome du plaste Pas de transfert du gne par le pollen 13

Gntique 2 Technique de transformation du chloroplaste :

Aprs bombardement des feuilles avec l'ADN contenant le gne dintrt et la recombinaison homologue (insertion) avec l'ADN chloroplastique, on obtient une plante transforme Canon particule : Des micro-projectiles d'or enrobs d'ADN sont projets sur une feuille place dan l'enceinte sous vide du canon. Les feuilles sont dcoupes en petits fragments placs sur un milieu de slection contenant la spectinomycine. Les cellules renfermant des chloroplastes transforms vont se diviser et donner des cals puis des plantules qui pourront tre repiques sur sol lorsqu'elles auront racin. Aprs traitement au PEG en prsence d'ADN, les protoplastes en suspension dan le milieu liquide se divisent et forment des micro-cals. Les plantules qui se dveloppent partir du cal sont des transformants chloroplastiques qui pourront tre repiqus sur sol lorsque les racines seront dveloppes Quelques applications de la transformation du chloroplaste : Rsistance au glyphosate Daniell et al (1998) a transform avec succs des plants de tabac avec le gne de rsistance au glyphosate insr dans le gnome du chloroplaste. Les plantes sont rsistantes et le gne ne peut tre transfr par le pollen d'autres vgtaux Rsistance aux insectes grce la toxine Bt Les toxines de Bacillus thuringensis (Bt) sont toxiques pour les insectes aprs ingestion. Kota et al (1999) ont observ que l'expression de la toxine Bt dan les chloroplastes permet de protger les plantes des attaques (i.e. pyrale Ostrinia nubilalis)

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Gntique 2 Un exemple de coopration des gnomes : la RUBISCO : protine la plus importante dan la biosphre elle catalyse la carboxylation du RuBP lors d la 1re tape du cycle de Calvin purifie par Wildman et Bonner en 1947 fonction lucide par Quayle et al en 1954 jusqu' 65% des protines foliaires

Structure de la RUBISCO Chez les eucaryotes, elle est constitue d'htro-octamres. En prsence de SDS et d'ure, la dissociation permet d'identifier : 8 exemplaires d'une sous unit de grande taille - masse molculaire comprise entre 50 et 55 kDa - code par le gne chloroplastique rbc L (L : large) 8 exemplaires d'une sous unit de petite taille - masse molculaire voisine de 15 kDa - code par le gne nuclaire rbc S (S = small)

Biosynthse de la RUBISCO chez les eucaryotes :

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Chapitre 3 : Les maladies humaines transmises par les mitochondries


Chaine respiratoire : compose de plusieurs complexes. Les protons via l'ATPase produisent de lnergie. Mitochondrie sige de la respiration et du mtabolismes nergtique Il existe 2 cas de figures : - dfaillance du gnome nuclaire dfaillance de la chaine respiratoire - dfaillance du gnome mitochondrial perturbe le mtabolisme nergtique On sintresse dans ce cours, aux dfaillance du gnome mitochondriale On distingue 4 types de maladies gntiques : les maladies hrditaires elles sont transmises selon un mode hrditaire suivant les lois de Mendel : dominant, rcessif, autosomique ou li l'X les maladies par aberration chromosomique ex : trisomie 21 les maladies mitochondriales les maladies multifactorielles ex : diabte, hypertension artrielle ... Les mcanismes conduisant l'apparition de ces pathologies sont diffrents : - pour les 3 premires mutations gntiques ou chromosomiques - pour les maladies multifactorielles gnes de susceptibilit Hrdit maternelle des mitochondries : Pntration du noyau spermatique dans l'ovocyte. Les mitochondries paternelles ne sont pas retrouvs dan l'embryon form Caractristiques Taille Nombre de molcule d'ADN/cellule Nombre de gne codant Densit gnes Introns % ADN codant Usage codon 3,00% code gntique universel Gnome nuclaire environ 3,3 x 10 pb 23 dans cellules haplodes/46 dans cellules diplodes environ 20 000 30 000 1 pour 40 000 pb Gnome mitochondrial 16569 pb plusieurs milliers de copies par cellule 37 (13 polypeptides, 22 ARNr et ARNt) 1 pour 450 pb absent 93,00% AUA mthionine ; TGA tryptophane ; AGA et AGG codon stop pas d'histone exclusivement maternelle 16

Protines associs Mode d'hrdit

Gntique 2 Les molcules d'ADNmt sont circulaires et codent : - 13 polypeptides (sous units de la chane respiratoire) - 22 ARNt - 2 ARNr Carte gntique mitochondrial : Le gnome code pour des ARNt, les ARNr et quelque protines comme le cytochrome b et l'ATP synthase (ATPase). Les 2 brins complmentaires de l'ADN mitochondrial sont reprsents par convention comme brin lger et brin lourd Pour que la chaine de respiratoire mitochondriale fonctionne, il faut une collaboration entre gnome mitochondrial et gnome nuclaire Complexe I ADNmt ADN nuclaire 7 36 Complexe II 0 4 Complexe III 1 10 Complexe IV 3 10 Complexe V 2 14

Les mitochondries se divisent en permanence indpendamment des mitoses et se rpartissent alatoirement entre les cellules filles

normal

anormal cellule mre cas intermdiaire cellules filles La rpartition des mitochondries se fait dj dan l'ovocyte. Ensuite, se produit des mitoses successives. Une cellule peut avoir une majorit de "normal" ou "anormal" alatoire Une population de mitochondries gntiquement htrogne Une population de cellules elles-mmes htrognes sur le plan de l'hrdit cytoplasmique

Certaines cellules contiennent un seul type de mitochondries mutes ou non mutes : on parle d'homoplasmie 17

D'autres contiennent les 2 types de mitochondries en proportions variables : on parle d'htroplasmie

Gntique 2 Lorsque l'on a des mitochondries anormales : on peut altrer le complexe de la chane respiratoire auquel appartient le peptide et donc altration de la chane respiratoire entire altration de la synthse protique Organes affects par la dfaillance de la chane respiratoire : muscles, cur, cerveau ... organes ncessitant un apport nergtique important Ce qui est important, c'est la balance entre homoplasmie et htroplasmie L'htroplasmie rend compte du phnomne de "spcificit tissulaire" qui affecte souvent les maladies mitochondriales Chaque tissu a un seuil spcifique de mitochondries mutes au de duquel il peut tre cliniquement normal Le rle central des mitochondries et la complexit de la chane respiratoire expliquent la svrit et la grande diversit des cytopathies mitochondriales parmi les maladies mitochondriales Ces pathologies interviennent dans des organes qui ncessitent des apports importants en ATP Exemple : cur, muscles stris, systme nerveux, reins, foie, pancras Des symptmes et des causes multiples ... La diversit et la complexit des symptmes posent le problme du diagnostique ... Des gnes nuclaires et mitochondriaux peuvent tres impliqus ... On distingue 2 grandes catgories de maladies mitochondriales : implication de mutation/dltions dan l'un des 22 gnes plus 2 gnes intervenant dan la synthse protique anomalies concernant les polypeptides = la structure de la chane respiratoire On a trouv qu'une grande dltion (jusqu' 1/4 de la cellule) peut causer la perte d'un grand nombre de gnes : si ne concerne que quelques mitochondries pas grave si concerne une majorit de mitochondries synthse protique plus chane respiratoire trs dfaillante mort possible La "constellation" d'anomalies associes une pathologie mitochondriale : le gne mitochondrial mut le niveau de sgrgation aprs la rplication d'un gnome mitochondrial mut au cours des 1res tapes du dveloppement embryonnaire l'abondance du gne mitochondrial mut dans un tissu donn le niveau critique de la quantit d'ADN mut ncessaire la manifestation clinique de l'anomalie dans un tissu 18

Gntique 2 Rarrangement de l'ADNmt : Dltion Duplications Syndrome de Pearson Syndrome de Kearns-Saye (KSS)

KSS : principale symptme = ophtalmoplgie externe progressive (=PEO) (problme mouvement de lil) dgnrescence de la couche pigmentaire de la rtine trouble de la conduction cardiaque ataxie surdit dmence diabte La maladie se situe gnralement avant 20 ans. En gnrale, le sujet meurt avant 20 ans En gnral, dltion de grande taille (plus de 1000 pb) de l'ADNmt galement des dltions. 1/3 des patients prsentaient une dltion de 4977 pb de l'ADNmt cassure entre les gnes de l'ATP 8 et de NDS proportion importante de cellules prsentant des mitochondries anormales en dessous de 85% de mitochondries anormales toujours dfaillance mais moins grave lorsque les ADNmt porteur d'anomalies se trouvent dans les cellules souches du sang Syndrome de Pearson La mme origine peut avoir des impacts multiples causes par : homoplasmie/htroplasmie sgrgation (initiale au cours de lembryogense) Pour le Syndrome de Pearson, incapacit pour ces cellules sanguines utiliser le fer dans la synthse d'hmoglobine maladie trs prcoce et mortelle Mutations ponctuelles de l'ADNmt affectant les ARNt : MELAS = encphalopathie mitochondriale avec acidose lactique et accidents vasculaires crbraux Maladie mitochondriale la plus frquente Syndromes : accidents vasculaires crbraux prcoces (avant 40 ans) ataxie contractions musculaires brusques dmence surdit vomissements rcurrents migraines PEO laptose = relchement des paupires diabte 19

Gntique 2 Acidose lactique = augmentation de la concentration en acide lactique et entrane la chute du pH et le pouvoir tampon des fluides corporels. Le pyruvate n'est plus mtabolis et s'accumule et de retrouve dans les fluides corporels, le pyruvate est alors transform en acide lactique et c'est cet acide qui saccumule Une mutation est prpondrante dans cette maladie MTTL1*MELAS3243G MT = mitochondrial ; T = ARNt ; L1 = leucine ; 3243G = position D'autres mutations ponctuelles peuvent tre responsables de ce syndrome MELAS mais la mutation ci-dessus reprsente 80% des cas de MELAS Si plus de 90% des cellules musculaires comportent des mitochondries portant la mutation forme la plus grave Si moins de 90% des cellules musculaires comportent des mitochondries portant la mutation forme moins grave donc symptme les moins graves (vomissements, migraines...)

MERRF = pilepsie myochronique associe la myopathie des fibres rouges en haillons Maladie rare. Associe des symptmes multiples : crise dpilepsie trouble du mouvement perte de cellule musculaires dmence surdit dgnrescence des nerfs spinaux Agrgat de grandes taille de mitochondries anormales dans les cellules musculaires se visualise par des fibres rouges en haillons permet d'identifier plus facilement la maladie Ce syndrome apparait plutt durant l'enfance et implique plusieurs mutations ponctuelles : une mutation ponctuelle principale = MTTK*MERRF 8344G une 2me (plus marginale) MTTK*MERRF 8356G Si plus de 90% des mitochondries sont porteuses de mutations MERRF avec les symptmes les plus graves Si moins de 90% des mitochondries sont porteuses de mutations MERRF avec les symptmes les moins graves

Ces symptmes peuvent atteindre divers systmes physiologiques : vue audition systme endocrinien cur reins systme digestif et excrteur

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Gntique 2 Plusieurs gnes d'ARNt mitochondriaux peuvent tres affects et tre l'origine de plusieurs pathologies. Des mutations diffrentes peuvent aboutir des manifestations cliniques similaires. Des mutations diffrentes sur un mme ARNt peuvent aboutir des syndromes diffrents Mutation de gnes codant pour des protines de la chaine respiratoire : NARP = Rtinine pigmentaire avec neuropathie et ataxie MILS = la maladie de Leign NARP : atteint jeunes adultes faiblesse musculaire dmence retard convulsion rtinine pigmentaire MILS : maladie infantile grave dgnrescence de certains neurones ceux du bulbe rachidien et des noyaux crbraux Ces 2 syndromes sont induit par les mutation qui touche l'ATP6 : - MTATP6*NARP 8993G - MTATP6*NARP 8933C Entre 70 et 80% manifestation du syndrome NARP Plus de 90% de mitochondries anormales manifestation du syndrome MILS LHON = la neuropathie optique hrditaire de Leber Affecte essentiellement lil. Trouble de la vision, puis s'aggrave et le patient perd la vision d'un il (sans douleur) puis perte du 2me il. Ou alors les 2 sont affects en mme temps Il y a dgnrescence du nerf optique plus les neurones de la rtine Quelques symptmes priphriques : tremblement troubles cardiaques perte du tonus musculaire Apparait 25 ans environ ou au del de 70 ans. 5 fois plus d'hommes que de femmes affects 18 mutations affectant 9 gnes : ND1 ; ND2 ; ND4 ; ND5 ; ND6 ; Cytb ; CO1 ; CO3 ; ATP6 Dont 4 mutations principales, qui, elles seules peuvent provoquer la manifestation clinique du LHON Mutations primaires : 1 des 4 mutations principales Mutations secondaires : les autres mutations

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Gntique 2 Les mutations secondaires peuvent provoquer la maladie la condition d'avoir une association avec d'autres mutations ou l'implication de mutation sur certains gnes nuclaires ou associs avec un stress environnemental (= facteurs pignique) 90% des cas de LHON primaire sont causes par 3 mutations MTND4*LHON 11778A ; MTND1*LHON ... C'est toujours le complexe 1 de la chaine respiratoire qui est touche MTND4*LHON 11778A ralentit la vitesse d'oxydation ND1 baisse l'efficacit du complexe 1 de 80% Clinique 1 : MELAS MERFF LHON Pearson MIDD (diabte, surdit) NARP MILS ets ... Clinique 2 : Association inexplique de symptmes N'importe quel organe ou tissu atteint Plusieurs organes touchs sans origine embryologique ou fonctions biologiques communes volution imprvisible Diagnostique : ADNmt extrait du muscle, sang, fibroblaste ... Recherche dltion, duplication - Pearson - Kearns-Sayre Recherche mutation ponctuelle (PCR) - LHON - MELAS - MERFF Squenage Estimation du degrs d'htroplasmie

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