UNIVERSITE DE VERSAILLES/SAINT-QUENTIN EN YVELINES

Génie génétique et transgenèse (LSBI 606)

Contrôle continu n°2 – 7 mai 2021
Durée 1h
Le maintien de l’homéostasie tissulaire (état d’équilibre du nombre de cellules constituant un tissu) dépend de
l’équilibre entre la prolifération cellulaire et l’apoptose. Les auteurs du travail présenté ci-dessous ont étudié le rôle
du facteur de transcription Bab2 dans le développement de l’aile chez la drosophile, en lien avec ces processus. Ils
ont d’abord étudié le profil d’expression de Bab2 dans les disques imaginaux d’aile par immunomarquage (Fig1A-B).

Figure 1 : Disque imaginal d’aile sauvage (A) montrant la distribution de la protéine Bab2 (en rouge) par immunomarquage. L’ADN
(DAPI) apparait en bleu. (B) Schéma montrant le territoire d’expression du pilote nub-Gal4 (en vert) dans le disque imaginal d’aile
: l’expression est restreinte à la partie du disque d’aile (appelée « poche ») qui donnera l’aile chez l’adulte. (C) Immunomarquage
révélant la protéine Bab2 (en gris clair) dans un disque imaginal d’aile de génotype nub-Gal4/+ (contrôle) ou nub-Gal4/UAS-
bab2RNAi. La « poche » est délimitée par des pointillés. (D) Ailes d’adulte de génotype nub-Gal4/+ (contrôle) ou nub-Gal4/UAS-
bab2RNAi. Les deux ailes (contour en pointillés) sont à la même échelle.

1) Décrivez la distribution de Bab2 dans les disques imaginaux montrés Figure 1A

Afin d’étudier le rôle de bab2 dans le développement de l’aile, les auteurs ont réduit la quantité de ses transcrits
dans le disque d’aile par interférence à l’ARN (RNAi) couplée au système UAS/Gal4 (Figure 1B-D).
2) Que montre la figure 1C ?

3) Que montre le résultat Figure 1D sur le rôle de bab2 dans l’aile ?

Pour compléter leur étude, les chercheurs ont testé les effets de l’expression ectopique de bab2 dans les
disques imaginaux. Pour cela, ils ont dans un premier temps induit l’activation de bab2 dans des clones de
cellules du disque imaginal d’aile par la technique de « Flp-Out » (Figure 2A). Les résultats sont montrés
Figure 2B ; Par ailleurs, ils ont induit la surexpression de bab2 à l’aide du pilote nub-Gal4 (Figure 2C).
Figure 2 : Effets de la surexpression de bab2 dans l’aile. (A) induction de clones par la technique du Flp-Out-Gal4. (B) Disque imaginal d’aile
(région de la poche) présentant des clones contrôles exprimant la GFP (en vert ; Genotype hs-Flp/+; act5C>stop>Gal4, UAS-GFP/+ ) ou des clones
exprimant à la fois la GFP et bab2 (en vert; Genotype: hs-Flp/+; UAS-bab2/+; act5C>stop>Gal4, UAS-GFP/+). Les clones ont été induits par un
choc thermique au début du stade larvaire L3. Une quantification de la taille des deux types de clones (en µm2) est montrée sur le graphe à
droite, indiquant la médiane et les valeurs extrêmes. n = 40. **** p<0.0001. (C) Effet de la surexpression de bab2 dans la poche du disque
imaginal d’aile avec le pilote nub-Gal4 (nub>mCherry, bab2), comparé à un disque contrôle (nub>mCherry). La mCherry est une protéine
fluorescente rouge qui permet ici de visualiser le territoire d’expression du pilote nub-Gal4. Le graphe à droite montre la quantification de la
taille de la zone de la poche (en µm2), en indiquant la médiane et les valeurs extrêmes. n= 5. **** p<0.0001. (D) Effet dans l’aile adulte de la
surexpression de bab2. Les génotypes contrôles et UAS-bab2 ainsi que la technique de quantification sont les même qu’en (C).

4) En vous aidant de la Figure 2, expliquez le principe de la technique de « Flp-Out »

5) Décrivez les résultats obtenus (Figure 2B, 2C et 2D) et concluez sur les effets possibles de
l’expression ectopique/surexpression de bab2 au cours du développement de l’aile
Afin de déterminer la cause des effets observés en réponse à la surexpression de bab2 dans l’aile, le gène
rapporteur rpr-LacZ a été utilisé pour visualiser l’activation du gène pro-apoptotique reaper (rpr) et donc l’activation
de la cascade apoptotique dans le disque imaginal d’aile (Figure 3B). En parallèle, l’activation de l’apoptose a été
détectée grâce à un immunomarquage de la caspase 3 clivée (CC3) (Figure 3C).

Figure 3 : Détection de l’apoptose dans des disques d’aile surexprimant bab2. (A) Représentation du territoire d’expression du pilote en-Gal4
dans le disque d’aile. Ce disque est composé deux compartiments : un compartiment antérieur (AC) et un postérieur (PC), séparés par une frontière
AP (indiquée par un trait jaune en B et C). L’expression d’en-Gal4 est restreinte au PC du disque. (B) L’expression de ce pilote est visualisée dans
le PC grâce à la fluorescence de la mCherry (en rouge) dans le contrôle (en haut ; en-Gal4, UAS-mCherry/+; rpr-lacZ/+) et dans un disque d’aile
surexprimant bab2 dans le PC (en bas ; en-Gal4, UAS-mCherry/ UAS-bab2; rpr-lacZ/+). L’expression de rpr-Lacz est détectée grâce à un
immunomarquage de la b-galactosidase (en vert). Le contour des disques d’aile est en pointillés. (C) Détection de la caspase 3 clivée (CC3, en
magenta) dans un disque d’aile contrôle (en haut ; en-Gal4, UAS-GFP/+) et dans un disque surexprimant bab2 dans le PC (en bas ; en-Gal4, UAS-
GFP/UAS-bab2).

6) Décrivez les résultats obtenus Figure 3B et 3C. Que pouvez-vous conclure ? Ces résultats sont-ils en
accord avec les précédents (Figure 2 C-D) ?
7) Faites une conclusion synthétique intégrant l’ensemble des résultats (Bonus)