CEC Validation Des Méthodes 06012024

Monastir.
Samedi 06 Janvier 2024
Processus analytique : / Vérification

et validation des méthodes.
Pr Fadoua NEFFATI
Faculté de Pharmacie-Monastir
Programme du 06 Janvier 2024
08h00-08h30 : Examen UE09

08h30- 09h00: Généralités –termes et définitions
09h00- 09h30: Exigences du GBPL & de la norme ISO 15189
09h30 - 10h00 : Caractéristiques de performances des méthodes
10h00- 11h00 : Etapes de vérification /validation des méthodes
11h00-11h30: Pause-café
11h30-12h00: Vérification des performances sur site
12h00-13h00: Atelier
13h00-14h00: Détermination de l’incertitude de mesure
14h00 -14h30 : Synthèse
toumimeriem55@gmail.com
Introduction
La VÉRIFICATION et la VALIDATION des méthodes : exigences
réglementaires (GBPL) et normative ISO 15189:2012.
Le dossier de validation de méthode est un document essentiel dans
la procédure d’accréditation.
La validation des méthodes peut se résumer en une simple
vérification.
Elle est conditionnée par l’utilisation de CIQ et par la participation à
l’EEQ.
3
Objectifs
Identifier les exigences réglementaires et
normatives relatives au processus analytique,
Reconnaitre les performances analytiques des
méthodes
S’initier au protocole de vérification/validation
des méthodes 4
Plan
Introduction
1- Généralités –termes et définitions
2- Exigences du GBPL & de la norme ISO 15189
3- Caractéristiques de performances des méthodes
4- Etapes de vérification /validation des méthodes
5- Vérification des performances sur site
6- Détermination de l’incertitude de mesure
Conclusion
5
Définition
Méthode
ensemble ordonné de principes, de règles, d’étapes pour parvenir à un résultat d’un examen de
laboratoire = procédure analytique = mode opératoire
Examen de laboratoire Matrice

test = paramètre = mesurande milieu faisant l’objet de l’examen/analyse
(sérum, plasma, sang total, urine, LCR, tissu, …)
Processus analytique
ensemble de méthodes permettant l’obtention de résultats d’examens aboutissant au diagnostic
biologique.
Processus simple Processus complexe

enchainement de plusieurs méthodes/étapes/ ex:
une seule méthode/étape/processus; ex: le dosage des
l’ECBU ou NFS ,faisant appel à des méthodes
protéines totales dans le sérum)
quantitatives et/ou qualitatives ),
6
Deux types de méthodes
Méthodes Méthodes
quantitatives qualitatives
Fournissent des Fournissent des

résultats issus de résultats issus de
données données non
numériques numériques
Comprennent le Identification macro

et/ou microscopique,
dénombrement, le présence/absence,
ratio (%) positif/négatif, …)
7
Deux sources de méthodes
Méthodes reconnues : les méthodes à privilégier seront celles des DM-DIV

marqués CE ou celles publiées dans des livres faisant autorité, des journaux
avec comité de lecture, des normes, des instructions de consensus
international ou des réglementations.
Méthodes non reconnues: Les méthodes développées par le laboratoire (ou

méthodes internes) doivent être validées de manière appropriée pour
l'utilisation prévue et parfaitement documentées.
8
Deux
Deux sources de
sources deméthodes
méthodes
Méthode fournisseur Méthode développée
 Utilisée sans modification:  Développée/méthode
Couple fournisseur ou normalisée
équipements/réactifs modifiée pour l’ajusteraux
DM-DIV, marquage CE besoins du laboratoire du
Kits, marquage CE : prescripteur…
validée
 Méthode reconnue  Méthode non reconnue
 Adopter une méthode  Adapter une méthode
 Portée A  Portée B
Vérification/validation différente selon la source

Deux
Deux sources de
sources deméthodes
méthodes
Méthode fournisseur Méthode développée
 Utilisée sans modification:  Développée/méthode
Couple fournisseur ou normalisée
équipements/réactifs modifiée pour l’ajusteraux
DM-DIV, marquage CE besoins du laboratoire du
Kits, marquage CE : prescripteur…
validée
 Méthode reconnue  Méthode non reconnue
 Adopter une méthode  Adapter une méthode
 Portée A  Portée B
VERIFICATION VALIDATION
Définition
VERIFICATION VALIDATION
 Confirmation par des preuves
 Confirmation par des preuves
objectives que les exigences pour
objectives (résultat d’un contrôle,
une UTILISATION SPÉCIFIQUE ou
calcul, revue de documents…) que
une APPLICATION PRÉVUES ont été
les EXIGENCES SPÉCIFIÉES ont été
satisfaites
satisfaites
 L’évaluation au laboratoire
 L’évaluation au laboratoire se
nécessitera une VALIDATION de
limitera à VÉRIFIER que les
toutes les performances ou
performances annoncées par les
caractéristiques de la méthode
fournisseurs sont satisfaites dans
les conditions réelles d’utilisation
11
En bref
Vérification • Méthodes« founisseur »
Validation • Méthodes adaptées

et/ou développées en
interne
12
Cycle de vie d’une méthode
La vie d’une méthode d’analyse est un processus évolutif qui suit différentes étapes
pouvant être représentées par un cycle
0-Cahiers des
charges
5- Utilisation
1- Sélection
en routine
2-Développement 4-Validation
3-Caractérisation
 Etape « 0 » ou étape préliminaire : expression du déploiement et de la mise en

œuvre d’une méthode pour un client/prescripteur et/ou pour un usage spécifié
sous la forme d’un cahier des charges ;
 Etape 1 : phase de sélection des outils, des analytes, … ;
 Etape 2 : phase de développement / optimisation de la méthode (en l’absence de

méthode préexistante pour le domaine d’application considéré) ;
 Etape 3 : caractérisation intra-laboratoire et inter-laboratoires, de la méthode ;
 Etape 4 : validation de la méthode développée au regard de l’usage attendu (voir

étape 0)
 Etape 5: utilisation en routine de la méthode.
 Etape 6: suite a la revue périodique de la méthode qui peut donner lieu à un

besoin de revalidation ou d’un nouveau développement .
Guide de bonne pratique de laboratoire
INTRODUCTION
I- LES REGLES DE FONCTIONNEMENT II- LES EXIGENCES III- LE SYSTEME DE MANAGEMENT DE

I.1- Obligations de la direction dans TECHNIQUES LA QUALITE
l’organisation et l’exécution des analyses II.1-Phase pré-analytique III.1- Organisation du système de
I.2- Personnel II.2- Phase analytique management de la qualité
I.3- Locaux et conditions II.3- Assurer la qualité des III.2- Responsabilité de la personne
environnementales analyses chargée du management de la qualité
I.4- Sécurité et élimination des déchets II.4- Phase post-analytique III.3- Maîtrise documentaire
I.5- Matériel de laboratoire II.5- Identification et III.4- Traitement des réclamations
I.6-Achat et approvisionnement des traitement des non IV-STOCKAGE ET ARCHIVAGE
produits consommables conformités
I.7- Informatique
I.8- Sous-traitance
Guide de bonne pratique de laboratoire
II.2 -Phase analytique

 « C’est au directeur du laboratoire qu’incombe le choix de
méthodes optimisées…
 « Les méthodes analytiques conseillées sont celles qui ont
été publiées dans des manuels bien établis et faisant
autorité, dans des textes ou des journaux revus par des
experts ».
 « Si des méthodes internes sont utilisées, elles doivent
être validées de manière appropriée pour l’utilisation
prévue et parfaitement documentées…»
 « Chaque nouvelle version des trousses de réactifs prêts
à l’emploi présentant des modifications importantes en
termes de réactifs ou de méthode doit être vérifiée. 17
Exigences normatives: norme ISO 15189:2022
7.2. Processus analytique

7.2.1 Généralités
7.2.2 Vérification des méthodes
analytiques
7.2.3 Validation des méthodes analytiques
7.2.4 Incertitude de mesure des valeurs
mesurées
7.2.5 Intervalle de référence biologique et
valeurs de décision clinique
7.2.6 Documentation du processus
analytique
18
 « Le laboratoire doit sélectionner et utiliser des méthodes

analytiques qui ont été validées pour une utilisation
prévue… »
 Le laboratoire doit disposer d’une procédure pour vérifier

qu’il peut exécuter les méthodes analytiques avant de les
mettre en service et en cours d’utilisation »
Le laboratoire doit valider et conserver les

enregistrements pour les méthodes:
- Conçues par le laboratoire
- Utilisées en dehors de leur domaine d’application
- Validées initialement et modifiées ultérieurement


L’incertitude de mesure doit être évaluée et
maintenue
Le laboratoire doit définir les intervalles de
référence biologique et les seuils de décisions
clinique
Validation des performances d’une
méthode: quel périmètre?
Phase
analytique
Méthodes Différentes
modifiées méthodes
Validation
d’une
méthode
Méthodes
Différents
déjà
milieux
utilisées
biologiques
par le LBM
Méthodes
nouvellement
introduites
22
méthode: quand?
Phase intiale, avant sa mise en

œuvre effective en routine
Phase de vérification continue et de

confirmation des performance, dans
le cadre du fonctionnement
quotidien du laboratoire
Vérification/validation rétrospective
des performances dans le cas d’une
méthode déjà utilisée par le
laboratoire
23
méthode: quels préalables?
Bonne
organisation
(SMQ)
Personnel
Processus
qualifié et
identifié
habileté
Validation
d’une
méthode
Equipement
Environnement sélectionné,
adapté contrôlé et
maitrisé
24
Pourquoi la vérification d’une méthode
validée par le fournisseur?
• Différence entre les lots de fabrication des

1 réactifs
•Conditions de transport et de stockage

2
•Conditions ambiantes locales, la qualité de l’eau, la

3 stabilité de l’alimentation électrique
•Compétence de l’utilisateur...
4
25
Pourquoi vérifier/valider une méthode?
S’assurer de sa fiabilité
S’assurer qu‘elle est utilisée dans son domaine

d'application
Identifier ses limites
Maitriser ses risques
S’assurer qu’elle répond aux besoins des

utilisateurs: patients/prescripteurs
Caractéristiques de performances des
méthodes quantitatives et qualitatives
méthodes quantitatives et qualitatives
• Méthode quantitative • Méthode qualitative
• Répétabilité et Fidélité • Variabilité inter-opérateurs
intermédiaire • Sensibilité, spécificité
• Exactitude , Justesse analytiques, justesse et fidélité
• Incertitude de mesure • Incertitude de mesure
• Comparaison de méthodes • Approche de la limite de
• Etendue de mesure détection
• Interférences et spécificité • Comparaison de méthodes
analytique • Interférences
• Contamination • Contamination .
• Robustesse et stabilité des • Robustesse
réactifs • Intervalle de référence et/ou
• Intervalle de référence et/ou valeurs seuils
valeurs seuils
28
méthodes reconnues = Portée A à vérifier
Méthode quantitative Méthode qualitative
• Répétabilité & Fidélité • Variabilité inter-opérateurs Protocole
intermédiaire Protocole • justesse et fidélité sur site/ou
• Exactitude , Justesse sur site/ou • Incertitude de mesure =Maîtrise
Rétrospectif
• Incertitude de mesure rétrospectif des facteurs de variabilité
• Comparaison de méthodes • Comparaison de méthodes
• Etendue de mesure
• Approche de la limite de détection
• Interférences et spécificité
analytique • Sensibilité, spécificité analytiques,
• Interférences
• Contamination
• Contamination .
• Robustesse et stabilité des • Robustesse
réactifs
• Intervalle de référence et/ou valeurs
• Intervalle de référenceFiche fournisseur seuils Fiche fournisseur
• et/ou valeurs seuils /Bibliographie /Bibliographie
29
méthodes non reconnue = Portée B à valider
Méthode quantitative Méthode qualitative

• Répétabilité & Fidélité • Variabilité inter-opérateurs
intermédiaire Protocole • justesse et fidélité
• Exactitude , Justesse Sur site • Incertitude de mesure
• Incertitude de mesure • Comparaison de méthodes
• Comparaison de méthodes • Approche de la limite de
• Etendue de mesure détection
• Interférences et spécificité • Sensibilité, spécificité
analytique analytiques,
• Contamination • Interférences Protocole
• Robustesse et stabilité des • Contamination . Sur site
réactifs • Robustesse
• Intervalle de référence • Intervalle de référence et/ou
• et/ou valeurs seuils valeurs seuils
30
Critères de performances d’une
méthode
Critères de performances des méthodes
évalués à partir des CQ
CIQ
CIQ CEQ
externalisé
• Justesse • Exactitude
• Fidélité:
• Fidélité
intermédiaire
• Répétabilité • Erreur
• Erreur d’inexactiude
• Erreur aléatoire systématique • Ecart = degré
• Biais(%) d’inexactitude(%)
• ET et CV(%)
A comparer aux limites acceptables

Quel protocole de vérification/validation et
pour quelle méthode?
Préparation d’une liste détaillée des examens
(analyses à vérifier/valider) en précisant :
• La nature de l’échantillon biologique
• Le principe de la méthode
• Le type d’échantillons
• Le type de de la portée :vérification ou
validation…
33
Exemple de liste ANNEXE 1
TABLEAU DE PORTEE
(ANNEXE 01 F.BM.20- rev01 - novembre 2021)
Principe de la
méthode
Remarques
(préciser si
(ajout,
Nature de automatisée Référence de
changement
Sous l’échantillon avec le nom la méthode Niveau de
Sous- Examen/ automate,
Domaine domaine biologique (sang del’automate (référence du flexibilité
domaine analyse changement de
et dérivés, ou manuelle document et (*)
technique méthode,
urine, selles...) ainsi que la version)
changement de
technique
réactif...)
mise en
œuvre)
Biologie Biochimie Non Calcium Plasma hépariné Spectrophoto MO-AN-XX 1
médicale Appliqué métrie - VersionX Portée A
N-BAPTA
Cobas c501
Biologie Biochimie Non TSH Plasma hépariné Electrochimilu MO-AN-XY 1
médicale Appliqué minescence Version X Portée A
Cobas e601
Biologie Hématologie Hémato- Hémo Sang total EDTA Impédance / 1
cytologie gramme
médicale Automate MO-AN-XZ Portée A
Sysmex Xs Version X
1000i
(* ) Niveau de flexibilité de la portée : préciser 1 ou 2selon le cas
(1) Utilisation de méthodes/protocoles fournisseurs sans aucune modification.:

(2)Utilisation de méthodes internes (protocoles fournisseurs modifiés ou encore méthodes développées dans le laboratoire.
4
1
Consultation de documents bibliographiques:
» Fiches techniques du fournisseur

» Recommandations des sociétés savantes
» Travaux de consensus
» Publications
» Exigences particulières
»…
35
EXEMPLE
Méthode quantitative reconnue –DM-DIV Portée A
Prospectus =Fiche technique
• Informations générales
• Domaine d'utilisation :Test immunologique pour la détermination
quantitative in vitro de la thyréostimuline dans le sérum et le
plasma humains.
• Caractéristiques
• Principe Méthode « sandwich ». Durée totale du cycle analytique:
18 minutes
• Réactifs - composition et concentrations
• Précautions d’emploi et mises engarde
• Préparation des réactifs
• Conservation et stabilité
• Prélèvement et préparation des échantillons
• Matériel fourni
• Matériel auxiliaire nécessaire
EXEMPLE
Méthode quantitative reconnue –DM-DIV Portée A
Prospectus =Fiche technique

• Réalisation du test
• Calibration
• Contrôle de qualité
• Calcul des résultats
• Limites d’utilisation – interférences
• Limites et intervalles
• Domaine de mesure
• Limites inférieures de mesure
• Dilution
• Valeurs de référence
• Performances analytiques
– Précision :Répétabilité &Précision intermédiaire
– Comparaison de méthodes
– Spécificité analytique
• Références bibliographiques
Choix des critères de performance à utiliser
en termes de CV, biais, incertitude…:
 Limites d’acceptabilité (Ricos, SFBC…)
 Fiches techniques fournisseur
 Recommandations
38
https://www.westgard.com/biodatabase1.htm
39
Quel protocole de vérification/validation
et pour quelle méthode?
40
41
Etude expérimentale:
» Rédaction de procédure de vérification/validation
» Les protocoles expérimentaux et formulaires pour
l’étude de répétabilité , fidélité intermédiaire et
exactitude et calcul d’exactitude (démarche et
données expérimentales)
» Réalisation de la vérification ou validation
42
Procédure de vérification / validation de méthodes
Modalités de description du processus analytique (du

prélèvement au compte rendu, les étapes de la
méthode manuelle/automatisée, processus
simple/complexe,...
Définition du mesurande (matrice, unité)
Choix de la méthode
Analyse de la bibliographie
Analyse des points critiques et maîtrise des

risques
43
Procédure de vérification / validation de méthodes
Décision du type de méthodes: vérification ou

validation
Définition du protocole de
vérification/validation sur site
Exploitation statistique des données
Concordance de méthodes
Prise en compte des transferts informatiques

entre l’automate et le SIL
Conclusion sur l’aptitude de la méthode

44
Exemple de vérification /validation HbA1c
5
8
L’étape de validation/vérification analytique doit être
précédée par la maîtrise de toutes les autres
composantes de l’analyse
Définir et maitriser les données d’entrée des

méthodes les 5M
46
ANNEXE 06
VALIDATION D’UNE MÉTHODE DE BIOLOGIEMÉDICALE
CERTIFICAT D’APTITUDE
Exemple de vérification /validation HbA1c
MISE ENŒUVRE
Préciser dans la colonne de droite les références aux documents de maitrise
Identité de ou des opérateur(s) Technicien …..

qualifié(s) et ayant réalisé la
vérification/validation de méthode
Procédure de validation de méthode PRC-AN-XX Procédure Vérification/ Validation
et documents associés (mode de méthodes
opératoire, formulaires…)
Protocole de validation INS-AN-ZZ Protocole de vérification
expérimentale
Procédure de la gestion de la portée PRC-AN-YY Procédure gestion de la portée
flexible flexible
Période de validation De …..à……
Date de mise en service : année
Autorisation de mise en service par : Biologiste
ANNEXE 06-Exemple de vérification /validation HbA1c
MAITRISE DES RISQUES
ANALYSE DES POINTS CRITIQUES DU PROCESSUS « PAS A PAS »
5M Indice de Modalités de
criticité maîtrise
Points critiques à IC= (Préciser les
Données d'entrée références des
maîtriser GxFxD
procédures et
IC= Gravité (G) x Fréquence (F) x Détectabilité (D).-Notés sur une échelle de 1 à 5
enregistrements.)
5x2x1= -Procédure d’accueildes
10 patients et réception des
prélèvements (PRC-PR-
XX)
-Identification du - Instruction de création
Identité
patient du dossier informatique
Préparation du patient des patients (INS-PR-XX)
(identitovigilance)
Revue de la demande -Gestion des doublons
(échantillons)
(INS-SI-XX)
Matière
-Fiche d’habilitation de
l’agent d’accueil (FOR-
RH-XX)
Modalités de prélèvement -
Type d'échantillon primaire
Type de récipient (tubes, additifs …)
Prétraitement de l'échantillon & délai de
conservations avant analyse
5x3x1= - Procédure d'habilitation

et maintien d'habilitation
- Qualification et 15
(personnel)
(PRC-RH-XX)
d’œuvre
Main d'œuvre qualification du personnel & maintien de la -Fiches de qualification du

Main
maintien de compétence qualification du personnel technique (FOR-

RH-XX)
personnel -Grille d’habilitation(FOR-
RH-XX)
technique

5M Indice de
Modalités de maîtrise
criticité
Points critiques à (Préciser les références
Données d'entrée IC=
maîtriser des procédures et
GxFxD
enregistrements.)
-Accidents 4x2x1=8 -Conduite en cas d'AES :
d’Exposition au Manuel d’hygiène et
Conditions ambiantes requises biosécurité (ORG-LS-XX)
sang (AES)
Milieu
(température, éclairage,…) pour le -Procédure gestion des

-Elimination en déchets (PRC-LS-XX)
matériel, réactifs & opérateur
toute sécurité -Procédure gestion des locaux
Organisation des locaux,
des déchets (PRC-LS-XX)
d'activité de soin
4 x 2 x 1= 8 -Fiche contrôle des achats à
-Contrôle à la la réception et avant
Référence du réactif
réception utilisation (FOR-AC-XX)
(fournisseur, version…). Conformité à la
-Gestion de stock -Instruction gestion du stock
réception…. (INS-AC-XX)
pour éviter la
Gestion des stocks
Matériel (réactifs)
-Fiche Inventaire (FOR-AC-

rupture de stock
XX)
Stabilité, Conservation et conditions
d’utilisation
5 x 4 x 1 =20
- Mode opératoire HbA1c
Matériaux de référence : étalons et ADAMS (MOD-AN-XX)
-Méthode et
échantillons CQI & EEQ, - -Instruction de
fréquence reconstitution des étalons
Reconstitution des réactifs, étalons,
d’étalonnag (INS-AN-XX)
contrôles
e
5M Indice de
criticité
Modalités de maîtrise
Points critiques à (Préciser les références
Données d'entrée des procédures et
maîtriser
enregistrements.)
Limites de la méthode (détection,

quantification, linéarité,interférences,
…)
Causes incertitudes de mesure
Méthode
4x5x1=
- Mode opératoire
20 HbA1c(MOD-AN-XX)
Reprises, repassage, selon mode mélange,
- - Instruction Validation
opératoire en décision manuelle, les repasses
technique (INS-AN-XX)
informatisée, Algorithmes la validation - - Critères de mélange et de
décisionnels… technique repasses (INS-AN-XX)
Validation technique
5 Indice de Modalités de maîtrise (Préciser
M Points critiques à criticité les références des procédures et
Données d'entrée
maîtriser enregistrements.)
-étalonnage des 3x2x1=

Surveillance des dérives 6 Planning maintenance préventive
instruments demesure
Exigences métrologiques* et d’étalonnage (FOR-EQ-XX)
critiques et suivi des
Equiipement-Logiciel
raccordements
Matériel
métrologiques
Contamination
Informatique embarquée Paramétrage,
étalonnage, connexions, archivage des
données, …
Connexion bidirectionnelleSIL
Transferts informatiques
Sérothèque-rajout d’examen
Prestations de conseils
Validation biologique
4x3x2= -Procédure de transmission des
Post-analytique
-Respect des délais de 24 résultats (PRC-PS-XX)

rendu des résultats
-Procédure gestion des
Diffusion des résultats Gestion - Transmission des
du compte-rendu résultats critiques demandes urgentes (PRC- PR-
XX)
- Registre transmission des
résultats critiques (FOR-PS- XX)
EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Sur site –protocole expérimental
1-Répétabilite
2-Fidélité Intermédiaire et variabilité inter
opérateur
3-Justesse
4-Exactitude
5. Incertitude 57
1.Evaluation de la répétabilité
• Analyser un même échantillon dans les mêmes conditions (conditions
optimales)
• Minimum 2 niveaux de concentration, zones de décision, échantillons

de contrôle titré ou non
• L’effectif idéal est de 30 déterminations (20 ou même 6 si coût élevé)
• L’exploitation des résultats : la moyenne (m), l’écart-type (s) et le

coefficient de variation (CV)
 Le CV calculé est évalué par rapport aux CV fournisseur et CV limites

acceptables (Ricos, SFBC…) 58
REPETABILITE
Applicable  ; non applicable (à justifier) 
Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) :

Si le champ est inutile, l’indiquer (ex. groupe sanguin).
CV (%) retenu
Nombre Ecart- CV (%) par le
Echantillon Moyenne CV (%) Conclusion
(N) type fournisseur laboratoire
(Ricos/SFBC)
Echantillon
30 4,8 0,03 0,62 < 0,8 0,9/3,8 Conforme
niveau 1
Echantillon
30 9,1 0,10 0,73 < 0,8 0,9/3,8 Conforme
niveau 2
59
2.Evaluation de la fidélité intermédiaire
• Analyser un même échantillon dans des conditions différentes en
faisant varier au moins un des facteurs: l’opérateur, les lots de
réactifs...
• L’essai est réalisé au cours de séries successives, en général 1 à

2 échantillons de CIQ quotidiens.
• Durée au moins 15 jours avec 30 déterminations et à deux niveaux

minimum.
 Le CV calculé est évalué par rapport aux CV fournisseur et CV

limites acceptables (Ricos, SFBC…)
60
FIDELITE INTERMEDIAIRE
Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) :

Si le champ est inutile, l’indiquer (ex. groupe sanguin).
Nombre CV (%) retenu

de Ecart- CV (%) par le
Echantillon Moyenne CV (%) Conclusion2
valeurs type fournisseur laboratoire
(N) (Ricos) 1
Echantillon
20 4,8 0,05 1,04 < 1,5 5,0 Conforme
niveau 1
Echantillon
20 9,1 0,10 1,1 < 1,5 5,0 Conforme
niveau 2
61
VARIABILITE INTER – OPERATEUR
VARIABILITE INTER-OPERATEURS
Applicable ; non applicable
Opérateur évalué 1 Essai sur site – résultats de la variabilité
Opérateur évalué 2
62
3.Evaluation de la justesse
• Quantifiée par le biais
• Estimée en comparant la la moyenne des participants (CIQ

externalisé) ou valeur vraie (v) lors de l'étude de fidélité
intermédiaire avec des échantillons de CIQ.
• Exprimée en pourcentage de la valeur cible, selon la formule:
63
JUSTESSE
Cas des contrôles internes externalisés
Moyenne Biais (%)

moyenne Cible Biais (%) Biais (%)
Nombre générale Limite
Echantillons Labo (groupe /groupe /moyenne Conclusion2
(N) (toutes (cf.
(Unité) de pairs) de pairs générale
techniques) source) 1
Echantillon
CIQ niveau
1
Echantillon
CIQ niveau
2
64
4- Evaluation de l’exactitude
• Evaluée par l’utilise des résultats obtenus lors

d’évaluations externes de la qualité (EEQ).
• L’inexactitude est exprimée en valeur ablolue ou en

pourcentage de la valeur cible à partir des résultats
des EEQ ponctuels, selon le calul suivant:
x: valeur trouvée pour un échantillon d’EEQ
v: valeur cible 65
Exactitude
Cas des contrôles externes ponctuels
Valeu Cible Moyenne Biais

Biais
r (groupe générale Biais (%) (%)
Nombre (%) Conclusion
Echantillon Labo de (toutes /moyenne limite 2
(N) /groupe
(unité pairs) techniques) générale (Ricos/
de pairs
) (Unité) (Unité) SFBC)
Echantillon
91/1475 5,6 5,661 5,751 1,05 2,62 6,8/6,2 Conforme
1
Echantillon
108/1572 10,4 10,753 10,964 3,28 5,14 6,8/6,2 Conforme
2
Echantillon
118/1653 7,2 7,111 7,300 1,25 1,37 6,8/6,2 Conforme
3
Echantillon
122/
4 5,2 5,150 5,213 0,97 0,25 6,8/6,2 Conforme
1685
Echantillon 130/
5 1707 8,2 8,218 8,401 0,22 2,39 6,8/6,2 Conforme
66
• « Paramètre associé au résultat d’une mesure qui

caractérise la dispersion des valeurs qui pourraient
raisonnablement être attribuées au mesurande».
(Ex =concentration du glucose plasmatique).
• Exemple : résultat exprimé avec incertitude de
mesure:
Glycémie :6,5±0,6 mmol/L [5,9-7,1mmol/L]
HbA1C : 5,0% ± 0,3 % [4,7 % - 5,3 % ]
67
• L’incertitude :
 un indicateur de la fiabilité d’un résultat
 apporte au biologiste un élément important

pour l'interprétation du résultat
 une aide pour le clinicien dans sa prise de

décision diagnostique ou thérapeutique
68
Exemple:Exemple: Incertitude
l’incertitude un outil
de mesure aided’aide à
d’interprétation
l’interprétation
• Que peut-on dire des deux résultat • Graphique2:
- graphique 1 ? • Résultats avec incertitude
mesure
Résultat du même patient Résultat du même patient
Jour J0 Jour 30 Jour J0 Jour 30
• Mathématiquement, les deux • les intervalles d’incertitude se

résultats sont différents chevauchent (zone grisée),
• Il manque dispersion autour du
Résultat: incertitude de mesure • les deux résultats d’analyse ne sont
indique un intervalle aidant à conclure à pas significativement différents.
une différence ou non
69
Exemple: l’incertitude de mesure aide d’interprétation
Cas 2:risque de faux négatif faible mais réel ; Cas3:risque de faux positif faible mais
à évaluer avec les signes cliniques réel; à évaluer avec les signes cliniques
Résultats
Seuil décisionnel
Résultats associés
À leurs incertitudes
Différents
cas
Résultat1
résultat3 Résultat4
Résultat 2
Prise de risque dans décision médicale dépend du chevauchement du résultat
avec le seuil décisionnel.
L’évaluation de cette prise de risque a été possible grâce au calcul
d’incertitude et son association aux signes clinques du patient.
70
Différentes approches de détermination de l’incertitude
Incertitude de 8
mesure 4
Evaluation de l’incertitude par le CIQ/CEQ
• Incertitude « u » sur le résultat d’analyse inclut:

– u (CIQ)
– u (EEQ)
– Incertitude « u » = somme quadratique des
composantes de l’incertitude issues du CIQ et de l’EEQ :
:représente la variance (carré de l'écart-type) de l'ensemble

des résultats du CIQ
:représente la variance (carré de l'écart-type) liée à la

justesse (biais) issue des résultats du CEQ.
72
Evaluation de l’incertitude
Calcul de l’incertitude issue du CIQ = u(CIQ)
- Utiliser les moyennes, les CV et les ET des

résultats du CIQ/période longue variabilité du
processus
m  i
x (x m) ET
ET  i CV%100
n n1 2 m
- 30 jours au moins, 6mois à une année

- Données du CIQ:
Incertitude du
CIQ
73
Exemple HbA1c
Calcul de l’incertitude issue du CIQ = u(CIQ)
Hb A1c %
Mois Niveau1 Niveau1 Niveau2 Niveau2
m CV% m CV%
Juillet 4,8 1,01 9,1 1,10
Aout 4,8 1,05 9,1 1,06
Septembre 4,9 1,00 9,2 1,01
Octobre 4,8 1,03 9,1 1,10
Moyenne m 4,8 9,1
Moyenne CV FI 1,02 1,06
ET CIQ= (u CIQ) 0,05 0,10
ET= CVxm/100
Hb A1c N1u(CIQ)= 0,05%

Hb A1c N2u(CIQ)= 0,10%
74
Calcul de l’incertitude issue du EEQ = u(EEQ)
• 2 paramètres interviennent dans le calcul

u(EEQ):
2-1-La moyenne des écarts = moyenne des

Biais = Ecart moyen : Ē
 2-2-L’écart type desécarts
75
Calcul de l’incertitude issue du EEQ = u(EEQ)
2-1-Moyenne des écarts ou Ecart ou Biais moyen

Au moins 6 résultats de EEQ
: résultat du laboratoire
: valeur de comparaison: « pairs » ;
- E : écart entre le résultat du laboratoire et la
valeur des pairs.
- « n » le nombre de comparaisons EEQ étudiés:
- Lamoyenne de l’écart ou biais
76
Détermination de l’incertitude demesure
Exemple: HbA1c
• Méthode « CIQ / EEQ

Mois Xlab Xref E (biais) E (%)
1 5,6 5,661 -0,061 -1,078
2 10,4 10,753 -0,353 -3,283
3 7,2 7,111 0,089 1,252
4 5,2 5,15 0,05 0,971
5 8,2 8,221 -0,021 -0,255
6 5,4 5,623 -0,223 -3,966
7 5,7 5,623 0,077 1,369

8 10,9 10,743 0,157 1,461
9 6,7 6,824 -0,124 -1,817
10 5 5,037 -0,037 -0,735
11 7,4 7,742 -0,342 -4,417

12 5,9 5,606 0,294 5,244
77
Exemple de l’HbA1c
Calcul de l’incertitude issue de l’EEQ = u(EEQ)
2-1-Moyenne des écarts ou des Biais

Unité : % EEQ – HbA1c 12 échanges EEQ (6+3+3)
N° Echanges Résultats Valeurs Biais

Laboratoire des pairs R Lab –V Pairs
X lab=Rlab X ref=Vpairs
Echantillon 1 5,6 5,661 -0,061
Echantillon 4 5,2 5,15 0,05

Echantillon 6 5,4 5,623 -0,223
Echantillon 7 5,7 5,623 0,077
Echantillon 10 5,0 5,037 -0,037

Echantillon 12 5,9 5,606 0,294
Moyenne des Nombre Total =
Biais(E) d’échantillons =6 0,01%
0,03%
78
2-1-Moyenne des écarts ou des Biais

Unité : % EEQ – HbA1c 12 échanges EEQ

Echantillon 2 10,4 10,753 -0,353
Echantillon 5 8,2 8,221 -0,021
Echantillon 8 10,9 10,743 0,157

Biais(E) échantillons n = 3 - 0,22%
0,07%
79
2-1-Moyenne des écarts ou des Biais :

Unité : % EEQ – HbA1c 12 échanges EEQ

Echantillon 3 7,2 7,111 0,089

Echantillon 9 6,7 6,824 -0,124
Echantillon 11 7,4 7,742 -0,342

Biais(E) échantillons n=3 - 0,38%
-0,23%
80
2-2 Ecart-type des écarts/Biais entre le

résultat du laboratoire et la valeur des pairs:
81
2-2-Ecart-type des écarts ou biais entre le résultat

du laboratoire et la valeur des pairs
Moyenne
Des
écarts
-0,061 0,00
0,294 0,00
0,03 0,15 0,03 0,17%
-0,037 0,09
0,077 0,00
-0,223 0,05
0,05
0,01 82
2-2-Ecart-type des écarts ou biais entre le résultat

du laboratoire et la valeur des pairs
Moyenne
Des
écarts
-0,353 0,00
0,05
-0,021 0,12
0,03 0,22%
0,07
0,157 0,01
83
Niveau 1
0,03
(0,17)2
u(CEQ)= 0,17%
84
Niveau 2
0,07
(0,22)2
u(CEQ)= 0,22%
85
Calcul de l’incertitude de mesure
C : concentration de l’analyte
u(5) = √ (0,05)2 + (0,17)2 = 0,18%
u(10) = √ (0,10)2 + (0,22)2 = 0,24%
Incertitude composée de l’HbA1c
86
Expression du résultat d’un analyte avec son
incertitude
 L’estimation de l’examen et de son incertitude

– Incertitude composée :u(C)
–incertitude élargie U [k=2] = 2u
 l’examen avec son incertitude de mesure en unité: =>
C ± U (k=2) unité
 Examen avec son incertitude de mesure en
pourcentage: => Ux100/C=%
87
Expression du résultat d’un analyte avec son
incertitude
–Exemple : HbA1c = 5,4%

• Incertitude exprimée en unité de l’examen
– Incertitude composée=u (C)= 0,18%
– Incertitude élargie : U [k=2]=2x0,18=0,36%
• Calcémie avec incertitude: 5,40± 0,36%
• intervalle compris entre la valeur mesurée +/- U
5,04 – 5,76%
88
INCERTITUDE DE MESURE
Applicable  ; non applicable (à
justifier) 
Exemple HbA1c
INCERTITUDES (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :
Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) ; calcul
Incertitudes calculées Exigence de performances
Mode de calcul Ricos
Quantification de l'incertitude Niveau 1: 5,4 ± 0,36% 3%

(niveau 1) :
Quantification de l'incertitude Niveau 2: 10,2 ± 0,48% 3%
(niveau 2) :
impact sur interprétation et
conseil :
Interprétation : Exploitation des données en fonction de la pertinenceclinique
Risque résiduels observés après Ex. : non-conformité sur Echantillons sur lesquels le
analyses des points critiques laboratoire accepte de travailler
Si oui ; maitrise à travers : CQI,
CQE, dysfonctionnements, non
conformités, analyse de tendance
100
INCERTITUDE DE MESURE
INCERTITUDES (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :

Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) ; calcul
Incertitudes calculées Exigence de performances
Mode de calcul Ricos
Quantification de l'incertitude Niveau 1: 5,4 ± 0,36% fidélité,5%

(niveau 1) : justesse 5%
incertitude 3%
Quantification de l'incertitude Niveau 2: 10,2 ± 0,48% fidélité,5%
(niveau 2) : justesse 5%
incertitude 3%
impact sur interprétation et
conseil :
Interprétation : Exploitation des données en fonction de la pertinence clinique
Risque résiduels observés après Ex. : non-conformité sur Echantillons sur lesquels le
analyses des points critiques laboratoire accepte de travailler
Si oui ; maitrise à travers : CQI,
CQE, dysfonctionnements, non
conformités, analyse de tendance
90
EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Critères vérifiés selon données bibliographiques et fiche fournisseur
6. Comparaison des méthodes

7. Etendue de mesure
8.Etude des interférences
9. Etude de la contamination
10. Robustesse et stabilité des réactifs
11. Intervalle de référence
12.Données informatiques
91
COMPARAISON DE METHODES
COMPARAISON DE METHODES
Données bibliographiques (fournisseurs, publications,…) :
Références méthodes
ressortir les éléments pertinents
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le laboratoire
CLHP
(back up), appareil en miroir
Méthode de reprise, complémentaires, de confirmation : ------
Nombre de mesures (Recommandations 30 à40): 134
Intervalle de comparaison adaptée à l’étendue des mesures du 4,4 – 19,5%
laboratoire /activité du laboratoire
(Préciser les valeurs minimum et maximum de l’étendue des
mesures)
Méthode d'exploitation des résultats
(Droite des moindres rectangles : Bland Altman, moindres Biais moyen = -0,25 [-0,29 ; -0,203] …
carrés,…)
Diagramme des différences et/ou des rapports
(Indiquer le nombre de déviants après les avoir vérifiés et
documentés)
Conclusions et dispositions : Non

Le laboratoire précise les dispositions mises en œuvre (par
exemple : utilisation transitoire et documentée d'un facteur de
correction).
92
6. Comparaison de méthodes
93
ETENDUE DE MESURE
ETENDUE DE MESURE (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour :
troponine, micro albumine, plaquettes, PSA, TSH, …)
Limite de détection : Etude bibliographique 3 % Etude expérimentale ----
Limite de quantification : Etude bibliographique 4% Etude expérimentale 4,4%
Limite supérieure de linéarité : Etude bibliographique 20% Etude expérimentale 20,3%
94
INTERFERENCES
INTERFERENCES
(ex : Hémolyse, turbidité, bilirubine, médicaments - à prendre en compte dans les facteurs
de variabilité - à évaluer si nécessaire) :
A remplir impérativement même pour noter qu’il n’y en a pas
Vérification bibliographique : source ngsp.org
Lister les interférences : HbD, HbE
Données de maitrise des échantillons HbF<30%
Vérification et résultats :
Si l’automate vérifie les interférences, fournir
les données de maitrise.
95
CONTAMINATION
CONTAMINATION
(Qualification d’équipement)
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par

exemple Ag HBS, HCG) Niveau haut (H) et niveau bas (B)
(Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge)
Inter réactif si nécessaire par exemple : LDH et ALAT, non
cholestérol et phosphate, lipase…
(Préciser les données fournisseur ou essai sur site)
Vérification bibliographique : données sources et analyse non
Critères de performance attendue si paramètre vérifié avec

essai sur site. < 5%
Vérification par essai et résultats, si justifié

Contamination = (mB1 – mB3)/(mH –mB3) = 0%
96
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS

(étude expérimentale indispensable en portée B)
(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour les paramètres sensibles)
Paramètres sensibles testés (T°, pH, position

sur un support, …)
Stabilité des réactifs après ouverture,

embarqués, …, données fournisseur…
97
INTERVALLE de REFERENCE
INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils en fonction des données

démographiques (étude expérimentale indispensable en portée B)
Valeurs de référence
Préciser les données fournisseur ou essai
sur site
98
DONNEES INFORMATIQUES
DONNEES INFORMATIQUES
Transfert automate – middle ware : mono ou
bidirectionnel.
(Références aux documents de maitrise)
Transfert middle ware – SIL : mono ou
bidirectionnel
(Références aux documents de maitrise- Dossiers
patients tests)
Algorithme décisionnel ou règles d’expertise
patients tests)
Calculs et règles d’arrondissage
patients tests)
Saisie manuelles
patients tests)
99
COMMENTAIRES EVENTUELS
…………………………………………………………………………………………………
……….
…………………………………………………………………………………………………
………..
DECLARATION d’APTITUDE
Conclusion : Décision d’aptitude :
…………………………………………………………………………………………………
……….…………………………………………………………………………………………
………………..
Date :
Autorisée par : nom du biologiste:…………………………………………………………….
Signature
100
Il faut conserver toute la
documentation relative :
• À la technique, à l’appareillage et au mode opératoire, au domaine

d’application et au but : vérification/validation de méthode
• A la détermination des critères de performances des paramètres à
vérifier
• A la détermination des limites acceptables, au plan d’expérience et
à la mise en oeuvre expérimentale dans le laboratoire
• Au traitement statistique des données obtenues
• A la décision finale quant à la validation opérationnelle de la
tchnique, au regard des spécifications (limites acceptables)
initialement fixées. 101
Rôle du technicien supérieur
 Participer à la maitrise des processus pré-analytique, analytique et

post analytique.
• Appliquer strictement les méthodes et entretenir les équipements
• Se conformer aux critères d’acceptabilité
• Participer à l’élaboration et à l’application du protocole/procédure

de validation
• Participer à la prise de décision de validation des méthodes…
102
Conclusion
• La sélection des méthodes, leur validation et leur
mise à jour constituent une étape primordiale dans
le processus analytique et la qualité des résultats
rendus aux patients.
• Le dossier de validation de méthode est le document

le plus important dans la procédure d’accréditation
car il conditionne la recevabilité en cas d’audit initial.
103

CEC Validation Des Méthodes 06012024

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Samedi 06 Janvier 2024

Processus analytique : / Vérification

08h00-08h30 : Examen UE09

réglementaires (GBPL) et normative ISO 15189:2012.

Le dossier de validation de méthode est un document essentiel dans

La validation des méthodes peut se résumer en une simple

Elle est conditionnée par l’utilisation de CIQ et par la participation à

normatives relatives au processus analytique,

Reconnaitre les performances analytiques des

S’initier au protocole de vérification/validation

Examen de laboratoire Matrice

Processus simple Processus complexe

Fournissent des Fournissent des

Comprennent le Identification macro

Méthodes reconnues : les méthodes à privilégier seront celles des DM-DIV

Méthodes non reconnues: Les méthodes développées par le laboratoire (ou

Vérification/validation différente selon la source

Vérification • Méthodes« founisseur »

Validation • Méthodes adaptées

 Etape « 0 » ou étape préliminaire : expression du déploiement et de la mise en

 Etape 1 : phase de sélection des outils, des analytes, … ;

 Etape 2 : phase de développement / optimisation de la méthode (en l’absence de

 Etape 3 : caractérisation intra-laboratoire et inter-laboratoires, de la méthode ;

 Etape 4 : validation de la méthode développée au regard de l’usage attendu (voir

 Etape 5: utilisation en routine de la méthode.

 Etape 6: suite a la revue périodique de la méthode qui peut donner lieu à un

I- LES REGLES DE FONCTIONNEMENT II- LES EXIGENCES III- LE SYSTEME DE MANAGEMENT DE

II.2 -Phase analytique

7.2. Processus analytique

7.2. Processus analytique

 « Le laboratoire doit sélectionner et utiliser des méthodes

 Le laboratoire doit disposer d’une procédure pour vérifier

7.2. Processus analytique

Le laboratoire doit valider et conserver les

- Conçues par le laboratoire

- Utilisées en dehors de leur domaine d’application

- Validées initialement et modifiées ultérieurement

7.2. Processus analytique

Phase intiale, avant sa mise en

Phase de vérification continue et de

• Différence entre les lots de fabrication des

•Conditions de transport et de stockage

•Conditions ambiantes locales, la qualité de l’eau, la

S’assurer qu‘elle est utilisée dans son domaine

Identifier ses limites

Maitriser ses risques

S’assurer qu’elle répond aux besoins des

Méthode quantitative Méthode qualitative

A comparer aux limites acceptables

Préparation d’une liste détaillée des examens

(analyses à vérifier/valider) en précisant :

• La nature de l’échantillon biologique

• Le type de de la portée :vérification ou

(1) Utilisation de méthodes/protocoles fournisseurs sans aucune modification.:

Consultation de documents bibliographiques:

» Fiches techniques du fournisseur

Prospectus =Fiche technique

Choix des critères de performance à utiliser

en termes de CV, biais, incertitude…:

 Limites d’acceptabilité (Ricos, SFBC…)

 Fiches techniques fournisseur

» Rédaction de procédure de vérification/validation