Priscilla Moyer et Romane Gorelli 1

Étude de la pharmacocinétique du paracétamol administré chez

la souris en intra-péritonéal : comparaison d’une dose de
100mg/kg et de 200mg/kg

Introduction

Le paracétamol (ou acétaminophène) est un

médicament utilisé comme antalgique (traitement
antidouleurs) et antipyrétique (traitement anti-fièvre) chez
l’Homme. On peut citer par exemple Doliprane, Efferalgan
et bien d’autres. Cependant, cette molécule présente des
effets néfastes sur le foie en cas de fortes doses et/ou en
prise continue (hépatotoxique). C’est pour cela qu’il ne faut
pas dépasser 3g de paracétamol par jour, ainsi que
d’espacer les prises de 4 heures. [1] [2] [3]

C’est dans ce contexte qu’une expérimentation a été réalisée afin d’étudier les
paramètres pharmacocinétiques du paracétamol chez le modèle de la souris. Les souris ont
subi une injection de paracétamol en intra-péritonéal à deux doses différentes : 100 mg/kg
ou 200 mg/kg. Par la suite, les concentrations plasmatiques en paracétamol ont été
mesurées sur une gamme de temps ( au bout de 0 min jusqu’à 70 min) grâce à une ponction
intra-cardiaque sur chaque souris. Pour chaque temps, le protocole a été réalisé pour 3
souris afin de prendre en compte la variabilité intra-espèce. L’objectif de cette étude est
alors de comparer les paramètres pharmacocinétiques suite à l'administration de deux
doses différentes.

Matériel et méthode

a) Les anesthésiques

Le bien-être animal est un point important à prendre en compte lors de

l’expérimentation. En effet, cette aspect de l'expérimentation animal est régi autour de
nombreuses lois. Ainsi, pour réaliser les ponctions intra-cardiaque chez les souris, elles ont
au préalable dûes être anesthésiées. Les anesthésiques utilisés ici sont le xylazine couplé à
la kétamine.
La xylazine est un agoniste qui agit sur les récepteurs adrénergiques situés dans le
système nerveux central et le cœur. Cela a pour conséquences la diminution de
noradrénaline et une inhibition du système nerveux sympathique. On voit chez l’animal une
diminution de la vigilance, du tonus musculaire, de la nociception ainsi qu’une bradycardie.
[4] La kétamine est un psychotrope employé comme analgésique ou sédatif. Elle permet
l’inhibition du glutamate et le blocage de certains récepteurs. Chez les rongeurs, elle
provoque une rigidité musculaire et elle est insuffisante pour réaliser une intervention
chirurgicale. La kétamine n’étant pas myorelaxante, elle est associée à d’autres molécules
 2

comme la xylazine afin de détendre les muscles. La combinaison des 2 molécules permet
une anesthésie chirurgicale. [5]

b) Le protocole de dosage

Lors de la première étape, le plasma des souris a été mélangé avec du TCA (acide
trichloroacétique) dans le but de dénaturer les protéines présentes dans le plasma. Cela va,
en outre, permettre de dissocier le paracétamol qui serait sous la forme liée à des protéines
plasmatiques. A la suite d’une centrifugation de 4 min à 8 000 tours/minute, le surnageant
contiendra le paracétamol libre mais aussi le paracétamol qui était préalablement lié à des
protéines plasmatiques.
Une fois le surnageant récupéré dans de nouveaux tubes Eppendorf, du nitrite de
sodium à 0,07 mol/L a été ajouté. Les ions nitrites ont la capacité de réagir avec le
paracétamol, en milieu acide, pour former un produit qui pourra par la suite être révélé. [6]
Pour que la réaction ait lieu, les tubes ont été placés au bain marie-marie à 37°C pendant 10
minutes. Le produit ainsi formé à la capacité de prendre une teinte jaune-orangée en milieu
alcalin L’hydroxyde de sodium a donc été rajouté dans l’objectif d’augmenter le pH de la
solution et donc de révéler le produit précédément formé. [6] La formation du produit peut
alors être suivie spécifiquement par mesure spectrophotométrique à une absorbance de 430
nm. L’absorbance de la solution sera donc proportionnelle à la concentration en
paracétamol. Tous les échantillons ont donc été placés dans une microplaque afin de
réaliser les mesures d’absorbance à l’aide du lecteur de microplaque.

Remarque : Deux étalons ont également été effectués à des concentrations de 0,2 et 0,6
mg/ml.

Résultats

a) Administration de 100 mg/kg : résultats de Garance et Sophie

Nous observons la droite de la gamme étalon utilisée lors de l’expérimentation. Les

concentrations mesurées sont équivalentes aux concentrations des étalons données soient
0,2 et 0,6 mg/ml. L’équation de cette droite a permis de calculer les concentrations
plasmatiques à partir des valeurs d’absorbance obtenues grâce au lecteur de plaque.
 3

Table 1 : Tableau de résultats obtenus pour une dose de 100 mg/kg de paracétamol

L’échantillon à 50 min de la souris B a dû être retiré à cause de son incohérence

avec les 2 autres valeurs du même temps. La source de l’erreur n’a pas pu être déterminée
car les manipulations ont été réalisées par d’autres techniciennes.
Les écart-types ont été reportés sur le graphique ci-dessous. Cependant, leur faible
valeur ne permet pas de les visualiser. Ainsi, afin d’avoir une idée de l’étendu des valeurs
des Cp pour chaque temps, les coefficient de variations ont été calculés. Nous pouvons
remarquer que dans l’ensemble, ces derniers restent relativement faibles sauf pour le temps
à 40 minutes où il est de 18%.
De plus, il n’y a pas de valeurs de ln pour t=0, t=60 et t=70 car les moyennes de Cp
sont négatives.

Nous distinguons sur la courbe du graphique ci-dessus la phase d’absorption qui est
croissante suivie d’une phase décroissante. Lors de cette décroissance, deux phases
modélisées par deux décroissances exponentielles, devraient apparaître : la phase de
distribution puis la phase d’élimination. Cependant, nous pouvons remarquer que la partie
décroissante de cette courbe ne suit pas tout à fait la courbe d’une décroissance
exponentielle. En effet, ces résultats font face aux effets des aléas du vivant et aux limites
de l'expérimentation. Ainsi le tracer du graphique ln(Cp)=f(t), va pouvoir permettre de
distinguer la phase d’élimination et donc de calculer les paramètres pharmacocinétiques.
 4

La courbe orange équivaut à la phase d’élimination. Son équation nous permet de calculer
les paramètres pharmacocinétiques du paracétamol à la dose de 100 mg/kg.

Calcul de la demi-vie :

L’équation de la droite du graphique ci-dessus est de type : ln(Cp) = - ke x t + ln(C0). On

obtient ainsi :

𝑙𝑛(2) 𝑙𝑛(2)
𝑡1 = 𝑘𝑒
= 0.1363
≃ 5 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑒𝑠
2

Calcul du volume de distribution :

Il faut tout d’abord calculer la quantité administrée à une souris. Nous considérons que
l’animal possède une masse de 30 g.
𝑄𝑎𝑑𝑚𝑖𝑛𝑖𝑠𝑡𝑟é𝑒 = 𝑚𝑠𝑜𝑢𝑟𝑖𝑠 × 𝐷𝑜𝑠𝑒 = 0. 03 × 100 = 3 𝑚𝑔

Nous pouvons à présent calculer le volume de distribution à l’aide de la formule suivante :

𝑄𝑎𝑑𝑚𝑖𝑛𝑖𝑠𝑡𝑟é𝑒 3
𝑉𝑑 = 𝐶𝑚𝑎𝑥
= 0.5398
≃ 5. 56 𝑚𝐿
Remarque : Cmax est déterminé grâce à la courbe Cp = f(t)

Calcul de la clairance plasmatique :

D’après la formule, on obtient :

𝐶𝑙𝑝 = 𝑘𝑒 × 𝑉𝑑 = 0. 1363 × 5. 56 ≃ 0. 76 𝑚𝐿/𝑚𝑖𝑛
 5

b) Administration de 200 mg/kg : résultats de Priscilla et Romane

Nous voyons ici la droite de la gamme étalon utilisée lors de l’expérimentation. Les
concentrations mesurées sont équivalentes aux concentrations des étalons données soient
0,2 et 0,6 mg/ml. L’équation de cette droite a permis de calculer les concentrations
plasmatiques à partir des valeurs d’absorbance obtenues grâce au lecteur de plaque.

Table 2 : Tableau de résultats obtenus pour une dose de 100 mg/kg de paracétamol

L’échantillon à 10 min de la souris C a dû être retiré à cause d’un oubli de réactif

dans le tube, ainsi il n’y a pas eu de réaction colorimétrique.
Les écart-types ont été reportés sur le graphique ci-dessous. Cependant, leur faible
valeur ne permet pas de les visualiser. Ainsi, afin d’avoir une idée de l’étendu des valeurs
des Cp pour chaque temps, les coefficient de variations ont été calculés. Nous pouvons
remarquer que dans l’ensemble, ces derniers restent relativement faibles, inférieur à 5% .
 6

Nous distinguons sur la courbe du graphique ci-dessus la phase d’absorption qui est
croissante ainsi que la succession de 2 exponentielles décroissantes qui sont difficilement
différenciables. Ces 2 exponentielles correspondent à la phase de distribution et la phase
d'élimination. Afin de les distinguer, et de confirmer qu’il s’agit bien de deux décroissances
exponentielles, le graphique ln(Cp)=f(t) à été tracé.

Les 2 courbes de tendances décroissantes représentent la phase de distribution (courbe

bleu) et la phase d’élimination (courbe orange). Nous allons utiliser l’équation correspondant
à la phase d’élimination afin d'effectuer les calculs des paramètres pharmacocinétiques.

Calcul de la demi-vie :

L’équation de la droite du graphique ci-dessus est de type : ln(Cp) = - ke x t + ln(C0). On

obtient ainsi :

𝑙𝑛(2) 𝑙𝑛(2)
𝑡1 = 𝑘𝑒
= 0.0108
≃ 64 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑒𝑠
2

Calcul du volume de distribution :

Il faut tout d’abord calculer la quantité administrée à une souris. Nous considérons que
l’animal à une masse de 30 g.
𝑄𝑎𝑑𝑚𝑖𝑛𝑖𝑠𝑡𝑟é𝑒 = 𝑚𝑠𝑜𝑢𝑟𝑖𝑠 × 𝐷𝑜𝑠𝑒 = 0. 03 × 200 = 6 𝑚𝑔

Nous pouvons à présent calculer le volume de distribution à l’aide de la formule suivante :

𝑄𝑎𝑑𝑚𝑖𝑛𝑖𝑠𝑡𝑟é𝑒 6
𝑉𝑑 = 𝐶𝑚𝑎𝑥
= 0.87515
≃ 6. 86 𝑚𝐿
 7

Calcul de la clairance plasmatique :

D’après la formule, on obtient :

𝐶𝑙𝑝 = 𝑘𝑒 × 𝑉𝑑 = 0. 0108 × 6. 86 ≃ 0. 074 𝑚𝐿/𝑚𝑖𝑛

Discussion

a) Comparaison des résultats

On constate que les paramètres pharmacocinétiques sont très différents selon la

dose administrée à la souris. La demi-vie pour une dose de 100 mg/kg est d’environ 5 min
tandis que pour une dose de 200 mg/kg, elle est d’environ 1h. Une demi-vie courte signifie
qu’il faut injecter la substance plus régulièrement. Dans le cadre d'une prise de médicament
cela peut donc être plus problématique car cela contraint le patient à augmenter sa prise et
donc cela diminue l’observance thérapeutique.
Concernant le volume de distribution, il est de 5.56 ml pour une dose de 100 mg/kg
alors qu’il est de 6.86 ml pour une dose de 200 mg/kg. Le volume de distribution est meilleur
en cas de forte dose. Cela signifie que plus la dose est élevée, plus la substance se
distribue bien dans l’organisme. De plus, le volume de distribution étant largement supérieur
au volume sanguin d’une souris (1,8 mL pour une souris moyenne), nous pouvons en
déduire que la distribution est efficace et que le paracétamol se distribue au-delà du volume
sanguin, dans les tissus. [7]
Enfin, la clairance plasmatique mesurée pour une dose de 100 mg/kg est de 0.76
ml/min. Pour une dose de 200 mg/kg, elle est de 0.074 ml/min. Contrairement au volume de
distribution, ici c’est la clairance plasmatique pour une dose de 100 mg/kg qui est la plus
élevée. La clairance est définie par le volume totalement épuré de la substance par unité de
temps. La dose administrée étant plus faible, il paraît logique que la substance soit éliminée
plus rapidement de l’organisme.

Dans le cas présent, on observe que les paramètres pharmacocinétiques varient en

fonction de la dose. Le paracétamol possède donc une pharmacocinétique non linéaire.
Selon la bibliographie, le paracétamol en solution pour perfusion est linéaire jusqu’à 2 g en
quantité unique chez l’Homme soit une dose de 250 mg/kg (pour un humain moyen de
80kg). [8]. Cependant, dans l’étude menée, il a été révélé une cinétique non linéaire pour
des doses inférieures à cette dernière. Nous pouvons alors nous questionner sur le mode de
métabolisation du paracétamol chez la souris par rapport à l’Homme et ainsi à la pertinence
de l’utilisation de ce modèle.

Les résultats obtenus lors de cette expérimentation ont pu être comparés avec ceux
d’autres binômes tels que Tara et Thomas. Les valeurs des paramètres pharmacocinétiques
sont similaires entre les doses ce qui témoigne de la bonne réalisation des manipulations.
 8

b) Extrapolation sur l’Homme

Chez l’Homme, la demi-vie est comprise entre 1h30 et 3h, ce qui est bien plus élevé
que chez la souris. [9] Nous pouvons ainsi considérer que les paramètres
pharmacocinétiques sont d’autant plus variables d’une espèce à l’autre. L’extrapolation de la
souris à l’Homme est donc à prendre avec précaution.

c) Limite de l’expérimentation

Plusieurs points ont été relevés quant aux limites de l’expérience. Dans un premier
temps, nous pouvons noter que le prélèvement de sang par ponction intra-cardiaque n’est
pas idéal. En effet, après une ponction intra-cardiaque l’animal décède. Ainsi il faut utiliser
un animal différent entre chaque temps. Par conséquent, la variabilité intra-espèce naturelle
à un impact direct sur les résultats présentés.
Dans un deuxième temps, l'administration de paracétamol chez l’Homme est la
plupart du temps par voie orale. Or, dans ce cas, l’injection de paracétamol chez la souris
était par voie intra-péritonéale. C’est pourquoi, la biodisponibilité est différente selon
l’espèce mais également selon la voie d’administration.
Enfin, nous pouvons notifier que la réaction est stable 30 min et que l’ensemble des
résultats dépendent des mesures d'absorbance. Ainsi, il faut veiller à réaliser les mesures
dans un laps de temps assez court pour que la réaction reste stable sinon les résultats en
seraient impactés.

Conclusion

Pour conclure, cette étude à permis de réaliser le suivi pharmacocinétique suite à

l’administration de deux doses différentes de paracétamol chez la souris. Pour les doses, la
mesure des concentrations plasmatiques en paracétamol, à différents temps après injection,
à permis de calculer des paramètres pharmacocinétiques tels que la demi-vie, la clairance et
le volume de distribution.
Ces paramètres ont permis de mettre en évidence une pharmacocinétique non
linéaire à des doses comprises entre 100 mg/kg et 200 mg/kg chez la souris. Il s’agit d’un
point important à prendre en compte lors de l’étude chez l’homme dans le but de déterminer
la posologie adaptée. En effet, la pharmacocinétique variant avec la dose, cela aura
également un impact sur l’effet du médicament.
Par ailleurs, l’extrapolation des résultats obtenus pour le modèle murin à l’homme est
à prendre avec précaution car la métabolisation du paracétamol est relativement différente
entre ces deux espèces. Ainsi l’étude de ce modèle ne peut suffire à la détermination de la
bonne posologie pour l’homme.

La réalisation de cette étude fut l'opportunité pour les étudiants de développer et

approfondir leurs compétences. Ainsi un bilan des compétences a pu être réalisé à l'issue de
ce travail. Ce dernier peut être retrouvé en annexe 1.
 9

Annexes

Annexe 1: Tableau représentant le bilan des compétences acquises lors de cette étude

Légende - A : acquis ; ECA : en cours d'acquisition ; NA : non acquis

Question annexe : Quel(s) anesthésique(s) utiliser pour pouvoir réaliser une ponction
intracardiaque chez la souris ?

La ponction intracardiaque est une technique terminale qui se réalise uniquement sous
anesthésie générale pour éviter tout stress ou douleur à la souris. [10] [11] Le sang peut
également être récolté après mort par euthanasie de l’animal. D’après la bibliographie, il
existe plusieurs couples d’anesthésiques qui permettent une anesthésie chirurgicale en vue
d'une ponction intra-cardiaque. Nous pouvons citer [12] :

● alphaxalone / alphadolone
● kétamine / médétomidine
● methohexitone
● metomidate + fentanyl
● propofol
● thiopental
● tribromoethanol
● isoflurane

La plupart sont des anesthésiques injectables sauf pour l’isoflurane qui est un anesthésique
par inhalation. Parmi ses inconvénients, l’anesthésie par inhalation d’isoflurane nécessite
beaucoup de matériels et induit, en outre, une dépression de la fonction respiratoire. [13]
 10

Bibliographie

[1] « Paracétamol », Wikipédia. 3 novembre 2023. Consulté le: 8 novembre 2023. [En
ligne]. Disponible sur:
https://fr.wikipedia.org/w/index.php?title=Parac%C3%A9tamol&oldid=209300376
[2] « Bien utiliser le paracétamol », VIDAL. Consulté le: 8 novembre 2023. [En ligne].
Disponible sur:
https://www.vidal.fr/medicaments/utilisation/bon-usage/paracetamol-aspirine-ains/parace
tamol.html
[3] « Actualité - Savez-vous bien utiliser le paracétamol contre la douleur et la fièvre ? »,
ANSM. Consulté le: 9 novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://ansm.sante.fr/actualites/savez-vous-bien-utiliser-le-paracetamol-contre-la-douleur
-et-la-fievre
[4] « Xylazine », Wikipédia. 31 octobre 2023. Consulté le: 8 novembre 2023. [En ligne].
Disponible sur: https://fr.wikipedia.org/w/index.php?title=Xylazine&oldid=209197844
[5] « ketamine-2.pdf ». Consulté le: 8 novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://sofia.medicalistes.fr/spip/IMG/pdf/ketamine-2.pdf
[6] « Memoire Online - Mesure de l’impact toxique du paracétamol à doses thérapeutiques
chez 11 alcooliques adultes volontaires à travers le dosages des taux de quelques
marqueurs hépatiques, et évaluation du danger encouru par deux présumés intoxiqués
par ce médicament - Samira AISSAT ». Consulté le: 9 novembre 2023. [En ligne].
Disponible sur:
https://www.memoireonline.com/04/11/4519/m_Mesure-de-limpact-toxique-du-paraceta
mol-a-doses-therapeutiques-chez-11-alco14.html
[7] « Retro Orbital, Tail and Intra-cardiac Blood Collection in Rodents | Lab Animal Research
| JoVE ». Consulté le: 9 novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://www.jove.com/fr/v/10246/retro-orbital-tail-and-intra-cardiac-blood-collection-in-rod
ents?language=French
[8] « Résumé des caractéristiques du produit - PARACETAMOL ARROW 10 mg/ml, solution
pour perfusion - Base de données publique des médicaments ». Consulté le: 9
novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://base-donnees-publique.medicaments.gouv.fr/affichageDoc.php?specid=6842980
7&typedoc=R
[9] « Paracetamol ». Consulté le: 9 novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://pharmacomedicale.org/medicaments/par-specialites/item/paracetamol
[10] « TEC-07_Admin_et_prelevements_180123.pdf ». Consulté le: 10 novembre 2023. [En
ligne]. Disponible sur:
https://recherche.umontreal.ca/fileadmin/recherche/documents/user_upload_ancien/Ani
maux_ethique_et_soins/Division_des_animaleries/TEC-07_Admin_et_prelevements_18
0123.pdf
[11] « Lignes directrices du CCPA : les souris ».
[12] « ANE-02_Anesthesie_rongeurs_170501.pdf ». Consulté le: 10 novembre 2023. [En
ligne]. Disponible sur:
https://recherche.umontreal.ca/fileadmin/recherche/documents/user_upload_ancien/Ani
maux_ethique_et_soins/Division_des_animaleries/ANE-02_Anesthesie_rongeurs_1705
01.pdf
[13] « AERRANE_FR_0.pdf ». Consulté le: 10 novembre 2023. [En ligne]. Disponible sur:
https://www.baxter.ca/sites/g/files/ebysai1431/files/2018-12/AERRANE_FR_0.pdf