Méthodes mécaniques utilisées à l'échelle industrielle

HOMOGÉNÉISATEURS HAUTE PRESSION

Une technique largement utilisée pour la désintégration des cellules est haute pression

homogénéisation. Les forces générées dans ce traitement sont suffisantes

à perturberait complètement de nombreux types de cellules. Dispositif commun pour

homogénéisation des cellules est le Gaulin

Les mécanismes exacts responsables de la rupture des cellules dans le Gaulin

homogénéisateur reste un sujet de débat. Cavitation, de cisaillement de fluide,

l'impact et le choc de pression peuvent tous jouer un rôle dans la rupture

processus.
Comme indiqué dans la figure passé, cette pompe à haute pression

incorpore une vanne réglable avec orifice restreint par

lequel les cellules sont forcées à des pressions allant jusqu'à 550 atm; Cependant, le

soupape homogénéisant peut se bloquer lorsqu'il est utilisé avec très

organismes filamenteuses.

Parce que le degré de perturbation cellulaire et la libération du produit

est généralement pas atteint au cours d'une seule passe à travers la

homogénéisateur, plusieurs passages sont nécessaires.

L'étendue de la rupture des cellules dans un homogénéisateur Gaulin est liée à

les conditions d'exploitation par modèle populaire de la cinétique de perturbation

développé en 1971 (52) par Hetherington:

R max est la quantité maximale de protéine disponible pour la libération, R est le

quantité de protéine libérée après passage N, k est une en température

constante de vitesse de charge, et p est la pression de fonctionnement. Tous les deux k et α

varient selon le type de cellule. L'exposant α est une mesure de la résistance de

les cellules à une perturbation; Les valeurs de la gamme de α entre 0,9 et 2,9 pour

bactéries et les levures

la libération de la protéine à partir de cellules de
levure à 30 ° C,

(Δ) et 100 kg / cm² (□)

200 kg / cm² (●) 270
kg / cm² (■) 400 kg /
cm² (○) 460 kg / cm²

Réduction du nombre de passes utilisés est souhaitable parce que plusieurs

passe produit des débris de cellules fines, ce qui peut causer des problèmes dans la suite

étapes de clarification.
 Les paramètres qui in fl uence la perturbation des cellules en haut
Homogénéisateur de pression

• Af fl ux température, chute de pression de 100 bars peut augmenter la

température de la suspension de 2,4 ° C

• Effets osmotiques, rupture des cellules de levure dans de l'eau déminéralisée

et dans une solution de chlorure de sodium de trois pour cent montre que la

degré de perturbation est réduit de 50% dans la solution de chlorure de sodium;

Afin d'améliorer la perturbation des cellules résultat de la biomasse devrait être

centrifugée après la fermentation, et remis en suspension par la suite dans de l'eau avec

faible teneur en sel

 Application

bactéries Micrococcus sont perturbées à 5 ° C dans un homogénéisateur Gaulin fonctionnant à

des pressions comprises entre 200 et 550 kg F/ cm². Les données obtenues pour la libération de protéines en tant que

fonction du nombre de passages dans l'homogénéisateur sont répertoriés dans le tableau.

(A) Combien de passes sont nécessaires pour atteindre 80% de libération de protéines à une pression de service de 460

kg F/ cm²?

(B) estimer la pression nécessaire pour délivrer la récupération des protéines de 70% en seulement deux passes.
 MEMBRANE FILTRATION

filtration sur membrane est une opération unitaire polyvalent qui peut être utilisé à

différentes étapes de traitement en aval pour séparer, concentré, et

produits purifier.
 MICROFILTRATION

microfiltration : Il est utilisé pour éliminer les particules telles que

des cellules et des débris cellulaires d'une taille de 0,2 à 10 um à partir de bouillons de fermentation

et homogénats cellulaires. membranes de microfiltration typiques ont

des diamètres de pores nominal de 0,05 à 5 um. La gamme d'applications pour

microfiltration chevauche quelque peu avec celui de classique

filtration et centrifugation.
ultrafiltration : Membranes pour ultrafiltration ont des pores avec nominale

diamètre compris entre 0,001 pm (10 °) et 0,1 um (1000 A °).

L'ultrafiltration est utilisée pour éliminer les colloïdes, les grandes molécules telles que

des protéines et des polysaccharides, des virus et des corps d'inclusion de plus petits

solutés et de l'eau. Les membranes d'ultrafiltration sont capables de retenir

macrosolutes ayant des poids moléculaires de 10 3 10 6 daltons.

Osmose inverse : Membranes pour l'osmose inverse ou hyperfiltration

ont des diamètres de pores nominales de 1 à 10 °. L'osmose inverse est utilisée pour

séparer l'eau de sels dissous et d'autres microsolutés. Sens inverse

L'osmose est pas aussi souvent appliquée comme microfiltration et ultrafiltration

pour le traitement en aval des produits biologiques.

La performance des procédés à écoulement tangentiel

l'Écoulement
l'accumulation
tangentiel limite
Une partie qui passe à la membrane appelee Travers perméat (débit

Q P);

- Une partie Qui ne passe pas à la membrane Travers, appelee

Concentrat OU rétentat (débit Q R), et Où se concentrent les molécules

Retenues par OU la PARTICULES membrane.

Le flux Valorisé est, Selon le cas, le perméat (déminéralisation des

Eaux) ou Le concentrat (extraction des du Protéines lactosérum;

concentration de jus de fruits ...).

 La performances

- la ou La perméabilité de flux density de filtration volumique Qui

conditioning la productivity de l'opération;

- la sélectivité, c'est-dire-à l'de la membrane Efficacité à retenir CERTAINS

solutés.
 Pression transmembranaires

La principale force motrice pour la filtration membranaire est la différence de pression Ap

exercée à travers la membrane.

Cependant, dans certaines situations, la pression osmotique des solutions de part et d'autre de la
membrane affecte également la force motrice nette pour la filtration:

où Π F est la pression osmotique de la solution d'alimentation et Π p est la pression

osmotique du perméat. La pression osmotique de toute espèce Π en solution diluée peut
être approchée en utilisant l'équation de van't Hoff:
 Théorie membrane de filtration

Un objectif important dans la conception des systèmes de filtration membranaire est

estimation de la surface de membrane nécessaire pour atteindre un certain taux de

filtration.

où F est le débit volumétrique du perméat et A est la surface de la membrane. unité

typique de perméat de flux est ms- 1
 concentration polarisation

Quand un fluide de nettoyage tel que l'eau est entraînée à travers une microporeux

membrane, le flux de perméat en fonction du nombre, le diamètre, et

longueur des pores, la pression différentielle exercée à travers le

membrane, et la viscosité du fluide. La relation entre

ces variables est donnée par l'équation de Hagen-Poiseuille, qui

représente l'écoulement de liquide à travers des pores de géométrie cylindrique:

couche de polarisation de concentration

La raison non linéaire à la

polarisation de concentration
 En Resistances série Modèle

Selon le principe du taux général, le taux de tout processus est

égale au rapport de la force motrice et la résistance. Donc,

comme Dp est la force motrice pour la filtration sur membrane, le perméat flux

peut être exprimé par l'équation:

où R T est la résistance totale à la perméation à travers la membrane.

 Fouling

R F est la résistance due à l'encrassement reflète les interactions physico-chimiques entre

salissures et la membrane, son amplitude est relativement non affectée par exploitation

des paramètres tels que la pression transmembranaire et la vitesse d'écoulement

où R M est la résistance de la membrane intrinsèque et R C est le

résistance due à la polarisation de concentration. La valeur de R M est

déterminée expérimentalement en mesurant J en fonction de Dp en

l'absence d'une couche de polarisation de concentration, par exemple, en utilisant

de l'eau pure en tant que matériau d'alimentation:

 Transfert de masse Modèle

J est le flux de perméat, C est la concentration de soluté dans la limite

couche, C p est la concentration en soluté dans le perméat, D est le soluté

coefficient de diffusion, et dC / dy est le gradient de concentration ou de changement

la concentration de soluté C avec la distance y.

L'équation précédente peut être résolu en intégrant sur l'épaisseur

de la couche limite. De la dernière figure, à y = 0, C = C B et y = δ,

C = C w.

k dépend de la géométrie de l'écoulement, la vitesse d'écoulement et les propriétés

du fluide. Si la membrane a un coefficient de rejet élevé pour la

soluté de telle sorte que C P est négligeable, la relation se réduit à:

Les équations précédentes sont applicables à une pression de fonctionnement fixe. Si la

la pression est modifiée, un nouveau gradient de concentration en régime permanent est

mis en place, ce qui affecte la valeur de C w; Augmenter la pression augmente

C w, Si la pression continue d'augmenter, C w atteint une valeur limite C g à

qui gélification ou la précipitation du soluté se produit à la membrane

surface. Cette condition est connue comme la polarisation de gel. la gélification

concentration C g dépend des propriétés physico-chimiques du

solutés, tels que la taille, la forme et le degré de solvatation:

L'application pratique de la dernière relation nécessite l'estimation de la masse

coefficient de transfert, k.
où M, α, ß, et ω sont des paramètres de corrélation et L est la longueur de

le canal d'écoulement. Les valeurs de M, a, ß, et ω dépendent de l'écoulement

conditions
 Application

bouillon de fermentation clarifié contient un produit de polysaccharide avec un

concentration de gélification de 25 g l- 1. La masse volumique du fluide est 1020 kg m- 3, le

la viscosité est de 1,8 cP, et la diffusivité de polysaccharide est de 5,6 × dix- 11 m². s-

1. Le produit est récolté à partir du bouillon par ultrafiltration à un fluide

vitesse de 0,34 m s- 1 dans des tubes à membranes ouvertes d'un diamètre de 2,4 cm et

longueur 2,0 m. Estimer le flux de perméat si le filtre fonctionne sous gel

conditions de polarisation et la concentration du polysaccharide dans la charge

est de 12 gl 1.
 L'amélioration du taux de filtration membranaire

Selon le modèle de transfert de masse de filtration sur membrane, significative

l'amélioration des flux perméat ne se produisent pas nécessairement si la pression

goutte augmente ou membranes à porosité plus élevées sont utilisées. sous gel

conditions de polarisation, les stratégies alternatives qui améliorent la masse

transfert de solutés loin de la membrane sont nécessaires.

• La vitesse d'écoulement

• concentration solutés

• Température

• Longueur du canal d'écoulement

 La vitesse d'écoulement

• plus fort pour turbulent que

laminaire
• la turbulence aide à éliminer les
matériaux accumulés / réduit epaisseur

• en augmentant le débit volumétrique ou en

réduisant la hauteur ou le diamètre des
canaux d'écoulement.

Effet de l'augmentation de la vitesse d'écoulement transversal sur le flux de perméat. Les données ont été mesurées
au cours de l'ultrafiltration de lait écrémé concentré à 60 ° C

Les données de M. Cheryan 1998, Ultrafiltration et microfiltration Manuel, Technomic, Lancaster, PA.
 concentration solutés

• Dans des conditions de polarisation de gel J

augmente de manière exponentielle en C B diminu

La variation du flux de perméat avec une concentration cellulaire ou soluté. le flux de perméat diminue de façon
exponentielle avec l'augmentation de la concentration du soluté.

Les données fromM.C. Porter, 1997, filtration sur membrane. Dans:. PA Schweitzer, Ed, Manuel des techniques de séparation pour les ingénieurs chimistes, 3e éd, pp 2-32-101,
McGraw-Hill, New York...
 Température

• des températures plus élevées se traduisent

par un flux de membrane supérieur à la fois
la pression contrôlée et commandée régions
de transfert de masse de fonctionnement.

Effet de la température sur la vitesse d'écoulement du perméat au cours de l'ultrafiltration de l'extrait aqueux de soja.

Les données de M. Cheryan 1998, Ultrafiltration et microfiltration Manuel, Technomic, Lancaster, PA.
 Longueur du canal d'écoulement

Lorsque l'écoulement à travers la membrane est laminaire, le transfert de masse

coefficient est inversement proportionnelle à la longueur du canal d'écoulement L.

Par conséquent, le flux perméat supérieur peut être réalisé sous flux laminaire

conditions d'utilisation à court plutôt que des canaux d'écoulement d'alimentation à long.
 Opérations de filtration à membrane

Il existe trois types principaux d'application de filtration sur membrane:

concentration, fractionnement, et diafiltration

Concentration: Le produit désiré est contenu dans le rétentat de filtration

Si l'on suppose que les densités sont les mêmes:

Plusieurs paramètres sont utilisés pour décrire la performance de

filtrations de concentration. Le rapport de concentration en volume, VCR, est

défini comme:

La fraction d'élasticité Y R d'un composant de charge qui est récupéré dans le

flux rétentat est:

 A tout moment, la concentration d'un composant particulier dans le

rapport rétentat dépend de la concentration du volume magnétoscope et le

coefficient de rétention membranaire R de ce composant:

Pour solutés qui a complètement rejeté par la membrane, R = 1. pour

ces solutés donne:

A l'inverse, si un soluté n'est pas rejetée par la membrane et passe

à travers librement au perméat, R = 0.

 fractionnement

Le fractionnement est utilisée pour récupérer les produits de faible masse moléculaire par

les séparant à partir de cellules ou de molécules de poids moléculaire plus élevé.

Le rendement fractionnaire Y d'un composant de charge récupéré dans le perméat

cours d'eau peut être déterminé comme suit:

 diafiltration

Le but de diafiltration est de remplacer le solvant ou tampon utilisé pour

suspendre les cellules ou macromolécules. Les principales applications sont dessalage

de protéines et de tampon échange, pour exemple, entre

étapes chromatographiques.

Dans la diafiltration à volume constant, le volume de solvant ajouté est égal au volume de
perméat enlevé,
rendant le volume final de la solution le même que le volume de départ,

V 0. Le changement de concentration de soluté pendant constant- continu

diafiltration de volume peut être déterminée à partir d'une masse à l'état instable

équilibre sur soluté autour du système:

où K est la constante d'intégration. L'application de la condition initiale:

En continu, la diafiltration à volume constant, le débit de perméat F p est égale à la vitesse
d'écoulement du solvant ajouté, F RÉ.

En outre, le volume de diafiltration solvant ajouté, V RÉ, est égale à F ré t.

Diafiltration est habituellement effectuée en utilisant des membranes avec des coefficients de rétention de
zéro pour V 0 microsolutés indésirables tels que le sel
 RÉCUPÉRATION DE PROTÉINES DE CELLULE homogénat

Les cellules cultivées dans un bioréacteur sont homogénéisées et les débris cellulaires ont
été éliminés par centrifugation. Une protéine recombinante présente dans l'homogénat
clarifié est concentré par ultrafiltration. Pour chaque tranche de 100 l de broyat, 5 l de
concentré de protéines est nécessaire. Les concentrations de protéine recombinante, un
polysaccharide, et le glucose dans l'homogénat clarifié sont 1 mg l- 1, 25 mg l- 1, et 2 g L- 1 ,

respectivement. La membrane d'ultrafiltration choisie pour cette séparation donne des

coefficients de rétention de 1 pour la protéine recombinante, 0,6 pour le polysaccharide, et 0
pour le glucose. A un effet Fouling négligeable sur le rejet soluté dans ce système.

(A) Quelles sont les concentrations de protéine recombinante, un

polysaccharide, et de glucose dans le rétentat?
(B) Quelle fraction de la présente polysaccharide dans l'homogénat est retenue dans le
concentré de protéines?
 DIAFILTRATION DE LA SOLUTION DE PROTÉINES

Une solution de protéine contient KCl 1,95 M; diafiltration à volume constant

en utilisant une membrane ayant un coefficient de rétention R = 0 pour KCl et R = 1

pour la protéine est utilisée pour dessaler 2000 l de la solution. Le filtre est

actionné de telle sorte que le flux de perméat est de 20 l m- 2 h- 1; La membrane totale

zone est de 65 m 2; L'eau est ajoutée jusqu'à ce que la concentration KCI est réduite à

0,01 M.

(A) Quelle heure est nécessaire pour ce processus?

 Propriétés à membrane

Les membranes pour les procédés de filtration sont fabriqués à partir d'un large

variété de matériaux, y compris polysulfone, polyéthersulfone,

le polyamide, le polyacrylonitrile, le chlorure de polyvinyle, la cellulose régénérée,

l'acétate de cellulose, et de la céramique. La membrane idéale est bien défini

des particules ou des caractéristiques de rejet de soluté, est résistant aux variations de

la température, le pH et la pression de fonctionnement, permet des taux élevés de filtration,

a une résistance mécanique élevée et est facile et économique à produire.

Il existe deux grandes catégories de la structure membrane:

symétrique ou asymétrique homogène et anisotrope ou

• Un diamètre uniforme sur toute la profondeur de la membrane

• Ont tendance à retenir les composants ayant approximativement la même taille que le

les pores dans la membrane elle-même

• La membrane agit comme un filtre en profondeur, ainsi que d'un filtre de surface

• Filtration utilisant des membranes symétriques peuvent devenir progressivement

moins efficace que la membrane devient irréversible bloquée

• (0,11 um) de la couche de peau avec des pores très petits supportés par un épais

support macroporeux. les pores change donc considérablement

à travers la profondeur de la membrane

• Les caractéristiques d'exclusion moléculaire dépend de la taille de la

pores dans la couche de peau; les taux de macrovides permettent une filtration rapide.

• membranes asymétriques bloquent rarement

• Le nettoyage est également relativement simple, car seule la surface et

pas la totalité du volume du filtre nécessite un traitement pour éliminer les résidus.