Biotechnologies végétales

Marie-Françoise Niogret
Maria Manzanares
Antoine Gravot

UMR 118 Amélioration des Plantes et

Biotechnologies Végétales – INRA-
Agrocampus Ouest-Université de Rennes 1
2011-2012
S7 : Technologie et biotechnologie vég
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologie : Définition OCDE

(2005)
 L’application de la science et de la technologie
à des organismes vivants, de même qu’à ses
composantes, produits et modélisations, pour
modifier des matériaux vivants ou non-vivants
aux fins de la production de connaissances, de
biens et de services.

? Mais comment en est-on arrivé à

des définitions aussi sibyllines ?
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologies
«l’application des principes scientifiques et de l'ingénierie à la
transformation de matériaux par des agents biologiques pour
produire des biens et services » (OCDE)

 technologies de bioconversion

Fermenteurs
Bioréacteurs
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologies végétales
« Développement et utilisation de techniques de cultures in vitro
dans différents domaines relatifs au végétal et à l’amélioration
variétale»

 Haplodiploïdisation
 Culture de méristèmes
 Micropropagation
 Sauvetage d’embryons www.srpv-bretagne.com

 Fusion de protoplastes
 Création de variabilité
 Banque de germoplasmes
 …
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologies
« Technologies impliquant l’obtention et/ou l’utilisation
d’organismes génétiquement modifiés »

“Biotechnologies modernes”
(Protocole de Carthagène)
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologies
« Développement et application d’outils moléculaires dans différents
domaines relatifs à l’agronomie et la médecine »

•Science Museum/Science & Society Picture

Library
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Biotechnologies
« Technologies innovantes basées sur des connaissances
scientifiques dans le domaine du vivant, impliquant d’importants
investissements en R&D et une large ambition commerciale»

Meristem
Therapeutics

Bretagne
Biotechnologies
Végétales
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Définitions
 Issues du génie des procédés (« école allemande »)
– Définition historique (Karl Ereky), début XXème
 Technologies de la biotransformation
– Mots clés : génie des procédés, production industrielle

 Issues du génie génétique (« école américaine »)

– Depuis les années 70
 « Utilisation des techniques de l’ADN recombinant »
– Mots clés : ADN recombinant, protéines hétérologues, organismes génétiquement modifiés
 Notion de « Biotechnologie moderne » du Protocole de Carthagène

 Plaçant au premier plan l’ampleur des investissements R&D et des débouchés

industriels et commerciaux

 Définitions concernant spécifiquement le végétal et les techniques de culture in vitro

 Plus récemment : définitions incluant les approches de génomique

S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Definition proposée par l’Association Française des Biotechnologies

Végétales :

Les biotechnologies végétales sont des technologies qui recouvrent toutes les
interventions en laboratoire sur les organes, les tissus, les cellules ou l’ADN des
végétaux, soit pour mieux maîtriser ou accélérer leur production, soit pour améliorer
leurs caractéristiques, au service de la recherche, de l’agriculture ou de productions
industrielles.

Et une définition plus simple que je vous propose:

Ensemble de pratiques faisant appel aux cultures in
vitro de plantes et aux techniques de biologie moléculaire
dans les domaines de l’agronomie, l’industrie et la recherche
fondamentale
S7 : Technologie et biotechnologie végétales
 Cours
– Cultures in vitro A. Gravot
– Marqueurs moléculaires M.Manzanares
– Transgénèse M-F.Niogret
– Applications non-alimentaires A.Gravot

 TD/contrôle continu
– Analyse d’articles par binômes
 Synthèse écrite 500 mots pour le lundi 3 octobre + diaporama
 Conseils personnalisés pour améliorer le diaporama le 7 octobre
 12 et 13 octobre: soutenances orales : 12 minutes
– T-DNA & données de transcriptome (par binôme)
 2 TD en salle bioinformatique
 Rapport à remettre pour le 6 décembre
 TP en septembre
– B-A-BA de la manipulation d’explants et de la préparation de milieux de culture.
– Préparation et utilisation de protoplastes

 Visite de l’IGEPP (INRA Le Rheu): Haplodiploïdisation & transgénèse Colza + Plateau de génotypage
 1. Recombinaison homologue chez les végétaux Zinc Finger Proteins & TALEN :
S7et: Technologie
Boch al 2009 Science, et biotechnologie
Saika végétalesMove over ZFN Nature Biotec
et al 2011 Plant Physiology,
volume 29 number 8, Shaked et al. 2005 PNAS, Hanin 2001 et 2003, Reiss1996
2. Alternatives à l’utilisation de gènes de résistance à des antibiotiques : Golstein et
al. 2005, Scutt 2002, Iamtham 2000, Scheid, 2005
3. Transformation des génomes chloroplastiques Ruf 2007 PNAS, Daniell 2007
PNAS, Daniell 1998, Daniell 2002 NatBiotec
4. Transgénèse et métabolisation du glufosinate Dröge et al. Planta 1992, 187:142-
151, Metz et al. Molecular Breeding 4: 335–341, 1998.
5. ARN interférent :
a. mécanismes applications : Fusaro et al. 2006 EMBO, Smith et al. 2000
Nature, Schwab 2006, Waterhouse 1998 PNAS, Small 2006, Brodersen 2005,
Metzlaff et al. Cell, Vol. 88, 845–854
b. Impact du froid sur l’efficacité du RNAi Szittya 2003 EMBO
c. Stratégie RNAi pour la résistance aux virus : Niu et al. 2006 Nat Biotec
d. Stratégie RNAi pour la résistance aux insectes : Price&Gatehouse 2008
Trends Genetics, Gordon &Waterhouse Nat Biotec 2007 , Mao et al. 2007 Nat
Biotec
6. Expression de protéines thérapeutiques : Ma et al. 2003, Stoger et al. 2005, Richter
2000, Tiwari2009
7. Génie métabolique :
a. Contenu en vitamine E dans l’huile de soja:
b. synthèse d’alcaloïdes chez le pavot Frick et al. 2007 Metabolic Engineering
c. pro-vitamine A : le golden rice 2
d. arômes chez la tomate Lewinsohn 2001 Plant Physiology
8. Génie métabolique chez les arbres : Pilate 2002 Nat Biotec, Hu 1999 Nat Biotec,
Editorial NatBiotec2005, Chen&Dixon 2007 Nat Biotec
9. Tolérance aux stress abiotiques
a. secondaires : la voie du contrôle du statut oxydatif : Bartel 2001
b. Transport membranaire du sodium et tolérance au sel : Zhang &
Blumwald 2001, Apse&Blumwald Science 1999
c. expression de chaperones hétérologues : Castiglioni 2008 Plant Physiology
10. Apomixie chez le maïs Singh et al. 2011 Plant Cell 29 (8)
11. L’haploïdisation par des histones modifiées Copenhaver et Preuss 2010 Nat Biotech
12. Licences open-source BIOS & travaux de R.A. Jefferson : Broothaerts et al. 1995
NATURE 433, Chilton 2005 Nature Biotechnology 23(3)
13. Analyse de la controverse sur la présence de transgènes dans les stocks de
semences fermières de maïs au Mexique Quist 2001, More 2002, Marris 2005, Dyer
2009
Totipotence de la cellule végétale

S7 : Technologie et biotechnologie vég

S7 : Technologie et biotechnologie végétales
Les cellules végétales, prélevées
sur un organe quelconque d'une
plante, possèdent la capacité de
régénérer un individu complet
identique à la plante mère.
C'est la totipotence des cellules
végétales. Elle repose sur
l'aptitude à la dédifférenciation
(site du GNIS)
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Gretchen Vogel, 2005

S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Historique de la culture de tissus et d’organes

de plantes
 Contexte théorique au début du XXème siècle:
– Théorie cellulaire (Schleiden et Schwann)
Comment étudier le comportement de cellules
isolées ?
– Microbiologie et biochimie

Cultures en conditions Caractérisation de substances

stériles de croissance
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

G. Haberlandt : le concept de totipotence de

la cellule végétale
Deux idées importantes :
•la culture de cellules isolées constituerait
potentiellement un modèle de recherche
•maintien en vie de cellules isolées
•Pas de multiplication cellulaire http://users.ugent.be/
~pdebergh/his/his2az1.htm

•on peut potentiellement régénérer une plante

entière à partir d’une cellule isolée  totipotence
•Échec (mauvais choix d’explants,
méconnaissance des substances de
croissance)
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Émergence des techniques de culture

– Haberlandt (1902) : concept de totipotence

– White (1934) : culture in vitro de racines de tomates
– Gautheret (1935) : utilisation d’auxine pour cultiver
du cambium de saule
– 1939 : 1ère culture indéfinie de cals de carotte

https://www2.carolina.com

La culture de tissus est possible en utilisant des substances de

croissance et/ou des tissus méristématiques
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Émergence des techniques de culture

– Braun (1941) : travaux sur le crown gall

Croissance in vitro des tumeurs

sans ajout d’hormones

– Miller (1955) : cytokinines

– Murashige et Skoog : mise au point de milieux de culture
efficaces contenant des cytokinines et des auxines

Organogénèse &
callogénèse
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

“La totipotence repose sur

l’aptitude à la dédifférenciation”

Sugimoto 2010 Dev Cell

Birnbaum 2008 Cell
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Confirmation des hypothèses

d’Haberlandt

 1956 (Muir) suspensions

cellulaires

 1958 (Reinart et Stewart)

Embryogenèse somatique
chez la carotte
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Confirmation des hypothèses de

Haberlandt

 1960 Production fiable de

protoplastes par digestion
enzymatique (Cocking)

 1971 (Nagata et Takabe)

Régénération d’un plant
entier à partir d’un
protoplaste
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Développements : des
outils agronomiques
 1965 (Morel) Germination et
micropropagation in vitro des
orchidées

 1967 (JP Bourgin & JP Nitsch) :

tabacs haploïdes à partir d’anthères

 1973 : hybride issu d’une fusion de

protoplastes
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Développements : production de
métabolites secondaires
 1977 : culture de cellules de tabac dans un réacteur
de 20 000 litres

 1983 (Mitsui Petrochemical) : production industrielle

d’un pigment: la shikonine

 1997 L’entreprise Samyang Genex (Daejeon, Corée)

produit un anticancéreux, le Genexol, à partir de
cultures in vitro de Taxus
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Développements : la transgenèse

 Marc Van Montagu (1983) : tabac

résistant à la kanamycine

 1994 : Flavr Savr (Calgene, antisensage

d’une polygalacturonase)

 1996 : maïs transgénique commercialisé

aux USA
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Sussex, Plant Cell 2008

S7 : Technologie et biotechnologie végétales Aspects historiques

Conclusions
 Problématique initiale :
– recherche d’un modèle de cellules isolées
– démonstration de la totipotence des cellules
végétales

Identification du rôle des substances de

croissance
Mise au point de nombreuses techniques
Transgénèse
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Revenons sur le phénomène de

totipotence…

Les cellules végétales, prélevées sur un organe

quelconque d'une plante, possèdent la capacité de
régénérer un individu complet identique à la plante mère.
C'est la totipotence des cellules végétales. Elle repose sur
l'aptitude à la dédifférenciation (site du GNIS)
S7 : Technologie et biotechnologie végétales
Embryogenèse / Organogénèse

 Embryogénèse à partir de cultures de

à partir de cellules somatiques cellules “indifférentiées”

Garces et al. PNAS 2007

 Régénération d’organes et de tissus à partir de cellules

somatiques ou de cellules « indifférentiées »

Birnbaum 2008 Cell Sena & Birnbaum 2010 Birnbaum 2008 Cell
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Des cellules plus ou moins

totipotentes
Les méristèmes :
•un réservoir de cellules totipotentes
Les autres types cellulaires :
• une totipotence plus ou moins facile à exprimer
•Utilisation de substances de croissance exogènes

Variabilité •Régénération directe

interspécifique •Régénération en passant par un stade de cal
 Principales méthodes de micropropagation

Culture de
Meristème
méristème

Apex caulinaire Plantules

Tige feuillée Enracinement

Nœud
Caulogenèse
directe

Morphogenèse
Embryogenèse Semences
directe somatique artificielles
directe

Explants divers
Caulogenèse
(racines, tige,
feuilles…) indirecte
cal

Morphogenèse Embryogenèse
indirecte somatique
Callogenèse indirecte
Suspensions
D’après Lindsey et Jones 1989 cellulaires
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

“La totipotence repose sur

l’aptitude à la dédifférenciation” (?)

Sugimoto 2010 Dev Cell

Birnbaum 2008 Cell
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Comprendre la nature des cellules

souches
 Notion de cellule souche en biologie végétale
 Notion de niche de cellule souche en biologie
végétale
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

Comprendre les mécanismes de

dédifférenciation
 Modulation de l’expression génétique via des
mécanismes épigénétiques
– Reconformation de la chromatine
 Modification des histones
 Méthylation de l’ADN
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Le rôle du péricycle : un
grain de sable dans le
modèle
S7 : Technologie et biotechnologie végétales Le rôle du péricycle : un
grain de sable dans le
modèle
S7 : Technologie et biotechnologie végétales

CONCLUSION:
In this study, we show that callus formation
from multiple organs is not a process of
reprogramming to an undifferentiated state,
but rather the differentiation of pericycle-like
cells present in the organ toward root
meristem-like tissue.

In this case, the pericyle-like cells are

functionally analogous to animal tissue stem
cells, which are found in many tissues
throughout the body and can divide and
differentiate into specialized types of cells.

This leaves open the question how root

meristem-like callus tissue has the ability to
form aerial shoots in the next stage of the
regeneration process

Kaoru Sugimoto, Yuling Jiao, and Elliot M. Meyerowitz