Chromatographie en phase liquide à

haute performance (HPLC)

 Plan

I.Introduction

II.Partie théorique
• Objectif
• Définition
• Principe
• Notions fondamentales

III.Partie théorique

• Matériel et produits
• Mode opératoire

IV.Expression des résultats

V.Conclusion
 Introduction
 Bref historique :
L’acronyme HPLC, créé par feu le professeur Csaba Horváth dans son article du Pittcon
de 1970, indiquait à l’origine qu’une pression élevée servait à générer le débit
nécessaire à la chromatographie liquide dans des colonnes garnies de particules. Au
début, les pompes n’avaient qu’une capacité de pression de 500 psi, soit 35 bar. Cette
technique fut baptisée « chromatographie liquide haute pression », ou HPLC. Au début
des années 1970, des progrès technologiques considérables ont permis de grandes
avancées, et les nouveaux instruments HPLC ont alors pu développer jusqu’à 6 000 psi
(400 bar) de pression et ont intégré des injecteurs, des détecteurs et des colonnes
améliorés. La HPLC a réellement commencé à s’imposer entre le milieu et la fin des
années 1970. Si la technique s’est continuellement améliorée pendant cette période
(particules plus petites, pression encore plus élevée), le sigle HPLC est resté identique,
mais sa signification a changé pour désormais correspondre à « High Performance
Liquid chromatography », soit « chromatographie liquide haute performance ».

La chromatographie liquide haute performance est à présent l’un des outils les plus
puissants de la chimie analytique. Elle permet de séparer, d’identifier et de quantifier
les composés présents dans tout échantillon pouvant être dissous dans un liquide.
Aujourd’hui, des composés à l’état de traces à l’échelle des parties par billion (ppt pour
« parts per trillion ») peuvent facilement être identifiés. La HPLC peut être (et est
d’ailleurs) appliquée à pratiquement tous les échantillons, tels que des produits
pharmaceutiques, des denrées alimentaires, des produits nutraceutiques, des
cosmétiques, des matrices environnementales, des échantillons médico-légaux et des
produits chimiques industriels.
Partie théorique
Objectif :
Notre objectif sert a la séparation par chromatographie liquide a haute performance.

Définition :
La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est une technique analytique
puissante largement utilisée dans divers domaines scientifiques, notamment la chimie,
la pharmacie, la biochimie et l'analyse environnementale. Il permet la séparation,
l'identification et la quantification des composants individuels dans un mélange avec
une précision et une exactitude élevées.

Principe :
Les composés à séparer (solutés) sont mis en solution dans un solvant. Ce mélange est
introduit dans la phase mobile liquide (éluant). Suivant la nature des molécules, elles
interagissent plus ou moins avec la phase stationnaire dans un tube appelé colonne
chromatographique.

La phase mobile poussée par une pompe sous haute pression, parcourt le système
chromatographique.
Le mélange à analyser est injecté puis transporté au travers du système
chromatographique. Les composés en solution se répartissent alors suivant leur affinité
entre la phase mobile et la phase stationnaire.

En sortie de colonne grâce à un détecteur approprié les différents solutés sont

caractérisés par un pic. L’ensemble des pics enregistrés est appelé chromatogramme.