**Fiche technique : Électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de

sodium pour l'analyse du gène CFTR dans la mucoviscidose**

**Introduction :**

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE) est

une technique couramment utilisée en biochimie structurale pour séparer et analyser les protéines
en fonction de leur poids moléculaire. Cette méthode est particulièrement utile pour l'étude des
protéines, y compris la protéine CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator), qui est
associée à la mucoviscidose.

**Principe de base :**

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide repose sur la migration des protéines à travers un gel de
polyacrylamide sous l'influence d'un champ électrique. L'addition de dodécylsulfate de sodium (SDS)
permet de dénaturer les protéines, de les charger négativement, et de les séparer principalement en
fonction de leur poids moléculaire. Les protéines plus petites migrent plus rapidement à travers le gel
que les protéines plus grandes.

**Matériel nécessaire :**

1. Gel de polyacrylamide : Un gel contenant une concentration de polyacrylamide appropriée pour la

séparation des protéines cibles.
2. Appareil d'électrophorèse : Une cuve électrophorétique équipée de deux électrodes, l'une à
l'anode et l'autre à la cathode.

3. Source d'alimentation électrique : Pour appliquer un courant électrique constant à travers le gel.

4. Tampon de course (Running buffer) : Un tampon contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS)

pour la dénaturation des protéines.

5. Échantillon : L'ADN codant pour la protéine CFTR ou des extraits de protéines de cellules ou de
tissus contenant CFTR.

6. Tampon de charge (Loading buffer) : Un tampon de chargement contenant du SDS et un agent

réducteur pour dénaturer et charger les échantillons.

7. Marqueur de poids moléculaire : Des protéines de poids moléculaire connu utilisées comme
référence pour estimer la taille des protéines inconnues.

**Protocole :**
1. Préparation du gel : Préparez un gel de polyacrylamide en fonction de la concentration requise
pour la séparation des protéines cibles. Assurez-vous qu'il est correctement polymérisé.

2. Préparation des échantillons : Mélangez les échantillons contenant l'ADN ou les protéines CFTR
avec du tampon de charge. Chauffez les échantillons à une température élevée pendant quelques
minutes pour dénaturer les protéines.

3. Chargement des échantillons : Chargez les échantillons dénaturés dans les puits du gel en utilisant
une pipette à gel.

4. Électrophorèse : Placez le gel dans la cuve électrophorétique et ajoutez le tampon de course pour
recouvrir le gel. Appliquez un courant électrique constant pendant une période déterminée.

5. Coloration : Après l'électrophorèse, retirez le gel de la cuve et réalisez une coloration pour
visualiser les protéines. Une coloration au bleu de Coomassie est couramment utilisée.

6. Analyse : Comparez la migration des protéines inconnues avec celle des marqueurs de poids
moléculaire pour estimer leur taille.

**Interprétation des résultats :**

Les protéines CFTR présenteront une bande spécifique sur le gel en fonction de leur poids
moléculaire. La comparaison avec les marqueurs de poids moléculaire permettra de déterminer
approximativement la taille des protéines CFTR présentes dans l'échantillon.

**Conclusion :**

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium est une

technique puissante pour l'analyse des protéines, y compris la protéine CFTR associée à la
mucoviscidose. Elle permet de séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire et de les
visualiser, contribuant ainsi à la compréhension des mécanismes moléculaires liés à cette maladie
génétique.