EXERCICES DAPPLICATION DE LA TECHNIQUE ELISA Exercice 1 La Beta-lactoglobuline est un allergne alimentaire important retrouv dans le lait de vache.

Proposer un test immunologique qui permet de dtecter et doser la Beta-lactoglobuline dans le lait de vache. Reprsenter les tapes de ce test et prciser les anticorps utiliss. Exercice 2 La toxoplasmose est une infection due au parasite intracellulaire Toxoplasmose gondii. La contamination humaine se produit directement au contact du chat ou indirectement par la consommation de viandes parasites insuffisamment cuites. Il est presque impossible de dceler le parasite chez lindividu infect par contre on peut dtecter des anticorps sriques spcifiques du toxoplasme. Toute la gravit de cette infection rside dans les formes congnitales (au cours de la grossesse). En effet, si la contamination est prcoce elle peut entraner la mort in utero, ou dans les mois qui suivent la naissance, ou entraner des retards psycho-moteurs graves chez le nouveau n. Il est donc ncessaire de connatre le statut immunitaire de la femme enceinte vis--vis du toxoplasme en dtectant les anticorps de classe IgG dirigs contre le parasite de la toxoplamose par la technique ELISA. Pour raliser ce test un technicien de laboratoire dispose : - Dune plaque ELISA en polyvinyle - De srum dune femme enceinte de 2 mois - Dun anticorps anti IgG humain marqu la phosphatase alkaline - De la protine du parasite de la toxoplasmose - Du lait (riche en casine) 1/ Proposer un protocole exprimental en prcisant les tapes (sous forme de schma) pour faire ce test. 2/ Quel(s) produit(s) doit commander ce technicien pour faire ce test?

Exercice 3 La Bronchite Infectieuse Aviaire (BIA) est une maladie virale trs contagieuse due au Virus de la Bronchite Infectieuse (VBI) qui reprsente une menace pour les levages de poulets et de dindes. Pour lutter contre cette pathologie une vaccination efficace est ncessaire. Plusieurs vaccins contre diffrentes souches virales du VBI existent. Un chercheur a test dans son laboratoire lefficacit de la protection humorale confre par deux vaccins de la BIA, lun appel le vaccin H120, lautre est appel vaccin IB 4-91, chez des cinq groupes de poussins traits diffremment. Pour cela, il a dos le taux danticorps sriques, spcifiques du VBI, chez ces cinq groupes (A, B, C, D et E). Les rsultats obtenus et les traitements des cinq groupes A, B, C, D et E sont reprsents dans le tableau suivant :
Traitement Groupes de poussins A B H120-H120 H120-H120 Puis Non infects par infects par VBI VBI 64 64 C H120- IB4-91 Puis infects par VBI 487 D H120 Puis infects par VBI 72 E Non vaccins/Non infects 66

Taux danticorps Avant traitement Taux danticorps Aprs traitement

5536

8995

8534

586

72

H120-H120 : 1re injection avec H120 et rappel avec H120 H120- IB4-91: 1re injection avec H120 et rappel avec IB4-91 H120 : une seule injection avec H120 1/ Proposer une technique immunologique pour faire ce dosage. 2/ Proposer un protocole dtaill, avec les diffrentes tapes et les anticorps utiliss, pour faire ce dosage. 3/ Interprter les rsultats obtenus, en dduire le (s) traitement(s) qui donne(nt) la meilleure protection contre le VBI ?

Par ailleurs, ce chercheur se propose de tester la spcificit des anticorps anti VBI quil a purifi chez les poussins du groupe A vis--vis dun mlange de protines virales dune autre souche du virus VBI. 4/ Proposer une technique avec un protocole dtaill pour faire ce test. Exercice 4 Les srums de quatre sujets atteints par une infection virale (sujet A, sujet B, sujet C et sujet D) sont analyss avec des anticorps dirigs contre les protines majeures de 4 virus diffrents (V1, V2, V3 et V4). Les rsultats obtenus sont donns dans le tableau suivant : Ac Ac anti V2 Ac anti V3 Ac anti V4 antiV1 Srum du + sujet A Srum du + sujet B Srum du + sujet C Srum du sujet D + : Test positif ; - : test ngatif. 1/ Quelle technique peut-on utiliser pour faire ce test ? 2/ Donner brivement les tapes de ce test sachant que les trois anticorps Ac1, Ac2 et Ac3 ne sont pas marqus. 3/ Interprter les rsultats obtenus en prcisant par quel virus serait infect chacun des sujets analyss.