Université de Jijel

Faculté de sciences et de la nature et de la vie

Département de biologie moléculaire et cellulaire
Licence Biologie Moléculaire
Module de GENIE GENETIQUE

Série N°4

Exercice N°1 : répondez aux questions suivantes :

1. à quoi sert l’insertion de tout ou partie du gène LacZ codant la β-galactosidase dans un vecteur de
clonage ?
2. quelles sont les trois séquences que doit contenir obligatoirement un plasmide ?
3. quelles sont les modifications nécessaires pour qu’un phage lambda puisse été utilisé comme
vecteur ?
Exercice N°2
-Afin de cloner un segment d’ADN circulaire double brin dans le plasmide Puc18, on réalise les
opérations suivantes :
 Traitement de l’ADN à cloner par l’enzyme de restriction EcoRI ;
 Traitement de plasmide Puc18 (voir la figure ci-dessous) avec la même enzyme ;
 Incubation de l’ADN à cloner et le plasmide traité par EcoRI en présence de ligase T4 et l’ATP.

-On répète la même expérience avec les enzymes de restriction suivantes : BamHI et Xbal.
-Les plasmides recombinants sont incubés en présence d’une souche d’E.coli AmpS, LacZ-
-Les bactéries sont ensuite cultivées sur une gélose contenant de l’ampicilline et du X-Gal. Tous les
types de colonies cultivant sur ce milieu sont isolés et leur ADN plasmidique est extrait.
L’électrophorèse sur gel d’agarose permet de déterminer la taille de chaque plasmide.
-Les résultats de ces expériences sont consignés dans le tableau suivant

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Enzyme utilisée Type de Taille de l’ADN Taille de l’insert en Kpb
colonies plasmidique en Kpb

A : bleue 2.69

EcoRI B : blanche 3.00

C : blanche 3.28

Xbal A : bleue 2.69

A : bleue 2.69

B : blanche 2.92
BamHI
C : blanche 2.81

D : blanche 3.29

Aucune A : bleue 2.69

1. Quel est le rôle de l’ampicilline au cours de ces expériences ?

2. A quoi correspondent une colonie bleue et une colonie blanche ?
3. Déterminer la taille de l’ADN inséré dans chaque cas.
4. Quel est la taille du fragment d’ADN concerné ?
5. Comment interpréter le résultat obtenu avec l’enzyme Xbal ?
Exercice N 3
Un fragment d'ADN KanR est cloné dans le vecteur pBR322, au niveau du site unique de restriction
Eco RI dont la séquence est :
 5 ' ----G/AATTC ----3 '
 1. Quel type d'extrémité génère une telle coupure?
 2. Pour déterminer la taille de ce fragment KanR inséré dans le vecteur pBR322, on fait une digestion
par l'enzyme de restriction Kpn I. Ce site est absent du vecteur pBR322. Or on génère un fragment de
4500 paires de bases et un fragment de 1000 paires de base.
Que peut-on conclure sur le nombre de sites Kpn I présents dans KanR et quelle est la taille de KanR,
sachant que pBR322 fait 4400 paires de bases.
 3. L'enzyme de restriction Sma I coupe dans le vecteur à 1000 paires de bases en amont du site
EcoRI qui a servi à intégrer KanR. Une digestion Sma I génère un fragment de 1600 paires de bases et
un fragment de 3900 paires de bases.
A combien de paires de bases du site Eco RI se situe le site Sma I présent dans l'insert?
Exercice 04 :
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Un chercheur veut cloner un fragment d’ADN génomique de 2kb d’Arabidopsis thaliana dans le
vecteur pBLQ54.
Proposer un protocole de clonage pour construire un plasmide recombinant (les enzymes utilisées sont
EcoRI et BamHI ; pBLQ54 porte le résistance à l’ampicilline) Le plasmide recombinant obtenu est
appelé pARABIDO.

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