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Volume 2 - Numro 17 - Octobre 2012

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email : amilabo@amilabo.com - site : www.amilabo.com Volume 2 - Numro 17 - Octobre 2012 Chers lecteurs, Lutilisation des Indicateurs Biologiques pour la qualication des procds de dcontamination au peroxyde dhydrogne pour les isolateurs ou plus gnralement pour la dcontamination des salles est un sujet dactualit complexe. En tant que fournisseur dindicateurs biologiques de longue date, nous sommes bien sr sollicits par les utilisateurs mais aussi confronts leur exigence lgitime dinformation et de qualit, labsence de standards et de recommandations concernant les performances de rsistance de tels indicateurs et, ceci expliquant peut-tre cela, linsufsance des connaissances disponibles sur le mode dinteractions des paramtres inuenant ce procd de "strilisation". Nous revenons dans ce Sterinews sur ces diffrents aspects et tentons, comme toujours, dapporter notre pierre ldice. Nous donnons galement rendez-vous, ceux qui sy rendront, au Congrs de lA3P Biarritz les 23,24 & 25 octobre 2012 pour prolonger cette discussion et dcouvrir nos dernires nouveauts. Jean-Christophe Gry

Utilisation dindicateurs biologiques tripliqus pour valuer un cycle de biodcontamination dun isolateur.
Si vous tes impliqus dans le domaine de la strilisation vous tes sans doute familier avec lapparition inattendue dun indicateur biologique positif et des problmes qui en dcoulent. Mais si votre implication en strilisation concerne la bio dcontamination au peroxyde dhydrogne en phase vapeur (VHP) alors ce sujet peut conduire des insomnies Les autres procds de strilisation comme la vapeur sature sous pression avec pr-vide possdent des capacits de pntration que nont pas les procds gazeux pression ambiante. En raison des faibles proprits de pntration du peroxyde dhydrogne, la prsentation des spores sur la surface du support est un point critique. De mme la prsence de dbris parmi les spores peut aussi conduire la prsence de spores survivantes alors que leur mort tait attendue. Ce phnomne est souvent dcrit dans les publications sous le terme de rogue BIs 1.,2. Comment procder alors lorsque ces indicateurs biologiques au comportement indsirable et inattendu se manifestent lors dun cycle de qualification ou dtudes de requalification ? Une fois que les indicateurs ont t cultivs dans leur bouillon et que le rsultat positif est constat, il est impossible de savoir si la pousse est lie un dfaut au niveau de linoculum des spores sur le support ou si cela est d une dviation de ltalit du cycle. Quand on dispose un (1) seul indicateur par point test, la question que faire maintenant ? la rponse consiste malheureusement devoir effectuer de nouveaux tests, coteux. Le rapport technique N51 de la PDA, section 8.1 suggre que refaire un cycle avec un lot diffrent dindicateurs ou de disposer deux ou trois indicateurs au mme point peut savrer ncessaire3. Ce Sterinews discute ce concept : utiliser des indicateurs tripliqus non en tant que mesure prise suite lapparition dun positif, mais comme mesure proactive. Dans la publication prcite, James Drinkwater cite une tude de cas o mme des coupons inox prpars et inoculs avec le degr de qualit le plus lev possible prsentent un taux dchec de 0.3%. Alors, si nous devons apprendre vivre avec les rogue BIs , pourquoi ne pas se prparer linvitable bien que cette situation soit indsirable ? La raison de lutilisation dindicateurs multiples chaque point test sexplique par le besoin que chaque indicateur soit une rplique statistique de son voisin. Lutilisateur peut rester sceptique (et cest bien comprhensible) par cette solution propose par un fournisseur dindicateurs biologiques qui va ainsi faire multiplier par 2 ou 3 la consommation dindicateurs. En fait cela ne doit pas tre le cas. Au lieu de disposer au hasard 100 indicateurs dans lisolateur, on peut identifier 30 ou 40 points les plus difficiles striliser et positionner 3 indicateurs chaque point challenger (soit entre 90 et 120 BIs par cycle). Avec un tel dispositif statistique en place, il est alors possible si lon observe la pousse de un (ou deux) indicateurs, dutiliser lquation de Halvorson-Zigler4. pour calculer le nombre le plus probable (NPP) dorganismes survivants.

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Lorsquun seul indicateur est utilis et sil pousse, il ny a aucun moyen de calculer et donc de savoir si ce rsultat est d une spore survivante ou plusieurs centaines de milliers de spores survivantes. Equation de Halvorson - Zigler NPP = ln (n/r) NPP = nombre le plus probable de survivants ln = fonction log nprien n = nombre de rpliques chaque point test r = nombre de BIs ngatifs chaque point Concernant lquation de Halverson Ziegler voir aussi Sterinews N14 (mars 2010) disponible sur notre site www.amilabo.com (rubrique sterinews) ainsi que larticle Understanding Biological Indicator Grow Out Times disponible galement sur notre site. Prenons comme exemple le cas o lon observe un (1) positif et deux ngatifs lissue dun cycle VHP un point o 3 BIs ont t disposs (n = 3 et r = 2) NPP= ln (3/2) = 0.405 Ce nombre NPP indique quen moyenne nous avons 0.405 spores survivantes par indicateur. Deux indicateurs sur trois sont ngatifs et donc nous savons quil ny a aucune spore survivante sur chacun de ces deux indicateurs. Maintenant que nous avons calcul le NPP, ltape suivante est dutiliser ce nombre pour calculer la SLR, Rduction Logarithmique de Spores, associe cette observation de deux ngatifs pour un positif. Pour cela on utilise lquation suivante : SLR = Log10 No- Log10 NPP SLR= Spore Log Rduction No = population initiale de spores sur les BIs non exposs. Si le certificat danalyse du lot de BIs utilis indique une population initiale de 1.6 x 106 spores par BI, la SLR calcule est donc de : SLR= Log10 1.6 x 106 - Log10 0.405 SLR= 6.204-(-0.393) SLR= 6.597 Donc en dpit dune pousse sur trois BIs disposs au mme point, on peut documenter quune rduction logarithmique de 6 log a bien t atteinte ce point particulier.

Ce calcul nest possible que si lon utilise des rpliques. Si lon avait rparti 100 BIs 100 points diffrents, il naurait pas t possible dutiliser ces calculs dans la mesure o ces 100 BIs individuels ne sont les rpliques daucun autre.

La question suivante que lon peut tre amen se poser est alors : Ce BI positif est il d une imperfection de linoculum ou une lgre dviation du niveau de mortalit dlivre par le cycle en ce point ? Nous avons observ 2 ngatifs ce point et les analyses mathmatiques montrent quune rduction logarithmique de 6 log a t atteinte. Si les 3 BIs rpliqus sont positifs ou si de multiples positifs de multiples points sont observs aprs plusieurs jours dessais, on doit considrer quil y a une vraie dficience du process et cela ncessite une attention particulire. Au contraire si, en utilisant cette approche de BIs tripliqus, on observe rgulirement aucune pousse en tout point et que soudainement un positif apparait, lanalyse ci-dessus permet de valider le cycle quelle que soit la cause relle de la pousse. Adopter lapproche des BIs rpliqus de faon systmatique et non uniquement en raction ou investigation suite une pousse est une assurance qui prpare linvitable. Si une pousse intervient tout est prt pour valuer la situation et aucune investigation ou revalidation couteuses ne seront ncessaires. Article original: Using replicate BIs to evaluate biodecontamination cycles in isolators Garrett Krushefski (MesaLabs) Traduction et adaptation franaise: Jean Christophe Gry (amilabo)
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Rfrences :
1.Drinkwater

rpartissent de faon tridimensionnelle sur le support. De par la nature du coupon inox, il y a aussi toujours un effet de bord sous forme danneau autour de la zone inocule. Cet effet est plus important sur une surface plane (ruban inox par exemple) que sur les coupons formant une cupule en raison de langle de surface existant, mais cet effet est toujours prsent. Il est donc plus difficile au peroxyde dhydrogne de pntrer les agrgats de spores ainsi forms lors de linoculation. Il y a deux faons daborder cette difficult. La premire consiste utiliser un cycle plus agressif ou plus long de faon essayer de pntrer les couches de spores existantes en certains points. La seconde mthode est dutiliser un indicateur avec une population plus faible (donc moins concentre) par exemple de 104 ou 105 au lieu de 106. Pour la bio dcontamination des surfaces cela peut tre un choix arbitraire qui permettra lutilisateur de raliser des cycles suffisamment ltaux pour tuer les spores des indicateurs sans avoir se confronter lapparition des rogues BIs simplement parce que la densit des spores sera rduite sur le support. En pratique on peut considrer que la probabilit dintroduire dans un isolateur une contamination importante est faible. Des cycles VHP sont raliss rgulirement dans lisolateur et tout ce qui y est introduit est strilis ou dcontamin. De plus si un contaminant tait prsent il le serait plus que probablement un taux trs faible et par un germe ne formant pas de spores. Par consquent, pour ces types denvironnement, lutilisation dindicateurs biologiques avec des populations plus faibles peut-elle tre justifie. La concentration en peroxyde dydrogne et autres facteurs La concentration en peroxyde dhydrogne est galement un sujet de proccupation. Au fil du temps des conditions standard ont t tablies pour la strilisation la vapeur, la chaleur sche ou loxyde dthylne. Pour la vapeur les conditions standard ont t fixes 121C en vapeur sature. Pour lOxyde dEthylne les conditions standard ont t fixes 60% Humidit Relative, 600 mg/L EtO, 54C. Les valeurs D des indicateurs biologiques sont calcules ces conditions trs prcises. Par contre pour la bio dcontamination au peroxyde dhydrogne en phase vapeur (VHP) aucune condition standard nexiste. Sur les certificats danalyse Apex par exemple, la valeur D indique a t calcule 2 mg/l de peroxyde dhydrogne. Mais beaucoup dutilisateurs travaillent, pour leurs tests et cycles de routine, avec une concentration en peroxyde dhydrogne infrieure.
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J, Chewins J, Steele G.Biological indicators dont lie, but in sporicidal gassing disinfection cycles do they sometimes confuse the truth? European Journal of Parenteral & Pharmaceutical Sciences 2009; 14(1): 5-11 P ,Hillebrand J, Case Study: Isolator Sanitisation Cycle Development, Validation and Revalidation.

2.Templeton

3.Technical

Report N51, Biological Indicator for Gas and Vapor-Phase Decontamination Process: Specification, Manufacture, Control and Use, Parenteral Drug Association: Bethesda, MD 2010 H, Ziegler N. Journal of Bacteriology 1933;

4Halvorson

25,101-121

Paramtres affectant la performance des indicateurs biologiques exposs aux vapeurs dH2O2
Les difficults lies lutilisation du peroxyde dhydrogne sont multiples et les paramtres qui influencent les performances sont bien moins connus que ceux influenant la strilisation par la vapeur, lEtO ou la chaleur sche. Ces principaux paramtres sont : La population Pour les strilisations classiques (vapeur, EtO, chaleur sche) la rsistance (valeur D) des spores issues dune mme souche est approximativement la mme que lon ait une population de 104, 105 ou 106. Ce nest pas le cas pour le peroxyde dhydrogne. De mme dans le cas des strilisations classiques le comportement des spores est prvisible (par exemple on peut recalculer pour une temprature diffrente la valeur D laide de la valeur Z, voir Sterinews N8). Cela nest pas possible pour le peroxyde dhydrogne. La raison est facile comprendre : la strilisation au peroxyde dhydrogne est une strilisation de contact. Par consquent plus les spores sont proches les unes des autres ou forment des agrgats, moins lagent strilisant a un accs direct aux spores. Et plus la concentration de spores augmente plus la probabilit pour que les spores soient en contact les unes avec les autres saccroit. Enfin il faut comprendre que ce phnomne de contact des spores les unes avec les autres ou dempilements sur la surface du support est particulirement susceptible de se produire sur un support lisse bidimensionnel (coupon inox). Ce qui nest pas le cas avec les supports papier ou fibre de verre par exemple o les spores se

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Dautres paramtres peuvent galement avoir un impact sur les performances du process. Les diffrences de structure (souple ou rigide ; nature des matriaux), de configuration (dimensions ; architecture) observes dun isolateur un autre mais aussi les conditions dutilisation (taux dH2O2, dbit, temprature, humidit, turbulences, etc.). Strilisants chimiques et effets similaires Les performances de lagent chimique strilisant le plus connu et le plus utilis, loxyde dethylne (EtO), sont modifies par lhumidit relative et par la temprature prsentes pendant lexposition. On observe qu une mme temprature et dans les mmes conditions de strilisation, si on diminue le taux dhumidit relative pendant lexposition, des indicateurs biologiques qui auraient d tre tus ont survcus. La temprature pendant lexposition affecte galement la rsistance des spores. Comme le stipule lISO 11138-2, si la temprature dexposition est diffrente, les exigences en terme de valeur D sont diffrentes (minimum D=2.5 54C ou D= 12.5 30C) et ceci pour des conditions identiques de concentration en gaz et dhumidit relative. On observe galement avec le dioxyde de chlore que la temprature et lhumidit affectent la performance des indicateurs biologiques. En ayant cela en mmoire il semble plausible dimaginer que l'efficacit ltale du peroxyde dhydrogne soit galement influence par des variations des mmes paramtres, savoir la temprature et lhumidit relative. Des tudes sont actuellement en cours dans ce domaine et devraient pouvoir apporter prochainement de prcieux renseignements et de meilleures nuits. Nouveauts Amilabo Indicateurs Biologiques Spciaux Pour des besoins trs spcifiques il nest pas toujours possible dutiliser les indicateurs biologiques standards. Cela est d le plus souvent la dimension ou la forme du support. Les applications les plus courantes sont le positionnement dindicateurs lintrieur dun dispositif mdical, dans un protge aiguille, une petite seringue, un tuyau de petite taille etc Afin de rpondre au mieux ces demandes nous mettons disposition des utilisateurs un panel de diffrents types de supports (papier, coton, acier) de petites tailles, inoculs avec les souches habituellement utilises pour les diffrents types de strilisation.

Ces indicateurs sont gnralement livrs avec un certificat danalyses (population, valeur D) comme les indicateurs biologiques standards. Cette liste de produits nest pas exhaustive, elle prsente les produits les plus couramment utiliss. Des demandes spcifiques peuvent nous tre adresses (population, tailles, support). Nous fournissons galement des suspensions pour inoculation directe

Quelques exemples : Indicateurs spcialement indiqus pour la strilisation de tuyaux :

Proline

Fils acier : pour aiguilles, tuyaux.

Fils coton particulirement adapts pour bouchons (col vis), protge-aiguilles

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