Machine Translated by Google
RECHERCHE ORIGINALE
Edité par :
Paul G. Schlegel,
Hôpital universitaire pour enfants
de Würzburg, Allemagne
Revu par:
Andreas Beilhack,
Université Jules Maximilien
Wurtzbourg, Allemagne
Rupert Handgtretinger,
Université de Tübingen, Allemagne
*Correspondance:
Caroline Arber
caroline.arber@unil.ch
Section de spécialité :
Cet article a été soumis à
T Cell Biology,
une section de la revue
Frontières en immunologie
Reçu : 06 décembre 2021
Accepté : 29 mars 2022
Publié : 29 avril 2022
Citation:
Bajwa G et Arber C (2022) Génération
rapide de cellules T spécifiques du
virus transgénique TCR et CD8ab pour
l'immunothérapie de la leucémie.
Devant. Immunol. 13h830021.
est ce que je: 10.3389/fimmu.2022.830021
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
publiée : 29 avril 2022 doi :
10.3389/fimmu.2022.830021
Génération rapide de TCR et CD8ab
Cellules T spécifiques du virus transgénique pour
Immunothérapie de la leucémie
Gagan Bajwa1 et Caroline Arber 1,2*
1 Centre de thérapie cellulaire et génique, Baylor College of Medicine, Houston Methodist Hospital et Texas Children's Hospital,
Houston, Texas, États­Unis, 2 Département d'oncologie UNIL CHUV, Centre Hospitalier Universitaire de Lausanne (CHUV), Université de
Lausanne (UNIL) et succursale de l'Institut Ludwig pour la recherche sur le cancer, Lausanne, Suisse
Contexte : Les lymphocytes T spécifiques du virus (VST) constituent une plateforme de thérapie cellulaire
intéressante pour la délivrance de récepteurs transgéniques ciblés sur les tumeurs. Cependant, la
fabrication avec des méthodes conventionnelles peut nécessiter plusieurs semaines et une manipulation
intensive. Ici, nous avons évalué la faisabilité et les délais lors de la combinaison de la capture de
cytokines IFN­g (CC) avec la transduction rétrovirale pour la génération de VST transgéniques du
récepteur des lymphocytes T (TCR) et du CD8ab (TCR8) afin de cibler simultanément plusieurs antigènes
viraux et tumoraux dans un seul produit.
Méthodes : Des cellules mononucléées du sang périphérique d'un donneur sain ont été stimulées avec
des mélanges peptidiques du cytomégalovirus (CMV) et du virus Epstein­Barr (EBV) dérivés de protéines
virales immunogènes, suivies d'une sélection de billes CC. Après 3 jours de culture, les cellules ont été
transduites avec un vecteur rétroviral codant pour quatre gènes (un abTCR et CD8ab spécifiques de la
survivine). Les VST transgéniques ou témoins TCR8 ont été développés et caractérisés pour leur
phénotype, leur spécificité et leurs fonctions antivirales et antitumorales.
Résultats : Les cellules sélectionnées par CC ont été transduites efficacement avec TCR8. L’expansion
moyenne était de 269 fois en 10 jours et les cellules contenaient une proportion élevée de cellules
mémoire centrales T CD8+. Les VST TCR8+ exprimaient simultanément des TCR antiviraux natifs et anti­
survivine transgéniques à la surface de leurs cellules. Les VST témoins et TCR8+ ont produit des cytokines
et ont tué des cibles virales, tandis que les cibles tumorales n'étaient reconnues et tuées que par les VST
TCR8+.
Conclusions : La capture des cytokines IFN­g sélectionne et active les cellules T CD8+, précurseurs de
mémoire spécifiques du CMV et de l'EBV, qui peuvent être efficacement modifiées par gène par
transduction rétrovirale et rapidement développées ex vivo. Nos cellules T multispécifiques sont
polyfonctionnelles et reconnaissent et tuent les cibles virales et leucémiques exprimant les antigènes apparentés.
Mots­clés : immunothérapie, cellules T spécifiques du virus, capture de cytokines, TCR transgénique, CD8 transgénique, cellules T modifiées,
interféron gamma
un
avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
INTRODUCTION
Le transfert adoptif de cellules T spécifiques du virus (VST) rétablit
rapidement l’immunité antivirale et prévient ou traite les infections virales
après une allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (GCSH) (1).
Les VST sont à la fois sûrs et efficaces lorsqu'ils sont fabriqués à partir du
donneur de cellules souches d'origine ou de donneurs tiers sains non
apparentés, partiellement compatibles HLA (1, 2), ouvrant la voie à leur
utilisation comme plate­forme de thérapie cellulaire pour la délivrance de
récepteurs modifiés ciblant les tumeurs. antigènes associés (récemment examinésséropositifs
En effet, la leucémie ciblait les récepteurs d'antigènes chimériques (CAR)
tels que les CD19­CAR dans la leucémie lymphoblastique aiguë à cellules B
(LAL­B) ou les récepteurs des cellules T (TCR) ciblant la tumeur de Wilms 1
(WT1) ou l'antigène mineur d'histocompatibilité HA­1H dans la leucémie
myéloïde aiguë (LMA) a été exprimée dans les VST et perfusée aux patients
après la transplantation (4–9). L'innocuité et une certaine efficacité ont été
démontrées avec les VST modifiés par CD19­CAR produits à partir du
donneur de cellules souches (4–6), tandis que la faisabilité et l'efficacité
avec les VST modifiés par TCR étaient variables selon les études (7, 8).
La fabrication de VST d'ingénierie est un défi et nécessite beaucoup
d'opérateurs. Certaines étapes sont réalisées dans des systèmes ouverts
comme le tri basé sur la cytométrie en flux (7), ou nécessitent une
connaissance de l'épitope ciblé comme la sélection des streptamères (8).
D'autres processus nécessitent le virus Epstein Barr (EBV) vivant pour la
génération de lignées cellulaires lymphoblastoïdes autologues (4–6),
plusieurs types de vecteurs viraux pour la transduction de cellules
présentatrices d'antigène et la transduction de VST (3, 6), ainsi qu'une
activité ex vivo prolongée. culture sur plusieurs semaines (4–7).
Pour une applicabilité plus large de ces thérapies ciblées multi­antigènes,
la complexité des processus de production doit être réduite (récemment
examinée dans (10)). Ici, nous avons étudié à petite échelle si les cellules T
mémoire spécifiques du virus sélectionnées par capture de cytokines (CC)
par interféron­g (IFN­g) provenant de donneurs sains sont suffisamment
enrichies et activées pour procéder directement à la transduction rétrovirale
en introduisant un HLA­A*02 : 01 a restreint la survie ciblant le TCR (11) en
combinaison avec CD8ab (TCR8) pour rediriger les VST vers un large
antigène associé à la tumeur (12, 13). Nous avons précédemment démontré
que l’incorporation de CD8ab en tant que transgène restaure l’activité
antivirale des VST transgéniques TCR et redirige les cellules T CD4+ vers
l’antigène apparenté restreint de classe I (12, 13). CC est attrayant car il est
compatible avec une production entièrement fermée de VST indépendamment
du HLA du donneur et peut sélectionner des cellules T avec divers répertoires
de TCR reconnaissant divers épitopes immunogènes (14­16). Nous montrons
maintenant que l'enrichissement et l'activation des cellules T mémoire
antivirales par CC suivis d'une transduction rétrovirale réduisent le temps de
fabrication de 7 à 10 jours, réduisent la complexité globale du processus et
produisent des cellules présentant une activité antivirale et antitumorale
simultanée. .
MATÉRIELS ET MÉTHODES
Lignées cellulaires
Les lignées cellulaires BV173 et K562 ont été obtenues auprès de la German Cell
Culture Collection (DSMZ) ou American Type Culture
Collection (ATCC), respectivement, et maintenue dans son intégralité
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
Milieu RPMI 1640 (Hyclone, Thermo Scientific) complété par 10 % ou 20 %
de sérum bovin fœtal (FBS, Hyclone), 1 % de pénicilline­streptomycine
(Gibco) et 1 % de glutamax (Gibco) ( 13).
Les cellules 293T (ATCC) ont été maintenues dans un milieu IMDM complet
(Hyclone) contenant 10 % de FBS, 1 % de pénicilline­streptomycine et 1 %
de glutamax.
Couches leucocytaires de donneurs sains Des
couches leucocytaires provenant de volontaires humains sains anonymisés
dans (3)). au CMV ont été achetées auprès du Gulf Coast Regional Blood
Center (Houston, Texas, États­Unis). Le statut HLA­A2 a été déterminé par
analyse FACS et les donneurs positifs pour HLA­A2 ont été sélectionnés
pour les expériences.
Génération de vecteurs rétroviraux et de surnageant La
conception du vecteur
rétroviral codant pour le TCR et le CD8ab spécifiques à la survivine (s24) a
été décrite précédemment (Figure 1A) (11­13). Le surnageant rétroviral a
été préparé par co­transfection transitoire de cellules 293T avec les
plasmides RD114 et Pegpam et le vecteur SFG contenant les gènes d'intérêt
(11).
Génération de cellules T spécifiques du virus modifiées par
un gène utilisant la capture de cytokines IFN­g et la transduction
rétrovirale. Les PBMC ont été isolées de la couche leuco­
plaquettaire en utilisant une centrifugation sur gradient de densité par
Lymphoprep (Accurate Chemical and Scientific Corporation), remises en
suspension dans un milieu complet de cellules T (mélange 1: 1 de RPMI
1640 et milieu Click, Hyclone, additionné de 10 % de FBS, Hyclone, 1 % de
pénicilline­streptomycine, 1 % de glutamax) et laissé au repos toute la nuit
à 37°C (107 PBMC pour 2 ml dans un milieu complet/puits dans une plaque
de 24 puits) . Après incubation, les PBMC ont été stimulées avec un mélange
de pepmix de CMV et d'EBV (CMV pp65, CMV IE1, EBV LMP2, EBV BZLF1,
EBV EBNA, 1 mg/ml, tous de JPT Technologies) et d'immunodominant
restreint HLA­A*02:01. peptides (NLV dérivé de CMV pp65 : NLVPMVATV,
YVL dérivé de EBV BRLF1 précoce immédiat : YVLDHLIVV, GLC dérivé de
EBV BMLF1 précoce, 1 mg/ml, tous issus de Genemed Synthesis) pendant
6 h à 37°C. La combinaison de pepmixes et de peptides a été choisie sur la
base des modèles d'expression des antigènes de l'infection par le CMV et
l'EBV au cours de la période post­transplantation (1). Les cellules sécrétant
de l'IFN­g ont été isolées à l'aide du kit d'enrichissement cellulaire par test
de sécrétion d'IFN­g (Miltenyi Biotech, n° 130­054­202) conformément aux
recommandations du fabricant (Figure 1B). Les cellules sécrétant l'IFN­g ont
été étalées dans un milieu complet avec de l'IL7 (10 ng/mL, R&D Systems),
de l'IL15 (10 ng/mL, R&D Systems) et de l'IL21 (30 ng/mL, R&D Systems) et
de l'IFN­g irradié. Une fraction négative (30 Gy) a été utilisée comme couche
nourricière (0,02 à 0,5 x 106 cellules capturées par IFN­g pour 0,5 x 106
cellules nourricières par puits dans une plaque à 24 puits). Après 3 jours,
les VST capturés par les cytokines IFN­g ont été récoltés et transduits avec
un surnageant rétroviral codant pour l'abTCR et le CD8ab spécifiques de la
survivine (TCR8, Figure 1A) sur des plaques recouvertes de rétronectine ou
exposés à des plaques recouvertes de rétronectine sans particules virales
(pour les VST non transduites). ). Les VST ont été étendus pendant 5 à 7
jours dans le
2 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
UN.
B.
C.
FIGURE 1 | Génération de VST transgéniques TCR8 par capture de cytokines IFN­g et transduction rétrovirale. (A) Schéma du vecteur rétroviral contenant le TCR spécifique de la survivine avec
des régions constantes murines (mCa, mCb), CD8ab et un marqueur sélectionnable tronqué (DCD271). (B) Étapes impliquées dans la production de VST transgéniques utilisant IFN­g CC,
transduction rétrovirale et expansion cellulaire. S1 : première stimulation, S2 : deuxième stimulation (facultatif). (C) Rendement total de cellules capturées par IFN­g à partir de 5x107 PBMC
après séparation immunomagnétique, n = 8 donneurs, moyenne ± SD.
présence de cytokines IL7 (10 ng/mL, R&D Systems), IL15 (10 ng/mL,
R&D Systems) et IL21 (30 ng/mL, R&D Systems). Une deuxième
stimulation (S2) a été réalisée pour évaluer le potentiel d'expansion
supplémentaire des VST conçus. S2 a été réalisé avec un pepmix/
peptide CMV/EBV et le peptide de survie restreint HLA­A*02:01
LMLGEFLKL (l'antigène apparenté du TCR transgénique, synthèse
Genemed) des cellules T activées autologues irradiées pulsées (40 Gy)
(précédemment activées sur OKT3/ plaques recouvertes d'anti­CD28)
et de cellules K562cs irradiées (100 Gy) (cellules K562 conçues pour
exprimer CD80, CD83, CD86, 41BBL et CD32) à un rapport de 1:1:5
( Figure 1B) dans une culture perméable aux gaz G­Rex dispositifs
(WilsonWolf, Saint Paul, USA) comme décrit précédemment (17).
Immunophénotypage Pour
l'évaluation de l'expression des marqueurs de surface cellulaire, les
cellules ont été colorées avec des anticorps conjugués au FITC­, à la
phycoérythrine (PE­), à l'allophycocyanine (APC), au V450­, au PerCP,
à l'APC­AF750 ou à l'orange Krome (Abs) contre CD4, CD8, CD45RO. ,
CD62L, CCR7, CD45RA, CD56, TCRgd, CD271, CD19, 7­AAD (BD
Biosciences), région constante du TCRb murin (ebiosciences),
pentamère NLV (Proimmune) ou dextramère LML de survivine
(Immudex) pendant 30 min à 4°C . . Le test de dégranulation a été
réalisé comme décrit précédemment (13). En bref, les VST (106 ) ont
été traités avec du golgi­plug/brefeldin A (Invitrogen) et du CD107a/b
VioBlue (BD Biosciences), suivis d'un traitement approprié.
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
stimulations : pepmixes viraux spécifiques au CMV/EBV ou peptide
unique (pp65, IE1, LMP2, BZLF1, EBNA1, GLC, 1 mg/ml), peptide
LML spécifique à la survivine, pepmixes/peptide viral plus peptide LML,
PMA (25 ng/ml )/Ionomycine (1 mg/ml) ou peptide témoin de la protéine
matricielle de la grippe GIL (GILGFVFTL, synthèse Genemed) (témoin
négatif) pendant 4 h à 37°C. La coloration intracellulaire (ICS) a été
réalisée à l'aide d'anticorps anti­IFN­g­FITC et TNF­a­PE (BD
Biosciences) humains. Les échantillons ont été acquis sur un FACS
Canto avec le logiciel BD FACSDiva et l'analyse a été réalisée à l'aide
du logiciel FlowJo (Tree Star Inc.).
IFN­g ELISpot Pour la
quantification des cellules productrices d'IFN­g par ELISpot, les VST
(105 par puits) ont été étalés en triple et stimulés avec des pepmix/
peptides individuels (1 µg/ml) ou des lignées cellulaires (BV173 ou
K562) à 1:1. ratio (105 cellules par puits) ou milieu seul. Les plaques
ont été incubées à 37°C/5 % de CO2 pendant une nuit et développées.
Les unités de formation de points (SFU) ont été énumérées par ZellNet.
Test de co­culture et détection de cytokines
Pour déterminer la fonction antitumorale, les cellules VST et BV173 ont
été co­cultivées dans un rapport E: T de 1: 5 sans cytokines exogènes.
Les surnageants des co­cultures ont été récoltés après 24 h et stockés
à ­80 ° C pour l'analyse des cytokines. Après 3 jours, les VST résiduels
et les cellules tumorales ont été dénombrés à l'aide de CountBright
Beads (Life Technologies) et d'une analyse FACS. Les cytokines étaient
3 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
quantifiés dans les surnageants à l'aide du panel de perles magnétiques de
cellules T CD8+ humaines MILLIPLEX (EMD Millipore) et d'un instrument Luminex
200 (Luminex).
Test de libération de 51Chromium La cytotoxicité in
vitro à court terme des VST a été évaluée à l'aide d'un test standard de libération
de 51Cr, comme décrit précédemment (13). En bref, les cellules T activées
autologues (cibles) ont été pulsées avec les peptides ou pepmix indiqués (1 mg/
ml) et marquées au 51Cr pendant 1 h. Les VST et les cellules cibles ont été
incubées à différents ratios pendant 4 h. Pour les contrôles, les cellules cibles ont
été incubées dans un milieu seul ou avec 1% de triton­X 100 (Sigma­Aldrich) pour
mesurer respectivement la libération spontanée et maximale. Le pourcentage
moyen de lyse spécifique des puits en triple a été calculé comme suit : [(nombres
de tests – dénombrements spontanés)/(nombres maximaux – dénombrements
spontanés)] x 100 %.
Analyse statistique Des statistiques
descriptives ont été utilisées pour résumer les données.
La comparaison entre les groupes a été effectuée à l'aide du test t de Student ou
de l'ANOVA unidirectionnelle, selon ce qui était approprié. Le prisme GraphPad
6 (logiciel GraphPad, Inc., La Jolla, Californie) ou supérieur a été utilisé pour
l'analyse statistique. Les valeurs P <0,05 ont été considérées comme
statistiquement significatives.
RÉSULTATS
Génération rapide de VST transgéniques par capture de cytokines IFN­g et
transduction rétrovirale Pour générer rapidement des VST TCR8+
génétiquement modifiés
à partir de donneurs sains, nous avons utilisé le système de sélection de capture
de cytokines IFN­g pour enrichir les cellules T mémoire spécifiques du CMV et de
l'EBV lors de la stimulation peptidique de cellules mononucléées du sang
périphérique, suivies d'une transduction rétrovirale. Le schéma du vecteur
rétroviral (Figure 1A) et le processus d’isolement, de transduction et d’expansion
cellulaire (Figure 1B) est illustré à la Figure 1 et est entièrement compatible avec
les laboratoires de bonnes pratiques de fabrication (BPF). Le rendement moyen
en VST sécrétant de l'IFN­g à partir de 50 x 106 PBMC était de 0,15 x 106 (plage
3,13 x 104 – 2,2 x 106 , n = 8, Figure 1C). Les VST isolés par IFN­g CC étaient
suffisamment activés par l'isolement pour passer directement à la transduction
rétrovirale au jour 3 (TCR8+ vs NT VST, %mTCR+ cellules ; 66 ± 9 % vs 0,8 ±
0,4 %, p < 0,0001, moyenne ± SD, n = 8) (Figure 2A).
Les VST TCR8+ se lient efficacement au dextramère spécifique de la survivine
par rapport aux VST non transduits (NT) (TCR8+ vs NT VST, %mTCR+Dex+ ; 42
± 7 % contre 0,3 ± 0,4 %, p <0,0001, moyenne ± SD, n = 8 , figure 2A). Les
lignées TCR8+ et NT VST ont été enrichies en cellules NLV+ (TCR8+ vs NT
VST ; 18 ± 15,8 % contre 28 ± 27 %, moyenne ± écart­type, p = ns, n = 5), sur la
base de la coloration NLV­pentamère utilisée. pour détecter les cellules spécifiques
du CMV dans le produit (Figure 2B).
Les VST non transduits et TCR8+ se sont bien développés avec des expansions
de plis comparables après le premier (S1) (NT : 294 ± 267 fois, TCR8+ : 269 ±
285 fois) et le deuxième (S2) (NT : 6284 ± 6646 fois,
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
TCR8+ : 5877 ± 6682 fois) stimulation respectivement (moyenne ± SD, n = 5,
Figure 2C). Phénotypiquement, les VST NT et TCR8+ étaient principalement
constitués de lymphocytes T CD3+CD8+ (NT : 95 ± 3 %, TCR8+ : 93 ± 3 %,
moyenne ± écart­type, n = 8) avec de faibles pourcentages de lymphocytes T
CD3+ CD4+ (NT : 3 ) ±3 %, TCR8+ : 1±1 %, moyenne ± écart type, n = 8)
(Figure 2D). Nous avons constaté une absence totale de cellules NK (CD3­
CD56+) et de cellules T TCRgd+ dans nos produits. Cependant, les VST TCR8+
contenaient des fréquences légèrement accrues de lymphocytes T activés
CD3+CD56+ par rapport aux VST NT (NT vs TCR8+ : 0 ± 0 vs 10 ± 10 %, p = ns,
n = 8) (Figure 2E). La distribution des sous­ensembles de mémoire dans le
compartiment CD3+CD8+ a révélé des proportions élevées de cellules T à
mémoire centrale (TCM) dans les VST NT et TCR8+ (NT vs TCR8+, naïfs (TN)
1,9 ± 1,9 % vs 2,5 ± 2,7 %, TCM ; 75 ± 18 % contre 81 ± 12 %, mémoire effectrice
(TEM) 22 ± 18 % contre 16 ± 11 %, différenciée en phase terminale (TEMRA) 0,8
± 1,2 % contre 0,7 ± 0,9 %, p = n, n = 6) (Figure 2F ). Ainsi, nous montrons que
la combinaison de la capture de l’IFN­g et de la transduction rétrovirale peut
rapidement générer des produits de lymphocytes T modifiés présentant des
spécificités antivirales et antitumorales simultanées qui sont hautement enrichies
en cellules CD8+ TCM .
Les VST IFN­g Capture TCR8+ réagissent contre les antigènes viraux et
tumoraux ciblés. Ensuite, nous avons évalué la fonction spécifique de
l'antigène des VST NT et TCR8+ par IFN­g ELISPOT et coloration intracellulaire
des cytokines (ICS). Comme prévu, les VST TCR8+ mais pas NT ont produit de
l'IFN­g en réponse au peptide de survivine apparenté (LML) ou à la lignée
cellulaire de leucémie HLA­A*02:01+survivine+ BV173, ciblée par le TCR
transgénique (IFN­g SFCs NT vs TCR8+ VST ; LML : 7,0 ± 3,7 vs 577 ± 268, p =
0,003 ; BV173 : 71,5 ± 122 vs 925 ± 246 p <0,0001, n = 6, moyenne ± SD) (Figure
3A, en haut à gauche). Il est important de noter que les VST NT et TCR8+ ont
montré des réactivités antivirales comparables contre les antigènes CMV (pepmix
pp65 et IE1) et EBV (pepmixes LMP2, EBNA1 et BZLF1, peptides GLC et YVL),
tandis qu'une réduction légère mais significative de la réactivité du NLV a été
observée avec TCR8 + VST (Figure 3A). Ces résultats ont été corroborés par ICS
où nous avons trouvé des niveaux similaires de dégranulation (CD107a/b), d'IFN­
g et de TNF­a dans les VST NT et TCR8+ en réponse aux antigènes viraux
(Figure 3B). Encore une fois, le peptide LML dérivé de la survivine n’était reconnu
que par TCR8+ mais pas par les NT VST. Ainsi, les VST TCR8+ de capture d'IFN­
g sont spécifiques et réactifs à la fois contre les antigènes tumoraux et viraux
ciblés, et les réactivités antivirales ne sont pas altérées par la transduction et
l'expression forcée de TCR8.
Nous avons ensuite évalué la cytotoxicité des VST NT et TCR8 + dans des
co­cultures et dans un test de libération
de 51Chromium de 4 heures . Lorsque nous
En co­culture de VST NT ou TCR8+ avec des cellules leucémiques HLA­
A*02:01+survivine+ BV173, nous avons observé une destruction significative des
cellules cibles par TCR8+ mais pas par les VST NT (nombre de cellules tumorales
résiduelles NT vs TCR8+ : 2,3 ± 0,6 x 106 vs 0,04 ± 0,07 x 106 , p = 0,0004,
moyenne ± SD, n = 6) (Figure 4A, à gauche). Aucune différence dans les comptes
de VST à la fin des co­cultures n’a été observée (Figure 4A, à droite). Nous avons
également analysé la sécrétion de cytokines et les granules lytiques présents dans le co­
4 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google

Bajwa et Arber VST transgéniques rapides pour la leucémie

UN.

B. C.

À F

FIGURE 2 | Caractérisation phénotypique et expansion des VST TCR8+. (A) Parcelles FACS représentatives (à gauche) et résumé (à droite) des efficacités de transduction (mTCRb, CD271) et
de la spécificité du TCR transgénique [LML dextramer (Dex)]. NT : non transduit. NT vs TCR8+, moyenne ± SD, ****p <0,0001, n=8 dans les deux.
(B) Parcelles FACS représentatives (à gauche) et résumé (à droite) des cellules T spécifiques du CMV dans les VST NT et TCR8+. NT vs TCR8+, moyenne ± SD, n=5, p=ns. La couleur des points
indique les donateurs individuels. (C) Pliez l’expansion des VST NT (cercles ouverts) et TCR8+ (cercles bleus) après la première (S1) et la deuxième (S2) stimulation. (D) Distribution des cellules
T CD4+ et CD8+, tracés FACS représentatifs (à gauche) et résumé (à droite) (couplés sur le total des cellules vivantes), moyenne ± SD, n=5. (E) Analyse des cellules NK (CD56+CD3­), des cellules
T activées (CD56+CD3+) ou des cellules T TCRgd (TCRgd+CD3+) dans les VST NT et TCR8+. Parcelles FACS représentatives (à gauche) et résumé (à droite) (sur le total des cellules vivantes),
moyenne ± SD, n = 5. (F) Terrain FACS représentatif (en haut) et résumé (en bas) (déclenché sur des cellules T CD3+CD8+ vivantes) du phénotype de mémoire des VST : naïf (TN), mémoire
centrale (TCM), mémoire effectrice (TEM) et différencié en phase terminale ( TEMRA) caractérisés dans les VST NT et TCR8+ sur la base de la coloration CD45RO et CD62L, n = 5, moyenne ±
SD. ns, non significatif.

Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org 5 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021

Machine Translated by Google

Bajwa et Arber VST transgéniques rapides pour la leucémie

UN.

B.

FIGURE 3 | Les VST TCR8+ sont multi­antigènes spécifiques de la survivine et des antigènes viraux (CMV et EBV). (A) Les VST NT ou TCR8+ après S1 ont été stimulés avec des pepmixes/
peptides viraux (CMV et EBV), un peptide de survivine ou des lignées cellulaires de leucémie (BV173 : HLA­A2*02:01+survivine+ ou K562 : HLA­A2­) pour 24 h et les cellules formant des taches
d'IFN­g (SFC) ont été mesurées par ELISPOT, n = 6, moyenne ± SD : NT vs TCR8+, peptide LML : **p = 0,003, BV173 : ****p<0,0001, peptide NLV : *p=0,035, pp65, IE1, LMP2, BZLF, EBNA1,
peptide GLC, peptide YVL : moyenne ± SD, p=ns, n=6. (B) Les VST NT ou TCR8+ ont été stimulés avec des pepmixes viraux, le peptide LML, des pepmixes viraux plus le peptide LML, du
PMA/Ionomycine (25 ng/ml) ou un peptide GIL grippal non pertinent (contrôle négatif) pendant 4 h et colorés pour la dégranulation (CD107a/ b) et IFN­g et TNF­a intracellulaires suivis d'une
analyse FACS. Le pourcentage de cellules exprimant CD107a/b+/IFNg+ (en haut à gauche), CD107a/b+/TNFa+ (en haut au milieu) et (CD107a/b+/IFNg+/TNFa+ (polyfonctionnel, en haut à droite)
sont indiqués. Points, moyenne ± SD, n= 3 donneurs. Des tracés FACS représentatifs sont présentés en bas (déclenchés sur les cellules vivantes totales, puis déclenchés sur les cellules
CD107a/b+) pour NT (à gauche) et TCR8 (à droite). ns, non significatif.

surnageant de culture 24 heures après la provocation tumorale. Les VST
TCR8+ ont produit des quantités significatives de cytokines TH1 ,
notamment IFN­g, TNF­a et IL­10 (NT vs TCR8+ VST : IFN­g ; 0,9±1,0
vs 8,1±4,0 ng/ml, p=0,017, TNF­a ; 0,02 ±0,01 vs 1,2±0,9 ng/ml, p=0,017,
IL­10 ; 0,3±0,2 vs 2,8±2,1 ng/ml, p=0,028, moyenne ±SD, n=6) et
granules cytolytiques (GZMB NT vs TCR8+ : 2,7 ± 1,5 contre 6,8 ± 4,0
ng/ml, p = 0,02, moyenne ± SD, n = 6) (Figure 4B). nous
détecté la libération de GZMA et de perforine dans le surnageant des NT
VST même si aucune cytotoxicité n'a été observée. Dans un test de
cytotoxicité de libération de 51 chrome de 4 heures , nous avons constaté
que les cellules T autologues activées pulsées avec des peptides viraux
étaient efficacement lysées par les VST NT et TCR8 + à différents
rapports E: T, tandis que les cibles non pulsées n'étaient pas tuées
(Figure 4C). ). , moyenne ± ET, n = 3 donneurs, chacun étalé en triple technique). HLA­

Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org 6 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021

Machine Translated by Google

Bajwa et Arber VST transgéniques rapides pour la leucémie

UN.

B.

C.

FIGURE 4 | Les VST TCR8+ sont cytotoxiques in vitro contre les cibles virales et tumorales apparentées. (A) Co­culture de VST NT ou TCR8+ avec des cellules leucémiques BV173 (HLA­A2*02:01+survivin+) ;
Rapport E:T 1:5. Cellules BV173 résiduelles (à gauche) ou VST (à droite) quantifiées par FACS au jour 3, NT vs TCR8+, moyenne ± ET, cellules tumorales : ***p=0,0004 ;
VST : p=ns ; n=6. (B) Quantification des cytokines dans les surnageants après 24 heures de coculture, NT vs TCR8+, moyenne ± SD, IFN­g, TNF­a, Granzyme (Gzm) B, GM­CSF, IL­10 et IL­4 : *p< 0,05, n = 6.
(C) Pourcentage de lyse spécifique de cellules T autologues activées pulsées ou non pulsées de peptide/pepmix ou de cellules BV173 par NT ou TCR8+ VST dans un 4­
heure de test de libération de 51Cr à des rapports E:T de 40:1, 20:1, 10:1, 5:1, moyenne ± SD, n=4. (D) Résumé du pourcentage de lyse spécifique au rapport E:T 10:1 représentant des donneurs individuels
(points colorés). NT vs TCR8+, moyenne ± écart­type, peptide NLV, CMV regroupé, EBV regroupé : p = ns ; Cellules BV173 : *p=0,01, n=3, test t apparié. ns, non significatif.

Les cellules leucémiques A*02:01+survivine+ BV173 ont été tuées uniquement par était presque exclusivement dirigé contre l’EBV et non contre
TCR8+ mais pas les VST NT. Hétérogénéité des donateurs en ce qui concerne CMV, tandis que les deux autres donneurs évalués ont montré
La réactivité au CMV et/ou à l'EBV était élevée, comme illustré dans réponses simultanées contre les deux virus. L'anti­leucémique
Figure 4D. Par exemple, spécificité antivirale du donneur n°9 l'activité conférée par le TCR transgénique était bien plus

Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org 7 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021

Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
cohérente entre les donateurs. Ainsi, nous démontrons que les VST TCR8+
générés avec notre approche sont cytotoxiques et fonctionnels contre les cibles
virales et tumorales.
DISCUSSION
Nous présentons ici une approche pour la génération rapide de cellules T
humaines modifiées avec une activité antivirale et antitumorale simultanée
(Figure 5). Avec le système de capture de cytokines IFN­g, nous avons enrichi
et activé efficacement les lymphocytes T CD8+ à mémoire antivirale qui se
prêtaient directement à la transduction rétrovirale, réduisant ainsi considérablement
la complexité de fabrication par rapport aux processus précédemment établis.
La co­expression transgénique du co­récepteur CD8ab avec le TCR ciblé sur la
tumeur a assuré une disponibilité suffisante du co­récepteur pour les TCR
antiviraux endogènes et antitumoraux transgéniques. Les cellules T générées
grâce à notre approche ont efficacement reconnu et tué les cibles virales et
tumorales.
Notre approche présente des avantages significatifs par rapport aux autres
processus établis pour la production de VST d'ingénierie et permet d'envisager
de passer à un processus fermé semi­automatisé. Les avantages les plus
importants sont que (1) aucun virus vivant n'est nécessaire pour la production de
lignées cellulaires lymphoblastoïdes, (2) la présentation de l'antigène viral et
l'activation des lymphocytes T sont obtenues avec l'impulsion peptidique des
cellules mononucléées du sang périphérique et sans génération supplémentaire
de cellules présentatrices d'antigène. est nécessaire, (3) une procédure en une
étape suffit pour la sélection et l'activation des lymphocytes T qui permet de
procéder directement à la modification génétique après une courte période de
culture, (4) la sélection est effectuée avec des colonnes magnétiques et ne
nécessite pas de cytométrie en flux. basé sur le tri, et surtout (5) l'approche
réduit considérablement le temps de fabrication ainsi que le nombre de
manipulations nécessaires à la génération du produit. Les VST capturés par l'IFN­
g peuvent être potentiellement modifiés à l'aide de systèmes de délivrance de
gènes non viraux tels que les transposons ou CRISPR/Cas9, qui sont plus
polyvalents et plus rentables (18). De plus, nous prévoyons d’améliorer l’approche
et de réduire le besoin d’étapes de fabrication ouvertes.
Par exemple, la capture de cytokines ainsi que la modification de gènes et
l'expansion cellulaire pourraient être adaptées aux capacités d'un système automatisé.générale.
FIGURE 5 | Aperçu schématique de la fabrication et de l’évaluation fonctionnelle des cellules T spécifiques du virus transgénique.
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
plateforme de fabrication fermée comme par exemple le système CliniMACS
Prodigy (16, 19).
Néanmoins, nous avons également identifié certains inconvénients,
notamment (1) l’enrichissement presque exclusif en lymphocytes T CD8+ et (2)
une forte variabilité du rendement en lymphocytes T du donneur après la
procédure de sélection CC. En fait, les lymphocytes T CD4+ spécifiques du virus
jouent un rôle clé dans le développement d’une immunité antivirale de longue
durée en potentialisant les réponses cytotoxiques des lymphocytes T CD8+, en
aidant les lymphocytes B à produire des réponses anticorps efficaces et durables,
et en produisant des effets cytotoxiques directs. (20­22) . Lors du transfert adoptif
de VST à des patients immunodéprimés après HSCT, le compartiment des
lymphocytes T CD4+ a joué un rôle déterminant dans le développement d'un
contrôle viral à long terme (23). L'absence d'enrichissement en lymphocytes T
CD4+ dans notre étude peut être due au fait que notre stimulation avec les
pepmixes viraux a été réalisée sur 6 heures seulement, par rapport à la littérature
précédente où la stimulation durait 16 heures (14, 24), un facteur qui nécessite
à évaluer dans le futur. La forte variabilité de la fréquence des cellules spécifiques
à l’antigène viral est cohérente avec les observations précédentes (14, 16, 24)
et confirme le fait que la fréquence des cellules T mémoire antivirales circulantes
varie sur une large plage chez différents individus.
Les VST constituent une plate­forme de thérapie cellulaire intéressante pour
le développement de thérapies allogéniques à base de cellules T prêtes à
l'emploi. Plusieurs essais cliniques universitaires ont démontré l’innocuité et
l’efficacité du contrôle des infections virales chez les patients immunodéprimés
après une greffe d’organe solide ou une HSCT allogénique avec la perfusion de
VST en banque dérivés d’un donneur tiers dans des contextes partiellement
compatibles HLA (25­30). La thérapie cellulaire VST tierce est désormais en
passe d’être commercialisée. Étant donné que les VST expriment un répertoire
TCR restreint à l’antigène viral, ils n’ont pas produit de maladie significative du
greffon contre l’hôte dans les études portant sur des patients perfusés.
Cependant, la persistance in vivo était plus courte que celle des VST dérivés de
donneurs compatibles HLA [récemment examinés dans (3)], ce qui indique un
rejet significatif par les cellules T ou NK de l'hôte. Récemment, des stratégies
d'ingénierie supplémentaires ont été développées pour conférer une résistance
au rejet aux VST génétiquement modifiés (31, 32) , ce qui améliore encore
l'applicabilité future potentielle en tant que plate­forme de thérapie cellulaire plus
8 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
En résumé, nous montrons que la fabrication de VST issus du génie génétique peut
être simplifiée et raccourcie en combinant la capture des cytokines IFN­g et la transduction
rétrovirale. Notre processus est évolutif, se prête à l’utilisation de systèmes de délivrance
de gènes non viraux et produit des cellules T hautement multifonctionnelles dotées d’une
activité à la fois antivirale et antitumorale. La traduction clinique de notre approche peut
être envisagée dans un essai clinique ayant pour objectif de prévenir ou de traiter les
infections virales et les rechutes malignes chez les patients après une greffe de cellules
souches allogéniques.
DÉCLARATION DE DISPONIBILITÉ DES DONNÉES
Les données brutes étayant les conclusions de cet article seront mises à disposition par
les auteurs sur demande raisonnable.
DÉCLARATION ÉTHIQUE
Un examen et une approbation éthiques n'étaient pas requis pour l'étude sur des
participants humains, conformément à la législation locale et aux exigences institutionnelles.
Le consentement éclairé écrit pour la participation n'était pas requis pour cette étude
conformément à la législation nationale et aux exigences institutionnelles.
LES RÉFÉRENCES
1. Borne CM, Heslop HE. Cellules T pour les infections virales après une greffe
allogénique de cellules souches hématopoïétiques. Sang (2016) 127(26):3331­40.
est ce que je: 10.1182/sang­2016­01­628982
2. O'Reilly RJ, Prockop S, Hasan A, Doubrovina E. Avantages thérapeutiques fournis
par les cellules T spécifiques au virus en banque de restriction HLA définie. Greffe
de moelle osseuse (2019) 54 (Suppl 2) : 759­64. est ce que je: 10.1038/
s41409­019­0614­1
3. Perez C, Gruber I, Arber C. Thérapies allogéniques à base de cellules T disponibles dans le commerce
pour le cancer : opportunités et défis utilisant l'utilisation de cellules « universelles » d'origine naturelle
Cellules T du donneur. Front Immunol (2020) 11:583716. est ce que je: 10.3389/
fimmu.2020.583716
4. Cruz CR, Micklethwaite KP, Savoldo B, Ramos CA, Lam S, Ku S et al.
Infusion de cellules T spécifiques au virus CD19 redirigées dérivées d'un donneur pour
les tumeurs malignes à cellules B récidivantes après une greffe allogénique de cellules
souches : une étude de phase 1. Sang (2013) 122(17):2965­73. doi : 10.1182/
blood­2013­06­506741 5. Rossig C, Pule M, Altvater B, Saiagh S, Wright G, Ghorashian S et al.
Vaccination pour améliorer la persistance des cellules T modifiées par le gène
CD19CAR dans la leucémie lymphoblastique aiguë pédiatrique en rechute. Leucémie
(2017) 31 (5):1087–95. doi : 10.1038/
leu.2017.39 6. Lapteva N, Gilbert M, Diaconu I, Rollins LA, Al­Sabbagh M, Naik S et al.
La stimulation des récepteurs de cellules T améliore l’expansion et la fonction des
cellules T exprimant le récepteur d’antigène chimérique CD19. Clin Cancer Res
(2019) 25 (24) : 7340­50. est ce que je: 10.1158/1078­0432.CCR­18­3199
7. Chapuis AG, Egan DN, Bar M, Schmitt TM, McAfee MS, Paulson KG et al. La thérapie
génique des récepteurs de cellules T ciblant WT1 prévient la rechute de la leucémie
myéloïde aiguë après la transplantation. Nat Med (2019) 25(7):1064­72. est ce que
je: 10.1038/s41591­019­0472­9
8. van Balen P, Jedema I, van Loenen MM, de Boer R, van Egmond HM, Hagedoorn RS
et al. Transfert de gène du récepteur des cellules T HA­1h pour rediriger les cellules
T spécifiques du virus pour le traitement des hémopathies malignes après une greffe
allogénique de cellules souches : une étude clinique de phase 1. Front Immunol
(2020) 11:1804. est ce que je: 10.3389/fimmu.2020.01804
9. Campillo­Davo D, Anguille S, Lion E. Trial Watch : Immunothérapie adoptive à
cellules T conçue par TCR pour la leucémie myéloïde aiguë. Cancers (Bâle) (2021)
13(18). est ce que je: 10.3390/cancers13184519
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
CONTRIBUTIONS D'AUTEUR
GB a conçu la recherche, réalisé des expériences, analysé et interprété les résultats et
rédigé le manuscrit. CA a conçu la recherche, supervisé l’intégralité de l’étude, analysé et
interprété les résultats et rédigé le manuscrit. Les deux auteurs ont contribué à l’article et
approuvé la version soumise.
FINANCEMENT
Le travail a été soutenu par une subvention du programme de recherche translationnelle
de la Leukemia & Lymphoma Society (6490­16), du Centre hospitalier universitaire de
Lausanne (CHUV) et de l’Université de Lausanne, Suisse, tous à CA. Le financement en
libre accès a été assuré par l'Université de Lausanne.
REMERCIEMENTS
Nous remercions les membres du Centre de thérapie cellulaire et génique du Baylor
College of Medicine et de la branche Ludwig Lausanne de l'Université de Lausanne pour
leurs discussions et suggestions utiles. Nous remercions Cynthia Perez pour la lecture
critique du manuscrit.
10. Abou­El­Enein M, Elsallab M, Feldman SA, Fesnak AD, Heslop HE, Marks P et al.
Fabrication évolutive de cellules CAR T pour l’immunothérapie du cancer.
Découverte du cancer du sang (2021) 2(5):408­22. est ce que je: 10.1158/2643­3230.BCD­21­
0084
11. Arber C, Feng X, Abhyankar H, Romero E, Wu MF, Heslop HE et al.
Le récepteur des cellules T spécifiques à la survie cible la tumeur mais pas les cellules T. J Clin
Invest (2015) 125(1):157­68. est ce que je: 10.1172/JCI75876
12. Rath JA, Bajwa G, Carreres B, Hoyer E, Gruber I, Martinez­Paniagua MA et al. La
transcriptomique unicellulaire identifie plusieurs voies sous­jacentes à la fonction
antitumorale du CD4(+) humain modifié par TCR et CD8alphabeta
Cellules T. Sci Adv (2020) 6(27):eaaz7809. doi : 10.1126/sciadv.aaz7809 13.
Bajwa G, Lanz I, Cardenas M, Brenner MK, Arber C. Le co­récepteur transgénique
CD8alphabeta sauve la fonction endogène du TCR dans les cellules T spécifiques du
virus transgénique TCR. J Immunautre Cancer (2020) 8(2):e001487. doi : 10.1136/
jitc­2020­001487 14. Feuchtinger
T, Opherk K, Bethge WA, Topp MS, Schuster FR, Weissinger EM, et al. Transfert adoptif de
cellules T spécifiques à Pp65 pour le traitement de la maladie à cytomégalovirus
chimioréfractaire ou la réactivation après une transplantation de cellules souches
haploidentiques et non apparentées. Sang (2010) 116(20):4360–7. doi : 10.1182/
blood­2010­01­262089 15. Priesner C, Esser R, Tischer S,
Marburger M, Aleksandrova K, Maecker­Kolhoff B et al. Analyse comparative de
l'enrichissement en lymphocytes T IFN­gamma­positifs à l'échelle clinique à l'aide de
plates­formes partiellement et entièrement intégrées. Front Immunol (2016) 7:393. doi :
10.3389/fimmu.2016.00393 16. Kim N, Nam YS, Im KI, Lim
JY, Jeon YW, Song Y et al. Production robuste de cellules T spécifiques du cytomégalovirus
Pp65 à l’aide d’un système de capture de cytokines IFN­Gamma entièrement
automatisé. Transfus Med Hémère (2018) 45(1):13­22. est ce que je: 10.1159/000479238
17. Ngo MC, Ando J, Leen AM, Ennamuri S, Lapteva N, Vera JF et al.
Complémentation des cellules présentatrices d'antigène pour générer des lymphocytes
T avec une large spécificité de cible. J Immunother (2014) 37(4):193­203. doi : 10.1097/
CJI.0000000000000014 18. Irving
M, Lanitis E, Migliorini D, Ivics Z, Guedan S. Choisir le bon outil pour le génie génétique :
leçons cliniques tirées des cellules T du récepteur d'antigène chimérique. Hum Gene
Ther (2021) 32(19­20):1044­58. doi : 10.1089/hum.2021.173 19. Joedicke JJ,
Grosskinsky U, Gerlach K, Kunkele A, Hopken UE, Rehm A.
Accélération de la production à l’échelle clinique de cellules BCMA CAR T avec des
9 avril 2022 | Tome 13 | Article 830021
Machine Translated by Google
Bajwa et Arber
Étapes de maturation. Méthodes Mol Ther Clin Dev (2022) 24 : 181­98. doi : 10.1016/
j.omtm.2021.12.005 20. Novy P,
Quigley M, Huang X, Yang Y. Les cellules T CD4 sont nécessaires à la survie des cellules T CD8
pendant les réponses primaires et de rappel de mémoire. J Immunol (2007) 179(12):8243­51.
doi : 10.4049/jimmunol.179.12.8243 21. Pourgheysari B, Piper KP,
McLarnon A, Arrazi J, Bruton R, Clark F et al.
La reconstitution précoce des cellules T CD4 + mémoire efficaces spécifiques au CMV
protège contre la réactivation du CMV après une SCT allogénique. Greffe de moelle
osseuse (2009) 43(11):853–61. doi: 10.1038/bmt.2008.403 22. Swain SL,
McKinstry KK, Strutt TM. Extension des rôles des cellules T CD4(+) dans l'immunité contre
les virus. Nat Rev Immunol (2012) 12(2):136­48. est ce que je: 10.1038/ nri3152
23. Walter EA, Greenberg PD, Gilbert MJ, Finch RJ, Watanabe KS, Thomas ED et al.
Reconstitution de l'immunité cellulaire contre le cytomégalovirus chez les receveurs de
moelle osseuse allogénique par transfert de clones de cellules T du donneur. N Engl J
Med (1995) 333(16):1038­44. est ce que je: 10.1056/ NEJM199510193331603
24. Rauser G, Einsele H, Sinzger C, Wernet D, Kuntz G, Assenmacher M et al.
Génération rapide de lignées de cellules T CD4+ et CD8+ combinées spécifiques au CMV
pour le transfert adoptif vers des receveurs de greffes de cellules souches allogéniques.
Sang (2004) 103(9):3565­72. doi : 10.1182/blood­2003­09­3056 25. Haque
T, Wilkie GM, Jones MM, Higgins CD, Urquhart G, Wingate P et al.
Thérapie allogénique cytotoxique par cellules T pour la maladie lymphoproliférative post­
transplantation positive à l'EBV : résultats d'un essai clinique multicentrique de phase 2.
Sang (2007) 110(4):1123­31. doi : 10.1182/blood­2006­12­063008 26. Leen
AM, Bollard CM, Mendizabal AM, Shpall EJ, Szabolcs P, Antin JH et al.
Étude multicentrique de cellules T tierces spécifiques à des virus mises en banque pour
traiter les infections virales graves après une transplantation de cellules souches
hématopoïétiques. Sang (2013) 121(26):5113­23. doi : 10.1182/
blood­2013­02­486324 27. Withers B, Blyth E, Clancy LE, Yong A, Fraser C, Burgess J et al.
Contrôle à long terme des infections virales récurrentes ou réfractaires après une HSCT
allogénique avec des cellules T tierces spécifiques au virus. Blood Adv (2017)
1(24):2193­205. est ce que je: 10.1182/bloodadvances.2017010223
28. Withers B, Clancy L, Burgess J, Simms R, Brown R, Micklethwaite K et al.
Création et exploitation d'une banque de cellules T tierce spécifique à un virus
Frontières de l'immunologie | www.frontiersin.org
VST transgéniques rapides pour la leucémie
Dans le cadre d'un programme de greffe allogénique de cellules souches. Greffe de moelle
sanguine Biol (2018) 24(12):2433­42. doi : 10.1016/j.bbmt.2018.08.024 29.
Tzannou I, Watanabe A, Naik S, Daum R, Kuvalekar M, Leung KS, et al.
"Mini" banque de seulement 8 donneurs fournit des cellules T dirigées par CMV à divers
destinataires. Blood Adv (2019) 3(17):2571­80. doi : 10:1182/ bloodadvances201900
30. Prockop S,
Doubrovina E, Suser S, Heller G, Barker J, Dahi P, et al. Immunothérapie par cellules T
spécifiques à l'EBV disponible dans le commerce pour le lymphome associé à l'EBV
réfractaire au rituximab après une transplantation. J Clin Invest (2020) 130 (2) : 733­47.
doi : 10.1172/JCI121127 31. Quach DH,
Becerra­Dominguez L, Rouce RH, Rooney CM. Une stratégie pour protéger les produits de
thérapie cellulaire disponibles dans le commerce à l'aide de cellules T spécifiques à des
virus conçues pour éliminer les cellules T alloréactives. J Transl Med (2019) 17(1):240.
doi : 10.1186/s12967­019­1988­y
32. Mo F, Watanabe N, McKenna MK, Hicks MJ, Srinivasan M, Gomes­Silva D et al. Les
cellules T thérapeutiques disponibles dans le commerce résistent au rejet immunitaire
de l'hôte. Nat Biotechnologie (2021) 39(1):56­63. est ce que je: 10.1038/s41587­020­0601­5
Conflit d'intérêts : CA et GB reçoivent des frais de licence d'Immatics. GB est un employé actuel
d'Immatics. CA possède des brevets et des demandes de brevet en attente dans le domaine des
thérapies à base de cellules T artificielles. GB a des demandes de brevet en attente dans le
domaine des thérapies par cellules T artificielles.
Note de l'éditeur : toutes les affirmations exprimées dans cet article sont uniquement celles des
auteurs et ne représentent pas nécessairement celles de leurs organisations affiliées, ni celles de
l'éditeur, des éditeurs et des critiques. Tout produit pouvant être évalué dans cet article, ou toute
réclamation pouvant être faite par son fabricant, n'est ni garanti ni approuvé par l'éditeur.
Copyright © 2022 Bajwa et Arber. Il s'agit d'un article en libre accès distribué selon les termes de
la licence Creative Commons Attribution (CC BY). L'utilisation, la distribution ou la reproduction
sur d'autres forums sont autorisées, à condition que le(s) auteur(s) original(s) et le(s) titulaire(s)
des droits d'auteur soient crédités et que la publication originale dans cette revue soit citée,
conformément à la pratique académique acceptée. Aucune utilisation, distribution ou reproduction
non conforme aux présentes conditions n'est autorisée.
dix avril 2022 | Tome 13 | Article 830021