THESE DE DOCTORAT DE LECOLE CENTRALE PARIS

Spcialit
Electrochimie - Biocorrosion

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Prsente par Cyril MARCONNET

Pour obtenir le grade de Docteur de lEcole Centrale Paris SUJET :

Influence de ladhsion et de lactivit enzymatique du biofilm sur le comportement lectrochimique des aciers inoxydables immergs en eaux de rivire
Soutenue le vendredi 30 Mars 2007, 9h30 Jury :
Mme M-N. BELLON-FONTAINE, Professeur, ENSIA (Prsidente du jury) Mme C. DAGBERT, Matre de confrence, Ecole Centrale Paris (Directeur de thse) Mme I. DUPONT-MORRAL, MIRIADE, conseil rgional B-Normandie (Membre invit) M. D. FERON, Expert Senior Corrosion, CEA Saclay (Examinateur) Mme M. LIBERT, Expert Senior Biochimie-Microbiologie, CEA Cadarache (Rapporteur) Mme N. PEBERE, Directeur de recherche, CNRS Toulouse (Rapporteur) M. B. TRIBOLLET, Directeur de recherche, CNRS Jussieu (Examinateur)

N 2007-13

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Remerciements

Les travaux prsents dans ce document ont t en grande partie raliss au Laboratoire Gnie des Procds et Matriaux de lEcole Centrale Paris. Je tiens remercier le professeur JeanBernard Guillot de mavoir accueilli au sein de lquipe du laboratoire. Cette thse tait partie prenante du programme Biocorys Interrgional et a t finance par la MIATT-Bassin Parisien et par la rgion Ile de France. Que soient ici remercies toutes les personnes qui ont permis la ralisation de ce travail. Je remercie Marie-Nolle Bellon-Fontaine (professeur lENSIA) davoir accept dtre prsidente du jury de thse, ainsi que pour la qualit de son accueil au sein de lUnit Bioadhsion et Hygine des Matriaux, pour les nombreuses discussions, toujours enrichissantes, que nous avons pu avoir durant ces trois annes, et pour ses conseils judicieux lors de la rdaction du manuscrit. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Je souhaite aussi exprimer toute ma gratitude envers les rapporteurs de ce travail, Marie Libert (Expert Senior Biochimie-Microbiologie au CEA Cadarache) et Nadine Pbre (directeur de recherche CNRS lENSIACET), dont les relectures attentives et les questions pertinentes ont permis damliorer la qualit du manuscrit et de mettre en perspective les rsultats obtenus. Je tiens exprimer ma sincre reconnaissance Bernard Tribollet (directeur de recherche CNRS lUniversit Pierre et Marie Curie) pour sa disponibilit, sa passion dlectrochimiste et son aide indispensable linterprtation des rsultats dimpdance lectrochimique. Merci aussi Isabelle Frateur (charge de recherche lENSCP) pour son aide prcieuse et Vincent Vivier (charg de recherche lUniversit Pierre et Marie Curie) qui a beaucoup contribu aux mesures dimpdance locale. Jadresse aussi de vifs remerciements Isabelle Dupont (MIRIADE, conseil rgional BasseNormandie) pour sa volont et son entrain enseigner la microbiologie aux doctorants travaillant sur des sujets de biocorrosion. Cest grce elle et lensemble du laboratoire Corrodys que la partie Microbiologie de cette thse a pu voir le jour. Jassocie ces remerciements Sophie Malard pour le travail effectu sur les isolements de microorganismes sessiles de la Seine et les dnombrements bactriens. Un grand merci Damien Fron (Expert Senior Corrosion au CEA Saclay), qui a suivi ce projet tout au long des trois annes et a su donner rgulirement des conseils, indiquer des pistes dinvestigation et rendre possible matriellement certaines exprimentations. Je remercie galement toute lquipe du laboratoire LECA du CEA Saclay, et en particulier Olivier Raquet pour son accueil au sein du laboratoire et Marc Roy avec qui jai ralis les immersions en eau de rivire naturelle. Ces moments passs les pieds dans leau resteront parmi les souvenirs les plus marquants de ces trois ans. Les mesures de photolectrochimie ont t ralises au laboratoire LEPMI de lENSEEG grce Yves Wouters, que je remercie chaleureusement, ainsi quAlain Galerie et Jean-Pierre Petit pour lintrt quils ont tmoigns pour ce travail. Les analyses XPS ont t effectues au laboratoire LRSI du CEA Saclay avec laide de Frdric Miserque, que je remercie pour sa grande disponibilit et son enthousiasme.

Une des originalits de ce travail a t de raliser des expriences dimmersion sur site en eau de rivire naturelle. Jadresse donc des remerciements Brahim Benassa (CETMEF), Gunol Chaussec (Concorde Chimie), Serge Richard (Renault Choisy-le-Roi), Venancio Frade (Renaud Flins), M. Mnissez (barrage de Poses-Amfreville), grce qui nous avons pu trouver les sites dexposition et y travailler. Ltude des phnomnes de bioadhsion et de leur influence sur le potentiel de corrosion libre a t mene au sein de lUBHM de lINRA (Massy). Cette collaboration ma permis dacqurir des connaissances thoriques et pratiques de microbiologie et de surmonter les difficults lies la pluridisciplinarit inhrente au sujet. Toutes les personnes de lquipe ont contribu la bonne ralisation de ce travail. Je tiens donc remercier Jean-Marie, Thierry, Margareth, Julien, Gilles, Romain, Sabine, Karine, Florence, Muriel, Virginie, Laurent, aux cts de qui jai pass de trs bons moments. Je remercie galement lensemble de lquipe du laboratoire LGPM, en particulier Annie, Arsne Isambert, Michel Jrme, Carole, Sandra. Une pense amicale pour tous les thsards que jy ai rencontrs et avec qui jai sympathis, Yannick, Catherine, Damien, Lenka, Cyril, et toute la petite bande du midi : Mourad, Nathalie, Monika, Cline, Amlie, Lucie, Fernando, Frdric. Je salue tout particulirement les thsards du programme Biocorys interrgional, Emilie Dajoux-Malard, Jessem Landoulsi et Djamel Aouali. Ce fut un vrai plaisir de vous ctoyer et de travailler avec vous. Bonne chance vous pour la suite ! Cette thse naurait pu se faire sans le concours de ma directrice de thse, Catherine Dagbert, dont lencadrement fut exemplaire. Je te remercie donc, Catherine, pour la confiance que tu as su me tmoigner ds le dbut, pour la motivation que tu sais engendrer chez les autres, pour ta gentillesse, pour ton soutien scientifique et moral qui fut indfectible durant ces trois annes passes ensemble. Jassocie ce remerciement Sylvie Levasseur, qui a beaucoup travaill la ralisation des chantillons de laboratoire. Nous avons form tous les trois, dans la bonne humeur, une vraie quipe de travail. Merci aussi aux copains, les Montbrisonnais bien sr, ainsi que les Parisiens venus assister la soutenance. Enfin, jadresse tous mes remerciements, et bien plus que a, toute ma famille, et en particulier mes parents Andre et Georges, ainsi qu Nicolas et Anne-Sophie, pour le soutien permanent quils reprsentent. Merci enfin Claire pour sa prsence mes cts, pour sa patience et le rconfort quelle ma apport durant la phase de rdaction de ce document.

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Introduction ............................................................................................................................... 7 Chapitre 1 : Etude bibliographique ........................................................................................ 11

1.1
1.1.1 1.1.2

Le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux naturelles............. 13

Evolution du potentiel de corrosion libre ...................................................................................... 13 Augmentation du courant cathodique............................................................................................ 16

1.2
1.2.1 1.2.2 1.2.3

Mcanismes de laugmentation du potentiel de corrosion libre .................................... 20

Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase ............................................................... 20 Biominralisation .......................................................................................................................... 29 Synthse ........................................................................................................................................ 38

1.3
1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4

Le film passif des aciers inoxydables................................................................................ 38

La passivit.................................................................................................................................... 38 Rle des lments dalliage........................................................................................................... 39 Formation de la couche passive..................................................................................................... 40 Proprits lectroniques et composition chimique du film passif ................................................. 41

1.4
1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.4.4

Le biofilm............................................................................................................................ 46
Nature et formation du biofilm...................................................................................................... 46 Ladhsion bactrienne ................................................................................................................. 47 Les exopolymres.......................................................................................................................... 51 Action corrosive des biofilms........................................................................................................ 52

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques.............................................................................. 55

2.1
2.1.1 2.1.2

Matriaux............................................................................................................................ 57
Echantillons de laboratoire............................................................................................................ 57 Echantillons pour les mesures in situ ............................................................................................ 57

2.2
2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4

Produits chimiques et solutions ........................................................................................ 58

Eau de rivire artificielle ............................................................................................................... 58 Ractifs enzymatiques ............................................................................................................. 58 Ajout ultrieur de catalase............................................................................................................. 58 Produits enzymatiques ............................................................................................................. 58

2.3
2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8

Techniques exprimentales ............................................................................................... 58

Expriences ralises dans leau de Seine..................................................................................... 59 Techniques de caractrisation microbiologique ............................................................................ 63 Technique de caractrisation physico-chimique de surface .......................................................... 63 Estimation de la biocontamination dune surface en conditions statiques .................................... 68 Mesure de Ecorr en prsence dun consortium microbien............................................................... 71 Techniques danalyse des couches doxydes ................................................................................ 72 Techniques lectrochimiques en laboratoire ................................................................................. 82 Analyses physico-chimiques de leau de rivire artificielle .......................................................... 86

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface .......... 89

3.1 Prparation de surface des chantillons........................................................................... 91 3.2 Influence de la prparation de surface sur lvolution de Ecorr dans leau de rivire artificielle ......................................................................................................................................... 92
3.2.1 3.2.2 3.2.3 Acier 304L .................................................................................................................................... 92 Acier 316L .................................................................................................................................... 93 Synthse ........................................................................................................................................ 94

3.3 Influence de la prparation de surface sur limpdance lectrochimique des aciers inoxydables dans leau de rivire artificielle ................................................................................ 94
3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 Spectroscopie dimpdance lectrochimique globale.................................................................... 94 Distribution 2D et distribution 3D................................................................................................. 96 Spectroscopie dimpdance lectrochimique locale...................................................................... 97 Synthse ........................................................................................................................................ 98

3.4 3.5 3.6

Influence de la prparation de surface sur les proprits de semi-conductivit .......... 99 Influence de la prparation de surface sur les caractristiques nergtiques de surface 100 Conclusion : choix du traitement de surface ................................................................. 102

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle........................................ 103

4.1
4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5

Mesures lectrochimiques ............................................................................................... 106

Evolution du potentiel de corrosion libre Ecorr au cours du temps............................................... 106 Evolution du courant cathodique au cours du temps ................................................................... 112 Evolution du comportement anodique au cours du temps........................................................... 116 Impdance lectrochimique en eau de rivire naturelle .............................................................. 122 Synthse : mesures lectrochimiques .......................................................................................... 125

4.2
4.2.1 4.2.2 4.2.3

Observations et analyses de surface ............................................................................... 126

Observations de surface (MEB) .................................................................................................. 126 Analyses de surface (MEB/EDS) ................................................................................................ 130 Synthse : observations et analyses de surface............................................................................ 135

4.3

Dnombrements bactriens............................................................................................. 136

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4.3.1 Dnombrements bactriens dans le milieu naturel ...................................................................... 136 4.3.2 Dnombrements bactriens sur des chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle 139

4.4

Caractrisation des films passifs en eau de rivire naturelle ....................................... 140

4.4.1 Analyse des couches doxydes par spectromtrie de photolectrons (XPS) .............................. 140 4.4.2 Dtermination des proprits de semi-conductivit des couches doxydes par la technique de Mott-Schottky............................................................................................................................................ 144

4.5

Synthse gnrale ............................................................................................................. 145

5 Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de peroxyde dhydrogne ........................................................................................................... 147

5.1
5.1.1 5.1.2 5.1.3

Physico-chimie de la solution .......................................................................................... 149

Cintique enzymatique dans la solution ractifs enzymatiques ............................................. 149 Dismutation du peroxyde dhydrogne ....................................................................................... 155 Synthse : physico-chimie de la solution .................................................................................... 158

5.2

Caractrisation des couches doxydes formes dans le modle enzymatique............. 158

5.2.1 Caractrisation des couches doxydes par photolectrochimie ................................................... 159 5.2.2 Analyse des couches doxydes par spectromtrie de photolectrons .......................................... 167 5.2.3 Dtermination des proprits de semi-conductivit des couches doxydes par la technique de Mott-Schottky............................................................................................................................................ 180 5.2.4 Synthse : caractrisation des couches doxydes ........................................................................ 184

5.3
5.3.1 5.3.2 5.3.3 5.3.4 5.3.5 5.3.6 5.3.7

Evolution du potentiel de corrosion libre en eau de rivire artificielle ....................... 186

Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des ractifs enzymatiques....................... 186 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence de peroxyde dhydrogne ....................... 189 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence dacide gluconique ................................. 193 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des produits enzymatiques ..................... 196 Synthse ...................................................................................................................................... 197 Complments : nature des instabilits de Ecorr et rle de la couche passive ................................ 197 Synthse gnrale : volution de Ecorr ......................................................................................... 203

5.4
5.4.1 5.4.2 5.4.3 5.4.4 5.4.5 5.4.6 5.4.7

Ractions cathodiques en eau de rivire artificielle ...................................................... 204

Ractions cathodiques en prsence des ractifs enzymatiques.................................................... 204 Identification de la rduction n1 ................................................................................................ 210 Identification de la rduction n2 ................................................................................................ 218 Ractions cathodiques en prsence des produits enzymatiques .................................................. 222 Synthse ...................................................................................................................................... 222 Ractions cathodiques en eau de rivire artificielle avec lectrode tournante............................. 223 Synthse gnrale : ractions cathodiques .................................................................................. 225

5.5
5.5.1 5.5.2 5.5.3 5.5.4 5.5.5 5.5.6

Effet des ractifs enzymatiques sur le comportement anodique des aciers inoxydables 226
Courbes intensit-potentiel ct anodique en prsence des ractifs enzymatiques ..................... 226 Courbes de polarisation galvanostatique en prsence des ractifs enzymatiques........................ 228 Effet de lactivit enzymatique.................................................................................................... 230 Synthse ...................................................................................................................................... 231 Effet des autres composs sur le comportement anodique des aciers inoxydables ..................... 232 Synthse : comportement anodiques ........................................................................................... 233

5.6
5.6.1 5.6.2 5.6.3

Influence des ractifs enzymatiques sur limpdance du systme ............................... 234

Diagrammes dimpdance en prsence des enzymes .................................................................. 234 Diagrammes dimpdance en prsence des produits enzymatiques ............................................ 247 Discussion ................................................................................................................................... 249

5.7
5.7.1 5.7.2 5.7.3

Mise en vidence du mcanisme de laugmentation de Ecorr sur le site de Choisy-le-Roi 250

Dtermination de la prsence de peroxyde dhydrogne............................................................. 250 Effet dun ajout de catalase sur le courant cathodique ................................................................ 252 Synthse ...................................................................................................................................... 252

5.8

Synthse gnrale : modle enzymatique de production de H2O2 ............................... 253

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6 Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle - Influence sur le potentiel de corrosion libre........................................................................................................................ 255
6.1 Isolement et slection de microorganismes provenant de biofilms forms en eau de rivire naturelle ............................................................................................................................. 257 6.2
6.2.1 6.2.2

Caractrisations microbiologiques des trois isolats ...................................................... 258

Tests dorientation et identification des isolats ........................................................................... 258 Courbes de croissance en milieu de culture ................................................................................ 259

6.3
6.3.1 6.3.2 6.3.3

Caractrisations physico-chimiques de surface des trois isolats.................................. 260

Hydrophilicit et caractre acide/base au sens de Lewis des microorganismes .......................... 260 Charge de surface des microorganismes ..................................................................................... 261 Synthse ...................................................................................................................................... 262

6.4 6.5
6.5.1 6.5.2 6.5.3

Caractrisations physico-chimiques de surface des supports ...................................... 262 Adhsion des isolats sur supports en acier inoxydable en conditions statiques ......... 263
Adhsion statique en eau de rivire artificielle ........................................................................... 263 Adhsion statique en bouillon nutritif ......................................................................................... 267 Synthse ...................................................................................................................................... 271

6.6 6.7 6.8

Discussion.......................................................................................................................... 272 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des isolats................................ 273 Synthse ............................................................................................................................ 275

7 8 9

Discussion gnrale....................................................................................................... 277 Conclusions et Perspectives .......................................................................................... 283 Annexes......................................................................................................................... 287

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Rust never sleeps.

Neil Young

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Introduction

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Introduction

Introduction

Le cot annuel de la corrosion peut atteindre 3 5% du PNB dun pays dvelopp, ce qui explique la quantit importante de travaux de recherche consacrs la prvention de la corrosion et au dveloppement de techniques de protection des matriaux. Lamlioration des proprits mcaniques et de la rsistance la corrosion des aciers inoxydables a t lorigine dune extension de leur utilisation pour laborer des structures immerges dans les eaux naturelles, dans de nombreux secteurs dactivit : transport de personnes ou de matriel, installations portuaires, exploitation des ressources naturelles, production dnergie, approvisionnement en eau Malgr la formation dun film passif limitant la corrosion gnralise, des pices en acier inoxydable peuvent subir des attaques de corrosion localise : piqres, effet de crevasse De plus, dans les eaux naturelles, et plus gnralement dans les milieux aqueux non striles, la colonisation de la surface du matriau par des microorganismes peut initier ou acclrer un processus de corrosion et conduire une dgradation importante de la structure. Ce phnomne est appel biocorrosion, ou corrosion induite par les microorganismes, ou encore corrosion microbienne, et est dfini comme suit : corrosion associe laction de microorganismes prsents dans le systme de corrosion . (norme NF EN ISO 8044, avril 2000). Les phnomnes de biocorrosion rsultent de la conjonction dfavorable de trois paramtres : un lectrolyte pouvant tre peu agressif, un matriau pouvant prsenter une bonne tenue la corrosion, et des microorganismes produisant des mtabolites dangereux pour le matriau. La formation dun biofilm la surface peut ainsi entraner une dtrioration dans un lectrolyte a priori inoffensif pour le matriau considr. Les phnomnes de biocorrosion pourraient reprsenter jusqu 20% du cot total annuel de la corrosion. Les mcanismes de biocorrosion ne sont pas encore pleinement compris lheure actuelle. La communaut scientifique se heurte plusieurs difficults : complexit et htrognit des biofilms naturels, interaction des microorganismes, diversit des mtabolismes microbiens Mme si la dcouverte de laction du biofilm sur le matriau date du dbut du XXme sicle, la ncessit dune approche pluridisciplinaire a longtemps ralenti la progression des connaissances. En effet, les processus de biocorrosion mettent en jeu de nombreux domaines scientifiques, depuis la microbiologie jusquau gnie des matriaux, depuis llectrochimie jusqu lenzymologie Dimportants progrs ont t effectus ces vingt dernires annes grce au dveloppement de techniques dinvestigation locale (lectrochimie, analyse, observation). Le comportement lectrochimique des aciers inoxydables immergs en eau de mer naturelle se caractrise par une augmentation de leur potentiel de corrosion libre, qui peut provoquer lamorage de la corrosion par piqres. Il a t dmontr lors dtudes prcdentes que cette lvation de potentiel est lie la formation du biofilm la surface du matriau et son impact sur les processus cathodiques. De nombreux cas de biocorrosion affectant les aciers inoxydables en eau de mer naturelle ont t relis au mtabolisme de certains microorganismes capables de synthtiser par voie enzymatique un milieu oxydant (production de peroxyde dhydrogne) et acide. Un tel mcanisme a t valid en laboratoire lors dtudes en eau de mer artificielle. Le potentiel de corrosion libre suit frquemment la mme volution dans les eaux naturelles faible teneur en ions chlorures (eaux fluviales, lacustres, lagunaires), toutefois son augmentation pourrait dpendre du milieu et ne pas tre systmatique. Par ailleurs, deux mcanismes sont souvent cits et opposs dans la littrature. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Introduction Lobjectif de ce travail de thse est de caractriser linfluence du biofilm sur le potentiel de corrosion libre, partir de ltude non seulement des ractions cathodiques mais aussi des processus anodiques et de limpdance lectrochimique, des aciers inoxydables immergs en eau de rivire naturelle, afin de mettre en vidence le principe du (ou des) mcanisme(s) induisant les modifications du comportement lectrochimique. Aprs la prsentation dune synthse bibliographique, la dmonstration sappuie la fois sur des mesures in situ ralises dans la Seine et sur diffrentes mthodes de caractrisation du film passif. Un des mcanismes menant laugmentation du potentiel de corrosion libre est ensuite valid en eau de rivire artificielle. Enfin, ladhsion de souches microbiennes sauvages provenant de la flore sessile prleve dans la Seine est tudie, ainsi que son influence sur le potentiel de corrosion libre. Avant de conclure ce travail, les rsultats les plus importants sont mis en perspective lors dune discussion critique. A la fin du manuscrit, des annexes concernant plusieurs domaines scientifiques abords dans cette thse (bases de corrosion, notions sur les semi-conducteurs, brve description des bactries) sont donnes afin de faciliter la lecture des non-spcialistes de ces domaines. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Tout au long de ce document, des synthses indiques par des encadrs permettent de rsumer les points importants du raisonnement.

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Chapitre 1 : Etude bibliographique

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Chapitre 1 : Etude bibliographique

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Chapitre 1 : Etude bibliographique

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Chapitre 1 : Etude bibliographique Lobjet de cette tude est la corrosion microbienne (ou biocorrosion) des aciers inoxydables en eaux douces naturelles. Ltat de lart ici effectu sappuie sur des recherches bibliographiques et dtaille les trois grandes composantes de la corrosion microbienne : llectrolyte (milieu liquide), le matriau (acier inoxydable) et les microorganismes. Du fait de la pluridisciplinarit inhrente cette discipline nouvelle quest la biocorrosion, certains concepts peuvent tre assez loigns du domaine de prdilection du lecteur. Pour cette raison, les notions de base des diffrents champs scientifiques intervenant dans ltude sont rappeles dans plusieurs annexes : corrosion aqueuse (annexe n1), matriaux (description des aciers inoxydables en annexe n2), semi-conductivit (annexe n3), microbiologie (brve description des bactries et levures en annexe n4) et enzymologie (description des enzymes en annexe n5). La problmatique de cette thse est prsente dans un premier temps : le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux naturelles (eau de mer, eaux douces) peut mener des situations o le risque de corrosion est lev. Ensuite, les diffrents mcanismes qui ont t proposs pour expliquer ce comportement sont explicits. Enfin, les troisime et quatrime sous-parties sont centrs sur deux lments primordiaux mis en jeu dans les phnomnes de corrosion microbienne des aciers inoxydables : le film passif, qui confre aux aciers inoxydables leur rsistance la corrosion gnralise et leur susceptibilit la corrosion localise, et le biofilm (en particulier son adhsion la surface du mtal), qui peut tre lorigine dune dtrioration du matriau.

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1.1 Le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux naturelles

Le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux naturelles se caractrise par une augmentation du potentiel de corrosion libre (aussi appel potentiel dabandon), souvent attribue dans la littrature une augmentation du courant cathodique au cours de limmersion, comme dvelopp ci-aprs. 1.1.1 Evolution du potentiel de corrosion libre 1.1.1.1 Evolution du potentiel de corrosion libre en eau de mer naturelle De nombreuses tudes antrieures ont port sur la corrosion des aciers inoxydables induite par les micro-organismes en eau de mer naturelle. Dans cet environnement, les cas de dgradation sont frquents. En eau de mer naturelle, le dveloppement du biofilm la surface dun acier inoxydable implique de faon systmatique une augmentation du potentiel de corrosion libre Ecorr, parfois appele anoblissement (traduction littrale de ennoblement, en anglais) [113]. De nombreuses exprimentations ont t conduites dans le monde entier pour confirmer ce modle, en particulier le programme europen MAST II dont les rsultats sont donns en exemple sur la figure 1 [6, 14]. Dans toutes les eaux de mer naturelles testes, le potentiel de corrosion libre a augment au cours du temps. Les valeurs finales atteintes sont toujours comprises entre +200 et +400 mV/ECS. Ces valeurs ne dpendent ni du potentiel initial, ni de la situation gographique, ni de la saison, ni de lalliage utilis (composition chimique, microstructure) [15, 16].

13

Chapitre 1 : Etude bibliographique Laugmentation de Ecorr peut ne pas tre instantane. Le temps de latence avant apparition de laugmentation (ou temps dincubation) est assez variable suivant le lieu, la saison, lcoulement du fluide, la temprature, la lumire Les rsultats du programme MAST II indiquent un temps de latence compris entre 0 et 15 jours. La temprature semble tre un paramtre primordial, pour un lieu dexposition donn [17]. Influence des conditions hydrodynamiques sur lvolution de Ecorr Leffet de la vitesse de circulation de leau sur lvolution du potentiel dabandon est encore sujet controverse. La majorit des auteurs pensent quune vitesse de circulation leve a tendance arracher le biofilm, donc faire crotre le temps dincubation et limiter laugmentation de Ecorr [10, 14]. Cependant, il existe quelques travaux exprimentaux affirmant que la vitesse de circulation deau na pas deffet sur lvolution de Ecorr. Les valeurs atteintes sont toujours les mmes, quel que soit le rgime hydraulique [18]. Influence de loxygne sur lvolution de Ecorr La prsence doxygne est indispensable laugmentation de Ecorr [15]. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Influence de lclairement sur lvolution de Ecorr Le rle de lclairement sur lvolution de Ecorr nest pas encore parfaitement connu. Dans certains travaux, les auteurs affirment que laugmentation de Ecorr nest pas affecte par les conditions dclairement [6, 14]. Dautres tudes, plutt minoritaires, montrent que le potentiel dabandon est plus lev lorsque leau de mer est plonge dans lobscurit [19, 20]. Enfin, dans certains articles, des mesures de Ecorr lors dalternances jour/nuit montrent que le potentiel varie entre les conditions claires et les conditions obscures : le potentiel prend une valeur plus leve le jour que la nuit [21]. Cette influence de lclairement pourrait provenir de la prsence dalgues photosynthtiques dans le biofilm. Leur production de O2 dpend de lclairement et peut influencer la raction cathodique, en gnrant de fortes pressions partielles en dioxygne proximit de llectrode.

Figure 1 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable 654SMO immergs dans 5 stations marines [6]

Enfin, le programme MAST II a montr quil y a un lien entre laugmentation de Ecorr et la teneur en carbohydrates et en protines extracellulaires, et ce pour toutes les nuances dacier inoxydable testes, quels que soit la vitesse de circulation de leau, la temprature, la saison, le lieu dimmersion Les microorganismes affectent donc le comportement la corrosion des aciers inoxydables via leurs produits extracellulaires [22].

14

Chapitre 1 : Etude bibliographique 1.1.1.2 Evolution du potentiel de corrosion libre en eaux douces naturelles Des expriences dimmersion daciers inoxydables (AISI 304, AISI 304, AISI 316 et AISI 316L) dans des eaux douces naturelles ont t menes dans plusieurs milieux : rivires, lacs, estuaires Les rsultats ont montr que le potentiel de corrosion libre des chantillons augmente jusqu des valeurs comprises entre +200 et +400 mV/ECS [4, 23-30]. Les rsultats obtenus par Dickinson et al [25] sont reprsents sur la figure 2-a en guise dexemple.

Ecorr (V/ECS)

Temps dexposition (heures) tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 a- Eau de rivire b- Eau ltape finale de traitement dans une station dpuration

Figure 2 : Evolution du potentiel de corrosion libre a- dchantillons dacier 316L immergs en eau de rivire [25] b- dchantillons daciers 304 et 316 immergs dans une eau use contenant 0,515 g/L de Cl- [34]

Comme en eau de mer, les valeurs de potentiel atteintes sont indpendantes du lieu, de la saison, de la temprature, de lalliage Quelles que soient les conditions exprimentales, le potentiel atteint toujours une valeur comprise entre +200 et +400 mV/ECS. En revanche, le temps dincubation ou temps de latence avant laugmentation de Ecorr varie en fonction de nombreux paramtres, biotiques (natures des microorganismes prsents dans le biofilm, nature des EPS) ou abiotiques (temprature, lumire, vitesse de circulation de llectrolyte). Le temps de latence varie en particulier avec la saison [23, 31]. Par ailleurs, les conditions dclairement pourraient avoir une influence sur le potentiel dabandon dans les eaux faible teneur en ions chlorures. Une exprience ralise dans une eau de rivire souterraine a montr que laugmentation de Ecorr sur des chantillons dacier 304 est bien plus importante en conditions claires (biofilm contenant bactries et algues) que dans lobscurit (biofilm uniquement bactrien). Lexprience avait pour but de visualiser leffet des microorganismes photosynthtiques. Il a t conclu que les microorganismes photosynthtiques produisent une pression partielle en oxygne importante dans le biofilm en conditions claires, ce qui a pour effet de faire augmenter le courant de rduction de O2 la cathode. Les rgions du biofilm domines par les algues seraient ainsi lorigine de laugmentation de Ecorr, et leur couplage avec les rgions domines par les bactries, capables dacidifier et de dsoxygner leur milieu environnant, pourrait initier une corrosion localise sur les petites zones anodiques occupes par les bactries [27, 28]. Dautres tudes ont montr que les diatomes photosynthtiques sont capables dinduire une augmentation de Ecorr de 200 mV [32, 33]. A titre de comparaison, la littrature relve des cas daugmentation de Ecorr pour des chantillons daciers inoxydables immergs dans des eaux douces industrielles (mais non strilises), dans des stations de traitement deaux uses, des eaux de vidange Les potentiels

15

Chapitre 1 : Etude bibliographique de corrosion libre ont en gnral augment jusqu atteindre des valeurs maximales denviron +250 +350 mV/ECS. La figure 2-b illustre ce phnomne [34-36]. Toutefois, llvation de Ecorr pourrait ne pas tre systmatique. Certains travaux relvent des cas o le potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau faible teneur en Cl- naugmente pas [34]. 1.1.1.3 Evolution du potentiel de corrosion libre en milieu strile Lorsque des chantillons dacier inoxydable sont immergs en eau de mer strile, le potentiel de corrosion libre volue trs peu. Les valeurs stationnaires de Ecorr en eau de mer strile sont comprises entre -100 et +100 mV/ECS [1, 19, 37]. La prsence de microorganismes serait ncessaire pour avoir une augmentation de Ecorr similaire celle obtenue en eau naturelle. Le mme rsultat a t trouv dans une eau de rivire du sud de lInde ayant une concentration en chlorures de 40 ppm [27, 28]. Lorsque leau de rivire est strilise, le potentiel dabandon des chantillons dacier inoxydable naugmente pas. Laugmentation de Ecorr est donc un effet produit par les microorganismes. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Cest par leur mtabolisme que les microorganismes influent sur la valeur de Ecorr. Lorsque de lazoture de sodium NaN3 (inhibiteur de lactivit respiratoire) est ajout au milieu, le potentiel dabandon diminue brutalement. Ainsi la prsence physique du biofilm peut jouer un rle, mais il semble tre ngligeable devant le rle du mtabolisme des microorganismes quil contient [37]. 1.1.1.4 Synthse Le potentiel dabandon Ecorr des aciers inoxydables immergs en milieu aqueux non strile augmente gnralement dans le temps. Les valeurs atteintes sont toujours dans lintervalle de +200 +400 mV/ECS. Ce phnomne reprsente un danger non ngligeable pour les structures mtalliques immerges en milieu aqueux, car si Ecorr dpasse la valeur du potentiel dapparition de piqres Epiq, la corrosion localise peut se dclencher et dgrader trs rapidement la structure. Cette augmentation de Ecorr, symptomatique de la formation dun biofilm la surface des aciers inoxydables, dpend de la temprature, de lclairement et ncessite la prsence de O2.

1.1.2 Augmentation du courant cathodique

1.1.2.1 Augmentation du courant cathodique en eau de mer naturelle La raction cathodique principale est, en conditions arobies, la rduction de loxygne. Elle est limite par la diffusion de cette espce au sein de la solution et donc dpendante de la prsence du biofilm (ventuelle barrire de diffusion ) et/ou de la vitesse de circulation du fluide (si la diffusion nest pas trop limite par le biofilm). Suivant ltat de la surface de lacier inoxydable (prparation prliminaire, traitement chimique, vieillissement en eau naturelle), la raction de rduction de O2 peut se drouler suivant 2 mcanismes diffrents : un mcanisme une tape mettant en jeu 4 lectrons, sans formation dintermdiaire de 16

Chapitre 1 : Etude bibliographique raction, et un mcanisme comprenant deux tapes mettant en jeu 2 lectrons chacune, avec H2O2 ou HO2- comme intermdiaire de raction. Rduction directe 4 lectrons : En milieu acide : O 2 + 4 H 3O + + 4 e 6 H 2 O O 2 + 2 H 2 O + 4 e 4 HO En milieu basique : Rduction en deux tapes deux lectrons O 2 + 2 H 3O + + 2 e H 2 O 2 + 2 H 2 O En milieu acide :
H 2 O 2 + 2 H 3O + + 2 e 4 H 2 O

(1) (2)

E = 1,229 V/ESH E = 0,401 V/ESH

En milieu basique :

O 2 + H 2 O + 2e HO 2 + HO HO 2 + 2e + H 2 O 3 HO

(3) (4) (5) (6)

E = 0,695 V/ESH E = 1,764 V/ESH E = -0,0649 V/ESH E = 0,867 V/ECS

Le peroxyde dhydrogne H2O2 et HO2- sont des espces ractives de loxygne. Ils sont plutt instables et susceptibles de dismuter selon les ractions (7) et (8) : 2 H 2 O 2 2 H 2 O + O 2 (7) tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007
2 HO 2 2 HO + O 2

(8)

Les premiers travaux sintressant lvolution de la branche cathodique en eau de mer naturelle ont montr que le courant de rduction a tendance augmenter au cours du temps. Il a t prouv exprimentalement quen eau de mer naturelle laugmentation de Ecorr est lie une augmentation du courant cathodique [10, 38]. Lvolution de la courbe intensit-potentiel en eau de mer naturelle prsente en figure 3-B indique effectivement une augmentation de la densit de courant cathodique au cours du temps.

Figure 3 : volution de la densit de courant cathodique sur acier inoxydable immerg en eau de mer naturelle A- chantillon polaris -200 mV/ECS, immerg dans un premier temps en eau de mer naturelle strile puis en eau de mer naturelle non strilise B- polarisations diffrents potentiels [39]

Lorsquun chantillon dacier inoxydable est polaris 0 V/ECS, le courant cathodique augmente quel que soit le lieu. Il semblerait que le temps de latence avant cette augmentation soit plus long que le temps de latence avant augmentation de Ecorr [5, 40]. La valeur finale du courant cathodique nest pas une constante, elle varie en fonction du lieu dimmersion dans cette tude. Une polarisation un potentiel plus cathodique (-200 mV/ECS) donne le mme rsultat : la densit du courant cathodique augmente lorsque lchantillon est mis en contact avec leau de mer naturelle (figure 3-A) [39]. Des travaux plus rcents ont montr que la cintique de rduction de O2 est modifie lorsquun biofilm se forme la surface de lchantillon. La vague de rduction de loxygne 17

Chapitre 1 : Etude bibliographique se dcale vers des potentiels plus levs (entre 0 et +300 mV/ECS), et le courant cathodique du plateau de diffusion augmente [10, 19, 37, 38, 41-43]. Le mcanisme de la rduction de O2 semble tre modifi au cours du vieillissement de la surface immerge [32, 44, 45]. Laugmentation de Ecorr et laugmentation de la cintique de la rduction de O2 sont plus importantes en eau de mer naturelle quen eau de mer artificielle strile, o seul intervient loxygne dissous. Daprs le Bozec et al, la transformation de la couche doxydes en eau de mer naturelle (paississement, stratification et formation dune couche interne riche en chrome et dune couche externe riche en oxydes de fer) est lorigine dune modification du mcanisme de la rduction de O2 [46]. En eau de mer naturelle, la rduction de O2 a lieu en mme temps que la rduction des oxydes de Fe(III) prsents la surface. Elle se fait selon les deux mcanismes ( deux et quatre lectrons), en fonction de la zone considre, alors que sur une surface frachement polie, la rduction de O2 se fait uniquement suivant le processus deux tapes bi-lectroniques. Ainsi, en eau de mer naturelle, laugmentation de la cintique de la rduction de loxygne serait lie la prsence de sites o cette rduction se fait 4 lectrons et dautres o la rduction se fait 2 lectrons. Les modifications de la composition chimique de la couche doxydes (en particulier, augmentation de la teneur en fer(III) lextrme surface) pourraient provoquer une acclration de la cintique de rduction de loxygne, les ions Fe3+ jouant le rle de catalyseur [17, 46, 47]. En eau de mer naturelle strilise par filtration 0,2 m, laugmentation du courant de rduction de O2 na pas lieu [38]. Cest bien la prsence de microorganismes qui est lorigine dune amplification de la rduction de loxygne. Par ailleurs, le courant anodique de dissolution du mtal (trs faible) nvolue pas durant limmersion ; laugmentation de Ecorr est par consquent due une augmentation de la densit de courant cathodique, cest--dire une amplification de la cintique de la raction cathodique [37]. Actuellement, la majorit des chercheurs travaillant dans ce domaine pensent que la modification de la branche cathodique explique laugmentation de Ecorr. Il faut toutefois noter que certains auteurs mettent lhypothse dune diminution du courant anodique. Selon eux, le biofilm synthtiserait des inhibiteurs de corrosion (polypeptides, polyphosphates), ce qui aurait pour consquence dabaisser le courant de dissolution du mtal, et donc de faire augmenter Ecorr. Cela pourrait expliquer le fait que parfois Ecorr dpasse la valeur du potentiel dapparition de piqres Epiq sans quune corrosion localise ne dmarre. Les microorganismes du biofilm auraient ainsi un effet de passivation sur lalliage et inhiberaient la croissance des piqres. Dans ces conditions, le biofilm aurait pour consquence de diminuer la vitesse de corrosion. Cette ide est dveloppe pour les aciers inoxydables [48] et largie aux bronzes et aux alliages base Al [49]. Elle a men au concept de CCURB (Corrosion Control Using Regenerative Biofilms), proposant de protger un matriau de la corrosion en le recouvrant dun biofilm produisant des inhibiteurs de corrosion. 1.1.2.2 Augmentation du courant cathodique en eaux douces En eau douce naturelle, le mme rsultat a t obtenu. Une forte augmentation du courant cathodique a t mesure pour de faibles polarisations dans la direction des potentiels cathodiques [25, 50, 51]. La figure 4 prsente des courbes de polarisation obtenues sur des chantillons dacier AISI 316L immergs dans en eau douce naturelle. Pour des potentiels suprieurs -400 mV/ECS, la densit de courant cathodique est plus importante aprs 160h et aprs 500h quau temps initial. Dans ce cas trs prcis, laugmentation de Ecorr a t attribue la biominralisation doxydes de manganse.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

18

Chapitre 1 : Etude bibliographique

Figure 4 : densit de courant cathodique pour un chantillon de 316L diffrents temps dimmersion dans une eau douce de rivire [25] (la courbe relative au dpt de MnO2 sera explicite plus loin)

Laugmentation du courant cathodique a aussi t trouve dans des eaux uses dans des stations dpuration. [34, 36] tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 1.1.2.3 Synthse Laugmentation de Ecorr est gnralement due une amplification de la cintique de la raction cathodique. Une augmentation du courant cathodique faible polarisation explique en effet le dcalage de Ecorr, comme le montre la figure 5. Cette modification du courant cathodique se produit soit par une amplification de la cintique de rduction de O2, soit par apparition dune nouvelle rduction mettant en jeu un nouvel oxydant produit au sein du biofilm. j (A.cm-2)

1 2 3

E (V)

1) Milieu strile ou premiers instants dimmersion 2) Amplification de la rduction de loxygne 3) Addition dune nouvelle rduction Figure 5 : effet dune modification des processus cathodiques sur la valeur de Ecorr

Les mcanismes proposs dans la littrature pour expliquer laugmentation du potentiel dabandon doivent se fonder soit sur la formation dun nouvel oxydant pouvant tre rduit la cathode, soit sur une volution de la cintique de la rduction de loxygne.

19

Chapitre 1 : Etude bibliographique

1.2 Mcanismes de laugmentation du potentiel de corrosion libre

Ces mcanismes sont multiples, mais actuellement deux phnomnes principaux semblent tre en mesure dexpliquer un grand nombre de cas daugmentation de Ecorr en eaux naturelles [267]. Le premier processus qui va tre voqu est un mcanisme enzymatique ; il met en jeu plusieurs enzymes extracellulaires pouvant tre prsentes dans le biofilm et capables de catalyser la production dun nouvel oxydant (le peroxyde dhydrogne). Le deuxime mcanisme a trait la formation ou la dissolution de dpts (oxydes de manganse, oxydes de fer) la surface de lacier inoxydable par action des microorganismes du biofilm. 1.2.1 Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase Les bactries sessiles peuvent secrter des enzymes extracellulaires dans la matrice du biofilm. Un modle enzymatique a t dvelopp pour expliquer laugmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables immergs en eau de mer naturelle, fluide le plus largement tudi. Historiquement, ce modle a t propos aprs avoir constat que laugmentation de Ecorr en eau de mer naturelle a lieu 25C mais pas 40C, alors que le nombre de microorganismes et la quantit dexopolymres ne sont pas significativement diffrents. La seule diffrence trouve entre les bactries formant le biofilm 25C et les bactries formant le biofilm 40C est leur spectre mtabolique, en particulier la nature des enzymes quelles sont capables de produire. Les bactries vivant 25C synthtisent des enzymes catalysant la dgradation des sucres, elles peuvent donc se dvelopper sur ces nutriments. [1] Certaines enzymes oxydorductases, formant la sous-classe des oxydases, sont capables de catalyser la production de peroxyde dhydrogne et dacidit partir de loxygne dissous et de sucres. H2O2 est une espce oxydante dont la rduction peut contribuer aux processus cathodiques. H2O2 tant form proximit de la surface, le courant cathodique rsultant de sa rduction peut tre assez lev. Par ailleurs, deux autres enzymes, la catalase et la peroxydase, catalysent la dgradation du peroxyde dhydrogne. La concentration en H2O2 dans le biofilm est ainsi fonction de la prsence doxydases, de catalase et de peroxydase. Loxydase qui a t le plus tudie en laboratoire est la glucose-oxydase (GOD). Ce modle cohrent reproduit correctement laugmentation du potentiel de corrosion libre observe en eau de mer naturelle. Des essais prliminaires ont t effectus pour ladapter aux eaux douces. Dans un premier temps les diffrents composs mis en jeu dans ce mcanisme (H2O2, glucose-oxydase GOD, glucose, acide gluconique) seront tudis, puis dans un deuxime temps un tat de lart concernant linfluence du mcanisme enzymatique sur le comportement la corrosion des aciers inoxydables sera dress. 1.2.1.1 Action de la glucose-oxydase a) Glucose-oxydase La glucose-oxydase, note GOD dans cette tude, est une enzyme de la classe des oxydorductases. Sa formule brute est C2808H4289N767O877S14 et sa rfrence dans la nomenclature EC 1.1.3.4 [52]. La GOD est un homodimre protique dune masse denviron 160 kDa (le dalton, not Da, autre nom de lunit de masse atomique unifie uma, est gal au douzime de la masse dun atome de 12C, environ 1,66054.10-27 kg) dont la structure tridimensionnelle est reprsente en figure 6. Elle est forme de deux sous-units identiques 20

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Chapitre 1 : Etude bibliographique ayant un poids molculaire de 80 kDa. Chacune des deux sous-units comporte deux parties, une qui se lie au substrat (le glucose) et lautre qui est lie au cofacteur de lenzyme, une petite molcule non protique appele Flavine Adnine Dinuclotide. La GOD est trs rpandue et peut tre isole partir de champignons (par exemple Penicillium notatum) ou de bactries. La GOD la plus employe en laboratoire et utilise dans ce travail est tire de la moisissure Aspergillus niger. Elle est souvent utilise pour doser le glucose, par exemple dans le sang pour des patients atteints de diabte.

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a- Molcule de GOD

b- Sous-unit de la GOD (FAD en rouge)

Figure 6 : reprsentation tridimensionnelle dune molcule de GOD

Cette enzyme catalyse loxydation du D-glucose C6H12O6 par loxygne dissous en peroxyde dhydrogne et D-glucono-1,5-lactone C6H10O6. Le bilan est un transfert de 2 lectrons et de 2 protons dune molcule de glucose une molcule de O2. La gluconolactone shydrolyse ensuite spontanment en acide gluconique C6H12O7. Le bilan global est lquation (9) [1] :
C 6 H 12 O 6 (D glucose) + O 2 GOD C 6 H 12 O 7 (D acide gluconique) + H 2 O 2

(9)

+ H2O D-Glucono-1,5-lactone C6H10O6 La GOD catalyse spcifiquement loxydation du D-glucose, lisomre optique dextrogyre de la molcule de glucose (figure 7-a). Par contre, elle est capable de catalyser loxydation des deux anomres du D-glucose, le -D-glucose et le -D-glucose, qui diffrent par la position dun groupement hydroxyle OH en-dessous (conformation bateau) ou au-dessus (conformation chaise) du plan de la molcule (figure 7-b) [53].

a- Isomres optiques du glucose

b- Anomres du glucose

Figure 7 : les diffrents isomres du glucose

21

Chapitre 1 : Etude bibliographique En reprsentation de Cram, dans le cas du -D-glucose, la raction peut scrire suivant lquation (10), aboutissant lacide gluconique :
H

+ O2

+ H2O2 H 2O

+ H2O2 (10) acide D-gluconique

Loxydation du groupement hydroxyle se fait sur le carbone n1, dans le cas dune catalyse par la GOD. Le produit obtenu est alors lacide D-gluconique. Dans dautres cas, loxydation peut porter sur lhydroxyle de latome de carbone n6, le produit de loxydation est alors lacide glucuronique. Loxydation du D-glucose donne dans un premier temps la D-glucono-1,5-lactone, qui sautohydrolyse spontanment en acide gluconique, lequel peut gnrer de la D-glucono-1,4lactone, selon lquilibre (11) [54]. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

(11)

acide D-gluconique La vitesse de lhydrolyse de la gluconolactone en acide gluconique dpend du pH. La raction est assez lente pH 3. A pH 8 la demi-vie de la gluconolactone est denviron 10 minutes. Aux chelles de temps considres (plusieurs heures, voire plusieurs jours), lacide gluconique sera considr comme majoritaire. La GOD est active dans une large gamme de tempratures allant de 20 60C, avec une temprature optimale comprise entre 30 et 40C. Elle est active dans une large gamme de pH, est peu influence par des variations de pH dans la plage 4,5 - 8, et son pH optimal est denviron 5,5. Globalement, la GOD catalyse la raction de formation de H2O2 et dacide gluconique. La GOD na pour linstant jamais t dtecte lintrieur de biofilms naturels, mais les techniques mettre en uvre pour extraire cette enzyme sont complexes. Le substrat de la GOD, le glucose, a t trouv dans des biofilms en eau de mer naturelle [55-57]. b) Le peroxyde dhydrogne Le peroxyde dhydrogne, aussi connu sous le nom deau oxygne, a pour formule brute H2O2 et contient la fonction peroxyde -O-O-. Il est utilis couramment comme dsinfectant. Il est aussi synthtis et employ comme bactricide par de nombreux champignons, ainsi que 22

Chapitre 1 : Etude bibliographique certaines cellules immunitaires. Il a un fort pouvoir oxydant au sein du couple redox H2O2/H2O, de potentiel redox standard E = 1,764 V, et est aussi rducteur au sein du couple redox O2/H2O2, de potentiel redox standard E = 0,695 V. Les deux demi-quations lectroniques correspondantes (12) et (13) sont les suivantes :
H 2O2 + 2 H + + 2 e 2 H 2O O 2 + 2 H + + 2 e H 2O 2

(12) E (H2O2/H2O) = 1,764 V/ESH (13) E (O2/H2O2) = 0,695 V/ESH

H2O2 est un intermdiaire de raction lors de la rduction en deux tapes bi-lectroniques du dioxygne. Le peroxyde dhydrogne est soluble dans leau, mais est instable et peut se dismuter en eau et en dioxygne selon lquation (14) :
H 2O2 H 2O + 1 O2 2

(14)

rH0 = -98,1 kJ.mol-1 [58]

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Cette raction de dismutation est acclre par la prsence de catalyseurs en solution. La plupart des mtaux, et en particulier le fer, le cuivre, le nickel, le chrome, le molybdne et le zinc, catalyse la dcomposition de H2O2. Dans le cas dune catalyse par le fer, lquation (15) sappelle raction de Fenton [59-61] :
2 Fe 2+ + H 2 O 2 + 2 H + 2 Fe 3+ + 2 H 2 O

(15)

Le mcanisme de cette raction est dtaill dans les quations (16-20). Les intermdiaires ractionnels sont le radical hydroxyle HO et O2- [61-63] :
Fe 2 + + H 2 O 2 Fe 3+ + HO + HO HO + H 2 O 2 H 2 O + H + O 2 O 2 + H 2 O 2 O 2 + HO + HO Fe
3+ +

(16) (17) (18) (19) (20)

Fe 3+ + H 2 O 2 Fe 2+ + 2 H + + O 2 + O 2 Fe
2+

+ O2

Ainsi, la dcomposition de H2O2 est catalyse par la prsence dune surface dacier inoxydable dans la solution. Des travaux ont montr quen prsence dun acier inoxydable AISI 316L, la vitesse de dcomposition de H2O2 peut scrire sous la forme (21) [64] :
d[H 2 O 2 ] = [H 2 O 2 ] 0 . exp(k t ) dt

(21)

o [H2O2]0 est la concentration initiale en peroxyde dhydrogne. Cette cintique dpend fortement du pH et de la temprature. La vitesse de dcomposition atteint un maximum pour un pH denviron 3,5 [58]. Certains anions ont un effet sur la raction de Fenton, en particulier les ions sulfates acclrent la dcomposition de H2O2 en prsence de Fe2+ [65]. Lauto-dcomposition du peroxyde dhydrogne est aussi catalyse par les ions halognures [58], ainsi que par lenzyme catalase.

23

Chapitre 1 : Etude bibliographique Les solutions commerciales de peroxyde dhydrogne contiennent des stabilisants afin daugmenter la dure de vie du produit. Du peroxyde dhydrogne a t trouv dans des biofilms obtenus en eau de mer naturelle [2, 17, 66, 67]. Des concentrations pouvant atteindre 10 mg/L ont t mesures par certains auteurs [3, 68]. Des expriences ralises sur des chantillons dacier inoxydable AISI 316L ont montr que la saison dimmersion semble avoir une influence sur la concentration en H2O2 au sein du biofilm. Les concentrations en H2O2 natteignent que 2 mg/L en hiver, alors quen t elles sont suprieures 10 mg/L. De plus, le potentiel de corrosion libre des chantillons semble varier proportionnellement avec [H2O2] (figure 8) [66].

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Ecorr (V/ESH)

[H2O2] dans les biofilms (mg/L)

Figure 8 : volution du potentiel de corrosion libre et de la concentration en H2O2 pour des chantillons dacier 316L recouverts dun biofilm en eau de mer naturelle [66]

Peu de mesures de H2O2 ont t effectues dans des biofilms obtenus sur des aciers inoxydables immergs en eaux douces. Le peroxyde dhydrogne a t trouv des concentrations de plusieurs centaines de nmol/L dans des eaux de lac. [69] c) Acide gluconique Lacide gluconique est un acide organique de formule brute C6H12O7 et de formule semidveloppe CH2OH-(CHOH)4-COOH. Il est le produit de loxydation du glucose par le dioxygne en prsence de GOD. Cest un acide faible ayant un pKa de 3,6 25C. La formation de H2O2 et dacide gluconique, catalyse par des oxydases au sein du biofilm, engendre une diminution du pH. Des pH acides ont t relevs lintrieur de biofilms forms en eaux naturelles [70]. d) Influence de la glucose-oxydase et de H2O2 sur les ractions lectrochimiques H2O2 est un oxydant puissant, qui peut tre rduit au niveau des sites cathodiques. H2O2 est mme plus facilement rductible que loxygne [2] : E(H2O2/H2O) = 1,776V > E(O2/H2O) = 1,229V H2O2 sera rduit avant O2. La rduction du peroxyde dhydrogne peut expliquer laugmentation du courant cathodique des potentiels proches du potentiel de corrosion libre, entranant laugmentation de Ecorr. La prsence de H2O2 en solution entrane une augmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables [71, 72].

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Chapitre 1 : Etude bibliographique Par ailleurs, H2O2 est un intermdiaire de la rduction de O2 lorsque le mcanisme se fait en deux tapes bi-lectroniques. La cintique de ces tapes pourrait tre affecte par la production de H2O2. La cintique de la rduction de O2 pourrait tre modifie en prsence de la glucose-oxydase et de son substrat. La modification des processus cathodiques en prsence de la GOD et du glucose provient principalement de la formation du peroxyde dhydrogne, toutefois lacide gluconique form simultanment semble aussi jouer un rle non ngligeable. Les pH acides obtenus peuvent modifier les surtensions des ractions cathodiques et dplacer les potentiels dapparition des plateaux de diffusion. De plus, il a t montr que lacide gluconique active la surface de lchantillon : le nombre dlectrons disponibles proximit de la surface, susceptibles de participer aux rductions de O2, de H2O2 et dventuels autres oxydants, est plus lev lorsque lacide gluconique est prsent en solution [73]. Actuellement, de nombreux chercheurs pensent que le peroxyde dhydrogne est le facteur essentiel expliquant laugmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables constate en eau de mer naturelle [66, 74]. Il a t dmontr que la prsence de H2O2 entrane une augmentation de Ecorr de plus de 300 mV. Le potentiel de corrosion libre dchantillons de 316L immergs en eau de mer naturelle est proportionnel la concentration en H2O2 dans le biofilm (figure 8) [66]. Laddition dacide gluconique dans une solution de NaCl gnre aussi une augmentation de Ecorr, a priori due un simple effet pH sur le potentiel. Lajout de H2O2 seul ou dacide gluconique seul fait augmenter le potentiel libre de corrosion, mais les valeurs finales atteintes sont infrieures celles obtenues en eau de mer naturelle. Il semble que la prsence des deux composs soit ncessaire pour reproduire convenablement laugmentation de Ecorr. La rduction de H2O2 ne pourrait expliquer totalement laugmentation de Ecorr que lorsque le pH est suffisamment faible [1, 3, 75-77]. Il faut un pH faible (aux environs de 3) et une concentration de H2O2 de lordre de la mmol/L pour obtenir une augmentation de Ecorr gale celle obtenue en eau naturelle [2, 78]. Lajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose dans une eau de mer artificielle contenant 35 g/L de NaCl donne la mme augmentation du potentiel libre de corrosion et le mme comportement la corrosion par effet de crevasse quen eau de mer naturelle (pour rappel, une unit est la quantit denzyme qui catalyse la transformation de 1 mol de substrat par minute). Cette composition a t retenue pour formuler une norme deau de mer artificielle simulant leffet lectrochimique des microorganismes arobies [73, 79, 80]. Des expriences ont t menes pour adapter ce modle enzymatique au cas de laugmentation du potentiel libre de corrosion dans les eaux douces. Lintroduction de GOD et de glucose dans une eau contenant 1000 ppm de Cl-, 500 ppm de SO42- et 500 ppm de NO3fait passer Ecorr de -200 +200 mV/ECS. Le modle enzymatique des oxydases semble reproduire assez fidlement laugmentation de Ecorr en eau peu chlorure, du moins sur des temps dimmersion courts [81]. e) Influence de la glucose-oxydase et de H2O2 sur la couche passive Une caractrisation chimique par XPS des films passifs forms sur des chantillons dacier inoxydable 254SMO immergs en eau de mer artificielle a montr que la prsence en solution de la GOD et du glucose, de H2O2 et/ou de lacide gluconique modifie fortement les proprits des couches doxydes. H2O2 favorise un enrichissement en fer au dtriment du chrome alors qu linverse, lacide gluconique favorise un enrichissement en chrome au dtriment du fer au sein du film passif. En prsence des ractifs enzymatiques (GOD et

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Chapitre 1 : Etude bibliographique glucose), la couche doxydes est plutt enrichie en chrome. Leffet de lacide gluconique sur la composition chimique du film passif semble lemporter sur leffet du peroxyde dhydrogne. Ceci est cohrent avec laugmentation des porteurs de charge dans le film ( proximit de linterface avec llectrolyte) constate dans une solution dacide gluconique. Toutefois, la couche passive forme en solution de H2O2 est plus proche en terme de composition chimique de la couche passive forme en eau de mer naturelle, o un enrichissement en fer est constat [73]. Selon dautres travaux, la mise en contact dune surface dacier inoxydable (904L) avec une solution de peroxyde dhydrogne (3,2 mmol/L) entrane une stratification du film doxydes, qui renferme alors une couche interne doxydes de chrome trivalent et une couche externe doxydes de fer trivalent. Aprs polissage, le fer est prsent sous la forme doxydes de fer divalent et trival, alors quaprs traitement chimique par le peroxyde dhydrogne, le fer est exclusivement trivalent. Le film passif gnr en prsence de H2O2 est trs pais [17]. 1.2.1.2 Action de la catalase et de la peroxydase Le peroxyde dhydrogne joue un rle important dans les processus cathodiques lorsquil est prsent dans le biofilm. La prsence denzymes catalysant sa production, ainsi que de leur(s) substrat(s), modifie la densit de courant cathodique. Les enzymes catalysant la dgradation de H2O2 devraient donc aussi affecter le comportement lectrochimique de lchantillon. a) Catalase La catalase, note CAT dans cette tude, est une enzyme de la classe des oxydorductases, de rfrence dans la nomenclature EC 1.11.1.6. La catalase est une des premires enzymes avoir t dcrites [82, 83]. Elle peut tre isole partir de toutes les cellules arobies, quelles soient animales, vgtales, ou microorganismes. La catalase est un homottramre pesant entre 220 et 350 kDa. Chacune des 4 sous-units contient un hme prosthtique (ensemble constitu dun fer(III) et de son contour organique appel porphyrine) qui sert de centre actif catalytique. Cette enzyme existe chez tous les organismes arobies chez lesquels elle participe, comme la peroxydase, la dfense contre les drivs toxiques de loxygne. La catalase catalyse en effet la raction de dismutation de H2O2 en eau et en oxygne molculaire, daprs lquation (22) [84] : 2 H 2 O 2 2 H 2 O + O 2 (22)
catalase

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Le mcanisme de cette raction consiste en deux tapes successives bi-lectroniques (23-24): [85-87] :
H 2 O 2 + Fe(III) enzyme H 2 O + O = Fe(V) enzyme H 2 O 2 + O = Fe(V) enzyme H 2 O + O 2 + Fe(III) enzyme (23) (24)

Fe(III) fait partie du hme prosthtique. b) Peroxydase Les peroxydases sont des enzymes oxydorductases catalogues gnriquement sous le nom de EC 1.11.1.7. Comme la catalase, elles existent chez la plupart des organismes arobies (cellules animales, vgtales, microorganismes) et ncessitent la prsence dun hme contenant Fe(III) comme cofacteur pour tre actives. Plusieurs types de peroxydases ont t trouvs, prsentant une structure gnrale similaire mais aussi des diffrences non ngligeables [88]. Elles catalysent la raction de rduction de H2O2 en H2O par oxydation dun substrat rducteur, selon lquation (25) :

26

Chapitre 1 : Etude bibliographique

SH 2 (substrat rduit) + H 2 O 2

peroxydase

2H 2 O + S (substrat oxyd)

(25)

Un mcanisme portant sur la peroxydase tire de racine de radis ou de raifort (peroxydase modle utilise par de nombreux enzymologistes, note HRP : horseradish peroxidase) a t propos pour dtailler cette raction (26-28) [89] :
Peroxydase + H 2 O 2 complexe I Complexe I + SH 2 complexe II + SH Complexe II + SH peroxydase + S + 2 H 2 O (26) (27) (28)

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c) Influence de la catalase et de la peroxydase sur llectrochimie des aciers inoxydables Il a t montr que lajout de catalase ou de peroxydase dans une eau de mer naturelle ayant engendr une augmentation de Ecorr sur des chantillons de 316L fait diminuer le potentiel dabandon denviron 400 mV (de +350 mV/ECS -50 mV/ECS) [66]. Un ajout de catalase dans une solution deau de mer strile contenant 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose ayant produit une augmentation de Ecorr sur des chantillons dacier 254SMO fait diminuer le potentiel jusqu des potentiels compris entre +30 et +50 mV/ECS [1]. La catalase, qui catalyse la dgradation de H2O2 sans modifier le pH, est capable dannuler laugmentation de Ecorr. Ceci met bien en valeur le rle du peroxyde dhydrogne, responsable principale de laccroissement du potentiel dabandon. Il est important de prciser que la diminution de Ecorr aprs ajout de catalase est trs rapide, une chelle de temps plus courte que lvolution de la couche doxydes. La diminution de Ecorr aprs ajout de la catalase semble donc principalement due la forte diminution de la concentration en H2O2 (et trs peu lvolution de la couche doxydes). Les enzymes dgradant H2O2 peuvent aussi avoir une influence sur la rduction de loxygne, lorsque celle-ci se fait suivant le processus deux tapes bi-lectroniques, ce qui peut tre le cas en eau naturelle. Des exprimentations ont port sur la rduction de loxygne sur des lectrodes en carbone vitreux, en prsence ou non de catalase et de peroxydase HRP [90, 91]. Une lgre augmentation du courant est observe bas potentiel (entre -500 et -300 mV/ECS) lorsque la catalase ou la peroxydase est en solution. Lexplication donne ce phnomne est que H2O2 intervient comme intermdiaire de raction. La catalase catalyse la dgradation de H2O2 en O2, qui est ainsi reform (figure 9-a). Ce nouvel apport doxygne induit une augmentation du courant cathodique de la raction (3). La peroxydase est capable de catalyser la rduction de H2O2 en H2O, que ce soit en solution proximit de la surface du matriau ou bien par un transfert direct dlectron du mtal la protine adsorbe (figure 9-b) [92]. Les deux enzymes en solution catalysent la rduction de loxygne en amplifiant une des deux tapes du mcanisme de rduction. Lorsque les enzymes sont adsorbes la surface de llectrode ( laide de dimethylsulfoxyde (CH3)2SO), le courant de rduction mesur est trs lev aux alentours de -100 mV/ECS. Il est dmontr que ce courant ne peut provenir dun mcanisme enzymatique classique en solution, et que la seule explication plausible est un transfert direct dlectrons de la surface de llectrode lenzyme adsorbe. Lactivit catalytique de lenzyme se fait donc directement au niveau de la surface du matriau (figure 9). Dautres travaux ont montr quun transfert lectronique pouvait avoir lieu directement entre une lectrode et une molcule de HRP adsorbe [93-95].

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Chapitre 1 : Etude bibliographique La catalase et la peroxydase sont capables sur certains types dlectrodes daugmenter le courant cathodique correspondant la rduction de loxygne. A titre de remarque, dautres enzymes peuvent sadsorber sur la surface dun matriau et catalyser les processus cathodiques. En particulier, un transfert lectronique direct peut se faire depuis une lectrode en acier inoxydable et une hydrognase, conduisant une augmentation du courant cathodique et du potentiel de corrosion libre [96-98].

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a- Mcanisme de la catalase I - en solution II - adsorbe

b- Mcanisme de la peroxydase (HRP)

Figure 9 : mcanisme enzymatique de laction de la catalase et de la peroxydase (HRP) sur la rduction de loxygne [91]

1.2.1.3 Synthse Laction conjugue du peroxyde dhydrogne (produit soit par les microorganismes du biofilm grce leurs oxydases, soit par la rduction deux tapes de loxygne sur le mtal) et dun pH acide semble tre en mesure dexpliquer laugmentation du potentiel dabandon constate systmatiquement sur les aciers inoxydables exposs aux eaux naturelles. Une oxydase modle, la glucose-oxydase (GOD), permet de retrouver en laboratoire ces conditions de pH et de [H2O2]. La pertinence de ce modle a t valide pour les eaux de mer, toutefois, laction de lenzyme peut diffrer en eau moins chlorure. Des premiers essais dadaptation ont t effectus et semblent aller dans la direction dune validation du modle de la GOD en eau douce. Les enzymes catalysant la dgradation de H2O2 induisent une diminution du potentiel de corrosion libre. La valeur de Ecorr est donc fixe par la comptition enzymatique entre dune part les enzymes catalysant la production de H2O2 (oxydases, par exemple GOD), et dautre part les enzymes dgradant le peroxyde dhydrogne (catalase, peroxydase). Le modle enzymatique est explicit dans le schma de la figure 10.

28

Chapitre 1 : Etude bibliographique

biofilm O2 H2O Oxydases Substrats carbons Autres protines

Catalase Peroxydase

H2O2 Acier inoxydable

H3O+

Augmentation du potentiel de corrosion libre

Figure 10 : reprsentation du modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase (daprs [76])

1.2.2 Biominralisation Les microorganismes capables de former un prcipit la surface dun acier inoxydable ou de solubiliser un lment entrant dans la composition du film passif jouent un rle important dans la biocorrosion des aciers inoxydables en eaux douces. La formation et la dissolution de dpts minraux la surface de lacier inoxydable influencent son comportement lectrochimique et modifient sa rsistance la corrosion localise. 1.2.2.1 Biodposition des oxydes de Mn Un des mcanismes frquemment cits pour expliquer de nombreux cas de corrosion microbienne en eaux douces est li la prsence de micro-organismes capables de prcipiter des oxydes de manganse sur la surface dun substrat prsent dans leur milieu. De nombreux microorganismes sont capables doxyder les ions Mn2+ et de former des prcipits contenant des oxy-hydroxydes de Mn (III, IV). La formation des oxydes de manganse, qui sont parmi les plus puissants oxydants trouvs en eaux naturelles, la surface dun chantillon dacier inoxydable peut avoir une influence sur son comportement vis--vis de la corrosion. En effet, de nombreux cas de dgradation de pices en acier inoxydable sous laction nfaste de microorganismes mangano-oxydants ont t rpertoris (cf. tableau 1). a) Nature des microorganismes mangano-oxydants Les Micro-Organismes Mangano-Oxydants (MOMO) sont des microorganismes arobies capables dacclrer considrablement la vitesse doxydation et de dposition de Mn. Ce sont principalement des bactries et des champignons (ainsi que certaines algues et certains protozoaires). Les MOMO sont ubiquitaires dans la nature et sont trouvs dans de nombreux environnements : sols, sdiments, eaux douces, eau de rivire[99] Des champignons producteurs doxydes de Mn ont t trouvs en eaux douces et en eau de mer. Des analyses biomolculaires ont montr que ces champignons font partie du groupe des ascomyctes [100]. Les bactries Mn(II)-oxydantes sont nombreuses dans la nature et prsentent une grande diversit phylognique, illustre par la varit des cas les plus tudis : le Bacillus SG-1 (Gram+, forme un spore), les souches MnB1 et GB-1 de Pseudomona putida, et la souche SS1 de Leptothrix discophora (bactrie filamenteuse munie dune gaine protectrice), cette dernire tant la plus retrouve dans les cas de biocorrosion par les MOMO mentionns dans

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Chapitre 1 : Etude bibliographique la littrature. Dautres genres classiques de bactries mangano-oxydantes se dveloppant en eaux naturelles sont Siderocapsa, Gallionella, Sphaerotilus, Crenothrix et Clonothrix [101103]. La diversit phylognique va de paire avec une importante diversit physiologique. Ces bactries sont retrouves dans de nombreux environnements : canalisations deau, eau de mer, eaux douces, sdiments [100]... Toutes les bactries Mn(II)-oxydantes sont capables de raliser loxydation du Mn ltat doxydation +II aux pH proches de la neutralit (entre 6 et 8) [99]. Leptothrix discophora peut procder loxydation du Mn(II) lorsque le pH est compris entre 6 et 8,5, lorsque la temprature est comprise entre 10 et 40C, lorsque la concentration en oxygne dissous est comprise entre 0 et 8,05 mg/L. Les conditions optimales de loxydation du manganse par Leptothrix discophora sont un pH de 7,8 et une temprature de 30C [20]. Les MOMOs sont capables de raliser la biooxydation de Mn(II) partir de trs faibles concentrations. Ainsi, des spores de la souche SG-1 de la bactrie marine Bacillus peuvent produire des oxy-hydroxydes de Mn(III,IV) partir de concentrations aussi faibles que 1 nM de Mn(II) en laboratoire [104]. Des dpts doxydes de Mn peuvent tre forms en eaux naturelles avec des taux de Mn(II) en solution de 10-20 ppb [25]. Les vitesses de dposition des oxydes de manganse peuvent atteindre des valeurs denviron 1 mC.cm-2.j-1 sur les aciers inoxydables [50]. Il est intressant de noter que la plupart des microorganismes oxydant Mn(II) sont aussi capables doxyder le fer(II) en fer(III) et de former des dpts doxydes ferriques. Par exemple, Gallionella et Leptothrix sont capables de biodposer des oxydes de fer [101]. Les dpts doxydes trouvs sur des chantillons dacier inoxydable immergs en eaux naturelles sont dailleurs la plupart du temps des mlanges doxydes de Mn et de Fe. b) Mcanismes de loxydation de Mn(II) Mcanisme de la raction lectrochimique Le manganse existe dans la nature aux degrs doxydation + II, + III et + IV. Comme un mme compos peut contenir plusieurs atomes de manganse ayant des nombres doxydation diffrents, la minralogie des oxydes, des hydroxydes et oxy-hydroxydes de manganse est complexe. Il existe en effet plus de 30 formes doxydes, dhydroxydes et doxy-hydroxydes de Mn (III,IV) (qui seront par la suite appels de faon gnrique oxydes de manganse, pour simplifier). La plupart ont une structure cristalline [99, 105]. Par consquent, les produits de la biooxydation des ions Mn2+ peuvent tre des phases mixtes assez complexes. Dans les conditions de ltude, les espces principales considrer sont lion soluble Mn2+ (+II) et les formes oxydes insolubles Mn3O4 (+2.66), Mn2O3 (+III), MnOOH (+III) et MnO2 (+IV). Gnralement, le produit de loxydation de Mn(II) est la forme minrale la plus stable prvue thermodynamiquement partir des valeurs de potentiels doxydo-rduction, de pH et de concentration en Mn(II) dans le milieu. Toutefois, il peut arriver que du Mn(IV) soit dpos des valeurs de pH et de concentration en Mn(II) o les composs de nombre doxydation plus faible (Mn3O4, MnOOH) sont thermodynamiquement plus stables [99]. La catalyse de loxydation-prcipitation du manganse par des microorganismes peut tre directe ou indirecte. Dans le cas dune catalyse indirecte, les microorganismes gnrent de par leur mtabolisme des modifications dans la physico-chimie du milieu qui vont acclrer la raction abiotique de dposition des oxydes de Mn. Par exemple, des changements locaux du

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Chapitre 1 : Etude bibliographique potentiel rdox et du pH de la solution autour de la cellule peuvent acclrer la dposition des oxydes de manganse. La catalyse directe relve dun processus enzymatique ou cellulaire. La littrature donne deux processus diffrents pour le mcanisme de la raction de biooxydation du Mn(II). Certains auteurs dmontrent exprimentalement que des microorganismes peuvent oxyder le Mn(II) en Mn(IV) directement, sans passer par un intermdiaire ayant un tat doxydation intermdiaire [106]. Cette oxydation directe deux lectrons est confirme par certaines analyses chimiques ralises sur des dpts de Mn prlevs en milieu naturel (sdiments de lac, eaux douces de surface) : seuls des composs contenant Mn(IV) sont dtects [107, 108]. Dautres auteurs affirment que le processus global se dcompose en deux tapes : oxydation 1 lectron de Mn(II) en Mn(III), puis oxydation 1 lectron de Mn(III) en Mn(IV). Des rsultats exprimentaux montrent que dans certaines conditions Mn(III) est un intermdiaire (instable) durant loxydation [109]. La prsence de cet intermdiaire de raction implique que loxydation globale du Mn(II) en Mn(IV) ait lieu en deux tapes successives mettant chacune en jeu le transfert dun lectron. Ltape limitante serait loxydation du Mn(II) en Mn(III) [109]. Globalement, la concentration en Mn(II) parait avoir une incidence sur le nombre doxydation moyen des composs minraux prcipits : une concentration plutt faible en Mn2+ donne des composs riches en Mn(IV), alors quune forte concentration en Mn2+ favorise la production de Mn3O4 et de MnOOH [110]. Daprs les derniers dveloppements de la littrature, il semblerait que le processus deux tapes soit reconnu comme le mcanisme principal. Ainsi, loxydation de Mn(II) en Mn(IV) passerait bien par la formation dun intermdiaire Mn(III) instable, soluble ou complex avec une enzyme [111]. Le mcanisme suivant (29-30) dcrivant la biooxydation de Mn2+ par les MOMO a t propos [51]:
Mn 2+ + 2H 2 O MnOOH + 3H + + e (29) MnOOH MnO 2 + H + e
+

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E 200mV / SCE E 382mV / SCE

(30)

Lintermdiaire contenant Mn(III) est MnOOH dpos la surface du mtal. Les composs contenant du Mn(IV) majoritairement forms sont la vernadite MnO2 de structure amorphe et la birnessite, hydroxyde de formule Na0.3Ca0.1K0.1Mn4+Mn3+O41.5(H2O) (Leptothrix, spores de Bacillus) [102]. Toutefois, des composs contenant Mn un degr doxydation moindre sont souvent prsents. Entre autres, la birnessite a tendance recristalliser en haussmannite octadrique Mn3O4 en prsence de Bacillus. Catalyse enzymatique Que ce soit pour les bactries ou les champignons, le mcanisme de la biooxydation de Mn(II) semble tre enzymatique. En effet, des tudes portant sur loxydation de Mn2+ par les bactries prcdemment cites et sur la souche KR21-2 ascomycte [112] ont montr que les gnes codant pour certaines enzymes ont un impact norme sur loxydation. En particulier, des enzymes de type oxydase, prsentant plusieurs sites actifs contenant des atomes de Cu avec diffrents environnements atomiques, appeles oxydases multi-cuivre, joueraient le rle de catalyseur de la raction [109]. Parmi ces enzymes, deux sont plus particulirement connues. La Mn peroxydase est une enzyme H2O2-dpendante. En prsence de peroxyde dhydrogne, elle catalyse loxydation (31) de Mn(II) en Mn(III) : 2 Mn 2+ + 2 H + + H 2 O 2 2 Mn 3+ + 2 H 2 O (31) qui est ltape limitante du mcanisme doxydation de Mn(II) en Mn(IV). Le pH optimal de cette catalyse enzymatique est de 5 [113, 114].

31

Chapitre 1 : Etude bibliographique Les laccases sont des oxydases multi-cuivre produites par certains champignons et plantes, capables de catalyser loxydation de Mn(II) en Mn(III) [115-116].

Ainsi, certaines enzymes de la famille des oxydases multi-cuivre catalysent la raction doxydation mono-lectronique de Mn2+ en Mn(III), et catalysent donc la raction globale doxydation 2 lectrons de Mn2+ en Mn(IV). c) Oxydes de manganse et corrosion Cas de dgradation daciers inoxydables en prsence de microorganismes manganooxydants De nombreux cas de dtrioration dlments en acier inoxydable ont t relevs en prsence de bactries mangano-oxydantes, dans un lectrolyte o la faible teneur en chlorures laissait prsager une absence de corrosion (tableau 1).
Rf. Date 1976 1991 1994 1994 1996 170 mg/L 3 ppm (rivire) [Cl-] 200 ppm 3 ppm Matriau AISI 304L, AISI 316L AISI 304 AISI 304 Fe-13Cr-4Ni 316L Bactries du manganse Bactries mangano- et ferro-oxydantes (Siderocapsa) +350 Bactries prsentes Bactries du fer, bactries du manganse Ecorr (mV/ECS) Observations Dpt rouge-brun Dpt microbien contenant du Mn Dpt rouge-brun contenant Fe et Mn Dpt de MnO2 et de MnOOH Dpts annulaires brun orang contenant MnO2 et du Fe(III) Mlange de Fe2O3, de Fe3O4, de Mn3O4, de MnOOH et de Mn2O3 Les bactries ont dpos du MnO2 amorphe et des hydroxydes. Dpts contenant Fe et Mn

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[117] [118] [119] [120121] [25, 50]

[122]

2002

3 ppm (rivire)

316L Bactries manganooxydantes type Leptothrix, BSR, bactries sulfurooxydantes, bactries productrices dun dpt visqueux. Bactries ferro- et mangano-oxydantes Bactries ferro- et mangano-oxydantes

+365

[123]

2002

453 mg/L

316L

Pas daugmen -tation

[36]

2003

< 200 ppm 400 ppm (rivire)

304, 316L (soudures uniquement)

300-470

[23] [124]

Dpt rouge-brun contenant des oxy+250 304L 2004 hydroxydes de Fe et de Mn Dpt noir/brun de 65-68 304, 316 Bactries mangano320-340 2006 MnO2 mg/L (soudure) oxydantes engaines Tableau 1 : cas de corrosion microbienne daciers inoxydables en eaux peu chlorures, attribus la prsence de microorganismes mangano-oxydants (les cases blanches correspondent des donnes non communiques) [266]

32

Chapitre 1 : Etude bibliographique Mcanismes de corrosion en prsence de MOMO Les microorganismes disposent de deux moyens principaux pour crer des conditions favorables une forte augmentation de la corrosion de lacier inoxydable. La zone immdiatement sous le dpt doxydes de Mn est une zone confine, prsentant des conditions favorables au dveloppement de la corrosion par effet de crevasse. Cet effet de stabilisation de la corrosion par piqre empche ou ralentit la repassivation des piqres mtastables. Il est parfois appel super-crevasse [125] et est encore plus important si le dpt prsente une slectivit spcifique par rapport aux anions [126]. Par ailleurs, suite un appauvrissement en oxygne (par exemple par la respiration des microorganismes arobies), ce confinement peut bloquer laccs au dioxygne et crer une cellule daration diffrentielle. La zone appauvrie en O2, situe sous le dpt doxydes, sera le sige dune corrosion dite sous dpt [127, 128]. Cette forme de corrosion microbienne est retrouve pour tous les microorganismes formant un dpt la surface des matriaux (et en particulier avec les bactries ferro-oxydantes bioprcipitant des dpts doxydes de fer [125]). Le couple redox Mn(II)/Mn(IV) mis en jeu lors de la formation du dpts doxydes de manganse peut modifier la valeur du potentiel de corrosion libre du substrat et ainsi augmenter la probabilit de corrosion par piqres de lacier inoxydable [129]. MnO2 est un fort oxydant en contact lectrique avec le substrat dacier inoxydable. Il peut tre rduit en deux tapes mono-lectroniques successives au niveau des sites cathodiques [130131] :
MnO 2 + H + + e MnOOH 2 MnOOH + 2 H MnO 2 + Mn
+ 2+

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(30) + 2 H 2O (29)

La raction globale de rduction de MnO2 peut scrire selon lquation (32) :

MnO 2 + 4 H + + 2 e Mn 2 + + 2 H 2 O (32) E 1,23 V / ESH

Le potentiel redox standard de cette raction est 1,23 V/ESH. Daprs lquation de Nernst applique cette raction :
E = E + 0,03 log a (MnO 2 ) . h 4 a (Mn 2+ ) = 1,23 0,03 log [Mn 2+ ] 0,12 pH

le potentiel redox diminue fortement quand le pH augmente :

dE = 120 mV dpH

Dans une eau naturelle ayant un pH de 7,8 et une concentration massique en Mn2+ de 0,01 mg/L (0,18 mol.L-1), le potentiel redox de MnO2 est denviron 495 mV/ESH. Les phnomnes mis en jeu au niveau de la surface sont reprsents dans le schma de la figure 11.

33

Chapitre 1 : Etude bibliographique

Figure 11 : biodposition et rduction lectrochimique des oxydes de manganse la surface dun acier inoxydable (daprs [132] repris par [133])

La production de MnO2 par les microorganismes mangano-oxydants implique la prsence dun nouvel oxydant disponible la surface de lacier inoxydable. Cet oxydant peut tre rduit, et cette rduction va entrer en comptition avec la raction de rduction classique qui a lieu la cathode, savoir, en eau are, la rduction directe 4 lectrons de loxygne : [134] tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007
O 2 + 2 H 2 O + 4 e 4 HO O2 + 4 H + + 4 e 2 H 2O ( 2) (1) E = 0,401 V E = 1,229 V (en milieu alcalin) (en milieu acide)

Daprs lquation de Nernst applique la raction de rduction du dioxygne en milieu alcalin : a (O2 ) E = E + 0,015 log a (HO ) 4

E = 0 ,401 + 0,015 log p(O2 ) 0 ,06 log [HO ] E = 1,24 + 0,015 log p(O2 ) 0,06 pH le potentiel diminue avec le pH : dE = 60 mV . dpH Avec un pH de 7,8 et une pression partielle en O2 de 2.104 Pa, le potentiel redox est denviron 835 mV/ESH. Dans des conditions de pH, de pression partielle en O2 et de concentration en Mn2+ typiques des eaux douces, le dioxygne dissous est a priori un meilleur oxydant que MnO2. Daprs la thermodynamique, la rduction de MnO2 devrait tre quantitativement ngligeable devant la rduction de O2 et contribuer trs peu la rduction la cathode. Toutefois, la rduction de O2 est trs limite par sa cintique. En effet, de fortes surtensions cathodiques sont trouves pour la rduction de O2 sur des surfaces dacier inoxydable en milieu aqueux. Les potentiels redox trouvs sont gnralement bien infrieurs aux valeurs prvues par la thermodynamique : en eau naturelle, lorsque O2 est loxydant prpondrant (absence dun dpt oxydant tel que MnO2, absence de H2O2, en dbut dimmersion par exemple), les potentiels de corrosion libre des chantillons dacier inoxydable ne dpassent pas 0 V/ECS, soit 245 mV/ESH. MnO2 est alors un meilleur oxydant que le dioxygne. De plus, MnO2 nest pas limit par les diffusions successives au sein de llectrolyte puis du biofilm, contrairement O2 [130]. De surcrot, les ions Mn2+ forms la cathode migrent dans llectrolyte et peuvent aussitt tre roxyds par les MOMO. Un cycle du manganse peut ainsi voir le jour linterface mtal/biofilm/lectrolyte, ce qui fournit aux zones cathodiques

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Chapitre 1 : Etude bibliographique un matriau oxydant constamment renouvel (figure 12) [51, 122]. La valeur du potentiel de corrosion libre serait fixe par lquation : MnO2 + H 2 O + e MnOOH + HO E ( pH = 8, 25C ) = 0,335V / ECS

ce qui expliquerait pourquoi la concentration en Mn2+ ne semble pas influer sur laugmentation du potentiel de corrosion libre [25].

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Figure 12 : reprsentation du mcanisme li aux MOMOs expliquant laugmentation de Ecorr

Dans des conditions dimmersion en eaux douces, un dpt de MnO2 biominralis par des MOMO peut savrer tre un meilleur oxydant que le dioxygne. Par consquent, la rduction de MnO2 en Mn2+ a lieu la cathode. La valeur du potentiel redox de MnO2 tant suprieure aux valeurs du potentiel de corrosion libre de lacier inoxydable, ce dernier va augmenter de plusieurs centaines de mV. Cette augmentation est comparable celle observe lors des immersions en eaux naturelles. Elle reprsente un danger pour lintgrit du mtal : si le potentiel de corrosion libre dpasse la valeur critique du potentiel de piqre, la corrosion par piqres sera stable et des piqres se dvelopperont au sein du matriau. d) Validation en laboratoire Des tudes ont t menes en laboratoire pour confirmer leffet de la dposition doxydes de Mn la surface dchantillons dacier inoxydable sur le potentiel de corrosion libre. Il a t montr quun chantillon dacier inoxydable recouvert sur une trs faible fraction de sa surface par un dpt artificiel de MnO2 a le mme comportement lectrochimique (Ecorr compris entre +350 et +370 mV/ECS, courbe intensit-potentiel identique) quun coupon immerg en eau douce naturelle (figure 4). Un taux de recouvrement de la surface par MnO2 de quelques pourcents (de 1% [135] 6% [25]) est suffisant pour avoir une augmentation de Ecorr similaire limmersion en eau douce naturelle. Des travaux rcents ont montr que le potentiel de corrosion libre dchantillons daciers inoxydables (304, 316L) exposs des cultures pures de Leptothrix discophora augmente fortement [136], pouvant atteindre une valeur stationnaire denviron 410 mV/ECS [131]. Lanalyse XPS des dpts prsents la surface des coupons a dtect principalement MnO2 et MnOOH [131].

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Chapitre 1 : Etude bibliographique Il a par ailleurs t montr par XPS que lpaisseur du film passif dun chantillon dacier 316L expos une culture pure de Leptothrix discophora est plus faible aprs laugmentation du potentiel de corrosion libre. Cette diminution de lpaisseur de la couche doxydes protectrice peut contribuer la susceptibilit la corrosion localise de lalliage [137]. La rduction de loxygne semble aussi tre modifie par la prsence dun dpt doxydes de Mn. Des tudes ont montr que le courant cathodique de rduction de O2 est plus lev sur un acier inoxydable recouvert dun dpt doxydes de Mn biominralis que sur le mme acier inoxydable nu [135]. MnO2 est non seulement un oxydant par lui-mme, mais de plus il peut agir en catalysant la raction de rduction de loxygne. Cette amplification de la raction cathodique contribue aussi laugmentation du potentiel de corrosion libre. e) Synthse Les microorganismes mangano-oxydants sont des microorganismes arobies capables de former des dpts doxydes de manganse la surface dchantillons dacier inoxydable. Les oxydes biodposs sont principalement forms de birnessite MnO2 et de manganite MnOOH, mais ils peuvent aussi contenir dautres composs contenant du manganse (par exemple, lhaussmannite Mn3O4). Le mcanisme de cette biominralisation est gnralement enzymatique. Deux types denzymes sont connus pour leur rle dans loxydation de Mn(II) : la Mn-peroxydase et certaines laccases.
Pour rsumer : MnO2 est un oxydant puissant. Sa formation la surface dun chantillon dacier inoxydable apporte un nouveau matriau cathodique. La rduction de MnO2 est lorigine dune forte augmentation du courant cathodique et donc du potentiel de corrosion libre, lequel est fix par la valeur du potentiel de la raction :

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MnO2 + H 2 O + e MnOOH + HO

E ( pH = 8, 25C ) = 0,335V / ECS

Le cycle du manganse qui stablit proximit de la surface de lacier inoxydable est capable dexpliquer le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux douces.

1.2.2.2 Biodposition des oxydes de Fe Certains microorganismes ont la capacit doxyder les ions Fe2+ en Fe3+ et de former un dpt doxy-hydroxydes de Fe la surface dun acier inoxydable : ils sont dits ferro-oxydants. Ils produisent des tubercules rouge orang doxy-hydroxydes de Fe partir des ions Fe2+ prsents dans llectrolyte ou le substrat. Ces microorganismes sont varis (bactries, levures, champignons) et sont souvent capables doxyder aussi Mn(II). La plupart des bactries ferrooxydantes sont micro-arophiles et sont par consquent trouves en grande quantit sous leurs dpts [102]. Les bactries ferro-oxydantes influencent la corrosion des aciers inoxydables selon trois moyens daction : Effet de super-crevasse : un dpt doxydes de Fe peut stabiliser le dveloppement de la corrosion par piqres en jouant le rle de super-crevasse : la zone sous le dpt est une zone confine lintrieur de laquelle des espces chimiques agressives (Cl-, H3O+) se concentrent. La prsence du dpt empche ou ralentit alors la repassivation des piqres mtastables, favorisant le passage dune corrosion par

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Chapitre 1 : Etude bibliographique piqres instables une propagation stable des piqres, ce qui a pour consquence directe de faire diminuer la valeur du potentiel de piqre de lalliage. Il a t montr exprimentalement que des chantillons dacier 304L peuvent tre victimes de corrosion par piqre stable des potentiels aussi faibles que -140 mV/ECS en prsence dun dpt de rouille [125]. Par ce moyen, les films de surface base de Fe dposs par les microorganismes ferro-oxydants peuvent stabiliser la corrosion et la rendre possible des valeurs de potentiel trs infrieures au potentiel de piqre Epiq. Cet effet de super-crevasse est accentu si le dpt combine une slectivit pour les anions et une faible rsistance ionique [126, 138]. Une tude exprimentale a prouv que le potentiel de piqre Epiq dun chantillon dacier 304L est fortement diminu lorsquil est artificiellement recouvert dun dpt doxydes de Fe. Cette diminution peut atteindre 200 mV [23]. La diminution de Epiq illustre la stabilisation de la corrosion par piqres. Toutefois, le dpt doxydes de Fe na pas dinfluence significative sur la valeur du potentiel de repassivation [23].
Effet daration diffrentielle : les zones sous les dpts doxydes de Fe sont gnralement trs peu oxygnes, voire anarobies. La corrosion par aration diffrentielle peut alors tre initie : les zones anarobies sous les dpts constituent des zones anodiques de faible surface et le reste de la surface, mieux oxygn, constitue la cathode. Linitiation des piqres dpend de la biodposition des oxydes. La propagation ultrieure des piqres dpend des lments dalliage et de leur pourcentage dans la matrice [102]. Par ailleurs, la prsence de zones anarobies sous le dpt autorise le dveloppement de bactries anarobies, et en particulier de la flore sulfurogne. En effet, des BSR et des BTR, ainsi que des prcipits noirs riches en soufre, sont souvent trouvs sous les tubercules biodposs par les bactries ferro-oxydantes. Les modes de biocorrosion en voie anarobie induits par la flore sulfurogne peuvent tre actifs en prsence de bactries ferro-oxydantes [139, 140]. Modification du potentiel de corrosion libre : ce mcanisme est controvers lheure actuelle. La plupart des articles concernant le sujet concluent que la dposition doxydes de Fe na pas dinfluence sur le potentiel de corrosion libre, mais quelques travaux de recherche ont obtenu une augmentation de Ecorr en prsence de bactries ferro-oxydantes. Deux cas contradictoires vont tre exposs pour illustrer ltat des connaissances. Des chantillons dacier inoxydable 304 immergs dans un milieu de culture contenant 50 mg/L de Cl- et ensemenc de Thiobacillus ferrooxidans ont vu leur potentiel de corrosion libre augmenter jusqu une valeur stationnaire de +230 mV/ECS. La voltamtrie cyclique montre que le courant cathodique a augment, ce qui est d laddition du courant de rduction du Fe(III) form par les bactries. Ni laugmentation du potentiel ni laugmentation du courant cathodique ne sont modifis par un balayage largon : la concentration en O2 na pas dimpact sur les modifications lectrochimiques induites par Thiobacillus ferrooxidans. Dans cette tude, une culture pure de bactrie ferro-oxydante a engendr une forte augmentation du potentiel de corrosion libre [141]. Dans une autre tude, le potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L immergs dans une eau de rivire augmente jusqu atteindre environ +250 mV/ECS. Lanalyse de la surface des chantillons rvle un dpt biominralis contenant un mlange de geothite FeOOH, de lpidocrocite -FeOOH, de magntite Fe3O4, de maghmite -Fe2O3 et doxydes de Mn. La prsence de dpts doxy-hydroxydes de fer incite raliser une exprience en laboratoire : des chantillons dacier 304L sont artificiellement recouverts dun dpt

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Chapitre 1 : Etude bibliographique doxydes de Fe ayant la mme composition (sans manganse) que celui produit par lactivit microbiologique. Les rsultats montrent que les dpts doxydes de fer ne peuvent pas provoquer une augmentation de Ecorr semblable celle obtenue en eau douce naturelle [23].
1.2.3 Synthse

Les deux mcanismes voqus dans cette partie (production enzymatique de H2O2 et biominralisation doxydes de manganse) peuvent expliquer tout ou partie de laugmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables en eaux naturelles. Ils ne sont vraisemblablement pas antagonistes mais plutt complmentaires. En effet, ils reposent sur un mme principe : les microorganismes du biofilm synthtisent une enzyme catalysant la production dun oxydant dont la rduction entrane une augmentation de Ecorr. La production enzymatique dun oxydant est dans les deux cas llment dclencheur des variations du potentiel de corrosion libre (figure 13).
Mn2+

H2O2
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Oxydase

Substrat
Laccase Mn-peroxydase

O2
MnO2

HO

Acide
-

Substrat

Produit

e-

Mn2+

a- Production enzymatique de H2O2

Figure 13 : modles enzymatiques de production dun oxydant gnrant une augmentation de Ecorr

b- Production enzymatique de MnO2

Lorsquun chantillon dacier inoxydable est immerg dans une eau naturelle, sa couche passive volue au cours du temps, en terme de composition chimique, de distribution spatiale des diffrentes phases prsentes, dpaisseur Par exemple, en eau de rivire naturelle, la couche doxydes spaissit et les oxydes de fer(III) deviennent prdominants lextrme surface du film. De telles variations peuvent modifier les ractions cathodiques (et/ou leur cintique) la surface du matriau. Il parait donc ncessaire de sintresser au film passif des aciers inoxydables, sa formation, sa composition chimique et ses proprits de conduction ionique et lectronique.

1.3 Le film passif des aciers inoxydables

1.3.1 La passivit

Un mtal est dit passif lorsquil se recouvre dun film doxy-hydroxydes (plus ou moins hydrat) limitant fortement toute corrosion gnralise ultrieure. Le caractre passif est confr aux aciers inoxydables par leurs lments dalliage, et en particulier par le chrome. Un acier est dit inoxydable sil contient au moins 12 % en masse de chrome. Lorsquun acier inoxydable tout juste poli est expos lair libre ou immerg dans un lectrolyte, il se recouvre trs rapidement dun film doxydes et dhydroxydes de fer et de chrome ayant une paisseur de quelques nanomtres (1-10 nm). Ce film adhrent a une permabilit ionique trs faible et limite le transfert des anions agressifs de llectrolyte et des 38

Chapitre 1 : Etude bibliographique cations mtalliques produits par la dissolution anodique. Sa conductivit lectronique est aussi trs faible [142]. Ce film rend lalliage passif vis--vis de la corrosion gnralise et est pour cette raison appel film passif. La courbe de polarisation anodique dun mtal passif est reprsente en figure 14. Dans un premier temps, un courant doxydation non ngligeable apparat, correspondant la dissolution du mtal. A partir du potentiel Ep (potentiel critique de passivation), la formation du film passif a lieu et le courant doxydation diminue jusqu atteindre une valeur constante et trs faible, au-del du potentiel Epp (potentiel de passivation). Le domaine de potentiels sur lequel le courant est constant est appel domaine de passivit. La valeur du courant dans le domaine de passivit est appele courant passif ipassif. La borne suprieure du domaine de passivit est le potentiel de transpassivit Etp, au-del duquel le courant anodique augmente fortement. Si le milieu contient des ions Cl-, la transpassivit correspondra trs probablement la corrosion par piqres, et le potentiel de transpassivit sera gal au potentiel de piqre Epiq. En fonction de la raction cathodique, et donc des espces oxydantes prsentes dans le milieu et de leur quantit, le potentiel de corrosion libre sera soit dans le domaine passif (pas de corrosion, figure 14-a), soit dans le domaine de la corrosion par piqres (figure 14-b). La rsistance la corrosion dun acier inoxydable dpend fortement de sa composition et de la chimie de llectrolyte dans lequel il est plong.
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a- Epp < Ecorr < Epiq

Figure 14 : courbes de polarisation anodique et cathodique dun mtal passif a- Ecorr est dans le domaine passif b- Ecorr>Epiq : corrosion par piqres [143]

b- Ecorr > Epiq

1.3.2 Rle des lments dalliage

Les lments participant la passivation sont gnralement spars en deux catgories [144]. Les promoteurs de passivit sont des lments qui ont une faible liaison avec les autres atomes mtalliques mais une forte affinit avec loxygne dissous, ils vont soxyder facilement et former la couche doxydes. Le chrome est typiquement un promoteur de passivit [145]. Les modrateurs de dissolution ont au contraire une forte liaison avec les autres atomes mtalliques et vont ralentir la dissolution du mtal. Mo est un bon exemple de modrateur de dissolution [145-147]. Chaque lment peut tre tudi sparment.
La prsence de chrome est indispensable la bonne rsistance la corrosion des aciers inoxydables. Il est responsable de la croissance trs rapide en milieu oxydant de la couche doxydes passivante, selon lquation (33) : 2 Cr + 3 H 2 O Cr2 O 3 + 6 H + + 6 e (33)

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Chapitre 1 : Etude bibliographique Plus la teneur en chrome est leve, plus le domaine passif va slargir. Le chrome augmente la valeur du potentiel de piqre Epiq. Une synergie existe entre leffet passivant du chrome et leffet du molybdne en milieu chlorur. Pour certains auteurs, la teneur en chrome pourrait avoir tendance faire diminuer lpaisseur du film passif [148], mais ce rsultat est controvers par dautres auteurs [149].
La prsence de molybdne dans lalliage largit le domaine passif et diminue le courant sur le palier de passivit (en milieu chlorur) [150]. Mo ne modifie pas la croissance du film passif et nentre pas dans sa composition chimique [151, 152]. Le molybdne renforce la stabilit de la couche passive et favorise la repassivation. La prsence de Mo dans lalliage entrane une augmentation de Epiq et protge de la corrosion caverneuse. Il semblerait que le molybdne soit capable de provoquer une augmentation en chrome dans la partie la plus interne du film passif, ce qui expliquerait le rle de stabilisation de la couche passive que joue cet lment dalliage en milieu chlorur [153]. Le nickel largit le domaine dexistence de laustnite et augmente la rsistance la corrosion sous contrainte. Il augmente aussi la rsistance la corrosion caverneuse et aurait tendance faire augmenter le potentiel de piqre Epiq des aciers inoxydables austnitiques [154, 155]. Lazote amliore les caractristiques mcaniques.

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La couche passive protge les aciers inoxydables de la corrosion localise. Toutefois, les aciers inoxydables peuvent subir une corrosion localise, en particulier dans les lectrolytes contenant des ions Cl-. Ils sont particulirement sensibles la corrosion par piqres, la corrosion par effet de crevasse, la corrosion intergranulaire et la corrosion sous contrainte.
1.3.3 Formation de la couche passive

La couche doxydes passivante se forme spontanment en milieu aqueux et dans lair ambiant. Le modle le plus cit dcrivant la formation du film passif est le modle dOkamoto (figure 15) [156-159]. Les principaux constituants de la couche doxydes sont les cations mtalliques Mn+ (principalement Fe2+, Fe3+ et Cr3+) qui ont une forte affinit avec loxygne et soxydent rapidement. Les molcules deau proches de la surface se dprotonent et forment des ions HO- ou O2- afin dquilibrer les charges proximit de la surface (lectroneutralit). Les cations Mn+ sassocient avec les anions HO- et O2- pour former respectivement des hydroxydes et des oxydes. Il en dcoule une structure bicouche pour le film passif en fonction de son hydratation : la couche interne, proche de linterface mtal/film passif, serait constitue doxydes, et la couche externe, en contact direct avec le milieu aqueux, serait plus hydrate et constitue dhydroxydes et de molcules deau lies la surface. Dans le modle dOkamoto, loxygne faisant partie de la couche doxy-hydroxydes provient non pas du O2 dissous mais des molcules deau. Dautres travaux voquent un modle o une premire tape serait ladsorption doxygne molculaire la surface du mtal, puis les cations mtalliques passeraient en solution et changeraient leur position avec loxygne. Dans ce modle, la source doxygne du film passif est loxygne dissous [160]. Des molcules deau ainsi que des anions de llectrolyte (Cl-, SO42-) peuvent aussi tre trouvs en faible quantit dans le film passif.

40

Chapitre 1 : Etude bibliographique

Figure 15 : reprsentation schmatique de la formation du film passif dun acier inoxydable par dprotonation de leau [161]

1.3.4 Proprits lectroniques et composition chimique du film passif tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Le caractre semi-conducteur des films passifs dacier inoxydable est de nos jours largement reconnu [162-164]. De nombreux travaux tudient en parallle la composition chimique du film passif (et son ventuelle stratification) et ses proprits de semi-conductivit. Un rappel sur les semi-conducteurs est disponible en annexe n3. Des mesures de photocourant et de capacit de films doxydes (par la mthode de MottSchottky) ont permis de mettre en vidence la nature semi-conductrice du film passif et dtudier ses proprits lectroniques. La mise en parallle des connaissances sur les proprits de semi-conductivit et des techniques danalyse de surface (spectroscopie Auger AES, XPS) a permis de caractriser les films passifs forms sur les aciers inoxydables. Dautres tudes portant sur des films doxydes forms haute temprature en milieux aqueux ou en milieu primaire de racteur nuclaire ont permis de dgager des similarits entre ces diffrents films doxydes. Certains auteurs proposent une structure bicouche des films passifs forms sur acier inoxydable en fonction du profil de composition chimique. En raison de la faible mobilit du chrome et de la dissolution prfrentielle du fer, les couches les plus internes seraient enrichies en chrome, alors que les couches externes seraient plutt enrichies en fer. Ces rsultats sont toutefois nuancer, car ils sont trs fortement affects par les conditions exprimentales : composition chimique de llectrolyte, pH, traitement de surface Il semblerait en particulier que le pH de la solution dimmersion ait une forte influence sur la composition et sur les proprits lectroniques des films passifs dacier inoxydable. La zone interne serait enrichie en chrome et la zone externe en fer en conditions neutres ou basiques, alors quun pH acide aurait plutt tendance enrichir la zone externe en chrome et la zone interne en fer [165-168]. En eau douce naturelle, les conditions neutres ou trs lgrement basiques devraient donc gnrer un film plutt enrichi en chrome en zone interne et enrichie en fer en surface, comme cela a t montr en eau de mer naturelle [73, 169]. Ltude des films passifs doit donc prendre en compte le pH de llectrolyte environnant.

41

Chapitre 1 : Etude bibliographique 1.3.4.1 Milieux neutres ou lgrement basiques Des mesures de Mott-Schottky effectues sur un inox 304 en solution tampon acide borique/borates (pH 9,2) ont montr que le comportement semi-conducteur du film passif se divise en deux rgions (figure 16). En dessous dun potentiel de bandes plates Ufb denviron 0,5 V/ECS, le film passif se comporte comme un semi-conducteur de type p (pente ngative sur la courbe C-2(E)). Au-dessus de Ufb, le film passif se comporte comme un semiconducteur de type n. Cette allure est trouve de faon trs gnrale en milieu aqueux [170, 171]. Il savre que la couche doxydes forme sur du fer pur se comporte comme un semiconducteur de type n au-dessus de -0,5 V/ECS, alors que le comportement de type p nest pas retrouv. Le comportement de type n au-dessus de Ufb serait donc d aux oxydes de fer du film passif. Par ailleurs le trac des diagrammes de Mott-Schottky pour diffrents alliages Fe-Cr (avec une teneur en chrome allant de 0 30 % par pas de 5%) montre que lorsque la teneur en chrome augmente, la pente de la partie linaire correspondant un semi-conducteur de type p crot, alors que la zone correspondant la semi-conductivit de type n nest pas affecte. Daprs plusieurs auteurs, les oxydes de chrome sont gnralement des semi-conducteurs de type p [164, 172-174]. Pour le film passif, le comportement de semi-conducteur de type p en dessous de -0,5 V/ECS semble tre d aux oxydes de chrome. Ceci est confirm par la ressemblance des diagrammes de Mott-Schottky raliss sur le 304 et sur un alliage Fe15%Cr. Les analyses Auger rvlent une structure duplex, compose dune fine couche interne doxydes de chrome (3-4 couches atomiques, probablement de la chromine Cr2O3), et dune zone externe mlange doxydes de fer (Fe2O3 probablement) et de nickel. La couche interne doxydes de chrome est responsable de la semi-conductivit de type p (potentiels infrieurs 0,5 V/ECS) alors que la couche externe doxydes de fer donne un caractre semi-conducteur de type n (potentiels suprieurs 0,5 V/ECS) [175]. Une autre tude portant sur lacier inoxydable 304 dans la mme solution tampon a confirm que le film passif a une couche interne principalement constitue de Cr2O3 [176]. Un tel film passif se comporte donc globalement comme une htrojonction p-n. Laccent est ici mis sur une stratification chrome/fer au sein du film passif.

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Figure 16 : diagramme de Mott-Schottky dun chantillon dacier 304 en solution tampon acide borique/borates (pH 9,2) [175]

Des tudes portant sur des films doxydes forms sur acier inoxydable haute temprature en milieux aqueux (ou en milieu primaire de racteur nuclaire) ont montr que ces films prsentent des similarits avec les films passifs du point de vue de leur semi-conductivit. Des mesures de photolectrochimie, dimpdance et des analyses Auger ont montr sur les aciers inoxydables 304 et 316 que les films doxydes forms haute temprature et les films passifs 42

Chapitre 1 : Etude bibliographique ont une structure duplex. La couche interne, forme majoritairement doxydes de chrome (chromine Cr2O3) et doxydes mixtes contenant du fer (spinelles type chromite FeCr2O4), se comporte comme un semi-conducteur de type p. La couche externe, compose principalement doxydes de fer (magntite Fe3O4, qui est un spinelle inverse) et doxydes mixtes contenant du nickel (spinelles inverses type Ni0,75Fe2,25O4), se comporte comme un semi-conducteur de type n. Un tel film passif se comporte donc globalement comme une jonction p-n. La conduction peut tre assure par des lectrons et par des trous [152, 175-181]. Dans le modle de structure lectronique propos, le film est dcrit comme une htrojonction p-n o les zones de charges despace ne sont pas juxtaposes mais localises au niveau des interfaces mtal/Cr2O3 et oxydes de fer/lectrolyte [178]. En milieu aqueux neutre ou basique, tous ces travaux vont dans le sens dun film passif stratifi en fonction de sa composition chimique (oxydes de chrome proches de linterface mtal/film passif, oxydes de fer proches de linterface film passif/lectrolyte). Le changement de semi-conductivit entre les deux couches du film passif correspond vraisemblablement sur le plan cristallographique au passage dun spinelle direct un spinelle inverse. Il semblerait que la couche interne riche en chrome soit constitue principalement de Cr2O3 et de spinelles directs (type chromite FeCr2O4), alors que la couche externe riche en fer serait constitue principalement de Fe2O3 et de spinelles inverses (Fe3O4, oxydes mixtes contenant du nickel). La grande difficult dans linterprtation des rsultats consiste connatre la semiconductivit des oxydes mixtes. Un changement dans la stoechiomtrie de ces oxydes peut engendrer une diffrence dans leurs proprits de semi-conductivit. Par exemple, il est connu que la prsence de fer dans la maille cristallographique de loxyde de chrome impose une semi-conductivit de type n ds que la teneur en fer excde 5 % [182, 183]. 1.3.4.2 Milieux acides Dans un travail rcent, le film passif dvelopp sur un alliage Fe-18Cr en solution neutre ou lgrement basique (tampon acide borique/borates de pH 8,4) est compar au film passif dvelopp sur le mme alliage en solution acide (0,1 M de H2SO4). Dans les deux conditions, les rsultats de photolectrochimie permettent de dire que les films sont constitus dune couche interne doxydes ayant une nergie de gap Eg de 3,4-3,5 eV (caractristique de Cr2O3) et dune couche externe dhydroxydes ayant un Eg de 2,4 eV (caractristique de Cr(OH)3). Aucun oxyde de fer nest dtect par mesure de photocourant. Laccent est ici mis sur la stratification oxyde/hydroxyde [184]. Dautres travaux corroborent cette sparation entre couches doxydes et couche dhydroxydes [185, 186]. Les proprits de semi-conductivit savrent diffrentes dans les deux conditions. En solution lgrement basique, la couche interne doxydes et la couche externe dhydroxydes ont un comportement de semi-conducteur de type n. Les deux couches sont en situation dappauvrissement (figure 17), ce qui permet la migration des espces ioniques (cations depuis le mtal jusqu llectrolyte, anion depuis llectrolyte jusquau mtal) et des lectrons dans tout le film passif et permet la fois une croissance continuelle du film passif et le dveloppement de la corrosion par piqres (migration des ions Cl-). En revanche, en solution acide, la couche interne doxydes est de type p et la couche externe dhydroxydes est de type n. La croissance du film passif gnre par le champ lectrique nest alors pas facilite.

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Chapitre 1 : Etude bibliographique Ce travail, contrairement aux articles prcdents, indique une semi-conductivit de type n pour lensemble de la couche en conditions neutres ou lgrement basiques [184].

Figure 17 : reprsentation schmatique de la structure lectronique des films passifs duplex forms sur un alliage Fe-18Cr a- en milieu acide sulfurique b- en solution tampon (pH 8,4) [184]

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Daprs une autre tude, en milieu acide, le nombre de porteurs de charges est lev (pente du diagramme de Mott-Schottky faible), lpaisseur faible, le film passif est fin et trs conducteur. En milieu neutre ou alcalin, le film passif est plus pais, sa densit de porteurs de charges est plus faible, la couche externe est enrichie en hydroxydes de fer et la couche interne enrichie en oxyde de chrome [187]. 1.3.4.3 Eau de mer artificielle Le film passif form sur deux aciers inoxydables austnitiques (16,4Cr-1,98 Mo-11Ni et 25Cr-4,7 Mo-25 Ni) en eau de mer artificielle (pH compris entre 7,5 et 8) a galement t tudi par les mmes techniques exprimentales. Les diagrammes de Mott-Schottky mettent en vidence deux zones de semi-conductivit diffrentes, spares par un potentiel proche de 0,5 V/ECS (gal au potentiel dquilibre lectrochimique du fer). La rgion la plus anodique correspond un semi-conducteur de type n, alors que la rgion la plus cathodique correspond un semi-conducteur de type p. Ceci est cohrent avec les rsultats prsents dans le paragraphe 3.4.1 concernant les milieux basiques ou lgrement neutres [182]. Les mesures de photocourant donnent une nergie de gap Eg denviron 3,1 eV caractristique de loxyde de chrome (cette valeur de Eg est trouve sur la couche doxyde dun chantillon de chrome pur). Les analyses Auger montrent que les films sont trs minces (environ 7 couches atomiques) et principalement constitus doxyde de chrome. Le rapport Cr/O donne une stoechiomtrie caractristique de Cr2O3. Lalliage contenant le moins dlments dalliage contient un peu doxyde de fer en extrme surface. Du nickel est dtect principalement entre les oxydes de fer et les oxydes de chrome (zone intermdiaire du film passif). Le potentiel de bandes plates de -0,5 V/ECS caractristique des oxydes de fer est trouv dans les deux cas, mme dans le cas de lalliage ne prsentant quasiment pas de fer dans sa couche passive. Mmes teneur trs faible, les oxydes de fer semblent imposer leur potentiel de bandes plates. Dans ltroite zone de potentiels autour de Ufb, le film doxydes a une capacit constante. Les valeurs de capacits mesures indiquent, par comparaison avec des mesures sur des chantillons de nickel pur passivs, que la capacit correspond aux oxydes de nickel [182]. Ainsi, en eau de mer artificielle, la stratification du film passif en fonction de sa composition chimique (et plus particulirement de son rapport Cr/Fe) nest pas aussi marque que dans les 44

Chapitre 1 : Etude bibliographique milieux basiques de laboratoire. Le film contient trs majoritairement de la chromine Cr2O3, les oxydes de fer et de nickel (bien que prsents) restant trs minoritaires. Les oxydes de fer influencent nanmoins les proprits de semi-conductivit et gnrent un comportement de type n au-dessus de Ufb (quils imposent gal -0,5 V/ECS). Dautres travaux montrent que les films passifs forms sur acier inoxydable en eau de mer naturelle sont stratifis. La couche interne est particulirement enrichie en chrome, alors que la couche externe (proche de llectrolyte) est enrichie en fer [73, 169]. Les diagrammes de Mott-Schottky montrent quen eau de mer artificielle, le temps dimmersion a une influence sur les proprits de semi-conductivit du film passif. Au cours du temps, le nombre de porteurs de charge diminue pour la partie semi-conductivit de type n (potentiel suprieur -0,5 V/ECS), et donc lpaisseur de la couche de charges despace augmente [179]. Les oxydes sont hautement dops, lordre de grandeur des densits de porteurs de charge tant de 1020 cm-3.
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1.3.4.4 Proprits semi-conductrices et corrosion par piqres Il est noter que les proprits semi-lectroniques du film passif semblent avoir une influence sur sa rsistance la corrosion par piqres. La valeur du potentiel de piqre Epiq augmente avec lnergie de gap Eg (largeur de la bande interdite) [188, 189]. La susceptibilit des aciers inoxydables la corrosion par piqres peut alors tre interprte laune des diagrammes de Mott-Schottky [170, 171, 190]. Limmunit serait assure tous les potentiels infrieurs au potentiel de bande plate Ufb. Les piqres mtastables commencent devenir probables ds que le potentiel devient suprieur Ufb. Les oxydes de fer confrent alors au film passif un caractre semi-conducteur de type n, le niveau donneur tant li lionisation des espces donneuses situes dans les sites ttradriques de la matrice spinelle, et plus particulirement aux vacances doxygne. Ceci est valable jusqu 0 V/ECS. Une zone de semi-conductivit de type n ayant une pente diffrente (plus faible) est ensuite souvent trouve entre 0 et 0,5 V/ECS [170, 191]. Cette nouvelle contribution correspond un niveau donneur profond dans la couche doxydes. Ce niveau est gnralement considr comme li lionisation des espces donneuses situes dans les sites octadriques de la matrice spinelle [191]. Certains lattribuent loxydation transpassive du Cr(III) en Cr(VI) [171, 190]. Dans cette zone il y a augmentation de la probabilit de dveloppement de piqres stables. Enfin, au-del dun potentiel critique (environ 0,5 V/ECS), la diminution de la courbe C-2(E) montre la rupture du film passif par piqration stable (la pente de type p peut tre interprte comme le passage des cations en solution) [171, 190]. Linfluence du molybdne sur les proprits semi-conductrices du film passif a t tudie afin de mieux comprendre le rle protecteur de cet lment. Quand Mo est prsent dans lalliage, il y a enrichissement de la zone interne du film en oxydes de chrome. Par ailleurs, les mesures de capacit montrent que le molybdne a tendance faire diminuer le nombre daccepteurs de la couche doxydes de chrome interne (semi-conductrice de type p) et faire diminuer le nombre de donneurs dans les niveaux profond et surfacique des oxydes de fer

45

Chapitre 1 : Etude bibliographique externes (semi-conductivit de type n). Ainsi, le molybdne diminue le taux de dopage des niveaux donneur et accepteur.

1.4 Le biofilm
Le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eaux naturelles est li la formation dun biofilm la surface du matriau. Ce biofilm est capable de provoquer des modifications de la physico-chimie locale linterface matriau/milieu et de modifier ainsi certains processus de corrosion.
1.4.1 Nature et formation du biofilm

Lorsquun matriau est immerg dans un milieu aqueux non strile, sa surface est rapidement colonise par des microorganismes, puis par des macroorganismes ( ce stade, on parle de biofouling) [192, 193]. Lensemble constitu par les microorganismes adhrents et les polymres extracellulaires quils produisent la surface du matriau est appel biofilm. La prsence du biofilm la surface dun matriau mtallique peut induire des modifications locales de la chimie de llectrolyte (par exemple modifier la valeur du pH et/ou de la concentration en dioxygne dissous) de par le mtabolisme microbien, ce qui peut avoir une influence sur le processus de corrosion. La formation dun biofilm sur une surface mtallique se fait en quatre tapes (figure 18) : Initiation : une premire couche de molcules organiques (paisseur de quelques nanomtres [194]) sadsorbe la surface (glycoprotines, polysaccharides, acides humiques, lipides), puis une monocouche discontinue de microorganismes adhre de faon rversible. Propagation : la colonisation se poursuit et devient tridimensionnelle, la surface est recouverte dune structure microbienne multicouche. Le taux de croissance des microorganismes est lev. Des exopolymres sont alors secrts. Phase plateau : la surface du substrat est recouverte dune forte population microbiologique. Une comptition entre les microorganismes voit le jour, certaines espces deviennent prdominantes au dtriment dautres espces. rosion : un dcrochage partiel du voile biologique peut avoir lieu. La formation et la croissance du biofilm la surface sont fonction du transport de matire de composs organiques et inorganiques, de ladsorption de ces composs, de ladhsion de cellules microbiennes et de leur production dexopolymres modifiant leurs proprits adhsives (glycocalyx, biosurfactants) [5, 6, 12, 74, 195-197]. La rhologie du biofilm se rapproche de celle dun gel. Le biofilm peut comprendre les produits de corrosion du substrat sur lequel le biofilm a adhr, ainsi que les composs minraux pigs au sein de la matrice du biofilm en provenance de la solution ou synthtiss par les microorganismes. Le biofilm est compos deau 80-95% et a une paisseur comprise entre 50 et 500 m. Le biofilm nest pas une couche compacte et homogne. Cest au contraire un milieu poreux, trs htrogne dans les trois directions et dans le temps, pouvant prsenter des zones plus paisses que dautres (formes de tubercules, ou mushroom model ). Lhtrognit est dabord structurale : les microcolonies de cellules sont spares par des vides interstitiels facilitant les transports de masse. Lespace interstitiel forme effectivement des canaux pour les nutriments et autres espces dissoutes. Lhtrognit est aussi microbiologique et chimique : les biofilms renferment plusieurs types de microorganismes, qui forment un 46

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Chapitre 1 : Etude bibliographique consortium microbiologique et qui crent des cellules de concentration en certaines espces chimiques. Des gradients de concentration peuvent alors apparatre et favoriser le dveloppement de la corrosion. Des bactries, des algues et micro-algues, des champignons, des levures peuvent tre trouvs dans des biofilms obtenus sur acier inoxydable en eaux naturelles. Les mcanismes de corrosion microbienne les plus tudis se rapportent toujours aux bactries ; il ne faut cependant pas ngliger la prsence des autres genres microbiens, comme par exemple les champignons, dont certaines espces sont capables de former des acides organiques et dabaisser le pH local linterface biofilm/couche doxydes et de dstabiliser le film passif. Lors dune immersion dans un milieu oxygn et clair, les micro-algues les plus nombreuses dans le biofilm sont des diatomes. Linfluence de la production de O2 par les algues photosynthtiques sur le comportement la corrosion des aciers inoxydables (et en particulier sur le courant cathodique) est aussi prendre en compte [27].
Transport

(1)

(2)

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SURFACE

Adhsion initiale

Consolidation

Colonisation

Agrgation(1)/ Erosion(2)

Cellules planctoniques Cellules adhrentes Cellules + polymres extracellulaires

Flux du milieu Biofilm (matrice + cellules)

Figure 18 : schma de la formation du biofilm [198, 199]

1.4.2 Ladhsion bactrienne

Une brve description des bactries est fournie en annexe n4. Ladhsion de microorganismes la surface dun matriau est un phnomne physicochimique contrl par des interactions physico-chimiques agissant longue et courte distance ainsi que des forces hydrodynamiques. Historiquement, deux thories dcrivant les interactions entre une particule charge sphrique non dformable et la paroi dun substrat ont t employes pour traiter la bioadhsion. La thorie DLVO (Derjaguin, Landau, Verwey, Overbeek), portant sur la stabilit de ltat collodal, prend en compte les interactions lectrostatiques et les interactions lectrodynamiques de type Lifshitz-Van der Waals. La thorie du mouillage, base sur la thermodynamique des surfaces, dcrit toutes les interactions intermolculaires mais nglige les interactions lectrostatiques [200]. Ces deux approches sont complmentaires. Les interactions lectrostatiques comme les interactions lectrodynamiques doivent tre values pour dterminer laptitude ladhsion dune cellule donne sur un substrat donn. Cette complmentarit est obtenue par la thorie DLVO tendue , qui prend en compte toutes les interactions lectrostatiques et nonlectrostatiques entre la cellule et la surface du substrat [201, 202] :

47

Chapitre 1 : Etude bibliographique Gtotal = GE + GLW + GAB + GBr (34) o GE est lnergie libre dinteraction lectrostatique, GLW lnergie libre des interactions de type Lifshitz-Van der Waals, GAB lnergie libre des interactions de type acide-base au sens de Lewis et GBr lnergie libre des interactions dues au mouvement brownien. Linteraction sera attractive si Gtotal<0 et rpulsive si Gtotal>0. Chaque terme de lquation (34) doit tre valu sparment. 1.4.2.1 Interactions lectrostatiques Les interactions lectrostatiques sont dues au recouvrement des doubles couches ioniques du substrat et de la cellule [203]. Comme il a t mentionn prcdemment, une surface immerge acquiert une charge de surface par adsorption ionique et/ou par ionisation de certains groupements atomiques prsents en surface. Ceci est valable pour le substrat (surface plane mtallique) comme pour la particule en suspension. Une accumulation de contre-ions se fait alors proximit de la surface, ce qui cre une double couche lectrique. Plusieurs modles thoriques ont t dvelopps pour rendre compte des proprits lectriques de la double couche. Dans le modle de Helmholtz, la double couche lectrique est considre comme un condensateur plan (les charges ct lectrolyte sont des ions fortement adsorbs situs tous la mme distance LH de la surface). Le potentiel au sein de la double couche dcrot de faon linaire avec la distance la surface. Dans le modle de Gouy-Chapman, la mobilit des ions prsents dans llectrolyte par agitation thermique est prise en compte. Les ions proximit de la surface ne sont alors plus aligns selon un plan, mais sont rpartis selon une distribution statistique de Boltzmann dans toute lpaisseur de la double couche alors appele double couche diffuse (ou de Gouy-Chapman), qui stend jusquau cur de la solution. Le potentiel au sein de la double couche diffuse varie de faon exponentielle avec la distance la surface. Le modle de Stern-Geary est une superposition des deux modles prcdents. La chute de potentiel entre la paroi et la solution est la somme dun terme correspondant une couche compacte de type Helmholtz (appele ici couche de Stern) renfermant les ions fortement adsorbs la surface, et dun terme correspondant une couche diffuse de type Gouy-Chapman comprenant les ions solvats. Dans la couche de Stern, le potentiel dcrot de faon linaire, puis au-del du plan sparant les deux couches, appel plan externe de Helmholtz, il varie de faon exponentielle avec la distance la surface (figure 19).

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Figure 19 : modle de Stern : superposition dune couche compacte de type Helmholtz (couche de Stern) et dune couche diffuse de type Gouy-Chapman [204]

48

Chapitre 1 : Etude bibliographique

Lpaisseur de la double couche varie inversement avec la force ionique de llectrolyte. Dans des solutions trs charges en ions, la double couche est trs fine et les interactions lectrostatiques lies au recouvrement des deux doubles couches (paroi mtallique et particule en suspension) sont faibles. Leffet des charges de surface est masqu. Inversement, lorsque llectrolyte est peu conducteur, les interactions lectrostatiques lies au recouvrement des deux doubles couches jouent un rle prpondrant. Le pH a galement une influence sur les interactions lectrostatiques, car le nombre de groupements chargs la surface du matriau et la surface de la particule en suspension varie avec ce paramtre chimique [203, 205]. Lorsquil y a coulement de llectrolyte, le plan de cisaillement est dfini comme le plan le plus proche de la surface o les contraintes de cisaillement sont nulles (et o la vitesse dcoulement tangentielle est nulle). Ce plan se trouve dans la couche diffuse proximit du plan externe de Helmholtz et spare les espces immobiles des espces mobiles. Le potentiel mesur au niveau du plan de cisaillement est appel potentiel zta . Le potentiel ne peut tre mesur directement, il est dtermin partir de mesures lectrocintiques. est typiquement compris entre -100 et 100 mV et dpend fortement de la charge de surface et de la force ionique de llectrolyte ( diminue quand la force ionique augmente).
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Lorsque linteraction particule charge/paroi se fait potentiel constant et infrieur 50 mV, lnergie libre dinteraction lectrostatique scrit selon lquation (35) [203, 206] :
G E = 0 a ( p 2 h ) 1 + exp( 2 L 2 h p S 2 H + ln(1 exp( ln + S ). ) 2 2 h LH p + S 1 exp( L ) H

(35)

o a est le rayon de la particule, p le potentiel de la surface de la particule, S le potentiel au sein de la solution, h la distance entre le centre de la particule et la paroi du substrat, et LH lpaisseur de la double couche (fonction de la force ionique de llectrolyte). 1.4.2.2 Interactions lectrodynamiques Les interactions lectrodynamiques entre une particule en suspension et une surface ne peuvent pas tre ngliges dans le cadre de la bioadhsion. a) Interactions de Lifshitz-Van der Waals Les interactions de Lifshitz-Van der Waals regroupent les interactions diple-diple (Keesom), les interactions diple-diple induit (Debye), et les interactions entre diples instantans (London). Dans ltude des phnomnes bioadhsifs, trois corps sont en prsence : le microorganisme (not 1), le substrat (not 2) et llectrolyte (not 3). Lnergie libre des interactions de type Lifshitz-Van der Waals entre deux corps 1 et 2 plongs dans le liquide 3 est donne par lquation de Dupr (36) : G 132 LW = 12 LW 13 LW 23 LW (36) La tension interfaciale lie aux interactions de Lifshitz-Van der Waals entre deux corps i et j peut scrire selon la relation de Good :
ij LW = ( i LW j LW ) 2 = i LW + j LW 2 i LW j LW

(37)

49

Chapitre 1 : Etude bibliographique

En appliquant la relation de Good aux trois tensions interfaciales de lquation de Dupr, lnergie libre G132 LW devient [205, 207] :
G 132 LW = 2 3 LW 2 1 LW 2 LW + 2 1 LW 3 LW + 2 2 LW 3 LW

LW LW G 132 LW = 2 1 LW 3 LW 3 2

Lnergie libre des interactions de Lifshitz-Van der Waals entre les corps 1 et 2 immergs dans le liquide 3 est positive lorsque 1LW< 3LW< 2LW et lorsque 1LW> 3LW> 2LW, les interactions sont alors rpulsives. Dans tous les autres cas, les interactions Lifshitz-Van der Waals sont attractives. Thoriquement, lnergie libre des interactions de Lifshitz-Van der Waals sexerant entre la paroi du substrat et la particule charge peut aussi sexprimer selon lquation (38) [203] :
G VdW = A 2a (a + h ) h + 2a ln 6 h (h + 2a ) h

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(38)

o A est la constante de Hamaker du systme, a le rayon de la particule et h la distance entre le centre de la particule et la paroi. b) Interactions acide-base de Lewis Un acide de Lewis est un accepteur dlectrons comportant une lacune lectronique. Une base de Lewis est un donneur dlectrons ayant une paire dlectrons libres. Une raction entre un acide de Lewis et une base de Lewis est donc un transfert dlectrons. Lnergie libre des interactions de type acide-base entre deux corps 1 et 2 immergs dans un lectrolyte 3 peut scrire laide de lquation de Dupr :
G 132 AB = 12 AB 13 AB 23 AB

La tension de surface lie aux interactions acide-base de Lewis entre deux corps i et j est exprime par :
ij AB = 2( i + j + )( i i )

o i+ (resp. j+) reprsente le paramtre accepteur dlectrons (acide de Lewis) du corps i (resp. du corps j) et i- (resp. j-) le paramtre donneur dlectrons (base de Lewis) du corps i (resp. du corps j). En appliquant cette relation aux trois tensions de surface de lquation de Dupr, lnergie libre G132 AB devient [205, 207] :
+ + + + + + G 132 AB = 2 3 ( 1 + 2 3 ) + 3 ( 1 + 2 3 ) 1 2 1 2 (39)

Le signe de G132 AB est fonction des valeurs des paramtres (i+ ; i-) des trois corps. Les interactions de type acide-base de Lewis peuvent tre attractives ou rpulsives. Le terme i+ (resp. i-) reprsente le caractre accepteur dlectrons (resp. donneur dlectrons) mais aussi donneur de protons (resp. accepteur de protons). Le terme G132 AB prend ainsi en compte les liaisons hydrogne qui peuvent intervenir au cours de ladhsion.

50

Chapitre 1 : Etude bibliographique

c) Interactions dues au mouvement brownien Toute particule immerge dans un milieu liquide possde une nergie brownienne de
3 k BT . 2

Cest cette nergie qui assure le maintien des particules en solution si elle est suprieure lnergie dattraction entre les particules immerges [205]. 1.4.2.3 Limitations de la thorie DLVO tendue Des limites sont apporter la thorie dveloppe ci-dessus lorsque la particule considre est une cellule vivante [203]. Une cellule vivante nest pas une particule idale. Sa gomtrie nest pas simple et constante au cours du temps (dformabilit), sa composition chimique de surface nest pas uniforme (mtabolisme, raction des conditions de stress). De plus, les interactions entre une cellule et un substrat dpendent fortement des conditions environnementales, du stade de croissance dans lequel se trouve la culture bactrienne, des paramtres de croissance (milieu de culture, temprature) Ces interactions semblent trs spcifiques. Un autre problme provient du fait que les deux thories ncessitent que le systme soit lquilibre thermodynamique, rarement atteint lors de ladhsion dune cellule sur un substrat. Par exemple, une cellule ayant adhr sur une surface continue raliser son mtabolisme, ce qui peut entraner des modifications de sa charge de surface, de la composition de sa paroi De plus, les processus dadhsion cellulaire se font gnralement en circuit ouvert, avec des changes de matire et dnergie avec le milieu extrieur (apport de nutriments). Dans la plupart des cas, lquilibre thermodynamique nest pas atteint, mais des conditions pseudostationnaires peuvent apparatre. Tout en gardant en mmoire ces restrictions, les deux thories peuvent tre appliques dans un premier temps pour valuer approximativement les interactions cellule/surface. 1.4.2.4 Synthse Les principales interactions entre cellule et surface du substrat sont les interactions lectrostatiques, les interactions de Lifshitz-Van der Waals et les interactions acide-base de Lewis. Concrtement, les interactions lectrostatiques seront estimes par la mesure du potentiel de la cellule et du substrat. Les deux types dinteractions lectrodynamiques considrs seront valus par mesures daffinit de la cellule et du substrat par rapport diffrents solvants.
1.4.3 Les exopolymres

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Les exopolymres forment de 85 98 % de la matire organique totale [208]. Ce sont les polymres synthtiss par les microorganismes dans le biofilm. Ils prsentent une assez grande diversit : exopolysaccharides (EPS), protines, lipides, enzymes et acides nucliques sont rgulirement trouvs lintrieur de biofilms [101]. Ils forment parfois une substance glatineuse appele matrice du biofilm. Ils ont notamment pour rle de favoriser ladhsion des microorganismes sur le substrat et de les protger des agressions provenant du milieu extrieur (par exemple par des biocides) [195].

51

Chapitre 1 : Etude bibliographique Ce travail sintresse plus particulirement un type dEPS, les enzymes, qui sont prsentes en annexe n5.
1.4.4 Action corrosive des biofilms

La corrosion induite par les microorganismes (CIM), encore appele corrosion microbienne ou biocorrosion, nest pas une nouvelle forme de corrosion. Le mtabolisme des microorganismes du biofilm engendre des modifications dans les conditions physicochimiques locales linterface biofilm/film passif des aciers inoxydables. Ces modifications peuvent acclrer une corrosion dj existante (rendre possible une corrosion thermodynamiquement prvisible mais limite par sa cintique), ou rendre possible thermodynamiquement une forme de corrosion. Brivement, les diffrentes modes daction des microorganismes sur la corrosion des matriaux mtalliques sont les suivants : Pile daration diffrentielle : les microorganismes arobies consomment le dioxygne dissous, ce qui provoque lapparition dun gradient de O2 proximit du matriau. Les zones colonises par des microorganismes arobies voient un appauvrissement en oxygne dissous et deviennent anodiques, tandis que le reste du substrat constitue la cathode. Le faible ratio aire anodique/aire cathodique peut expliquer des courants de corrosion localise trs importants. Piles de concentrations dions : des gradients de certains ions peuvent tre crs par le mtabolisme bactrien (Fe2+, S2-, H3O+) Les piles de corrosion ainsi formes peuvent donner naissance la corrosion localise. Production de S2-/H2S : rle de la flore sulfurogne ; Production de NH3 par les bactries dnitrifiantes : ces bactries consomment des ions nitrates NO3-, qui sont des inhibiteurs de corrosion pour les aciers inoxydables. Production de H2 ; Formation de dpts pouvant tre lorigine dune corrosion par effet de crevasse ; Action catalytique de macromolcules (exopolymres) ; Changement du pH sous le biofilm : certains microorganismes scrtent dans leur milieu environnant des acides organiques et/ou inorganiques. Le pH local linterface biofilm/film passif peut atteindre des valeurs trs faibles. Cest le cas par exemple du biofilm appel plaque dentaire qui gnre une attaque de lmail des dents par acidification du milieu (carie). Nouvelle raction cathodique : biosynthse dun oxydant au sein du biofilm ; Activit enzymatique des biofilms. Cette liste na pas pour vocation dtre exhaustive. La littrature sur le sujet comporte plusieurs excellents tats de lart sur les diffrents mcanismes microbiens pouvant induire de la corrosion sur acier inoxydable [101, 209]. Certains mcanismes vont tre dtaills plus particulirement dans la suite de cette tude, en particulier le rle des EPS, parmi lesquels les enzymes pourraient tre un acteur prdominant de la corrosion microbienne. 1.4.4.1 Influence des exopolymres Certains exopolymres sont capables de former des complexes avec les cations mtalliques, dans certains cas avec une haute spcificit. Des groupements fonctionnels comme les groupements carboxyle et amine peuvent tre ioniss et dvelopper des liaisons ioniques et/ou lectrostatiques avec les cations mtalliques

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Chapitre 1 : Etude bibliographique [210]. Par exemple, les exopolysaccharides ont une forte affinit avec les ions Fe2+ [211]. La solubilit des cations mtalliques est alors amplifie, et les cations restent pigs dans le biofilm, gnrant des cellules de concentration [195]. Comme les EPS constituent la trs grande majorit des molcules organiques du biofilm, ils peuvent jouer un rle non ngligeable dans la corrosion microbienne des aciers inoxydables. 1.4.4.2 Evolution du potentiel de piqres Epiq Le risque de corrosion localise peut tre augment non seulement par laugmentation du potentiel de corrosion libre Ecorr, mais aussi par la diminution du potentiel de piqres Epiq. Cest en fait la diffrence Epiq-Ecorr qui est significative pour valuer le risque de dveloppement de piqres la surface de lacier. 1.4.4.2.1 Bactries ferro-oxydantes
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Comme il a t mentionn plus haut, les films doxydes de fer dposs par les bactries ferrooxydantes se comportent comme des barrires slectives danions. Les oxy-hydroxydes de fer empcheraient les protons H+ de traverser le dpt pour aller en solution, ce qui favoriserait la propagation des piqres. Ce phnomne est parfois appel super-crevasse , car les proprits des oxy-hydroxydes de fer biodposs ont tendance gnrer de la corrosion par crevasse et empcher (ou retarder) la repassivation des piqres mtastables. 1.4.4.2.2 Flore sulfurogne Mme en conditions arobies, les bactries sulfato-rductrices (BSR) et thiosulfatorductrices (BTR) sont trouves sous les dpts de surface, et en particulier sous les tubercules riches en fer dposs par les microorganismes ferro-oxydants, qui par leur consommation doxygne crent une anarobiose. Du soufre est souvent trouv sous ces dpts [139]. De plus, la concentration en oxygne dans la zone intrieure du biofilm (proche de la surface du film passif) diminue en raison de la respiration des bactries arobies. Ainsi, proximit du matriau, lorsque le biofilm est mature et stationnaire (temps dimmersion suffisamment lev), des conditions anarobies sont gnres et des bactries anarobies peuvent se dvelopper. Des bactries anarobies ont en effet t trouves dans des biofilms matures dvelopps en conditions ares [125, 126, 192, 212]. Les bactries du soufre sont souvent trouves la surface de pices en acier inoxydable qui ont t attaques dans des eaux peu chlorures [129, 140, 212-214]. Les BSR et les BTR sont capables de rduire respectivement les ions SO42- et S2O32- en ions sulfures S2- [209]. Les ions SO42-, consomms par les BSR, sont des inhibiteurs de corrosion. En revanche, les ions S2- sont capables dabaisser la valeur du potentiel de piqre Epiq et dempcher la repassivation des piqres [215, 216]. La dissolution du fer par les ions S2- passe par la formation de complexes de surface (clusters) [217]. La consommation de SO42- et la production de S2- et de H2S (diminution du pH) peuvent donc entraner la corrosion par piqres des structures en acier inoxydable. Des expriences ont montr que des chantillons dacier 304L immergs en culture pure de BSR sont attaqu par une corrosion par piqre et par une corrosion intergranulaire dues aux 53

Chapitre 1 : Etude bibliographique bactries. Des chantillons dacier 316L ont aussi t dgrads dans une moindre mesure [218]. Les BSR sont capables de faire diminuer le potentiel de repassivation Erep, ce qui largit la gamme de potentiels o des piqres mtastables peuvent apparatre et tend dstabiliser la couche passive [212].

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

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2 Chapitre 2 : Matriels et Techniques

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

2.1 Matriaux
Trois nuances dacier inoxydable ont t retenues pour cette tude. Les aciers AISI 304L et AISI 316L sont des aciers inoxydables austnitiques. Lacier 254SMO est un acier inoxydable superaustnitique. Leur composition chimique est donne dans le tableau 2. Nom usuel 304L 316L 254SMO UNS S30403 S31603 S31254 C 0,018 0,019 0,01 Cr 18 17,3 19,9 Mo 0 2,04 6 Ni 8,1 11,3 17,8 Mn 0 1,04 0,5 N 1,5 0,041 0,2

Tableau 2 : composition chimique (en pourcentage massique) des aciers inoxydables

2.1.1 Echantillons de laboratoire tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Les chantillons utiliss pour ltude de la bioadhsion et pour les caractrisations de couche passive sont des plaques de dimension 30 X 10 X 1mm, manipules laide de pinces. Les chantillons utiliss pour llectrochimie sont des plaques de dimension 30 X 10 X 1mm, sur lesquelles un fil de cuivre a t soud pour assurer un contact lectrique. Le tout a t recouvert dune peinture protectrice (Bain PSA type 781-975, PPG) par cataphorse et englob dans une rsine poxy (Epofix resin additionne dEpofix Hardener dans des proportions de 7 pour 1, Struers). Seule la face de travail (dune surface utile de 3 cm2) est en contact avec llectrolyte, ce qui permet dviter des problmes de corrosion par effet de crevasse. Les chantillons sont polis mcaniquement laide de disques abrasifs en carbure de silicium progressivement jusquau grade 1200, puis subissent un poli miroir la pte de diamant jusqu un grain de 1 m. Ils sont dgraisss aux ultrasons entre chaque grade de polissage. Aprs le polissage au micron, ils peuvent subir diffrents traitements de surface. Ces prparations de surface et leur influence sur diverses proprits des matriaux sont tudies au chapitre 3.
2.1.2 Echantillons pour les mesures in situ

Les chantillons utiliss pour les mesures de potentiel de corrosion libre in situ sont des plaques de dimension 100 X 25 X 1 mm. Chaque plaque est suspendue un crochet en acier inoxydable, sur lequel une cosse de contact lectrique a t soude. Cette cosse se prolonge par un fil lectrique gain qui permet dacqurir le signal. Les chantillons ont t immergs au pralable dans une solution contenant 20% dacide nitrique 65% et 2% dacide fluorhydrique 40%. Ils ont ensuite t rincs leau distille et stocks lair ambiant jusqu la date dimmersion (temps de stockage suprieur 5 jours). Les chantillons utiliss pour les mesures lectrochimiques dynamiques quasi in situ (en bcher sur site) sont identiques aux chantillons de laboratoire, la seule diffrence que le fil lectrique est beaucoup plus long (3-4 mtres environ).

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

2.2 Produits chimiques et solutions

Toutes les solutions sont agites pendant 1 2 minutes aprs ajout des diffrents composs chimiques ou biochimiques. Lagitation est stoppe pendant les mesures lectrochimiques dynamiques (EIS, courbes de polarisation, chronoampromtries, chronopotentiomtries, diagrammes de Mott-Schottky).
2.2.1 Eau de rivire artificielle

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Leau de rivire artificielle est une eau distille additionne de 0,3 g/L de NaCl (Sigma). Ce milieu a t choisi pour sa conductivit lectrique denviron 0,55 mS/cm, comparable celle de leau de la Seine (cf. tableau 3). Si les conductivits sont sensiblement les mmes, la composition chimique de leau de rivire artificielle est toutefois trs simplifie par rapport celle de leau de rivire naturelle. En effet, le seul anion prsent est Cl-, ce qui permet de saffranchir de linfluence des autres ions (entre autres, les inhibiteurs de corrosion NO3- et SO42-). La teneur en chlorures de leau artificielle est par consquent nettement plus leve que celle de leau naturelle. Leau de rivire artificielle modlisant leau de la Seine est le milieu utilis dans la quasitotalit des expriences de laboratoire.
2.2.2 Ractifs enzymatiques

La solution note ractifs enzymatiques est une solution deau de rivire artificielle laquelle ont t ajouts 100 u/L de glucose-oxydase (GOD produite par Aspergillus niger, 5100 units/g, Sigma) et 20 mmol/L de D-(+)-glucose (Sigma).
2.2.3 Ajout ultrieur de catalase

Lajout dune deuxime enzyme, la catalase (produite par Aspergillus niger, 168,64 units/L, Sigma) dans la solution ractifs enzymatiques a galement t considr. Gnralement, 20 L de la solution commerciale de catalase sont introduits dans la solution ractifs enzymatiques (3370 units de catalase par litre).
2.2.4 Produits enzymatiques

La solution note produits enzymatiques est une solution deau de rivire artificielle laquelle ont t ajouts 2 mmol/L de peroxyde dhydrogne H2O2 (solution 50%, Rectapur, Prolabo) et 1 mmol/L dacide gluconique (solution 50%, Acros Organics).

2.3 Techniques exprimentales

Ce paragraphe a pour vocation de prsenter les techniques exprimentales mises en uvre dans ce travail et de donner les protocoles exprimentaux utiliss. Les techniques employes sont :

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

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Des exprimentations menes sur des chantillons immergs en eau de rivire naturelle (dans la Seine) : mesures lectrochimiques, observation de surface (MEB), dnombrements bactriens ; Des techniques de caractrisation microbiologique : isolement de souches microbiennes, tests dorientation ; Des techniques de caractrisation physico-chimique de surface : MATS et mobilit lectrophortique pour la surface des bactries, goniomtrie et potentiel lectrocintique pour les matriaux mtalliques ; Des expriences destimation de la biocontamination dune surface en conditions statiques : protocole dadhsion, calcul du taux de recouvrement de la surface par les microorganismes, comparaisons statistiques ; Des mesures de Ecorr dans un milieu de culture en prsence de microorganismes ; Des techniques danalyse des couches doxydes : XPS, photolectrochimie, diagrammes de Mott-Schottky ; Des mthodes lectrochimiques utilises en laboratoire : mesure de Ecorr, spectroscopie dimpdance lectrochimique (globale et locale), courbes de polarisation cathodique et anodique, chronopotentiomtrie, chronoampromtrie ; Des analyses chimiques des solutions : dosages des concentrations en H2O2 et en O2, mesure du pH. 2.3.1 Expriences ralises dans leau de Seine

2.3.1.1 Sites dimmersion en eau de rivire naturelle Le fleuve choisi dans cette tude est la Seine. Trois sites dimmersion ont t retenus : la station de pompage dune usine Renault situe en amont de lagglomration parisienne (Choisy-le-Roi), le dbarcadre dune usine Renault situe en aval de Paris (Flins), et un barrage situ quelques kilomtres en amont de Rouen (Poses-Amfreville). La localisation gographique et une photographie des trois sites dimmersion sont visibles sur la figure 20.

Amfreville Flins Choisy-le Roi

a- Localisation gographique des trois sites

b- Site de Choisy-le-Roi

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

c- Site de Flins

d- Site de Poses-Amfreville

Figure 20 : emplacement et photographies des trois sites dimmersion dans la Seine

2.3.1.2 Composition chimique de leau de rivire naturelle

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Des valeurs moyennes sur une priode de deux ans sont donnes pour les principaux paramtres physico-chimiques de leau (tableau 3). Le COT est le Carbone Organique Total et les MES sont les Matires En Suspension.
T Unit Choisy-leRoi Flins PosesAmfreville C 14, 2 14,2 14 Conductivit (25C) S/cm 524 611 601 pH 7,9 7,8 7,7 [O2] dissous mg/L 10 8,1 7,9 Clmg/L 20 24,4 25,3 SO42mg/L 31,1 40,7 39,1 NO3mg/L 25,4 21,8 23,9 PO43mg/L 0,51 0,68 0,61 COT mg/L 2,9 3,9 4,1 MES mg/L 15 19,9 27,2

Tableau 3 : valeurs moyennes sur deux ans des principaux paramtres physico-chimiques de leau des trois sites dimmersion

La concentration en manganse dans leau de Seine du site de Poses-Amfreville a t mesure (au mois de Septembre) par ICP (Induction Coupled Plasma) par le laboratoire Corrodys lUniversit de Caen. Elle nest que de 0,01 mg/L, ce qui est le seuil de dtection de lanalyseur. 2.3.1.3 Montage exprimental utilis pour les mesures in situ du potentiel de corrosion libre Plusieurs portiques dimmersion ont t spcialement conus et usins pour immerger 20 chantillons dacier inoxydable de dimensions 100 X 25 X 1mm. Ce dispositif original permet de mesurer en continu leur potentiel de corrosion libre laide dun multiplexeur HP Agilent 34970A, contrl par le logiciel Benchlink Datalogger. 4 lectrodes de rfrence sont utilises pour mesurer les potentiels (une rfrence pour cinq chantillons) : trois lectrodes au calomel satur Hg2Cl2 (s)/Hg (l) (ECS) et une lectrode au sulfate mercureux Hg/Hg2SO4 (ESM). Deux types dlectrodes de rfrence sont utiliss afin de mettre en vidence dventuels problmes

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques de rfrence qui pourraient survenir durant limmersion. Tous les potentiels sont ensuite reports par rapport lECS. La photographie dun portique est donne sur la figure 21-a.

a- Portique mont (20 chantillons, 5 lectrodes de rfrence)

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b- Contact lectrique chantillon-crochetcosse-fil protg par un vernis isolant

Figure 21 : portiques dimmersion utiliss pour les mesures de Ecorr in situ

Les chantillons sont percs dun trou ( 6 mm) dans leur partie suprieure, afin de pouvoir tre suspendus sur des crochets en acier inoxydable. Un autre trou ( 9 mm) est perc dans la partie infrieure, travers par une barre en tflon qui permet de stabiliser les chantillons. Le contact lectrique entre un chantillon et son fil se fait par lintermdiaire dune cosse soude sur le crochet. La partie inutile du crochet, la cosse et sa soudure sont recouvertes dun vernis isolant (rf. Combisub T150, Chryso Resipoly), visible sur la figure 21b. Les chantillons sont immergs une profondeur infrieure 1 mtre. La temprature de leau est releve rgulirement. 2.3.1.4 Mesures lectrochimiques dynamiques sur site dimmersion Des mesures dynamiques dlectrochimie ont t ralises sur les sites de Choisy-le-Roi et de Flins. Elles sont ralises selon un protocole qualifi de quasi in situ . Les chantillons sont les mmes que pour les mesures de Ecorr in situ. Ils ne sont pas enrobs. Les mesures dynamiques sont ralises dans un bcher contenant de leau de Seine du site, aprs prlvement dun chantillon sur le portique et rimmersion rapide dans le bcher. Une pince crocodile assure le contact et permet la transmission du signal jusquau potentiostat. La contre-lectrode est une grille de titane platin et la rfrence une ECS. Les courbes de polarisation cathodique sont ralises depuis Ecorr jusqu -2 V/ECS une vitesse de balayage de 5 mV/s. Cette vitesse de balayage est rapide et ne permet pas de mesurer des courants stationnaires, mais est trs pratique pour des mesures sur site ncessairement limites en temps. Les courbes de polarisation anodique sont ralises suivant la technique de quasi in situ une vitesse de balayage lente de 0,15 mV/s (9 mV/min) sur le site de Choisy-le-Roi (plus accessible) et une vitesse de balayage rapide de 5 mV/s sur le site de Flins.

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques 2.3.1.5 Observation et analyse de surface par Microscopie Electronique Balayage couple une analyse EDS Le principe du microscope lectronique balayage (MEB) coupl une analyse EDS est expliqu dans lannexe n6. a) Protocole de prparation des chantillons Les chantillons dacier inoxydable prlevs dans la Seine pour observation au MEB sont soumis un protocole de prparation avant lintroduction dans le microscope. Ce protocole est utilis classiquement lors de lobservation de micro-organismes. Il permet dviter une trop forte dgradation des structures biologiques (paroi bactrienne par exemple) lors de la dshydratation de lchantillon. Les chantillons sont dabord fixs pendant 1 heure dans un tampon de cacodylate de sodium (CDS) 0,2 M contenant 3% en volume de glutaraldhyde, puis rinc par le tampon de cacodylate. Ils sont enfin progressivement dshydrats. Le protocole est dtaill dans le tableau 4.
Fixation Fixation gluta 3% dans tampon CDS 0.2M 4C Rinage en tampon CDS 0.2M Dshydratation Ethanol (EtOH) 30% Ethanol 50% Ethanol 70% Ethanol 90% Ethanol absolu EtOH absolu/HMDS v/v : 2/1 EtOH absolu/HMDS v/v : 1/1 EtOH absolu/HMDS v/v : 1/2 HMDS pur Evaporation sous hotte Mtallisation

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Temps 1h 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 10 min 5 min 5 min 5 min 10 min 5 min 175 s

Nombre doprations 1X 2X 1X 1X 1X 1X 3X 1X 1X 1X 1X I = 10 mA

Tableau 4 : protocole de prparation des chantillons pour observation de biofilm au MEB

b) Appareillage Deux MEB ont t utiliss dans cette tude. Le premier est un JEOL-T220A appartenant au laboratoire LGPM de lEcole Centrale Paris. Il a surtout t employ pour son systme danalyse EDS Oxford Link-ISIS (dtecteur en Si-Li). La plupart des images de biofilms naturels ont t acquises lunit UBHM de lInra Massy sur un MEB balayage effet de champ Hitachi S4500. 2.3.1.6 Dnombrements bactriens Des dnombrements bactriens ont t effectus au laboratoire Corrodys de Cherbourg. La composition des diffrents milieux de culture est donne dans lannexe n10. Les flores totales arobie et anarobie sont dnombres aprs ensemencement sur botes de Ptri contenant du milieu de culture riche glos PCA (Plate Count Agar) ajout de 0,3 g/L de NaCl (milieu dit PCA-NaCl ). La temprature dincubation est de 30C +/- 2C pendant 48 heures, en tuve arobie dune part, en tuve anarobie dautre part. 62

Chapitre 2 : Matriels et Techniques Les Bactries Sulfato-Rductrices (BSR) et les Bactries Thiosulfato-Rductrices (BTR) sont dnombres par ensemencement respectivement dans les milieux de culture liquides de Starkey [219] et de Magot [220]. La temprature dincubation est de 30C +/- 2C (temprature optimale de croissance de la flore sulfurogne) pendant 3 semaines. La mthode de dnombrement retenue est la technique NPP (Nombre le Plus Probable). Les tubes sont rvls par ajout de FeCl2 : la prsence dions sulfures produits par les bactries entrane lapparition dun prcipit noir de FeS. La lecture des rsultats se fait laide de tables de Mc Cardy. Les entrobactries sont dnombres par ensemencement dans le milieu de culture liquide de Mc Conkey. Pour les dnombrements bactriens de biofilms, les ensemencements ont t raliss suivant la mme mthode, aprs dcrochage des biofilms dans un bain dultrasons 35 kHz pendant 5 minutes. Tous ces dnombrements donnent des rsultats concernant les bactries viables cultivables, qui ne forment quune fraction de la flore bactrienne totale.
2.3.2 Techniques de caractrisation microbiologique tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

2.3.2.1 Isolement de souches microbiennes Dans ce travail, des souches microbiennes sauvages sont isoles partir de prlvements du milieu naturel. Lisolement consiste en trois repiquages successifs de chaque souche sur deux botes de Ptri. A la suite de chacun de ces repiquages, les souches sont isoles sur la base de leurs diffrences de morphologie. Aprs le troisime repiquage, les souches sont isoles puis ensemences dans des milieux liquides (bouillon nutritif BN, Mac Conkey, Starkey, Magot). Aprs cette dernire culture, un stock est ralis par conglation des isolats -80C dans une solution de glycrol 20%. 2.3.2.2 Tests dorientation Les quatre tests classiques suivants ont t raliss sur les isolats : test de Gram : il permet de sparer les bactries en deux grandes catgories en fonction de la composition chimique de leur paroi bactrienne. test au KOH (Ryu) : il confirme les rsultats du test de Gram. test de la catalase : il permet de savoir si la souche tudie synthtise de la catalase, enzyme catalysant la dcomposition de H2O2 en H2O et O2. test de loxydase : permet de mettre en vidence une enzyme, la phnylne diamine oxydase, synthtise par certaines bactries.
2.3.3 Technique de caractrisation physico-chimique de surface

2.3.3.1 Caractrisation physico-chimique de la surface de microorganismes a) Caractres hydrophile/hydrophobe et acide/base de Lewis des microorganismes Ces proprits de surface sont dtermines laide du test MATS (Microbial Adhesion To Solvents).

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Principe La MATS est une mthode de partage dveloppe par Bellon-Fontaine et al qui permet de dterminer le caractre lectron-accepteur/lectron-donneur (acide/base au sens de Lewis) et le caractre hydrophile/hydrophobe des microorganismes [221]. Elle est base sur ltude de laffinit des microorganismes pour 4 solvants de proprits physico-chimiques diffrentes et connues (tableau 5). Le chloroforme CHCl3 (not C) est un solvant polaire acide au sens de Lewis ; lactate dthyle (not AE) est un solvant polaire basique au sens de Lewis ; lhexadcane (not HD) et le dcane (not D) sont deux solvants apolaires. Il est noter que la composante de Lifshitz-Van der Waals de lnergie de surface est peu prs gale pour le chloroforme et lhexadcane dune part, pour le dcane et lactate dthyle dautre part. L+ LLLW Chloroforme (C) 27,2 3,8 0 Hexadcane (H) 27,7 0 0 Dcane (D) 23,9 0 0 Actate dthyle (AE) 23,3 0 19,4
Tableau 5 : caractristiques nergtiques des solvants utiliss pour la MATS en mJ.m-2 (LLW est la composante due aux interactions de Lifshitz-Van der Waals, L+ la composante lectron-accepteur et L- la composante lectron-donneur)

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Le caractre base de Lewis (lectron-donneur) du microorganisme est dtermin par la comparaison des affinits avec le chloroforme et lhexadcane. Le caractre acide de Lewis (lectron-accepteur) du microorganisme est dtermin par la comparaison des affinits avec lactate dthyle et le dcane. Le caractre hydrophile/hydrophobe du microorganisme est dtermin par son affinit pour le dcane et lhexadcane. Afin de saffranchir des interactions lectrostatiques entre microorganismes et solvants, les cellules sont gnralement places dans un liquide de force ionique leve, telle que leau physiologique (9 g/L NaCl). Dans ce travail, la MATS a t effectue en eau physiologique et dans le milieu tudi, leau de rivire artificielle (0,3 g/L NaCl).
Protocole exprimental Dans un tube hmolyse sont introduits 2,4 mL de la suspension microbienne analyser et 0,4 mL de solvant. Lchantillon est agit fortement par vortexage durant deux minutes, afin de former une mulsion entre la phase aqueuse et la phase organique. Lmulsion est ensuite laisse au repos pendant 15 minutes, afin que les deux phases dcantent. La mesure de la densit optique initiale de la suspension (DOi) et de la densit optique finale de la phase aqueuse (DOf) permet de calculer le pourcentage daffinit de la suspension pour le solvant :
Affinit (%) = (1 DO f ) X 100 DO i

(40)

La figure 22 propose un schma du protocole exprimental.

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques

agitation solvant Suspension microbienne mulsion

Dcantation

Figure 22 : schma du protocole exprimental de la MATS [199]

DOi

DOf

b) Mobilit lectrophortique et charge globale de surface des microorganismes

Principe de la mesure Les cellules microbiennes sont assimiles des particules collodales en suspension. Lorsque r des particules charges sont soumises laction dun champ lectrique E , elles se dplacent r une vitesse v . Le mouvement des particules charges est schmatis sur la figure 23.

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r v r v

r v r v

r E
a- Charge de surface positive

r E
b- Charge de surface ngative

Figure 23 : action dun champ lectrique sur des particules possdant une charge de surface

La mobilit lectrophortique des particules, note ME, est dfinie par la relation (41) :
ME = v E

(41)

Diffrents modles permettent de relier la mobilit lectrophortique au potentiel lectrocintique ou potentiel zta des particules. Dans ce travail, lquation de Smoluchowski (42) a t utilise.
= 4 . ME (42)

o est la viscosit dynamique du milieu et sa permittivit. La mesure de la mobilit lectrophortique permet de dterminer le potentiel zta des cellules microbiennes.
Protocole exprimental Les cellules microbiennes sont mises en suspension en eau de rivire artificielle, dont la faible conductivit ne masque pas la charge de surface des cellules. La concentration est ajuste 106 cellules/mL environ, puis la suspension est injecte dans une cellule dacquisition. Une tension de 50 V est applique entre deux lectrodes pour gnrer un champ lectrique dans le canal. Les particules sont claires par un faisceau laser et leur vitesse de dplacement est mesure laide dune chane dacquisition numrique (figure 24). La mobilit lectrophortique des particules est mesure diffrentes valeurs de pH de la suspension, afin de dterminer le point isolectrique du microorganisme, cest--dire la valeur

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques de pH annulant sa charge de surface. Le pH est ajust par des ajouts de KOH ou de HNO3 dans une gamme allant gnralement de 2 8. Lappareillage utilis consiste en un ztamtre laser (Zetaphoromtre II, CAD Instrumentation, Les Essarts-le-Roi, France) coupl un microscope (BX, Olympus, France).
Ordinateur

Camra Microscope Sortie du liquide

Laser Entre du liquide

a- Schma du montage exprimental

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b- Photographie du montage exprimental

Figure 24 : montage exprimental utilis pour les mesures de mobilit lectrophortique de cellules microbiennes

2.3.3.2 Caractrisation physico-chimique de la surface des supports en acier inoxydable a) Caractrisation de lnergie de surface des matriaux
Principe Les caractristiques nergtiques de surface S LW , S + , S et S AB des supports solides sont obtenues partir de mesures dangles de contact (ralises par la mthode de la goutte pose) et de la relation de Young-Van Oss : [201]
2 ( S LW L LW + S + L + S L + = L (1 + cos )

(43)

Pour rappel, le terme SAB li aux interactions acide/base au sens de Lewis peut sexprimer en fonction de S+ et S- selon lquation : AB = 2 + (44) Lnergie de surface du solide S est la somme du terme li aux interactions de Lifschitz-Van der Waals et du terme acido-basique : = LW + AB (45) Lquation (43) trois inconnues peut tre rsolue en effectuant des mesures dangles de contact avec trois liquides purs de proprits connues sur les supports plans en acier inoxydable. Dans cette tude, les trois liquides utiliss sont leau, le diiodomthane et le formamide, dont les caractristiques nergtiques sont indiques dans le tableau 6. Liquide Eau Diiodomthane Formamide Formule H2O CH2I2 CH3NO LW 21,8 39 50,8 25,5 39,6 0 + 25,5 2,3 0 AB 51 19,09 0 72,8 58,1 50,8

Tableau 6 : caractristiques nergtiques (en mJ.m-2) de liquides utiliss pour les mesures dangles de contact [221, 222]

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques Le systme 3 quations (mesures pour trois liquides diffrents) et 3 inconnues (SLW, S-, S+) permet de calculer les caractristiques nergtiques de surface des chantillons. Les mesures dangles de contact sont ralises par la mthode de la goutte pose.
Protocole exprimental Une goutte de liquide L est dpose sur une surface solide S crant ainsi un systme trois phases (solide, liquide, air). Langle form entre la surface du solide et la tangente la surface du liquide au point triple est appel et mesur laide dun goniomtre Krss G10 (figure 25).

air
S tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

a- Angle de contact

b- Goniomtre G10 (Krss, Palaiseau, France)

Figure 25 : reprsentation de langle de contact au point triple (liquide, solide, air) et goniomtre utilis dans cette tude

b) Potentiel lectrocintique des aciers inoxydables Le potentiel lectrocintique (ou potentiel dcoulement) de la surface plane des supports est estim par des mesures de potentiel zta.
Principe Dans une cellule de mesure sont disposes paralllement deux plaques planes du matriau caractriser. Lespace entre les plaques constitue un fin capillaire dans lequel une solution est mise en mouvement. La diffrence de potentiel E est mesure aux bornes de la cellule ainsi que la perte de charge P. La conductivit de la solution est mesure par un capteur situ sur le circuit dcoulement de llectrolyte. Le potentiel E est appel potentiel dcoulement ou potentiel lectrocintique [207]. Lorsquun lectrolyte circule entre deux plaques mtalliques portant une certaine charge, les particules se rpartissent dune certaine manire au voisinage des plaques : les contre-ions adsorbs la surface et leau structure par le champ de surface forment la couche de Stern, et, plus loigne, la zone non influence par la surface est appele couche diffuse. La circulation du liquide entrane lapparition dune diffrence de potentiel entre la couche de Stern fixe et la couche diffuse circulante, au niveau de leur interface appele plan de coupure hydrodynamique. Cette diffrence de potentiel est appele potentiel zta [205]. Le calcul montre que la perte de charge et le champ lectrique dans le capillaire sont lis. Lgalisation du courant de convection (d la circulation de la couche diffuse) et du courant de conduction (liquide conducteur) permet dtablir la relation de Helmholtz-Smoluchowski (46), dans le cas o le rgime dcoulement est laminaire.

67

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

E = (46) P 4
o E est la diffrence de potentiel et P la diffrence de pression aux bornes du capillaire, la constante de permittivit dilectrique du liquide, sa viscosit dynamique et sa conductivit lectrique. Le potentiel zta dpend de la conductivit, de la temprature et de la permittivit lectrique du milieu. Il est calcul grce lquation (47) :

o E est en mV, P en mbar et en S.cm-1. C est une constante qui dpend de la temprature T, suivant la loi empirique :

E 10000 13,55 C (47 ) P

C = 16,32 0,35197 T + 0,00351 T 2 (48)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007
Protocole exprimental Deux plaques dacier inoxydable dpaisseur 1 mm sont introduites dans la cellule de mesure. Le capillaire ainsi form a une paisseur de 150 m. La diffrence de pression et la diffrence de potentiel entre les deux extrmits de la cellule sont mesures pour des dbits dentre du liquide diffrents. Lappareillage utilis est un ztamtre ZetaCAD (CAD Instrumentation, Les Essarts-le-Roi, France). La courbe trace par le logiciel dacquisition/traitement ZetaCAD4 reporte E/P en fonction de P ; une rgression linaire effectue automatiquement calcule la valeur la pente. Les valeurs de la temprature et de la conductivit sont implmentes dans le calcul, qui donne alors la valeur du potentiel zta des chantillons. 2.3.4 Estimation de la biocontamination dune surface en conditions statiques

2.3.4.1 Protocole dadhsion Le principe des essais dadhsion statique est de mettre le support en contact avec une suspension microbienne de concentration connue. Aprs une dure dimmersion fixe (24 heures dans le cas de cette tude), les chantillons sont rincs afin dliminer les cellules simplement dposes . Les cellules adhrentes sont alors dnombres par pifluorescence pour dterminer la flore sessile totale. Les chantillons dacier inoxydable sont au pralable nettoys selon le protocole dtaill dans le tableau 7. La biocontamination des supports est ralise par sdimentation temprature ambiante. Les surfaces contaminer sont places laide de pinces striles au fond dune bote de Ptri strile puis sont recouvertes avec 15 mL dune suspension microbienne contenant environ 107 cellules/mL. Aprs 24 heures de contact, les cellules non adhrentes sont limines par 5 rinages-gouttages successifs laide deau distille strile (10 mL pour chaque rinage). Les gouttages sont effectus de faon ne jamais dshydrater totalement la surface utile des supports. Aprs le dernier gouttage, les chantillons sont immergs pendant 10 minutes dans

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques une solution dacridine orange 0,01%. Lorang dacridine est un colorant qui se fixe spcifiquement sur les acides nucliques (ADN et ARN). Les chantillons sont ensuite rincs avec de leau distille strile et enfin observs en pifluorescence au microscope optique. Opration Nettoyage avec un mouchoir doux imbib dun mlange alcool-actone v/v Immersion dans une solution de RBS 2% dans de leau chaude (500 mL + 10 mL de RBS, sous agitation) Rinage sous eau chaude Immersion dans de leau chaude (sous agitation) Immersion dans de leau distille non strile (sous agitation) Schage sous hotte Temps 10 s 10 min 2 min 5 min 5 min 10 min Nombre doprations 1X 1X 5X 5X 1X

Tableau 7 : protocole de nettoyage des supports dadhsion en acier inoxydable

2.3.4.2 Calcul du taux de recouvrement dune surface

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Dix photographies reprsentatives sont prises pour chacun des chantillons biocontamins. Ces photographies sont ensuite traites laide du logiciel ImageTool (UTHSCSA). Limage est dabord convertie en niveaux de gris, puis le contraste et la luminosit sont optimiss automatiquement laide de la fonction stretch . Un filtre est ensuite appliqu afin de slectionner les nuances de gris clair correspondant aux microorganismes. La valeur du seuil de coupure du filtre est fixe manuellement. Limage obtenue aprs filtrage est binarise en pixels blancs et noirs. La fonction Count black/white pixels permet alors dobtenir le pourcentage de recouvrement de la surface (pourcentage de pixels noirs). Un exemple de traitement dimage est donn sur la figure 26.

a- Photographie initiale

b- Aprs passage en niveaux de gris

69

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

c- Aprs optimisation du contraste et de la luminosit d- Image binaire obtenue aprs filtrage Figure 26 : exemple de traitement dimage permettant dvaluer le taux de recouvrement de la surface dun support en acier inoxydable par des microorganismes (acier 304L, isolat 3)

Les taux de recouvrement obtenus sont reprsents sous la forme de graphiques botes moustaches , qui permettent de visualiser la mdiane, la moyenne, le minimum, le maximum, le premier et le troisime quartiles de la srie de donnes.
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2.3.4.3 Analyse de variance (ANOVA) Lanalyse de la variance (ANalysis Of Variance) est une technique statistique qui permet de comparer les moyennes de plusieurs populations. Elle permet de dterminer si les diffrences de moyenne entre plusieurs populations sont statistiquement significatives. Soit p le nombre dchantillons (ou de conditions exprimentales) et n le nombre de mesures par chantillon. Toutes les mesures peuvent tre prsentes sous la forme dune matrice X = (xij)1 i n, 1 j p.

x
La moyenne gnrale de toutes les valeurs est note x : x =
i =1 j =1

ij

np

x
La moyenne des valeurs obtenues sur lchantillon j est note x . j : x . j = Lcart total eT dune valeur la moyenne gnrale x est gal :
e T = x ij x =
cart int ra chantillon
i =1

ij

( x ij x . j ) 1 4 24 3

cart int er chantillons

(x . j x) 1 4 24 3

En levant la deuxime galit au carr et en sommant sur i et j, aprs annulation des doubles produits, la relation obtenue peut scrire ainsi :

(x
i =1 j =1

ij

x) 2 =

(x
i =1 j =1

ij

x .j ) 2 +

(x
i =1 j =1

.j

x) 2

SCET = SCER + SCEF La somme des carrs des carts totaux (SCET) se dcompose exactement en la somme des carrs des carts intra (Somme des Carrs des Ecarts Rsiduels, SCER) ajoute la somme des carrs des carts inter (Somme des Carrs des Ecarts Factoriels, SCEF).

70

Chapitre 2 : Matriels et Techniques Pour passer aux carrs moyens (ou variances), il faut diviser les SCE par le degr de libert. Le carr moyen total (CMT), le carr moyen rsiduel (CMR) et le carr moyen factoriel (CMF) peuvent alors scrire :
CMT = SCE F SCE R SCE T ; CMF = ; CMR = p 1 p(n 1) pn 1

Le rapport entre le Carr Moyen Factoriel (inter-chantillons) et le Carr Moyen Rsiduel (intra-chantillon) est not F.
F= CMF CMR

La valeur de ce rapport F est compare celle dune table de Fisher- Snedecor, tableau double entre avec pour numrateur (p-1) et pour dnominateur p(n-1), ce qui permet de dterminer des diffrences statistiquement significatives entre les moyennes x . j des chantillons avec un certain niveau de confiance. Un tableau dANOVA indique les trois sommes des carrs des carts (SCET, SCER et SCEF), les degrs de libert, les carrs moyens (ou variances) inter- et intra-chantillons (CMF et CMR), leur rapport F et la probabilit p que la valeur de F soit dpasse. Ces diffrents paramtres peuvent tre calculs manuellement ou laide dun logiciel de statistique. Dans cette tude, lanalyse de variance a t effectue laide du logiciel Statgraphics.
2.3.5 Mesure de Ecorr en prsence dun consortium microbien

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Un racteur lectrochimique comportant plusieurs entres est strilis par autoclavage durant 20 minutes 121C. La suspension du consortium bactrien en bouillon nutritif est ensuite introduite dans le racteur plac sous agitation magntique. Les chantillons dacier inoxydable (de type lectrochimie en laboratoire et prpars suivant le protocole de nettoyage utilis lors des expriences dadhsion statique) sont fixs sur les entres du racteur. Llectrode de rfrence au calomel satur (ECS) est nettoye avec un mlange v/v deau distille et dthanol, puis laisse 5 minutes dans une solution de Mucocit. Elle est ensuite soit introduite directement dans le racteur, soit introduite dans une allonge strile contenant de leau distille sature en KCl et plongeant dans le milieu de culture. Ltanchit du racteur est assure par du coton card laissant passer loxygne mais empchant la contamination du milieu par des microorganismes de lair ambiant. La mesure du potentiel de corrosion libre est assure par un multiplexeur HP Agilent 34970A. La temprature de la pice est contrle et fixe 20C. La figure 27 prsente une photographie du montage exprimental.

Figure 27 : photographie du montage exprimental utilis pour mesurer le potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable dans une suspension microbienne

71

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Pour certaines manipulations, un bullage dair strile est mis en place dans le racteur. Il est assur par une pompe envoyant dans un tuyau (strilis lautoclave) de lair strilis par deux filtres 0,2 m successifs.

2.3.6 Techniques danalyse des couches doxydes

2.3.6.1 Spectroscopie de photolectrons (XPS) Cette technique a t utilise pour caractriser la couche doxydes des aciers inoxydables 304L et 254SMO dans le cadre du modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase . Le principe de lXPS est dtaill dans lannexe n7. a) Appareillage Le spectromtre qui a t utilis est de type VG Escalab 220 iXL (figure 28). La source X est la raie K de laluminium non monochromate. Son nergie incidente est de 1486,6 eV. La puissance employe est de 20 mA * 15 V = 300 W. La pression dans la chambre danalyse est denviron 10-10 mbar.

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Figure 28 : photographie du spectromtre XPS utilis dans ce travail (laboratoire LRSI, CEA Saclay)

b) Acquisition des spectres

Spectre gnral

Que ce soit sur un chantillon dacier 304L ou sur un chantillon dacier 254SMO, les deux pics principaux sont les pics du C1s et du O1s (figure 29). Les pics de Cl2p, Cr2p, Fe2p, Ni2p, N1s et Na1s sont aussi visibles dans les deux cas. Les chantillons de 254SMO, contenant 6 % en masse de molybdne, donnent en plus le pic du Mo3d.

72

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

a- Acier 304L

b- Acier 254SMO

Figure 29 : spectre gnral obtenu sur des chantillons dacier 304L et 254SMO tmoins (immergs pendant 24 heures dans leau de rivire artificielle)

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Le choix a t fait dacqurir de faon plus fine les pics obtenus sur le spectre gnral. Les pics tudis sont indiqus dans le tableau 8. Spectre Gamme dnergie (eV) Pas (eV) Gnral 0-1300 1 C1s 274294 0,1 Cr2p 570595 0,1 Fe2p 700740 0,1 Mo3d 223240 0,1 Ni2p 848888 0,1 O1s 522542 0,1 S2p 157171 0,1 N1s 393404 0,1 Cl2p 194204 0,1

Tableau 8 : spectres enregistrs lors dune acquisition

Les spectres individuels de chaque lment sont prsents ici en trois catgories distinctes, en fonction du type de traitement des donnes qui sera effectu par la suite.
Spectres de Cl2p, N1s, Ni2p et S2p

Lallure de ces spectres est donne sur la figure 30, dans le cas dun chantillon de 254SMO tmoin immerg pendant 24 heures dans leau de rivire artificielle.
9,0 8,8 8,6
12,2 12,6

12,4

kcoups/s

Cl2p
8,2 8,0 7,8 7,6 204 202 200 198 196 194

kcoups/s

8,4

12,0

N1s
11,8

11,6

11,4 404 402 400 398 396 394 392

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

Cl 2p

N 1s

73

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

85

7,90

7,85
80

7,80

koucps/s

kcoups/s

Ni 2p1/2
75

Ni 2p3/2

7,75

7,70

70

7,65

7,60
65 890 880 870 860 850 840

172

170

168

166

164

162

160

158

156

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

Ni 2p

S 2p

Figure 30 : spectres de Cl2p, N1s, Ni2p et S2p sur un chantillon tmoin de 254SMO

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Cl provient de la solution. Son unique pic Cl2p est situ environ 200 eV. N et Ni sont des lments de lalliage. Le pic de N1s est situ autour de 398 eV. Le spectre de Ni 2p est constitu de 2 pics, correspondant aux orbitales 2p1/2 et 2p3/2. Le pic le plus intense est Ni 2p3/2 autour de 853 eV, il sera utilis pour la quantification. (Remarque : sur le spectre du Ni2p3/2 de la figure 30, la ligne de base utilise est linaire, uniquement dans le but dillustrer les diffrents types de lignes de base, cf. c)) S peut apparatre dans lacier inoxydable sous forme dinclusions. Le spectre de S2p ne prsente aucun pic. Ce rsultat a t trouv sur tous les chantillons. La conclusion est quaucun chantillon ne contient de soufre en surface, ou du moins que la teneur en soufre est sous la limite de dtection de l'appareil. Le spectre de S2p ne sera donc plus voqu par la suite.
Spectres de C1s et O1s

Lallure de ces spectres est donne sur la figure 31, dans le cas du mme chantillon de 254SMO tmoin immerg 24 heures en eau de rivire artificielle.
20

35
18

HO+ contamination

O2-

30
16

kcoups/s

kcoups/s

25

14

O1s
20

12

C1s
15

10

8 295 290 285 280 275 270

10 545 540 535 530 525 520

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

C1s

O1s

Figure 31 : spectres de C1s et O1s sur un chantillon tmoin de 254SMO

Le carbone est un lment des deux alliages. Vu la concentration, il est cependant plus probable que le carbone dtect soit dorigine atmosphrique, cest--dire quil sagit certainement dune contamination par contact avec lair ambiant du laboratoire. En solution enzymatique, le carbone pourra aussi provenir dune adsorption de lenzyme sur la surface de lchantillon. Le pic C1s est situ environ 285,5 eV. 74

Chapitre 2 : Matriels et Techniques Loxygne fait partie des oxydes et des hydroxydes constituant la couche passive des aciers inoxydables. Il peut aussi tre prsent dans une couche de molcules organiques adsorbes sur la surface, ces molcules pouvant tre les molcules organiques ajoutes en solution ou des molcules provenant dune contamination par lenvironnement du laboratoire. Le pic de O1s est localis autour de 531 eV.
Spectres de Cr2p, Fe2p et Mo3d

Lallure de ces spectres est donne sur la figure 32, dans le cas du mme chantillon de 254SMO tmoin immerg 24 heures en eau de rivire artificielle.
28 50 26

Cr 2p3/2
24

Fe 2p1/2
40

Cr 2p1/2

kcoups/s

kcoups/s

22

Fe 2p3/2

20

18

30

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16 595 590 585 580 575 570 740 730 720 710 700

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison

Cr2p
10,5

Fe2p
Mo
10,0

kcoups/s

9,5

9,0

8,5 235 230 225 220 215

Energie de liaison (eV)

Mo
Figure 32 : spectres de Cr2p, Fe2p et Mo sur un chantillon tmoin de 254SMO

Le chrome et le fer font partie des lments dalliage du 304L et du 254SMO. Les deux spectres sont constitus chacun de 2 pics, correspondant aux orbitales 2p3/2 et 2p1/2. Le pic le plus intense est le pic 2p3/2, qui se situe vers 577 eV pour le chrome et vers 710 eV pour le fer. Le molybdne est dtect sur le 254SMO entre 226 et 238 eV. Le 304L ne contient pas de molybdne. c) Traitement des donnes Le traitement des spectres a t effectu laide du logiciel Avantage. Le but est soit de simplement calculer laire sous un pic afin de quantifier llment correspondant, soit de procder une recomposition du spectre afin de sparer les diffrentes composantes de llment (par exemple, sparer la composante mtallique des composantes oxydes).

75

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Calcul de laire dun pic

Pour calculer laire dun pic, il suffit de dfinir une ligne de base, puis de calculer la diffrence entre lintgrale de la courbe exprimentale et lintgrale de la ligne de base. Il existe trois mthodes pour dfinir une ligne de base. Une ligne de base linaire peut tre employe, toutefois elle est trs sensible la dfinition des bornes de lintervalle considr (figure 30, spectre de Ni2p3/2). La mthode de Shirley consiste dfinir une ligne de base en forme de S, dont lintensit est proportionnelle en tout point lordonne du pic. Cest la mthode qui a t choisie dans ce travail (figure 31, spectre de O1s). Il faut enfin voquer la mthode de Tougaard, plus complexe, qui prend en compte la perte dnergie cintique (par choc inlastique) des lectrons provenant des zones profondes de lpaisseur analyse. Une fois la ligne de base dfinie, le calcul de laire de la surface comprise entre la courbe du pic et la ligne de base est ralis par le logiciel de traitement. Cette aire, corrige par le facteur de sensibilit (de type Scofield dans ce travail) et par le facteur de transmission, est rapporte au total des aires des pics des diffrents lments prsents, ce qui permet de quantifier chaque lment et davoir une composition relative de lpaisseur analyse. Un facteur de sensibilit relatif llment tudi doit tre pris en compte. Il reprsente la probabilit dionisation et dpend de llment et de lorbitale considre. Il est dfini par rapport au carbone (facteur de sensibilit du carbone gal 1). Cette mthode est suffisante pour connatre la composition relative de la surface de lchantillon et a t utilise pour traiter les pics de Cl2p, N1s, Ni2p et S2p. Toutefois, elle ne permet pas de sparer les diffrentes composantes dun pic. Pour cela, il faut procder la recomposition des spectres.
Recomposition des spectres

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Afin de dterminer les diffrentes formes chimiques de chaque lment, il est ncessaire de recourir une recomposition mathmatique des pics. Le pic dun lment est gnralement la somme de plusieurs composantes proches en nergie : en effet, des diffrences dans ltat doxydation de latome ou dans son environnement chimique entranent lapparition de pics proches mais distincts. Le principe de recomposition spectrale consiste tracer tous les pics caractristiques de llment considr dont lnergie est tabule, de calculer leur somme, de tracer lenveloppe et dajuster les composantes jusqu avoir une enveloppe aussi proche que possible de la courbe exprimentale. Le rsidu est la diffrence entre la courbe exprimentale et lenveloppe de la recomposition. Lorsque le rsidu tend vers zro, la recomposition est considre comme correcte. Dans ce travail, les spectres du carbone, de loxygne, du fer, du chrome et du molybdne ont t recomposs pour certains chantillons. Les quantifications sont toutefois ralises partir du calcul des aires sous les pics, comme pour les autres lments. Carbone

La recomposition du spectre du C1s met en vidence 3 composantes correspondant 3 types de liaisons chimiques mettant en jeu le carbone (figure 33-a). La premire composante est caractristique des liaisons CH-CH de molcules organiques adsorbes la surface et est observable vers 285,3 eV. La deuxime composante correspond aux liaisons C-O et est visible autour de 287 eV. La troisime composante est trouve 288,9 eV et correspond aux liaisons de type O-C=O.

76

Chapitre 2 : Matriels et Techniques Ces trois composantes mettent en vidence une pollution provenant de lair ambiant du laboratoire. Cette pollution peut aussi dcouler de la prparation de surface des chantillons, en particulier du polissage. Une composante 288 eV due aux liaisons peptidiques H2N-C=O est attendue lorsque la solution contient une enzyme. De nouvelles liaisons C-O dues lenzyme peuvent contribuer au pic 287 eV. Pour la quantification, un simple calcul daire de pic a t effectu.
22

CH-CH contamination

45 40 35

O1s C-O et H2O adsorbe O1s O=C O1s oxydes

20

18

16

O-C=O enveloppe

kcoups/s

kcoups/s

C-O

30 25 20 15 10

14

12

enveloppe

10 290 285 280

545

540

535

530

525

520

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

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a- C1s

b- O1s

Figure 33 : recompositions des spectres du niveau 1s du carbone (chantillon dacier 254SMO immerg dans une solution de H2O2 10 mmol/L) et du niveau 1s de loxygne (chantillon dacier 254SMO immerg dans la solution ractifs enzymatiques , pic des OH adsorbs proche de zro, faible pic des oxydes)

Oxygne :

La recomposition du spectre de O1s met en vidence 3 composantes (figure 33-b). La premire composante est caractristique des liaisons de type oxydes et se situe vers 530,2 eV. La deuxime correspond aux liaisons C=O et est visible 531,6 eV. La troisime composante est localise 533,5 eV ; les liaisons C-O (visibles 287 eV sur le spectre du C1s) et les molcules dH2O adsorbes sur la surface en sont responsables. Une composante 531,5 eV due aux liaisons peptidiques H2N-C=O est attendue lorsque la solution contient une enzyme. Pour la quantification, un simple calcul daire de pic a t effectu. Molybdne
Mo3d
8

Mo3d3/2 oxyde IV Mo3d5/2 oxyde VI Mo3d3/2 oxyde V Mo3d3/2 oxyde VI

Mo3d3/2 mtal

Mo3d5/2 oxyde V 3d5/2 mtal

kcoups/s

Mo3d5/2 oxyde IV

enveloppe

240

235

230

225

Energie de liaison (eV)

Figure 34 : recomposition du spectre du niveau 3d du molybdne (chantillon dacier 254SMO immerg dans la solution ractifs enzymatiques )

77

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

La recomposition du spectre de Mo3d met en vidence 8 composantes (figure 34). La premire composante (227,9 eV) correspond Mo3d5/2 du Mo mtal, la deuxime (229,7 eV) Mo3d5/2 de loxyde de Mo(IV) (trs peu visible en gnral), la troisime (230,8 eV) Mo3d5/2 de loxyde de Mo(V), la quatrime (231,4 eV) Mo3d3/2 du Mo mtal, la cinquime (232,4 eV) Mo3d3/2 de loxyde de Mo(IV), la sixime (232,7 eV) Mo3d5/2 de loxyde de Mo(VI), la septime (234,1 eV) Mo3d3/2 de loxyde de Mo(V), et la huitime (235,8 eV) Mo3d3/2 de loxyde de Mo(VI). Cette recomposition est assez complexe. Pour la quantification, un simple calcul daire de pic a t effectu. Chrome

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Le traitement du spectre du Cr2p3/2 nest pas proprement parler une recomposition (figure 35-a). Une recomposition parfaite, identifiant les diffrents types doxydes et dhydroxydes, na pas t ncessaire. La sparation a t faite simplement entre le pic du mtal et le pic global des oxy-hydroxydes de chrome. Un premier pic correspondant parfaitement au pic du mtal a t trac, et il a t conserv par la suite lors de tous les traitements des spectres du Cr2p3/2, toutes ses proprits (largeur mi-hauteur, rapport lorentzien/gaussien), et en particulier ses proprits dasymtrie, tant fixes toujours la mme valeur. Laire du pic du mtal donne la composition relative en Cr mtal et laire de lautre pic la composition relative en oxy-hydroxydes de Cr. Par la suite, le terme oxydes de Cr sera gnrique et dsignera lensemble des oxydes et des hydroxydes de Cr, toutes valences confondues. Les trois composantes Cr2p3/2 oxydes de la figure 35-a ne correspondent pas une nature prcise doxyde de chrome mais servent juste dterminer laire globale du pic oxyde (complexit diffrencier les diffrentes espces).
28
46 44

Fe2p1/2

26

Fe2p3/2 Fe2p3/2 oxydes Fe2p3/2 mtal

Cr2p3/2
24

42

Cr2p3/2 oxydes

40

kcoups/s

Cr2p1/2

kcoups/s

38 36 34 32 30 28

22

Cr2p3/2 mtal

20

enveloppe
18

enveloppe

16 595 590 585 580 575 570

740

730

720

710

700

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Cr2p

b- Fe2p

Figure 35 : recomposition des spectres du niveau 2p du chrome et du niveau 2p du fer (chantillon dacier 254SMO immerg en eau de rivire artificielle)

Fer

Comme pour le Cr, le traitement du spectre du Fe2p3/2 nest pas une vraie recomposition (figure 35-b). Le pic du mtal dune part et lensemble des pics correspondant aux oxydes et hydroxydes de fer dautre part sont spars. Les paramtres du pic du mtal sont dfinis sur un chantillon tmoin, et sont par la suite toujours fixs aux mmes valeurs, en particuliers les paramtres dasymtrie. Laire des deux surfaces ainsi dfinies donne linformation de la composition relative en Fe mtal dune part, en oxy-hydroxydes de Fe toutes valences confondues dautre part. Les oxy-hydroxydes de fer seront dsigns par la suite sous le terme gnrique oxydes de Fe . 78

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Quantification

Pour chaque chantillon analys, deux quantifications ont t ralises : Une quantification relative portant sur tous les lments prsents Une quantification relative ne prenant en compte que le chrome et le fer, afin dtudier plus prcisment lvolution de la teneur en ces deux lments. 2.3.6.2 Photolectrochimie La photolectrochimie est une technique de caractrisation des matriaux proprits semiconductrices trs utilise pour lanalyse de couches doxydes (en particulier pour les films passifs anodiques et thermiques). Elle permet daccder au type de semi-conduction (n ou p) de loxyde et donne la largeur de bande interdite (nergie de gap Eg), qui est une vritable signature de loxyde . Une brve prsentation de la photolectrochimie est disponible en annexe n8. Cette technique a t utilise pour caractriser lvolution de la couche doxydes des aciers inoxydables 304L et 254SMO dans des solutions enzymatiques (glucose-oxydase + glucose). Les mesures de micro- et macro-photolectrochimie ont t ralises au laboratoire LTPCM de lENSEEG Grenoble. a) Macro-photolectrochimie (PEC) Une lampe arc Xnon (1000W, Mller LAX 1000, 220 nm < < 1100 nm) est utilise pour clairer toute la surface de lchantillon. La rponse en photocourant de la couche passive forme peut tre enregistre soit en fonction du potentiel appliqu aux chantillons, soit en fonction de la longueur donde utilise pour illuminer lchantillon. Cette technique de caractrisation non destructive permet daccder diffrents types dinformation comme le type de semi-conduction (n ou p) de la couche passive, ou encore les diffrentes contributions en photocourant apportes par les oxydes prsents dans la couche passive. Le montage utilis pour la PEC est un montage classique utilisant le plus souvent la technique de dtection synchrone ou lock-in. Un schma du dispositif exprimental est visible sur la figure 36-a. La technique consiste moduler frquence rglable lintensit lumineuse arrivant sur llectrode de travail laide dun hacheur mcanique (197, EGG Instruments, domaine de frquences 15Hz-3kHz). Cette modulation lumineuse provoque des variations du photocourant la mme frquence. La mesure de lamplitude de ces variations et de leur dphasage par rapport au signal de rfrence dlivr par le hacheur est ralise par une dtection synchrone (EGG PAR modle 5208), dont le signal dentre est reli a la sortie courant non filtre du potentiostat (EGG PAR modle 273A/92). Un monochromateur rseau (240 nm ou 500 nm, 1200 rainures/mm, EGG PAR modle 1235) permet dtudier la dpendance du photocourant en fonction de lnergie lumineuse dans le domaine spectral 220-700 nm avec une rsolution spectrale, compte tenu des fentes dentre et de sortie utilises (0,6 mm), infrieure 2 nm. Les diffrentes optiques utilises (lentilles, optiques de lampes, fond de la cellule lectrochimique) sont en quartz et permettent ainsi de travailler dans le proche ultraviolet. Les sources lumineuses, monochromateur, optiques diverses, cellule photolectrochimique et plus particulirement llectrode de travail, sont prcisment positionnes sur le banc optique 79

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Chapitre 2 : Matriels et Techniques de faon contrler de manire reproductible le flux lumineux, ainsi que la surface claire au niveau de lchantillon. Le contrle de tous les appareils, mis a part la source lumineuse, et lacquisition des donnes sont ralises par micro-ordinateur laide de liaisons GPIB et dun logiciel spcifique dvelopp au laboratoire LTPCM. b) Micro-photolectrochimie (PEC) Le but de la PEC est dtudier les phnomnes photolectrochimiques se droulant la surface dun chantillon semi-conducteur lchelle microscopique. Pour cela, un laser focalis balaie la surface de lchantillon, et la rponse locale du semi-conducteur lexcitation lumineuse est enregistre pour chaque point. Une image de la surface en photocourant peut alors tre ralise. Cette technique de caractrisation non destructive permet daccder diffrents types dinformation comme la localisation des diffrentes phases semi-conductrices prsentes au sein de la couche doxydes par exemple. Lensemble du montage utilis pour raliser les expriences de PEC est prsent sur la figure 36. Lchantillon constitue llectrode de travail dune cellule lectrochimique classique trois lectrodes. Il est polaris par rapport une rfrence dans llectrolyte (ECS) laide dun potentiostat, afin dimposer le sens de circulation du courant. Cet chantillon est illumin laide dun faisceau laser focalis travers un objectif de microscope. Il peut tre dplac par rapport au faisceau laser laide dune platine micromtrique. Le photocourant gnr sur la zone illumine de lchantillon est enregistr en chaque point. Une image en photocourant de la couche doxydes balaye est alors obtenue. Une photographie du dispositif exprimental utilis dans cette tude est visible sur la figure 36-b.

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a- Reprsentation schmatique du banc optique de macrophotolectrochimie

b- Montage de PEC

Figure 36 : montages exprimentaux de macro et microphotolectrochimie (ENSEEG, Grenoble) [223]

2.3.6.3 Technique de Mott-Schottky a) Principe Les orbitales molculaires des lectrons dans un solide cristallin sont tellement proches en nergie quelles forment des bandes continues. Les orbitales remplies sont dites liantes et constituent la bande de valence, et les orbitales vides sont dites antiliantes et constituent la bande de conduction. Ces deux bandes sont spares par une rgion interdite dune largeur nergtique Eg (nergie de gap) de lordre de quelques eV. La valeur de Eg permet de distinguer trois types de matriaux, les conducteurs lectriques (mtal par exemple), les isolants et les semi-conducteurs. Comme il a t prcis dans le chapitre 1 (1.3.4), les films 80

Chapitre 2 : Matriels et Techniques passifs dacier inoxydable sont considrs lheure actuelle comme des semi-conducteurs. La thorie des semi-conducteurs est dtaille dans lannexe n3. Les diagrammes de Mott-Schottky permettent de connatre les proprits lectroniques du film passif par des mesures de capacit. Dans le modle de la double couche lectrique de Stern et Geary, la capacit totale mesure peut scrire selon la relation (49) : C 1 = C ox 1 + C H 1 + C GC 1 (49) o Cox est la capacit de la couche doxydes (film passif), CH la capacit de la couche compacte de Helmholtz, et CGC la capacit de la couche diffuse de Gouy-Chapman. Ces deux derniers termes peuvent tre regroups dans Cdl, capacit de la double couche lectrique :
C 1 = C ox 1 + C dl 1 avec C dl 1 = C H 1 + C GC 1

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Lorsquune des deux capacits Cox ou Cdl est ngligeable devant lautre, la capacit quivalente aux deux capacits relies en srie est gale la plus faible des deux capacits. La capacit Cdl de la double couche est gnralement trs suprieure la capacit de la couche doxydes, et la capacit mesure est alors gale Cox : (50) Le film passif tant un semi-conducteur, la capacit de la couche doxydes est gale la capacit de la couche de charges despace CSC (semi-conducteur). La capacit CSC peut tre calcule laide de lquation de Mott-Schottky [224] :
C dl >> C ox C = C ox C SC 2 = 2 0 e N q S
2

( U fb E +

kB T ) e

(51)

o Nq est la densit des porteurs de charge, la constante dilectrique du film passif, 0 la permittivit du vide (environ 8,8542.10-12 F.m-1), e la charge lmentaire (-1,6.10-19 C pour les lectrons, 1,6.10-19 C pour les trous), S la surface de llectrode en contact avec llectrolyte (surface utile), Ufb le potentiel de bandes plates (cf. annexe n3), E le potentiel appliqu llectrode et kB la constante de Boltzmann (environ 1,3806.10-23 J.K-1). Ainsi, une courbe exprimentale C-2(E) doit comporter des portions linaires (cf. figure 16, chapitre 1). Sur chaque portion linaire : le signe de la pente permet de connatre le type de semi-conductivit : type n si la pente est positive, type p si la pente est ngative ; la valeur de la pente permet de dterminer la densit de porteurs de charge Nq ; labscisse du point dintersection entre la courbe C-2(E) et laxe des abscisses est peu prs gale au potentiel de bandes plates Ufb (en ngligeant le terme dnergie thermique kBT). Lpaisseur de la couche de charges despace W peut tre calcule laide de lquation (52) :
W= 0 C(max)

(52)

o C(max) est gal la valeur de capacit au maximum de la courbe C-2(E). b) Protocole exprimental Le balayage en potentiel se fait depuis les potentiels anodiques (gnralement +300 mV/ECS pour lacier 304L, +700 mV/ECS pour lacier 316L, +800 mV/ECS pour lacier 254SMO) 81

Chapitre 2 : Matriels et Techniques dans la direction des potentiels cathodiques (-1,2 V/ECS gnralement). Le pas en potentiel dpend de lexprience. Les frquences dacquisition choisies dans la littrature sont trs varies et comprises entre 15,8 Hz [175] et 6,31 kHz [73]. La capacit mesure varie avec la frquence dacquisition. Certains auteurs montrent que les proprits lectroniques du film passif (valeurs de C, de W, de Nq, de Ufb) ne dpendent pas de la frquence entre 600 Hz et 6 kHz [73]. Dautres indiquent des variations de la capacit avec la frquence non ngligeables [175] Le choix de la frquence est primordial dans la technique de Mott-Schottky ; cest lune de ses principales limitations. La frquence dacquisition choisie dans ce travail est 1580 Hz, qui est la valeur la plus communment utilise. Lautre limitation de la technique de Mott-Schottky est li au comportement capacitif des films passifs. En effet, les diagrammes dimpdance montrent de faon gnrale que la partie imaginaire de limpdance dun film passif nest pas celle dune capacit idale. La capacit varie avec la frquence. Un comportement non-idal de type CPE (Constant Phase Element) est trouv dans la plupart des cas, mais dautres modles peuvent aussi rendre compte de la variation de la capacit avec la frquence. Par exemple, le modle de Young, qui dcrit limpdance du film doxydes comme un assemblage en srie infini de circuits RC parallles suivant la normale la surface, introduit une variation verticale de la conductivit lectronique au sein du film (compatible avec la distribution de plusieurs oxydes dans lpaisseur de la couche) [174, 175, 225]. Dans tous les cas, le comportement du film doxydes nest pas celui dune capacit idale. Il parait donc risqu de tirer directement des valeurs de capacit avec lquation de Mott-Schottky, qui se fonde sur une vraie capacit indpendante de la frquence. Le comportement capacitif de la couche doxydes doit imprativement tre tudi laide de la spectroscopie dimpdance lectrochimique (EIS) sur une large plage de frquences. La mthode de Mott-Schottky est toutefois intressante, car elle permet dvaluer rapidement et assez facilement des variations relatives des proprits lectroniques du film doxydes dans diffrents environnements. Dans la littrature, la valeur de la constante dilectrique du film passif dun acier inoxydable varie entre 12 [153, 226, 227] et 15,6 [164, 228]. varie de toute vidence avec la stoechiomtrie des diffrents oxydes de la couche passive. Dans ce travail, la constante dilectrique a t fixe 12.

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2.3.7 Techniques lectrochimiques en laboratoire

Les techniques lectrochimiques utilises en laboratoire sont la mesure du potentiel de corrosion libre Ecorr, la spectroscopie dimpdance lectrochimique, la mesure dimpdance locale, les courbes de polarisation anodique et cathodique, la chronoampromtrie potentiostatique et la chronopotentiomtrie galvanostatique. Les mesures lectrochimiques en laboratoire ont t ralises dans des cellules lectrochimiques classiques trois lectrodes. Les potentiostats utiliss sont de la marque Radiometer (PGZ 100, 301 et 402) et de la marque Gamry Instruments. La contre-lectrode est une grille de titane platin et la rfrence est toujours une lectrode au calomel satur (note Hg2Cl2 (s)/Hg (l) ou ECS), dont le potentiel par rapport lENH est denviron +240 mV. Les expriences sont ralises temprature ambiante.

82

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

2.3.7.1

Mesure du potentiel de corrosion libre Ecorr

La dfinition du potentiel de corrosion libre Ecorr est donne dans lannexe n1. La valeur de Ecorr est fonction la fois du courant anodique et du courant cathodique. Une volution de Ecorr ne permet pas de dire si la modification provient de la raction anodique ou de la raction cathodique. Cest toutefois une valeur facile mesurer et qui apporte des informations sur lvolution globale des deux ractions. Le potentiel dun mtal est toujours mesur par rapport une rfrence. La rfrence internationale est llectrode normale hydrogne (ENH), dont le potentiel est pris par dfinition gal zro. Les lectrodes couramment utilises en laboratoire sont llectrode au calomel satur (ECS), dont le potentiel est gal 240 mV/ENH environ, et llectrode au sulfate mercureux (ESM), dont le potentiel est gal +650 mV/ENH environ. Dans ce travail, toutes les mesures de Ecorr effectues au laboratoire ont t faites laide dlectrodes au calomel satur. Tous les potentiels sont indiqus par rapport lECS. Les suivis du potentiel de corrosion libre durent 24 heures (avant lajout des enzymes) ou 48 heures (aprs lajout des enzymes) - ce qui est ncessaire pour atteindre des valeurs de potentiel stationnaires avec une frquence dacquisition dune minute. 2.3.7.2 Spectroscopie dimpdance lectrochimique a) Principe La spectroscopie dimpdance lectrochimique (EIS en anglais) est employe pour mieux apprhender de nombreux problmes : revtements protecteurs contre la corrosion, modles de passivation... Elle permet de connatre le nombre de processus diffrents qui ont lieu linterface lectrolyte/matriau et de les tudier sparment. Le principe de lEIS potentiostatique est dimposer llectrode un potentiel constant E0 modul par une oscillation priodique E(t) (gnralement sinusodale), et denregistrer la rponse en courant du systme I(t). Le principe de lEIS galvanostatique est dimposer llectrode une densit de courant constante I0 module par une oscillation priodique I(t) (gnralement sinusodale), et denregistrer la rponse en potentiel E(t). La spectroscopie dimpdance est pratique dans ce travail en mode potentiostatique et en utilisant une modulation en potentiel sinusodale de pulsation . Lamplitude de E(t) doit tre faible afin de rester dans un domaine pseudo-linaire. En rgime linaire ou pseudo-linaire, la rponse la tension sinusodale sera une sinusode de mme frquence, mais prsentant un dphasage . Les signaux E(t) et I(t) peuvent tre crits comme la partie relle de nombres complexes :
E ( t ) = E 0 cos (t ) = Re(E 0 exp ( jt )) I ( t ) = I 0 cos (t ) = Re(I0 exp ( jt ))

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Limpdance lectrochimique Z est dfinie comme la fonction de transfert du signal, cest-dire le rapport entre la transforme de Fourier de lexcitation en potentiel E() et la transforme de Fourier de la rponse en courant I(). Elle est dfinie dans le domaine frquentiel.
Z () = E () I()

Limpdance est un nombre complexe, caractris par son module |Z |et sa phase .

83

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Z= E 0 I0

arg ( Z) =

Exprimentalement, limpdance lectrochimique est mesure sur une large plage de frquences, typiquement depuis 100 kHz jusqu 1 mHz. Il existe plusieurs types de graphiques utiliss classiquement pour reprsenter les rsultats : Diagramme de Nyquist : courbe paramtre Z() dans le plan complexe ; Diagramme de Bode : trac du module |Z| et de la phase en fonction du logarithme de la frquence ; Tracs de Re(Z) et de Im(Z) en fonction du log de la frquence. Les mesures dEIS peuvent entre autre permettre de dterminer le type de contrle cintique de la raction lectrochimique (transfert de charge ou transport de matire), de dterminer les diffrentes constantes de temps de plusieurs processus simultans b) Protocole exprimental Dans ce travail, la spectroscopie dimpdance lectrochimique est ralise au potentiel de corrosion libre Ecorr, gnralement dans la plage de frquences allant de 65 kHz 4 mHz, avec une frquence dacquisition de 5 points par dcade. Ceci permet dviter dventuels artefacts lis la frquence du secteur 50 Hz. Lamplitude crte du signal sinusodal est de 10 mV. Les mesures dimpdance sont effectues avant, puis 24 heures aprs, puis 48 heures aprs lajout des composs biochimiques ou chimiques dans la solution. Les rsultats dimpdance sont reprsents sous la forme de diagrammes de Nyquist, de diagrammes de Bode et sous la forme de graphes log|Im(Z)|=f(log frquence). Ce type de reprsentation permet de mettre en vidence graphiquement le comportement capacitif du matriau [229]. 2.3.7.3 Mesures dimpdance locale a) Principe La technique de spectroscopie dimpdance lectrochimique locale (LEIS) permet de caractriser linterface lectrolyte-matriau lchelle microscopique. Le principe de la mesure est schmatis sur la figure 37. Une bilectrode (en argent ou en platine par exemple) est approche de la surface du matriau. Les extrmits des deux fils mtalliques sont alignes sur la normale la surface. Le potentiel local Elocal est valu par la mesure de la diffrence de potentiel entre le fil mtallique le plus proche de la surface et une rfrence dans llectrolyte. Par ailleurs, la mesure de la diffrence de potentiel E entre les deux fils mtalliques permet de calculer le courant local ilocal laide de la loi dOhm :
i local = E d

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(53)

o est la conductivit de llectrolyte et d la distance entre les deux fils de la bilectrode. Le potentiel interfacial est dfini comme la diffrence entre Elocal et le potentiel de llectrode Emtal. Une impdance dite interfaciale-locale peut tre dfinie de la manire suivante [230, 231] :
Zint erfaciale locale = E local E mtal i local

(54)

84

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

Figure 37 : reprsentation schmatique dune mesure dimpdance lectrochimique locale (daprs [231])

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b) Protocole exprimental Les mesures dimpdance lectrochimique locale ont t effectues au laboratoire LISE de lUniversit Pierre et Marie Curie (Paris 6). La bilectrode utilise dans cette tude est constitue de deux fils de platine de diamtre 40 m spars dune distance denviron 500 m. Le dispositif exprimental est schmatis sur la figure 38.

Figure 38 : schma du dispositif exprimental utilis pour les mesures dimpdance locale

2.3.7.4 Courbes de polarisation Pour les courbes de polarisation cathodique, le balayage seffectue depuis Ecorr jusqu -2 V/ECS, avec une vitesse de 5 mV/s. La vitesse de balayage est un paramtre primordial dune courbe intensit-potentiel. La vitesse choisie ici est leve et les points obtenus ne reprsentent pas un tat stationnaire. Toutefois, cette vitesse de balayage a t employe dans de nombreux travaux prcdents [17, 73] et permet de comparer les rsultats avec la littrature. Pour les courbes de polarisation anodique, le balayage seffectue depuis Ecorr jusqu une valeur dpendant de la nuance (gnralement, +800 mV/ECS pour le 304L, +1400 mV/ECS pour le 316L et +1700 mV/ECS pour le 254SMO), avec une vitesse de balayage de 0,15 mV/s (9 mV/min). Cette vitesse lente permet de comparer les courbes de polarisation anodique de cette tude avec celles de la littrature [81]. 2.3.7.5 Electrode disque tournant Des courbes de polarisation cathodique et des chronoampromtries potentiostatiques ont t effectues avec une lectrode disque tournant. La surface utile de llectrode de travail en contact avec llectrolyte est un disque de diamtre. 85

Chapitre 2 : Matriels et Techniques Llectrode de travail est fixe sur un rotateur reli un contrleur de vitesse. La vitesse de rotation de llectrode est rglable, ce qui permet de contrler la diffusion la surface de lchantillon des espces dissoutes dans llectrolyte. Cette mthode hydrodynamique permet datteindre rapidement un tat stationnaire. Dans le cas de loxygne dissous, la rsolution des quations de lhydrodynamique permet dobtenir lexpression du courant limite de diffusion ilim, appele quation de Levich [232] :
i lim = i Levich = 0,62. 2 .S.nF.[O 2 ].D(O 2 ) 2 / 3 . 1 / 6 .N r 1 / 2 60

(55)

o S est la surface utile de llectrode, n le nombre dlectrons de la raction dlectrode, F la constante de Faraday (96485 C), D(O2) le coefficient de diffusion de loxygne dissous dans llectrolyte, la viscosit cinmatique et Nr la vitesse de rotation en tr/min (Round Per Minute RPM, en anglais). Lorsque la raction est contrle par le transport de matire, le courant limite de diffusion de loxygne dissous varie linairement avec la racin carre de la vitesse de rotation. 2.3.7.6 Chronoampromtrie
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Les mesures de chronoampromtrie effectues sont complmentaires des courbes de polarisation cathodique. La vitesse de balayage de 5 mV/s utilise pour les courbes intensitpotentiel du ct cathodique est en effet trop leve et donne des valeurs de courant nonstationnaires. Elle permet en revanche de visualiser facilement les diffrentes rductions qui ont lieu. La chronoampromtrie permet au contraire de mesurer des valeurs de courant stationnaires. Cette technique a t particulirement employe pour caractriser les deux rductions ( -450 mV/ECS et -1100 mV/ECS) trouves dans la solution ractifs enzymatiques . 2.3.7.7 Chronopotentiomtrie galvanostatique Lemploi de cette technique est bas sur les travaux de Frangini et al. [233-235] Les tests de chronopotentiomtrie galvanostatique sont raliss 10 A.cm-2. Ils permettent de dterminer le potentiel de dstabilisation du film passif, valeur maximale de potentiel atteinte juste avant lapparition de la corrosion localise par piqres [81]. Cette technique est utilise en complment des courbes de polarisation anodique. Son atout majeur est sa courte dure, qui diminue fortement le risque de dveloppement de la corrosion caverneuse dans les ventuelles cavits se situant entre la rsine et lchantillon.
2.3.8 Analyses physico-chimiques de leau de rivire artificielle

2.3.8.1 Dosage de H2O2 La technique employe pour le dosage du peroxyde dhydrogne en solution repose sur lemploi de tubes Merck (Spectroquant 14731). Dans une solution contenant de lacide sulfurique, H2O2 forme avec un ester de lacide titanique des acides peroxotitaniques (de couleur jaune), dont la concentration est dose par photomtrie. 10 mL de la solution titrer sont introduits dans un tube contenant le ractif. Le tube est referm, agit vigoureusement et laiss au repos pendant 3 minutes, puis labsorbance est mesure une longueur donde de 405 nm. Grce une droite dtalonnage effectue sur des 86

Chapitre 2 : Matriels et Techniques solutions de concentration en H2O2 connues, la concentration en H2O2 peut tre calcule partir de labsorbance 405 nm laide de la formule de Beer-Lambert :
[H 2 O 2 ] (mg / L) = A (405 nm) 0,018

(56)

Les tubes Merck permettent de doser des concentrations en peroxyde dhydrogne comprises entre 2 et 20 mg/L. Lorsque la concentration dpasse 20 mg/L, une dilution doit tre effectue au pralable. 2.3.8.2 Mesure du pH Les mesures de pH sont faites laide dun pHmtre Radiometer Analytical PHM 210 talonn avec les solutions tampon IUPAC. 2.3.8.3 Mesure de la concentration en oxygne dissous
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La concentration en oxygne dissous est mesure avec une sonde de Clark. Cette sonde plongeant dans la solution titrer comporte une cathode en platine et une anode en argent baignant dans un lectrolyte. Llectrolyte est spar de la solution titrer par une membrane permable loxygne dissous mais impermable aux molcules deau et aux ions prsents dans le milieu. La concentration en oxygne dissous est donc la mme dans llectrolyte et dans le milieu titrer. Une tension de polarisation denviron 0,7 V est applique entre les deux lectrodes. Loxygne dissous est rduit la cathode, et le courant de rduction qui est mesur est proportionnel la concentration en oxygne dissous. Aprs un calibrage dans lair humide satur ou dans de leau distille dsoxygne, la sonde de Clark indique directement la valeur de la concentration en oxygne dissous. La sonde de Clark utilise dans ce travail est un oxymtre WTW Oxi 340.

87

Chapitre 2 : Matriels et Techniques

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Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

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3 Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

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Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

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Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

3.1 Prparation de surface des chantillons

Le but de cette tude prliminaire est de trouver, pour les essais en laboratoire, une prparation de surface permettant davoir un tat de surface stable et reproductible dans la solution deau de rivire artificielle. Cinq traitements de surface diffrents ont t tests sur les chantillons dacier inoxydable, afin dtudier linfluence du traitement de surface sur llectrochimie des chantillons et de trouver un traitement de surface appropri permettant dobtenir une bonne reproductibilit des rsultats. Les cinq traitements de surface tudis sont les suivants : ultrasons alcool : lchantillon est poli graduellement laide de disques abrasifs en carbure de silicium SiC (papier meri) de finesse de grains croissante jusquau grade 1200, puis la finition est effectue avec un feutre imprgn de poudre de diamant jusqu atteindre une rugosit dite poli-miroir de 1 m. Lchantillon est nettoy et dgraiss par passage aux ultrasons dans un bain dthanol entre chaque grade de polissage. Aprs le dernier passage aux ultrasons, lchantillon est sch laide dun mouchoir doux et immerg rapidement (en moins dune minute) dans llectrolyte.
ultrasons eau distille : cette prparation de surface est la mme que la prcdente, en remplaant lthanol par de leau distille. dcap HF/HNO3 : lchantillon subit dabord le traitement ultrasons alcool , puis il est immerg 20 minutes dans un bain de dcapage compos de 20% dacide nitrique 65% et de 2dacide fluorhydrique 40%. Lchantillon est alors rinc lthanol et sch laide dun mouchoir doux, puis immerg rapidement (en moins dune minute) dans llectrolyte de travail. Le dcapage nitro-fluorhydrique est un procd industriel rpandu qui assure la dissolution des impurets mtalliques de surface et attaque la couche mtallique dchrome, ainsi que la couche doxy-hydroxydes surfacique. Les deux acides utiliss jouent des rles diffrents. Le fluor provenant de lacide fluorhydrique complexe le fer prsent dans la couche doxy-hydroxydes, ce qui provoque un enrichissement en chrome au sein du film passif. Cet enrichissement en chrome entrane une amlioration de la rsistance la corrosion par piqres de lalliage [236]. Lacide nitrique dissout les inclusions, en particulier les inclusions non-mtalliques type MnS [237]. HNO3 provoque aussi un enrichissement en chrome dans le film passif [238]. Leffet global du mlange HF/HNO3 est un dcapage de lchantillon et un enrichissement en chrome du film passif en fin dimmersion dans le bain dacide. passiv 5 jours lair libre : lchantillon subit dabord le traitement de surface ultrasons alcool , puis il est laiss lair libre du laboratoire pendant 5 jours. Lchantillon est ensuite immerg dans la solution. Le film passif est form par oxydation au contact du dioxygne de lair. dcap puis passiv 5j : cet chantillon subit dabord le traitement dcap HF/HNO3 , puis il est laiss lair libre du laboratoire pendant 5 jours. Lchantillon

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Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface est alors immerg dans llectrolyte. Ce traitement de surface est une combinaison des protocoles dcap HF/HNO3 et passiv 5 jours lair libre . Trois types de mesures lectrochimiques sont mis en oeuvre pour valuer leffet de ltat de surface sur llectrochimie des chantillons dans leau de rivire artificielle : mesure du potentiel de corrosion libre Ecorr, spectroscopie dimpdance lectrochimique et mesure des proprits semi-conductrices par la technique de Mott-Schottky. De plus, lnergie de surface des aciers est mesure pour les diffrents traitements de surface.

3.2 Influence de la prparation de surface sur lvolution de Ecorr dans leau de rivire artificielle
Afin de voir leffet du traitement de surface des aciers inoxydables sur lvolution de leur potentiel de corrosion libre, le potentiel de corrosion libre des chantillons daciers inoxydables ayant subi les cinq traitements de surface est suivi au cours du temps.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 3.2.1 Acier 304L

Les rsultats obtenus sur les chantillons dacier 304L sont visibles sur la figure 39. Les chantillons simplement polis et dgraisss aux ultrasons ont un potentiel de corrosion libre initial compris entre -300 et -200 mV/ECS. Ecorr augmente au cours du temps pour atteindre une valeur stationnaire comprise entre -100 et +50 mV/ECS aprs 24 heures dimmersion. Cette augmentation met en vidence la formation et lvolution de la couche doxydes formant le film passif la surface des chantillons. Le ralentissement de lvolution du film passif induit une stabilisation de Ecorr aprs 24 heures dimmersion. La passivation des chantillons se fait ici principalement au contact de llectrolyte. Lchantillon qui a subi le dcapage nitro-fluorhydrique a un potentiel de corrosion libre initial plus faible, autour de -480 mV/ECS. Ceci est d au fait que dans les premiers instants aprs dcapage, la couche doxydes est trs fine. Puis la couche doxydes crot et volue au contact de leau de rivire artificielle, ce qui a pour consquence une augmentation du potentiel dabandon. Aprs 24 heures dimmersion, la valeur de Ecorr est stationnaire et comprise entre -100 et 0 mV/ECS. Lchantillon poli et laiss 5 jours lair libre a dj une couche doxydes bien forme et stable (dans lair), son potentiel de corrosion libre initial est donc plus lev (environ -50 mV/ECS) que les autres Ecorr initiaux. La couche doxydes volue toutefois au contact de llectrolyte, ce qui induit une modification du potentiel dabandon. Aprs 24 heures dimmersion, la valeur de Ecorr est stationnaire et comprise entre +30 et +50 mV/ECS. Lchantillon qui a subi le dcapage nitro-fluorhydrique puis la passivation 5 jours lair libre a un potentiel de corrosion libre initial encore plus lev (+90 mV/ECS) que lchantillon passiv 5 jours lair libre. Le dcapage pralable semble accentuer loxydation de la surface qui se fait durant la passivation lair libre. La lgre volution de la couche passive en contact avec llectrolyte entrane une faible modification du potentiel dabandon. La valeur stationnaire de Ecorr, atteinte rapidement aprs environ 6 heures dimmersion, est de 60 mV/ECS.

92

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

0,1

0,0

-0,1

Ecorr (V/ECS)

-0,2

-0,3

-0,4

ultrasons alcool ultrasons eau distille dcap HF/HNO3 passiv 5 jours l'air libre dcap puis passiv 5j

-0,5 0 5 10 15 20 25 30

temps (heures)

Figure 39 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L polis au micron et immergs en eau de rivire artificielle, en fonction du traitement de surface utilis

Ainsi, quel que soit le traitement de surface appliqu un chantillon dacier inoxydable 304L, son potentiel de corrosion libre est toujours stable et compris entre -100 et +50 mV/ECS aprs 24 heures dimmersion.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 3.2.2 Acier 316L

Les rsultats concernant lacier inoxydable 316L sont indiqus sur la figure 40. Le potentiel de corrosion libre initial des chantillons simplement polis et dgraisss aux ultrasons est compris entre -150 et -100 mV/ECS. Ecorr augmente au cours du temps, en raison de lvolution du film doxydes au contact de leau de rivire artificielle. La surface soxyde jusqu atteindre un tat stable, o la valeur stationnaire de Ecorr est dans lintervalle [-40 ; 20 mV/ECS]. Le potentiel dabandon est stable 24 heures aprs limmersion. Lchantillon dcap par le mlange HF/HNO3 a un potentiel de corrosion libre initial trs faible, aux alentours de -370 mV/ECS. Cette faible valeur indique une faible oxydation de la surface, ce qui est cohrent avec lattaque du film passif par les acides du bain de dcapage. Au contact de la solution de NaCl, la couche doxydes se forme, entranant une augmentation de loxydation de la surface et donc une augmentation de Ecorr. Celui-ci est stable aprs 24 heures dimmersion et prend une valeur comprise entre -70 et -20 mV/ECS. Le potentiel dabandon initial de lchantillon passiv 5 jours lair libre est compris entre +80 et +110 mV/ECS. Cette valeur leve est due un tat trs oxyd de la surface, qui sest recouverte dune couche doxydes formant le film passif durant les 5 jours de contact avec lair ambiant du laboratoire. Lors du contact avec llectrolyte, la couche doxydes volue, entranant une modification du potentiel de corrosion libre. Aprs 24 heures dimmersion, Ecorr est stable autour de 10 mV/ECS. Lchantillon ayant subi successivement le dcapage nitro-fluorhydrique et la passivation 5 jours lair libre a un potentiel de corrosion libre initial assez lev, compris dans lintervalle [-100 ;-40 mV/ECS]. Au contact de la solution de NaCl, lvolution de la couche doxydes gnre une volution de Ecorr. Aprs 24 heures dimmersion, le potentiel dabandon est stable et vaut environ -15 mV/ECS.

93

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

0,1

0,0

Ecorr (V/ECS)

-0,1

-0,2

-0,3

ultrasons alcool ultrasons eau distille dcap HF/HNO3 passiv 5 jours l'air libre dcap puis passiv 5j
0 5 10 15 20 25 30

-0,4

temps (heures)

Figure 40 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 316L polis au micron et immergs en eau de rivire artificielle, en fonction du traitement de surface utilis

Globalement, quel que soit le traitement de surface appliqu un chantillon dacier inoxydable 316L, son potentiel dabandon est toujours stable et compris entre -100 et +50 mV/ECS aprs 24 heures dimmersion.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 3.2.3 Synthse

Le potentiel de corrosion libre des chantillons daciers inoxydables 304L et 316L est stable et compris entre -100 et +50 mV/ECS aprs 24 heures dimmersion dans leau de rivire artificielle. Ce rsultat, vrifi sur lacier inoxydable 254SMO, est valable pour les trois nuances dacier inoxydable qui ont t retenues dans cette tude. Sa consquence immdiate est que, dans le protocole exprimental de toutes les expriences dlectrochimie ralises par la suite, les chantillons dacier inoxydable sont toujours immergs dans leau de rivire artificielle 24 heures avant lexprience proprement dite (mesure lectrochimique, ajout dun nouveau compos dans leau de rivire artificielle). Cette attente de 24 heures permet datteindre une valeur de potentiel toujours identique et reproductible et de standardiser le protocole exprimental. Le potentiel de corrosion libre initial de lexprience (aprs 24 heures dimmersion) se situera toujours dans lintervalle [-100 ;50 mV/ECS].

3.3 Influence de la prparation de surface sur limpdance lectrochimique des aciers inoxydables dans leau de rivire artificielle
Les rsultats ici prsents concernent lacier inoxydable 316L immerg en eau de rivire artificielle. Celui-ci est pris en guise dexemple, les deux autres nuances dacier inoxydable ayant dans la solution 0,3 g/L de NaCl le mme comportement en terme dimpdance lectrochimique.
3.3.1 Spectroscopie dimpdance lectrochimique globale

Les diffrents traitements de surface sont tudis par mesure dimpdance lectrochimique. Les mesures dimpdance sont ralises aprs 24 heures dimmersion. Le potentiel de

94

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface corrosion libre des chantillons est alors toujours compris entre -70 et 20 mV/ECS quel que soit le traitement de surface. Les diagrammes dimpdance effectus en eau de rivire artificielle sur des chantillons dacier 316L prpars suivant les diffrents traitements de surface choisis sont prsents sur la figure 41. Limpdance semble dpendre trs peu du traitement de surface. Les portions de boucles capacitives sont superposes sur le diagramme de Nyquist. Le trac de la courbe Im(Z)=f(frquence) en coordonnes logarithmiques montre que le comportement capacitif des chantillons dpend assez peu du traitement de surface mis en uvre. Cette courbe permet dtudier le comportement capacitif, et en particulier de savoir si ce comportement est idal (la capacit est alors une capacit pure) ou non-idal. Dans ce dernier cas, la partie imaginaire de limpdance est souvent mise sous la forme dun lment phase constante (CPE, pour langlais Constant Phase Element). Loppos de la pente de la partie linaire de la courbe Im(Z)=f(log(frquence)) est le coefficient entrant dans la dfinition de limpdance dun CPE :
Z
CPE

1 ( j) Q

(57)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lcart dun CPE une capacit pure est gnralement attribu des htrognits de surface, la porosit de llectrode, des ractions dadsorption trs lentes ou des variations des proprits de la couche doxydes pour les mtaux passivables [239]. Il correspond une distribution des constantes de temps des diffrents processus interfaciaux. Un lment de type CPE est souvent trs pratique pour modliser limpdance dune lectrode mais doit ncessairement tre reli au phnomne physico-chimique lui donnant naissance.
2,0x10
5

1 mHz

1,5x10

-Im(Z) (ohm.cm )

log |Im(Z)|

- BF

ultrasons alcool ultrasons eau distille dcap HF/HNO3 passiv 5 jours l'air libre dcapt puis passiv 5j

1,0x10

5,0x10

6,5 mHz

ultrasons alcool ultrasons eau distille dcap HF/HNO3 passiv 5 jours l'air libre dcapt puis passiv 5j

- HF
10
-3

0 10
-2

10

-1

10

10

10

10

10

frquence (Hz)
0,0 0,0 5,0x10
4

1,0x10

1,5x10
2

2,0x10

Re(Z) (ohm.cm )

a- Diagramme de Nyquist

b- log | Im(Z)| = f(log(freq))

Figure 41 : diagrammes dimpdance globale dchantillons dacier inoxydable 316L polis au grade 800 et immergs depuis 24 heures en eau de rivire artificielle, ayant subi diffrents traitements de surface pralables

Une rgression linaire du graphe de la figure 41b montre que la partie linaire des courbes est en fait constitue de deux zones linaires de pentes diffrentes, lune aux hautes frquences (pente note -HF) et lautre aux basses frquences (pente note -BF). Une frquence-seuil spare deux comportements de type CPE distincts. Les valeurs des coefficients BF et HF trouves pour les diffrents traitements de surface sont releves dans le tableau 9.

95

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

Ultrasons eau

Ultrasons alcool

Dcap HF/HNO3

Passiv 5j air

Dcap passiv

BF HF

0,92 0,76

0,92 0,80

0,93 0,79

0,90 0,78

0,94 0,77

Tableau 9 : valeurs des coefficients dans les deux zones linaires (basses et hautes frquences) de la courbe log(Im(Z))=f(log(frquence)), pour les diffrents traitements de surface considrs

La valeur du coefficient est plus leve basse frquence qu haute frquence : BF > HF. Le coefficient Q du CPE peut alors tre calcule laide de la formule [229] :
Q 1 = Im(Z) . sin( ) 2

(58)

Les valeurs du coefficient Q du CPE trouves pour les diffrents traitements de surface sont donnes dans le tableau 10. Elles sont indiques pour les deux valeurs de possibles, basse frquence (QBF) et haute frquence (QHF).
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Ultrasons eau Ultrasons alcool Dcap HF/HNO3 Passiv 5j air Dcap passiv

QBF QHF

1,0.10-4 1,7.10-4

1,1.10-4 1,6.10-4

1,2.10-4 1,9.10-4

1,0.10-4 1,4.10-4

8,8.10-5 1,5.10-4

Tableau 10 : valeurs des coefficients Q dans les deux zones linaires (basses et hautes frquences) de la courbe log(Im(Z))=f(log(frquence)), pour les diffrents traitements de surface considrs

La valeur du coefficient Q est plus leve haute frquence qu basse frquence : QHF > QBF. Le calcul doit tre en ralit effectu avec les valeurs de correspondant aux basses frquences. Il a en effet t montr que la dviation de vers des valeurs plus faibles aux hautes frquences est due aux distributions de courant et de potentiel dans llectrolyte proximit de la surface de llectrode [230, 240]. Ces distributions de courant et de potentiel sont directement lies la gomtrie de llectrode [241]. Les valeurs de Q considrer sont donc les valeurs basses frquences QBF. Quel que soit le traitement de surface appliqu aux chantillons, le comportement capacitif des aciers inoxydables immergs dans leau de rivire artificielle prsente toujours un cart lidalit (capacit pure). Il peut tre modlis par un lment de type CPE. Les variations des paramtres du CPE (, Q) (calculs aux basses frquences) en fonction du traitement de surface ne sont pas significatives. est gnralement compris entre 0,9 et 0,94 et Q entre 0,8 et 1,2.10-4 -1.cm-2.s. La partie rsistive de limpdance ne semble pas tre influence par la prparation de surface. Le traitement de surface na pas dinfluence notable sur limpdance, et tout traitement de surface peut tre employ indiffremment du point de vue de limpdance lectrochimique du systme.
3.3.2 Distribution 2D et distribution 3D

Lorigine dun comportement capacitif CPE a t discute auparavant. La distribution de limpdance en fonction de la frquence Z() provient dune distribution des constantes de temps des processus mis en jeu. La distribution des constantes de temps provient soit dune 96

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface distribution bidimensionnelle, soit dune distribution tridimensionnelle. Dans le premier cas, la distribution des constantes de temps est due une distribution bidimensionnelle nonuniforme en courant et/ou en potentiel dans le plan de la surface de llectrode, autrement dit dans le plan (x,y). Dans le deuxime cas, la distribution des constantes de temps est due une distribution tridimensionnelle dhtrognits le long de la normale la surface, autrement dit le long de laxe z. Ces htrognits peuvent tre de diffrentes natures : rugosit de surface, porosit de llectrode, variation de la composition chimique [239] La distinction entre une distribution 2D et une distribution 3D donne des renseignements sur la couche doxydes. En effet, de nombreux travaux ont montr que la composition chimique de couches doxydes dveloppes sur acier inoxydable en milieu aqueux nest pas uniforme le long de la normale la surface [165-168, 175, 176]. Ceci a t vrifi en eaux de mer naturelle [73, 169] et artificielle [73, 182]. Certains auteurs parlent mme de stratification du film passif [17]. Cette variation de la composition chimique selon laxe des z doit a priori engendrer une distribution 3D de limpdance. Limpdance globale de lchantillon est gale lintgrale des impdances locales relies en parallle sur la totalit de la surface expose llectrolyte. La distribution des impdances locales est schmatise sur la figure 42.

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Figure 42 : reprsentation du circuit lectrocintique quivalent une distribution locale de limpdance (CPE local) [239]

Si la distribution est bidimensionnelle, limpdance locale ne contient pas dlment CPE. Limpdance globale a alors un comportement capacitif type CPE et limpdance locale un comportement capacitif idal. Si la distribution est tridimensionnelle, la partie capacitive de limpdance locale est de type CPE. Les impdances globale et locale prsentent un comportement capacitif type CPE. Les coefficients des deux CPE doivent tre gaux [239]. La distinction entre distribution 2D et distribution 3D peut donc tre faite laide de mesures dimpdance locale. Une impdance locale ayant une partie capacitive de type capacit idale indique une distribution 2D en courant et/ou en potentiel (lie la gomtrie de llectrode) dans le plan de la surface de lchantillon. Une impdance locale ayant une partie capacitive de type CPE va dans le sens dune distribution 3D, cest--dire dans le cas dun chantillon en acier inoxydable dans le sens dune variabilit des proprits de la couche doxydes dans son paisseur.
3.3.3 Spectroscopie dimpdance lectrochimique locale

La figure 43 prsente les rsultats des mesures des impdances globale et locale, ralises sur des chantillons dacier 316L polis au micron, passs aux ultrasons dans lthanol et

97

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface immergs depuis 24 heures dans leau de rivire artificielle. La partie imaginaire de limpdance est reprsente en fonction de la frquence en coordonnes logarithmiques. La courbe correspondant limpdance globale comprend deux parties linaires, caractristiques dun comportement capacitif de type CPE. Les valeurs des pentes sont denviron 0,9 pour global, BF et de 0,62 pour global, HF. La prsence de deux CPE distincts a dj t explicite ; le CPE haute frquence correspond la distribution en courant et en potentiel dans llectrolyte proximit de la surface de llectrode et provient de la gomtrie de lchantillon. Seule la partie basse frquence est considrer. Limpdance locale prsente un comportement capacitif de type CPE basse frquence. Le coefficient local de ce CPE est denviron 0,92 et est dans la mme gamme que le coefficient global, BF de limpdance globale :
local global, BF

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Ainsi, un comportement capacitif de type CPE est retrouv au niveau de limpdance locale. Ceci indique que la dispersion de limpdance en fonction de la frquence Z() est due une distribution 3D au sein de la couche doxydes, le long de la normale la surface. Certaines proprits de la couche doxydes (composition chimique, proprits dilectriques, porosit) varient selon laxe des z et engendrent une distribution de la constante de temps, donc un comportement capacitif non idal. Ce rsultat est cohrent avec les remarques prcdentes, notamment avec le fait que le profil des concentrations des diffrents lments prsents dans le film passif dun acier inoxydable nest gnralement pas constant sur toute lpaisseur de la couche doxydes.
6

globale locale
-0.89707

-0.61947
2

-0.92066

log |Im(Z)|

-2

-4

-6

-8 -3 -2 -1 0 1 2 3 4

log(frquence)

Figure 43 : diagramme dimpdances globale et locale dchantillons dacier 316L immergs depuis 24 heures en eau de rivire artificielle

3.3.4 Synthse

Le traitement de surface employ sur un chantillon dacier inoxydable a une influence ngligeable sur son impdance en eau de rivire artificielle. Le choix de la prparation de surface nest donc pas primordial du point de vue de la spectroscopie dimpdance lectrochimique. Les mesures dimpdances globale et locale ont montr que le comportement capacitif (partie imaginaire de limpdance) global et local est non pas de type capacit idale, mais plutt de type CPE. Ceci indique une htrognit de la couche doxydes selon la normale la surface. Cette htrognit peut tre une htrognit de la composition chimique du film passif les profils de concentration des lments constitutifs de la couche passive ne seraient alors pas constants sur toute lpaisseur- et/ou une htrognit des proprits dilectriques la constante dilectrique ne serait alors pas constante sur toute lpaisseur.

98

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface

3.4 Influence de la prparation de surface sur les proprits de semi-conductivit

Des diagrammes de Mott-Schottky sont acquis sur des chantillons dacier inoxydable ayant subi les divers traitements de surface, afin dvaluer linfluence de ltat de surface sur les proprits de semi-conductivit. Ces mesures sont effectues sur des chantillons dacier inoxydable 316L 24 heures aprs leur immersion dans leau de rivire artificielle. Les rsultats sont prsents sur la figure 44.
8,0x10
10

6,0x10

10

ultrasons alcool ultrasons eau dcap HF/HNO3 passiv 5 jours l'air libre dcap puis passiv 5j

C (F .m )

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4,0x10

-2

-2

10

2,0x10

10

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

1,0

E (V/ECS)

Figure 44 : diagrammes C-2(E) de Mott-Schottky pour des chantillons dacier 316L polis au micron et immergs depuis 24 heures en eau de rivire artificielle, en fonction du traitement de surface utilis

Quel que soit le traitement de surface appliqu, le potentiel de bandes plates Ufb est toujours proche de -0,5 V/ECS. Ufb est connu pour varier avec le pH de la solution, qui est ici identique pour toutes les expriences [224]. En dessous de Ufb, le comportement capacitif est variable. Les diagrammes des chantillons ayant subi un dcapage nitro-fluorhydrique ( dcap HF/HNO3 et dcap puis passiv 5j ) comportent une zone linaire de pente ngative, correspondant un comportement semiconducteur de type p. Ce comportement est vraisemblablement li la prsence doxyhydroxydes de chrome au sein de la couche passive [164, 172-175]. Le dcapage par HF/HNO3 est connu pour provoquer un enrichissement en chrome. Dans le cas de lchantillon dcap par HF/HNO3 , la densit des porteurs de charge (accepteurs : lacunes dlectrons ou trous ) Na est de 2,3.1019 cm-3. Elle est difficile dterminer sur lchantillon dcap puis passiv 5j en raison dun bruit important. Les autres diagrammes ne prsentent pas cette zone linaire. Le film passif est parfois considr comme dgnr aux potentiels infrieurs au potentiel de bandes plates [73]. Les cinq courbes prsentent entre Ufb (-0,5 V/ECS) et environ 0,2 V/ECS une zone linaire de pente positive. Le signe de la pente de cette zone linaire indique que lacier inoxydable a un comportement semi-conducteur de type n. Une mesure de la pente par rgression linaire permet de calculer la densit des porteurs de charge (cest--dire des lectrons dans ce cas prcis) laide de la formule (51). Lpaisseur W de la couche de charges despace W est calcule par la formule (52). Pour rappel, W et Nd varient en sens inverse.

99

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface Les valeurs des densits de porteurs de charge Nd et dpaisseurs de couche de charges despace W trouves pour les cinq traitements de surface diffrents sont indiques dans le tableau 11. Traitement de surface Nd (cm-3) W (nm) ultrasons alcool 2,4.1019 0,20 ultrasons eau 2,2.1019 0,20 dcap HF/HNO3 2,3.1019 0,24 passiv 5 jours lair libre 2,0.1019 0,26 dcap puis passiv 5j 1,4.1019 0,29

Tableau 11 : densits des porteurs de charge et paisseur de la couche de charges despace pour les diffrents traitements de surface tudis

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Nd est compris entre 1,4 et 2,4.1019 cm-3. W est compris entre 0,2 et 0,3 nm. Le traitement de surface a une faible influence sur lpaisseur de la couche de charges despace et sur le taux de dopage du semi-conducteur de type n quest le film passif entre Ufb et 0,2 V/ECS. La passivation de lchantillon au contact de lair ambiant semble provoquer une diminution de Nd (resp. une augmentation de W). Il faut toutefois noter que lpaisseur de la couche de charges despace est trs faible ; une paisseur de 0,2 nm correspond 2 angstrms, cest--dire une couche biatomique. Des restrictions doivent alors tre apportes lutilisation de la technique de Mott-Schottky, qui ne prend pas en compte lchelle atomique de la couche de charges despace. Lassimilation lectrocintique dune couche biatomique une capacit peut savrer risque. Lautre critique qui peut tre mise envers la mthode de Mott-Schottky est la rapide assimilation de la partie capacitive de limpdance une capacit idale. Les rsultats dimpdance globale et locale dj discuts ont montr que la partie capacitive nest pas une capacit idale mais se comporte comme un CPE. En outre, le choix dune seule frquence dacquisition limite forcment la prcision de la mesure de la capacit. Synthse Le traitement de surface a une faible influence sur les proprits semi-conductrices de type n que prsente le film passif des aciers inoxydables aux potentiels suprieurs Ufb (environ gal -0,5 V/ECS). La passivation lair libre (stockage de lchantillon durant 5 jours) a tendance faire augmenter la densit de donneurs Nd dans la couche de charges despace. Le comportement semi-conducteur aux potentiels infrieurs Ufb parait tre plus affect par la prparation de surface. En effet, le traitement de dcapage par le mlange HF/HNO3, qui provoque un enrichissement en chrome dans le film passif, fait apparatre un comportement semi-conducteur de type p dans cette gamme de potentiels. Ce comportement type p pourrait tre attribu aux oxydes et hydroxydes de chrome [175]. Ces rsultats ont t obtenus sur la nuance 316L et sont identiques sur les deux autres nuances (304L, 254SMO) dacier inoxydable.

3.5 Influence de la prparation de surface sur les caractristiques nergtiques de surface

Des mesures dangle de contact sont ralises sur des chantillons dacier inoxydable ayant subi divers traitements de surface, afin dvaluer linfluence de ltat de surface sur les

100

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface caractristiques nergtiques. Les traitements de surface employs ici diffrent lgrement de ceux qui ont t utiliss pour les mesures lectrochimiques. Les trois protocoles de traitement de surface considrs sont les suivants : ultrasons alcool ; dcap puis passiv 5j ; passiv 3j eau : lchantillon subit dabord le traitement de surface ultrasons alcool , puis il est laiss dans de leau distille pendant 5 jours. Lchantillon est alors prlev et sch laide dun mouchoir doux. Les rsultats obtenus en fonction du traitement de surface, prsents dans le tableau 12, montrent que les cart-types sur les mesures sont relativement levs, laissant supposer une certaine htrognit des surfaces tudies. Nuance 304L
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316L 254SMO

Traitement de surface ultrasons alcool dcap puis passiv 5j passiv 3j eau ultrasons alcool dcap puis passiv 5j passiv 3j eau ultrasons alcool dcap puis passiv 5j passiv 3j eau

eau 58,7 4,5 89,3 5,1 86,4 5,6 66,1 9,1 77,3 9,4 61,1 4,9 66,1 5,3 91,4 4,6 89,5 3,1

diiodomthane 52,4 2,6 57,1 3,6 54,9 2,2 56,8 5,1 54,9 5,5 52,9 5,0 45,1 2,2 56,2 1,8 60,9 2,3

formamide 47,9 5,7 69,0 5,3 75,5 7,6 60,0 10,5 70,2 6,3 50,3 6,5 50,3 8,8 73,5 5,6 76,0 2,6

Tableau 12 : mesure des angles de contact de leau, du diiodomthane et du formamide sur des chantillons dacier inoxydable ayant subi 3 traitements de surface diffrents

Les surfaces prsentent une variabilit dans leur degr dhydrophilie en fonction du traitement utilis. Si lacier 316L reste moyennement hydrophile quelle que soit la prparation de surface pratique, les nuances 304L et 254SMO perdent cette caractristique lorsque lchantillon est dcap ou passiv lair libre. Les caractristiques nergtiques de surface, calcules partir des valeurs dangles de contact et de lquation (43) de Young-Van Oss, sont quant elles donnes dans le tableau 13.
Nuance 304L Traitement de surface

SLW
32,9 1,5 30,3 2,1 31,5 1,3 30,4 2,9 31,5 3,1 32,6 2,8 37 1,2 30,8 1 28,1 1,3

S22,8 7,5 3,4 3,6 8,9 7,2 22,2 15,8 15,5 13 21,5 8,1 15,3 8,4 3,8 3,7 6,3 2,9

S+
0,8 0,7 0,1 0,4 0,3 0,7 0,1 0,6 0,1 0,5 0,6 0,8 0,4 0,7 00 0 0,1

SAB
8,3 4,9 1,4 2,3 3,1 4,9 3 9,9 2,6 7 7,3 5,7 4,6 5,7 0,2 2,3 0,6 1,7

S
41,2 5,1 31,7 3,1 34,6 5 33,4 10,3 34,1 7,7 39,9 6,3 41,6 5,8 30,9 2,5 28,6 2,2

ultrasons alcool dcap puis passiv 5j passiv 3j eau ultrasons alcool 316L dcap puis passiv 5j passiv 3j eau ultrasons alcool 254SMO dcap puis passiv 5j passiv 3j eau

Tableau 13 : valeurs des caractristiques nergtiques de surface pour des chantillons dacier inoxydable ayant subi 3 traitements de surface diffrents (mJ.m-2)

101

Chapitre 3 : Etude prliminaire : choix du protocole de traitement de surface Quel que soit le traitement de surface employ, lnergie de surface S est toujours comprise entre 28 et 42 mJ.m-2. Ces valeurs sont en accord avec les donnes de la littrature concernant les aciers inoxydables [205, 207]. Le terme li aux interactions de Lifschitz-Van der Waals ne varie pas de faon significative avec le traitement de surface et est toujours suprieur au terme acido-basique. Dans la composante acido-basique, le terme S- est toujours suprieur S+, ce qui indique que la surface a un fort caractre donneur dlectrons. La surface est basique au sens de Lewis dans tous les cas, et en particulier lorsque lchantillon a t poli peu de temps avant la mesure des angles de contact (traitement de surface ultrasons alcool ). La composition de la matrice des aciers inoxydables ne semble pas avoir dinfluence vidente sur les caractristiques nergtiques de surface. Il faut toutefois rappeler que les mesures de mouillabilit de surface sont perturbes par la prsence dune couche de molcules organiques adsorbes provenant dune contamination par lair ambiant du laboratoire (visible en XPS par exemple). Les mesures dangles de contact se font sur cette couche organique adsorbe toujours prsente la surface des chantillons, ce qui explique la similarit des valeurs caractrisant en ralit non pas des nuances dacier inoxydable diffrentes mais des couches carbones de contamination diffrentes [207, 242].

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3.6 Conclusion : choix du traitement de surface

Influence du traitement de surface sur Ecorr et sur limpdance : Le traitement de surface peut modifier assez fortement la valeur initiale du potentiel de corrosion libre (durant les premires minutes aprs limmersion), toutefois quel que soit le traitement de surface employ la valeur du potentiel dabandon 24 heures est toujours stable et comprise entre -100 et +50 mV/ECS. Le traitement de surface na pas dinfluence notable sur limpdance des aciers inoxydables. Le choix du traitement de surface nest pas crucial pour les mesures de Ecorr et pour les mesures dimpdance. Influence du traitement de surface sur les proprits semi-conductrices : Les proprits semi-conductrices sont fortement influences par ltat de surface initial des chantillons : le traitement de dcapage par HF/HNO3 confre aux coupons un comportement semi-conducteur de type p entre -0,8 et -0,5 V/ECS, li un enrichissement en chrome de la couche doxydes. Cette semi-conductivit de type p est absente dans les chantillons nayant pas subi le traitement de dcapage. Influence du traitement de surface sur les caractristiques nergtiques de surface : Le protocole de prparation des chantillons a une influence non ngligeable sur les caractristiques nergtiques de surface. Tous les protocoles gnrent une basicit (caractre lectron-donneur) et un caractre moyennement hydrophobe de surface. Les chantillons ultrasons alcool , polis peu de temps avant les mesures dangle de contact, prsentent un caractre lectron-donneur plus lev et une hydrophobicit moins marque que les autres chantillons.

Le choix a t fait dutiliser par la suite le traitement de surface ultrasons alcool , simple mettre en uvre, accentuant la basicit et diminuant lhydrophobie de la surface des chantillons.

102

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

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4 Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

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Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

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La surface dun matriau immerg dans une eau naturelle est colonise par un consortium de micro-organismes (bactries, algues, champignons, levures) et dexopolymres (lipides, polysaccharides, protines, acides nucliques), qui forme une matrice biologique complexe appele biofilm [192, 193]. La prsence physique du biofilm et le mtabolisme des microorganismes qui le composent sont lorigine de modifications de la physico-chimie locale de llectrolyte proximit de la surface, ce qui peut avoir une influence sur les processus de corrosion du matriau. Il est actuellement reconnu que le potentiel de corrosion libre Ecorr des aciers inoxydables immergs en eau de mer naturelle augmente au cours du temps [1-4]. Sa valeur initiale dans les premiers temps dimmersion est gnralement comprise entre -100 et -50 mV/ECS. Aprs augmentation, Ecorr est situ dans lintervalle [+100 ; +400 mV/ECS]. Cette augmentation rapproche le potentiel dabandon du potentiel de piqre, augmentant ainsi la probabilit dinitiation de la corrosion par piqres. Il a t prouv que laugmentation de Ecorr observe en eau de mer naturelle est due la prsence et au mtabolisme du biofilm qui se dveloppe la surface du matriau. Laugmentation du potentiel dabandon (parfois appele anoblissement par traduction littrale de langlais ennoblement) est en gnral associe avec une augmentation du courant cathodique [10, 38] due soit la catalyse de la raction cathodique prexistante (la rduction de loxygne dissous), soit lapparition de la rduction dune nouvelle espce oxydante. Leffet global est une augmentation de la cintique des processus cathodiques. Lors de limmersion dchantillons dacier inoxydable dans des eaux contenant peu dions chlorures, quil sagisse deaux naturelles (rivires, lacs, estuaires) ou deaux artificielles (eaux uses), le potentiel de corrosion libre augmente dans la plupart des cas jusqu atteindre des valeurs comprises entre +250 et +450 mV/ECS environ [4, 23-26, 34, 35]. Laugmentation de Ecorr semble se produire dans les eaux douces comme en eau de mer naturelle. Elle est aussi associe avec une augmentation du courant cathodique [25, 34, 36, 50, 51]. Toutefois, daprs la littrature, laugmentation du potentiel dabandon nest pas forcment systmatique en eaux peu chlorures [34]. Lobjectif de cette partie est de confirmer (ou dinfirmer) laspect systmatique de laugmentation de Ecorr, didentifier les phnomnes provoquant cette augmentation, dtudier la biocontamination des surfaces et de caractriser la couche passive dchantillons dacier inoxydable (nuances 304L, 316L et 254SMO) immergs en eau de rivire naturelle. Leur comportement lectrochimique est caractris par plusieurs mthodes : mesures du potentiel de corrosion libre, afin de confirmer (ou dinfirmer) la littrature dans des conditions exprimentales fixes ; courbes de polarisation anodiques et cathodiques, afin de comprendre les mcanismes de laugmentation de Ecorr et dvaluer linfluence du biofilm sur la rsistance la corrosion par piqres ; mesures dimpdance lectrochimique et par des mesures de capacit selon la mthode de Mott-Schottky, afin destimer le rle jou par le biofilm sur le systme interfacial matriau/film passif/lectrolyte. Les suivis du potentiel de corrosion libre sont effectus sur les trois sites dimmersion. En revanche, pour des raisons pratiques, les courbes lectrochimiques dynamiques, ncessitant lutilisation de potentiostats et dchantillons enrobs, ne sont ralises que sur deux sites (Choisy-le-Roi et Flins).

105

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Des observations de surface, des analyses de surface et des dnombrements bactriens permettent de caractriser le biofilm, d dterminer son influence sur ltat de surface du matriau et dtudier les mcanismes conduisant aux variations de Ecorr.

4.1 Mesures lectrochimiques

4.1.1 Evolution du potentiel de corrosion libre Ecorr au cours du temps

4.1.1.1 Influence du lieu dexposition Le potentiel de corrosion libre dchantillons de platine et dacier inoxydable 304L, 316L et 254SMO est mesur au cours du temps sur les trois sites dimmersion dans la Seine, Choisyle-Roi (en amont de Paris), Flins (en proche aval de Paris) et Poses-Amfreville (aval de Paris, prs de Rouen) [268]. Les rsultats sont prsents sur les figures 45-47, avec les dates dimmersion et les tempratures initiales de leau de Seine. Dans les premiers instants de limmersion Choisy-le-Roi, le potentiel de corrosion libre des trois nuances dacier inoxydable est compris entre -250 et -120 mV/ECS. Le potentiel reste stable pendant quelques jours, puis augmente rapidement jusqu atteindre des valeurs comprises entre +130 et +320 mV/ECS. La dure de laugmentation est de 3 ou 4 jours environ. Le temps entre limmersion et laugmentation de Ecorr, appel temps de latence ou temps dincubation, est denviron 25 jours dans les conditions exprimentales considres. La temprature de leau en dbut dimmersion est de 8C. Les valeurs du potentiel de corrosion libre ne sont pas significativement diffrentes entre les trois nuances testes. Lvolution du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables en eau de rivire naturelle ne dpend pas de la composition chimique de lacier. Le potentiel dabandon de lchantillon de platine augmente aussi au cours du temps. Il passe de +650 mV/ECS juste aprs limmersion une valeur maximale de +770 mV/ECS. Laugmentation est plus faible que pour les aciers inoxydables. Toutefois, un accroissement du potentiel dabandon se produit, confirmant que le phnomne daugmentation de Ecorr napparat pas que sur des chantillons dacier inoxydable. Les valeurs du potentiel dabandon de lchantillon de platine sont leves, ce qui indique que leau de Seine du site de Choisy est un milieu trs oxydant. Des instabilits de potentiel sont visibles sur tous les graphiques. Elles pourraient correspondre de trs courtes pertes de contact lectrique avec les chantillons. De plus, lagitation de leau (due la circulation navale sur le fleuve, aux remous) est telle que le biofilm peut tre localement endommag, voire dcroch. De telles dgradations locales du biofilm peuvent aussi expliquer les instabilits de potentiel releves sur les graphes exprimentaux.

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106

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

304L-1 304L-2 304L-3 304L-4

0,3

0,3

0,2

0,2

Ecorr (V/ECS)

0,1

0,1

316L-1 316L-2 316L-3 316L-4

Ecorr (V/ECS)
0 10 20 30 40 50 60

0,0

0,0

-0,1

-0,1

-0,2

-0,2

-0,3
-0,3

10

20

30

40

50

60

temps (jours)

temps (jours)

a- Acier 304L
0,80
0,3 0,2 0,1

b- Acier 316L

254SMO-1 254SMO-2 254SMO-3 254SMO-4

0,75

Ecorr (V/ECS)

0,0 -0,1 -0,2

Ecorr (V/ECS)

0,70

Platine
0,65

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-0,3 -0,4 0 10 20 30 40 50 60

0,60 0 10 20 30 40 50 60

temps (jours)

temps (jours)

c- Acier 254SMO

d- Platine

Figure 45 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons mtalliques immergs le 21 Janvier dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi (T = 8C)

Dans les premiers instants dimmersion sur le site de Flins, le potentiel de corrosion libre des chantillons dacier inoxydable est compris entre -220 et -70 mV/ECS. Le potentiel dabandon reste constant durant environ 3 jours, puis augmente rapidement (en 3 ou 4 jours) jusqu atteindre des valeurs comprises entre +140 et +400 mV/ECS. Les trois nuances dacier inoxydable ont le mme comportement : du point de vue du potentiel de corrosion libre, aucune diffrence notable ne distingue les trois nuances 304L, 316L et 254SMO. La temprature au moment de limmersion est de 14C. Lvolution du potentiel de corrosion libre est quasiment la mme sur le site de Choisy-le-Roi et sur le site de Flins. La seule diffrence importante est la valeur du temps de latence avant augmentation de Ecorr. Il est en effet beaucoup plus court durant limmersion Flins (3-4 jours) que durant limmersion Choisy-le-Roi (25 jours). Il est important de souligner que les tempratures de leau de Seine sont aussi diffrentes (respectivement 14 et 8C). Le potentiel dabandon de lchantillon de platine volue aussi au cours du temps. Aprs immersion, il diminue rapidement pour se fixer une valeur stable de -180 mV/ECS. Puis, 4 jours aprs limmersion, il augmente rapidement (en 3 ou 4 jours) pour atteindre environ +230 mV/ECS. Cette augmentation de 420 mV est tout fait comparable aux augmentations mesures sur les chantillons dacier inoxydable. Le comportement du platine est identique au comportement des aciers inoxydables en terme daugmentation du potentiel dabandon.

107

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

0,4
0,5 0,4 0,3

0,3

0,2

0,1

Ecorr (V/ECS)

Ecorr (V/ECS)

0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2 -0,3

0,0

-0,1

-0,2

304L-1 304L-2 304L-3

0 5 10 15 20

316L-1 316L-2 316L-3

0 5 10 15 20

-0,3

temps (jours)

temps (jours)

a- Acier 304L
0,3 0,2
0,2 0,3

b- Acier 316L

0,1

Ecorr (V/ECS)

0,0 -0,1 -0,2 -0,3 -0,4 0 5 10 15 20

Ecorr (V/ECS)

0,1

0,0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

254SMO-1 254SMO-2 254SMO-3

-0,1

Platine

-0,2 0 5 10 15 20

temps (jours)

temps (jours)

c- Acier 254SMO

d- Platine

Figure 46 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons mtalliques immergs le 20 Septembre dans la Seine sur le site de Flins (T=14C)

Dans les premiers instants de limmersion sur le site de Poses-Amfreville, le potentiel de corrosion libre des chantillons dacier inoxydable est compris entre -240 et -30 mV/ECS. Le potentiel dabandon reste stable aux alentours de sa valeur initiale pendant environ 1 jour et demi, puis augmente jusqu atteindre des valeurs comprises entre +50 et +260 mV/ECS. Laugmentation est assez rapide, elle se fait en 3 ou 4 jours. Les trois nuances dacier inoxydable ont un comportement identique. La composition de lalliage ninflue pas sur lvolution de son potentiel de corrosion libre. Le temps de latence avant augmentation de Ecorr est ici trs court, entre 1 et 3 jours. Cest le mme ordre de grandeur que sur le site de Flins, et beaucoup plus court que sur le site de Choisy. La temprature de leau de Seine au moment de limmersion est ici de 14C. Les temps de latence les plus courts (infrieurs 4 jours Poses-Amfreville et Flins) correspondent la temprature de llectrolyte la moins froide (14C). Il semble y avoir un lien direct entre le temps de latence et la temprature de leau. Le potentiel dabandon de lchantillon de platine volue aussi au cours du temps. Il prend une valeur comprise entre 180 et 280 mV/ECS dans les premiers temps de limmersion, pendant environ 4 jours, puis augmente assez progressivement, jusqu atteindre une valeur maximale de 580 mV/ECS. Cette augmentation denviron 350 mV/ECS est dans la mme gamme que laugmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables. Le phnomne daugmentation de Ecorr nest pas limit aux aciers inoxydables, dautres matriaux subissent ce processus.

108

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

0,3

0,3
0,2

0,2
0,1

0,1

Ecorr (V/ECS)

Ecorr (V/ECS)

0,0

0,0

-0,1

-0,1

-0,2

304L-1 304L-2 316L

-0,2

254SMO-1 254SMO-2 254SMO-3

-0,3 0 2 4 6 8 10 12

-0,3 0 2 4 6 8 10 12

temps (jours)

temps (jours)

a- Aciers 304L et 316L

0,6

b- Acier 254SMO

0,5

Ecorr (V/ECS)

0,4

0,3

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Platine
0,2

0,1 0 5 10 15 20

temps (jours)

c- Platine
Figure 47 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons mtalliques immergs le 20 Septembre dans la Seine sur le site de Poses-Amfreville (T=14C)

4.1.1.2 Influence de la temprature sur le temps de latence Laugmentation de Ecorr nest jamais instantane. Il y a toujours un temps de latence, une dure prcdant la hausse du potentiel dabandon. Daprs les rsultats prsents auparavant, il semble que la temprature de leau est un facteur primordial qui dtermine la valeur du temps de latence. Pour confirmer cette ide, plusieurs immersions ont t ralises sur le site de Choisy-le-Roi diffrentes saisons. La temprature de leau de Seine varie avec la saison, ce qui permet de voir leffet de la temprature sur lvolution de Ecorr. Les rsultats obtenus sont visibles sur la figure 48 ; en particulier, le tableau de la figure 48-d rsume les temps de latence mesurs en fonction de la temprature de leau de Seine. Les trois graphiques reprsentant Ecorr(t) montrent que quelle que soit la temprature de leau, le potentiel de corrosion libre augmente au cours du temps. Ici, la valeur maximale atteinte est +300 mV/ECS. Si lon exclut lexprience du 3 Avril, qui diffre des autres et sera interprte plus loin, les rsultats prouvent que le temps de latence dpend directement de la temprature de leau. Le temps de latence le plus lev (25,3 jours) correspond la temprature la plus faible (8C), alors que le temps de latence le plus faible (5,9 jours) est trouv pour la temprature la plus leve (22C). Laugmentation du potentiel de corrosion libre se produit dautant plus tt que la temprature de leau de rivire naturelle est leve.

109

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

0,3

0,3

0,2

Ecorr (V/ECS)

304L-1 304L-2 316L-1 316L-2 254SMO-1 254SMO-2

0,2

0,1

0,0

Ecorr (V/ECS)

0,1

-0,1

0,0

-0,2
-0,1

316L-1 254SMO-1 254SMO-2

-0,3
-0,2 0 2 4 6 8 10 12 14

temps (jours)
16 18

10

15

20

25

temps (jours)

a- Immersion du 3 Avril (T = 15C)

0,4

b- Immersion du 10 Juin (T = 22C) Temps de latence (jours) 25,3 0 5,9 7,4

0,2

254SMO-1 254SMO-2 254SMO-3 254SMO-4

Date dimmersion 21 Janvier (8C) 3 Avril (15C) 10 Juin (22C) 18 Octobre (14C)

Ecorr (V/ECS)

0,0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-0,2

-0,4 0 5 10 15 20 25

temps (jours)

c- Immersion du 18 Octobre (T = 14C)

d- Temps de latence en fonction de la temprature

Figure 48 : suivi du potentiel de corrosion libre et temps de latence moyens pour des chantillons dacier inoxydable immergs diffrentes dates dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi

Ceci confirme lide mise prcdemment, savoir que la temprature de leau fixe la valeur du temps de latence. Ce rsultat va dans le mme sens que les travaux de Chamritski et al. [23, 31] Il faut prciser que la temprature nest certainement pas le seul paramtre ayant une influence sur le temps de latence prcdant laugmentation de Ecorr. En particulier, la teneur en Carbone Organique Total (COT) et la vitesse de circulation de llectrolyte sont susceptibles de modifier la vitesse de colonisation de la surface, la vitesse de formation du biofilm, et donc le temps de latence. Le COT prend en compte toutes les molcules organiques carbones et est li la quantit de nutriments que reoivent les microorganismes du biofilm. Le flux de nutriments est aussi dpendant de la vitesse de circulation de leau. De plus, une vitesse de circulation du fluide leve proximit de la surface de lchantillon peut dcrocher ou endommager le biofilm. Ces deux paramtres, COT et vitesse du fluide, pourraient donc avoir une influence sur le temps de latence. Certains travaux mentionnent cette influence, en particulier en eau de mer naturelle [10, 14, 47]. 4.1.1.3 Influence du cycle jour/nuit sur lvolution de Ecorr La figure 48a diffre des autres volutions du potentiel dabandon. En effet, Ecorr augmente immdiatement aprs limmersion, et une oscillation semble sajouter sur la tendance globale laugmentation. La priode de ces oscillations est de 24 heures. Ceci a pu tre remarqu en raison dune modification de la frquence dacquisition des potentiels. Dans les autres expriences, cette frquence est de 1 heure, alors que pour le graphique a, la frquence dacquisition est de 10 minutes. Les points plus rapprochs mettent bien en vidence lajout 110

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle dune oscillation de priode 24 heures sur le signal continu daugmentation de Ecorr. Lamplitude maximale des oscillations est de 70 mV, le signal alternatif nest quune modulation du signal continu . Toutefois, lexistence de ces faibles oscillations peut apporter un clairage nouveau sur le phnomne daugmentation du potentiel dabandon. La priode de ces oscillations indique quelles sont dues au cycle jour/nuit. Le cycle jour/nuit a donc une influence sur lvolution du potentiel de corrosion libre. Lalternance jour/nuit peut modifier de deux faons lvolution du potentiel dabandon. Tout dabord, elle a un effet sur la temprature de leau, paramtre influenant les variations de Ecorr. Cet effet est toutefois assez minime, car la rivire est un thermostat. Lalternance jour/nuit induit aussi une volution priodique de lclairement. Une telle variation de lclairement a un impact fort sur le mtabolisme des espces microbiennes photosynthtiques du biofilm. Durant les priodes diurnes, ces espces reoivent beaucoup dnergie lumineuse et produisent une quantit importante doxygne dissous. En revanche, durant les priodes nocturnes, labsence dclairement limite trs fortement la production doxygne par photosynthse. Or la production locale doxygne au sein du biofilm et linterface biofilm/couche passive, en apportant une quantit supplmentaire doxygne, modifie le courant cathodique, donc le potentiel de corrosion libre. La photosynthse du biofilm pourrait avoir une influence sur lvolution de Ecorr. Ces observations vont dans le mme sens que la littrature portant sur le sujet. Des mesures du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de mer naturelle lors dalternances jour/nuit montrent que le potentiel varie entre les conditions claires et les conditions obscures [21]. Limmersion dchantillons dacier inoxydable 304 dans une eau de rivire souterraine a montr que laugmentation de Ecorr est bien plus importante en conditions claires (biofilm contenant des algues) que dans lobscurit (biofilm uniquement bactrien). Il est conclu partir de cette constatation que les microalgues photosynthtiques sont capables, par leur production doxygne une chelle locale, de faire augmenter le courant de rduction de O2 et par consquent dinduire une augmentation du potentiel dabandon [27, 28]. En particulier, certaines diatomes photosynthtiques peuvent gnrer une hausse du potentiel de corrosion libre denviron 200 mV [32,33]. Enfin, les algues sont souvent les microorganismes les plus prsents dans les biofilms deau douce. Tout ceci permet de penser que les oscillations du potentiel dabandon sont dues des variations de la production locale doxygne par les microorganismes photosynthtiques prsents dans le biofilm, cette production tant plus quantitative dans des conditions claires (jour) que dans des conditions obscures (nuit). 4.1.1.4 Synthse : volution de Ecorr au cours de limmersion Toutes les expriences dimmersion dans la Seine donnent des rsultats en accord avec la littrature portant sur lvolution du potentiel dabandon des aciers inoxydables en eau de mer naturelle (1.1.1.1) et en eau douce naturelle (1.1.1.2). Elles permettent de fournir quelques prcisions sur ce phnomne. Augmentation systmatique de Ecorr : Lorsquun chantillon dacier inoxydable est immerg dans une eau de rivire naturelle, son potentiel de corrosion libre augmente au cours du temps. La valeur maximale atteinte se situe dans lintervalle [+100 ; +400 mV/ECS], ce qui montre que la dispersion des valeurs est relativement importante. Cette augmentation ayant t observe pour tous les chantillons, elle peut tre considre comme systmatique. Dans la limite des nuances testes, elle ne dpend pas de la composition de lacier inoxydable. De plus, ce phnomne daugmentation de Ecorr ne se limite pas aux aciers inoxydables mais concerne aussi dautres matriaux, tels que le platine par exemple. 111

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Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

Temps de latence avant augmentation de Ecorr : Dans les conditions de cette tude, laugmentation du potentiel de corrosion libre na quasiment jamais t immdiate. Il existe un laps de temps entre limmersion dans leau de rivire naturelle et le dbut de laccroissement de Ecorr. Ce laps de temps est appel temps de latence ou temps dincubation , car il doit tre li au temps ncessaire au biofilm pour se dvelopper et crotre la surface des chantillons (sur le modle des courbes de croissance microbienne). Le temps de latence avant augmentation du potentiel dabandon est ici compris entre 0 et 26 jours. Il dpend fortement des conditions exprimentales, et en particulier de la temprature. Une faible temprature de leau de rivire naturelle gnre un temps de latence lev, autrement dit retarde laugmentation de Ecorr. Une faible teneur en COT et une vitesse de circulation deau leve pourraient avoir un rle similaire.

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Lexplication du phnomne la plus courante dans la littrature met en corrlation laugmentation de Ecorr avec une amplification des ractions cathodiques. Des courbes intensit-potentiel ont t ralises sur des chantillons immergs en eau de Seine vers les potentiels cathodiques afin de connatre lvolution du courant cathodique au cours du temps pendant limmersion.
4.1.2 Evolution du courant cathodique au cours du temps

Lobjectif de ce paragraphe est de dterminer lvolution de la densit de courant cathodique (note j et toujours discute en valeur absolue) au cours du temps durant une immersion en eau de rivire naturelle, afin de considrer si cette hypothtique volution peut tre lorigine de laugmentation de Ecorr. Pour cela, des mesures lectrochimiques dynamiques sont effectues sur des chantillons dacier inoxydable dans les premiers temps de limmersion (potentiel de corrosion libre faible, situ entre -200 et -50 mV/ECS) et aprs augmentation de Ecorr (potentiel de corrosion libre compris entre +100 et +400 mV/ECS). La comparaison des rsultats permet de mesurer le courant cathodique avant et aprs augmentation de Ecorr, et de visualiser ainsi une ventuelle augmentation de la densit de courant cathodique. La technique employe ici est la polarisation cathodique, qui consiste tracer des courbes intensit-potentiel en effectuant un balayage en potentiel depuis Ecorr jusqu des valeurs de potentiels plus faibles (ici -2 V/ECS). De telles courbes de polarisation cathodique sont traces sur les trois nuances dacier inoxydables avant et aprs augmentation de Ecorr, au niveau des sites de Choisy-le-Roi et de Flins. La vitesse de balayage choisie est de 5 mV/s. Sur les diffrents sites dimmersion en eau de rivire naturelle, il na pas t possible de mettre en place un dispositif exprimental permettant des mesures lectrochimiques dynamiques in situ sur des chantillons enrobs, trop compliqu mettre en oeuvre. En revanche, le protocole de quasi in situ a pu tre utilis (2.3.1.4). Des courbes de polarisation cathodique sont traces sur site sur des chantillons dacier inoxydable immergs depuis 30 minutes dans de leau de Seine prleve sur le site mme et introduite dans un bcher. Ces courbes sont ainsi acquises avant augmentation de Ecorr. Par ailleurs, des chantillons (non enrobs) immergs dans la Seine depuis plusieurs mois (sur un portique dimmersion servant aux mesures de Ecorr) et ayant subi une augmentation de potentiel de corrosion libre ont t prlevs, introduits rapidement (aprs au maximum 1 minute de passage lair) dans un bcher contenant leau du site, puis soumis un balayage en potentiel du ct des potentiels plus cathodiques. Les courbes de polarisation cathodique 112

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle ainsi obtenues ne sont pas proprement parler des mesures in situ, cest la raison pour laquelle elles sont qualifies de quasi in situ . Elles permettent davoir une bonne ide du courant cathodique dans leau de rivire naturelle. Le faible temps de passage lair limite lvolution de linterface biofilm/couche passive/mtal. Cependant, la rduction de loxygne est certainement diffrente des conditions in situ, en raison dun gradient de O2 diffrent dans la solution. 4.1.2.1 Influence du lieu dexposition Des courbes de polarisation cathodique sont traces suivant le protocole quasi in situ sur les sites de Choisy-le-Roi et de Flins, avant et aprs augmentation de Ecorr. Les rsultats obtenus Choisy sont prsents pour les nuances 316L et 254SMO entre -1,5 et +0,5 V/ECS sur la figure 49.
0

-50

100

3 jours (Ecorr = -200 mV/ECS) 3 mois (Ecorr = +399 mV/ECS)

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j (a.cm )

-2

-2

-100

-j (A.cm )
3 jours (Ecorr = -200 mV/ECS) 3 mois (en bcher, Ecorr = +399 mV/ECS)
-1,0 -0,5 0,0 0,5

10

-150

-200

-1,5

E (V/ECS)

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

E (V/ECS)

a- Acier 316L (linaire)

0

b- Acier 316L (semi-log)

30 minutes (Ecorr = -170 mV/ECS) 3 mois (Ecorr = +340 mV/ECS)

-50

100

j (A.cm )

-100

-j (A.cm )
-2

-2

10

-150

30 minutes (Ecorr = -170 mV/ECS) 3 mois (Ecorr = +340 mV/ECS)

-200 -1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

E (V/ECS)

E (V/ECS)

c- Acier 254SMO (linaire)

d- Acier 254SMO (semi-log)

Figure 49 : courbes de polarisation cathodique ralises quasi in situ sur des chantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi, diffrents temps dimmersion, avant et aprs augmentation de Ecorr (vitesse de balayage : 5 mV/s, chelles linaire et semi-logarithmique).

Sur le site de Choisy-le-Roi, la rduction de loxygne se fait sur lchantillon tmoin (avant augmentation de Ecorr) des potentiels infrieurs -0,3 V/ECS. La densit de courant maximale de la rduction de O2, sur le palier limite de diffusion, est denviron 59 A.cm-2 sur les deux nuances (figures 49b et d). En revanche, sur lchantillon immerg depuis 3 mois, le courant cathodique augmente (en valeur absolue) proximit de Ecorr, des surtensions cathodiques trs faibles. La densit de courant est dj de 9,5 A.cm-2 +300 mV/ECS, alors quil faut atteindre un potentiel aussi faible que -400 mV/ECS pour obtenir cette valeur de densit de courant sur lchantillon tmoin. Un premier maximum local de |j| est effectivement obtenu entre -460 et -380

113

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle mV/ECS. Ce maximum semble correspondre une nouvelle rduction, la rduction dun oxydant qui ntait pas prsent aprs seulement 30 minutes dimmersion. Cet oxydant est limit par la diffusion, il est prsent ltat dissous dans llectrolyte proximit de la surface. La rduction de loxygne dissous est ensuite retrouve aux potentiels infrieurs 0,5 V/ECS, atteignant un maximum sur le palier de diffusion -0,75 V/ECS. Ce maximum est assez proche (quoique lgrement plus faible, cf. tableau 14) de la densit de courant maximale de la rduction de O2 sur les chantillons tmoins. Au cours de limmersion, une nouvelle rduction est apparue entre Ecorr et 0,5 V/ECS. Ces courbes de polarisation cathodique peuvent expliquer laugmentation du potentiel de corrosion libre : une nouvelle espce oxydante est prsente en solution proximit de la surface mtallique (trs probablement synthtise par le biofilm en son sein) et est rduite une faible surtension cathodique (plus faible que la surtension de la rduction de loxygne), ce qui implique une augmentation du courant cathodique (en valeur absolue) de faibles surtensions cathodiques entranant une augmentation du potentiel de corrosion libre. Les rsultats sont identiques sur les deux nuances et peuvent tre tendus lacier 304L. La composition chimique de lacier inoxydable ne modifie pas lvolution du courant cathodique au cours de limmersion.
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Les six courbes de polarisation cathodique traces en bcher sur le site de Flins (protocole quasi in situ ) sont visibles sur la figure 50.
0
100

-50
10

-100

-j (A.cm )
-2

j (a.cm )

-2

-150

-200

0,1

-250

-300

30 minutes (Ecorr = -168 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +370 mV/ECS)

0,01

30 minutes (Ecorr = -168 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +370 mV/ECS)

-1,0 -0,5 0,0 0,5

1E-3 -1,5

-350 -1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Acier 304L (linaire)

0 -50
100

b- Acier 304L (semi-log)

30 minutes (Ecorr = -161 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +214 mV/ECS)

-100

j (a.cm )

-2

-150

10

-200

-j (A.cm )
-2

-250

-300

30 minutes (Ecorr = -161 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +214 mV/ECS)

0,1

-350 -1,0 -0,5 0,0

0,01 -1,0 -0,5 0,0

E (V/ECS)

E (V/ECS)

c- Acier 316L (linaire)

d- Acier 316L (semi-log)

114

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

0

30 minutes (Ecorr = -155 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +355 mV/ECS)

100

-50

-100
10

j (a.cm )
-2

-150

-200

-j (A.cm )
-2

-250

-300

30 minutes (Ecorr = -155 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = +355 mV/ECS)

0,1

-350 -1,0 -0,5 0,0

0,01 -1,0 -0,5 0,0

E (V/ECS)

E (V/ECS)

e- Acier 254SMO (linaire)

f- Acier 254SMO (semi-log)

Figure 50 : courbes de polarisation cathodique ralises sur des chantillons dacier inoxydable prlevs deux temps dimmersion diffrents (avant et aprs augmentation de Ecorr) dans la Seine sur le site de Flins et immergs dans un bcher contenant leau du site (vitesse de balayage : 5 mV/s, chelles linaire et semi-logarithmique, faux in situ )

Les trois courbes traces 30 minutes aprs immersion ressemblent aux courbes de polarisation cathodique tmoins du site de Choisy-le-Roi : la densit de courant cathodique reste trs faible depuis Ecorr jusqu -0,3 V/ECS, puis la rduction de loxygne (et des oxydes du film passif) apparat. Le palier de diffusion de loxygne se situe entre -1 et -0,6 V/ECS. La rduction de leau a lieu aux potentiels infrieurs -1 V/ECS. En revanche, la densit de courant cathodique augmente (en valeur absolue) des potentiels plus levs lorsque les chantillons ont t immergs pendant 9 mois et ont un potentiel de corrosion libre suprieur +200 mV/ECS. La densit de courant cathodique est dj importante des potentiels cathodiques faibles, proches de Ecorr. Par exemple, la valeur de -10 A.cm-2 nest atteinte qu -370 mV/ECS sur un chantillon dacier 304L immerg depuis 30 minutes, alors quelle est dj atteinte 15 mV/ECS pour un chantillon dacier 304L immerg depuis 9 mois. Le courant cathodique slve des potentiels plus positifs lorsque le temps dimmersion augmente, ce qui pourrait correspondre une diminution de la surtension de la rduction de O2. Une telle acclration de la cintique de rduction de loxygne durant limmersion aurait pour consquence directe une augmentation du potentiel dabandon. Comme sur le site de Choisy-le-Roi, llvation de |j| des valeurs de potentiel leves peut aussi correspondre la rduction dun nouvel oxydant synthtis dans le biofilm au cours de limmersion. La densit de courant du palier de diffusion de loxygne ne varie pas de faon significative avec le temps dimmersion, ce qui indique que la concentration en oxygne dissous proximit de la surface ne varie pas au cours de limmersion. Le biofilm ne limite pas lapport doxygne par diffusion vers la surface. Les densits de courant cathodique du palier de diffusion de O2 des diffrentes expriences sont donnes dans le tableau 14. Site Nuance dacier inoxydable Ecorr (mV) Avant augmentation de Ecorr (A/cm2) Aprs augmentation de Ecorr (A/cm2) Choisy-le-Roi 316L 599 - 59 - 50 254SMO 510 -59 -47 304L 538 -67 -76 Flins 316L 375 -80 -82 254SMO 510 -74 -99

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Tableau 14 : valeurs de la densit de courant cathodique sur le plateau de diffusion de O2 pour des chantillons dacier inoxydables immergs dans leau de Seine, avant et aprs augmentation de Ecorr

115

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

Ainsi, sur le site de Flins, laugmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables parait tre due soit une augmentation de la cintique de rduction de loxygne dissous, se traduisant par une diminution de la surtension cathodique de cette raction, soit la synthse dun nouvel oxydant par les microorganismes du biofilm au cours de limmersion. Sur le site de Choisy-le-Roi, la cintique de la rduction de loxygne nvolue pas de faon significative, en revanche il semble quune nouvelle espce oxydante prsente proximit de la surface mtallique soit rduite de faibles surtensions cathodiques, des potentiels plus levs que loxygne. Ce nouveau compos est probablement synthtis lintrieur mme du biofilm. 4.1.2.2 Synthse : volution du comportement cathodique au cours de limmersion
Amplification des ractions cathodiques : La densit de courant cathodique volue au cours du temps sur les deux sites considrs. Dans les deux cas, elle slve en valeur absolue des potentiels plus levs aprs un long temps de sjour dans leau de Seine quaprs quelques minutes dimmersion. Influence du lieu dexposition : Sur lun des sites (Choisy-le-Roi), une nouvelle rduction apparat partir dune surtension cathodique largement infrieure (en valeur absolue) la surtension de la rduction de loxygne. Une nouvelle espce oxydante prsente proximit de la surface est rduite entre 0,45 V/ECS et Ecorr. La cintique de rduction de loxygne nest pas modifie. Laugmentation du potentiel de corrosion libre peut sexpliquer sur le site de Choisy-le-Roi par la synthse dans le biofilm dun oxydant puissant apport la surface par diffusion et rduit des potentiels plus levs que loxygne.

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Sur lautre site (Flins), llvation du courant cathodique des potentiels levs peut correspondre soit une volution temporelle de la cintique de rduction de loxygne dissous, soit la rduction dun nouvel oxydant. Aucune vague de rduction nouvelle ntant dtecte, cet oxydant serait ncessairement en contact direct avec llectrode. Dans les deux cas, la hausse de la densit de courant de faibles surtensions cathodiques (potentiels lgrement infrieurs Ecorr) entrane laccroissement du potentiel dabandon.

4.1.3

Evolution du comportement anodique au cours du temps

Laugmentation du potentiel de corrosion libre en eau de rivire naturelle a t dmontre. Cette hausse de Ecorr est un danger rel si le potentiel dabandon dpasse la valeur du potentiel de piqre Epiq. En effet, des piqres de corrosion peuvent alors se former et dgrader lchantillon dacier inoxydable. Pour analyser le risque engendr par une immersion en eau de rivire naturelle, lvolution du potentiel de piqre au cours du temps doit tre connue. Pour cela, des courbes de polarisation anodique et des chronopotentiomtries galvanostatiques 10 A.cm-2 sont traces avant et aprs augmentation de Ecorr, sur les sites de Choisy-le-Roi et de Flins. Comme pour les courbes de polarisation cathodique, les expriences sont ralises selon le protocole qualifi de quasi in situ . 116

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle 4.1.3.1 Courbes de polarisation anodique Le trac dun balayage aller-retour en potentiel du ct des potentiels anodiques (depuis Ecorr jusqu 1,5 V/ECS, puis retour Ecorr) sur un chantillon dacier 304L immerg depuis 1 jour dans leau de Seine sur le site de Choisy est visible sur la figure 51. Labsence de boucle hystrsis caractristique de la corrosion par piqres est trs nette. Aucune corrosion par piqres ne se dveloppe sur lchantillon dacier 304L, ce qui est due la faible teneur en ions chlorures (environ 20 mg/L). Certains ions prsents dans le milieu naturel peuvent par ailleurs jouer le rle dinhibiteur de corrosion et empcher lamorage des piqres (prsence de SO42 une concentration de 31 mg/L et de NO3- une concentration de 25 mg/L). La nuance 304L est celle qui prsente la rsistance la corrosion par piqres la plus faible, et le trac des courbes de polarisation anodique des autres nuances indique quelles ne subissent pas non plus de corrosion par piqres. Leau de rivire naturelle est donc tellement peu charge en ions agressifs (Cl-) et tellement charge en ions inhibiteurs que la corrosion par piqres ne peut affecter aucune des nuances dacier inoxydable choisies, dans les conditions exprimentales de cette tude. La densit de courant augmente partir de +100 mV/ECS et prend une valeur denviron 0,8 A.cm-2 entre +400 et +900 mV/ECS. Ce courant anodique, qui ne correspond ni de la corrosion par piqres ni loxydation de leau (potentiels trop faibles), est ncessairement d une (ou des) oxydation(s) se produisant au niveau de la couche doxydes (ou ventuellement dans le biofilm). Dans cet intervalle de potentiels, le courant est le plus souvent attribu loxydation du fer(II) en fer(III) et/ou du chrome(III) en chrome(VI) dans la couche passive. Aux potentiels suprieurs 1 V/ECS, la raction doxydation prpondrante est loxydation de leau produisant un dgagement gazeux de dioxygne.
5

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100

1 jour (Ecorr = -105 mV/ECS)

4

1 jour (Ecorr = -105 mV/ECS)

10

j (A.cm )

j (A.cm )
-2

-2

0,1
0 -0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

-0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Coordonnes linaires

b- Coordonnes semi-logarithmiques

Figure 51 : courbe de polarisation anodique acquise selon le protocole quasi in situ sur un chantillon dacier 304L immerg depuis 1 jour dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi (vitesse de balayage : 0,15 mV/s, chelles linaire et semi-logarithmique)

Des courbes de polarisation anodique (depuis Ecorr jusqu 1,5 V/ECS) ralises Choisy-leRoi sur des chantillons dacier inoxydable 304L sont traces sur la figure 52. Les mesures sont faites deux temps dimmersion diffrents (1 jour et 48 jours), dates se situant avant et aprs laugmentation du potentiel de corrosion libre. Le courant anodique sur lacier inoxydable 304L varie peu au cours de limmersion. Entre 0,4 et 0,9 V/ECS, le courant anodique est lgrement plus lev aprs 48 jours dimmersion quaprs 1 jour de contact avec leau de rivire naturelle. Le courant passif +700 mV/ECS est de 2,8 A.cm-2 48 jours, alors quil nest que de 0,8 A.cm-2 aprs 1 jour. Loxydation des lments rducteurs (fer(II) et/ou chrome(III)) contenus dans le film passif parait plus quantitative en fin dimmersion. Ceci incite penser que la couche doxydes formant le film 117

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle passif volue (faiblement durant limmersion). Trs vraisemblablement, lune des deux oxydations (fer(II) en fer(III), chrome(III) en chrome(VI)) est majoritaire, et lvolution de la composition chimique du film passif au contact de leau de rivire naturelle va dans le sens dune augmentation de la quantit en lment oxyd majoritairement (et par consquent dune diminution de lautre lment). La teneur de cet lment augmentant dans la couche passive, le courant de son oxydation augmente. Daprs les rsultats obtenus en XPS (cf. 4.4), le film passif de lacier 304L senrichit en chrome au cours de limmersion dans le milieu eau de rivire naturelle . Loxydation majoritaire semble par consquent tre celle du chrome(III) en chrome(VI). Sur le site de Choisy-le-Roi, lvolution de la composition chimique du film passif au contact de leau de rivire naturelle a pour consquence une lgre augmentation du courant anodique aux potentiels lgrement suprieurs au potentiel de corrosion libre (entre +400 et +900 mV/ECS). La surtension anodique partir de laquelle se produit le dgagement gazeux de dioxygne ne semble pas voluer avec le temps dimmersion (figure 52b). Elle reste comprise entre 0,9 et 1 V/ECS. En revanche, le courant anodique augmente beaucoup plus vite une fois cette valeur de potentiel franchie : en effet, aux potentiels suprieurs 1 V/ECS, la pente de la courbe intensit-potentiel est plus leve aprs 48 jours dimmersion quaprs 1 seul jour de contact avec leau de rivire naturelle. La ractivit de la surface vis--vis de loxydation de leau et du dgagement gazeux de O2 semble augmenter avec le temps dimmersion.
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6

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100

1 jour (Ecorr = -105 mV/ECS) 48 jours (Ecorr = 98 mV/ECS)

10

1 jour (Ecorr = -105 mV/ECS) 48 jours (Ecorr = 98 mV/ECS)

j (A.cm )
-2

j (A.cm )
-2

0,1 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Acier 304L (coordonnes linaires)

b- Acier 304L (coordonnes semi-log)

Figure 52 : courbe de polarisation anodique dun chantillon dacier 304L immerg dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi, deux temps dimmersion diffrents, avant et aprs augmentation de Ecorr (vitesse de balayage : 0,15 mV/s, chelles linaire et semi-logarithmique, protocole quasi in situ )

Des mesures similaires sont ralises sur des chantillons dacier inoxydable 304L et 254SMO immergs dans leau de Seine sur le site de Flins. Les rsultats sont indiqus sur la figure 53. Ils sont identiques pour les deux nuances dacier inoxydable. La composition chimique ne semble pas avoir dinfluence sur le comportement anodique. Le courant anodique pour des potentiels compris entre 0,6 et 1,1 V/ECS est lgrement plus lev aprs 9 mois dimmersion quaprs 30 minutes de contact avec leau de rivire naturelle. Ce courant anodique est li loxydation du fer(II) en fer(III) et/ou loxydation du chrome(III) en chrome(VI). Lvolution de la couche doxydes durant limmersion sur le site de Flins se fait au bnfice de llment oxyd majoritairement (et par consquent au dtriment de llment oxyd minoritairement), quelle que soit la nuance considre. Dans le paragraphe 4.4, les analyses XPS indiquent des diffrences de composition chimique entre le film passif de lacier 304L et celui de lacier 254SMO. La couche doxydes forme en eau de rivire naturelle sur la nuance 304L est enrichie en chrome (par rapport un chantillon tmoin immerg en eau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl), alors que la couche doxydes 118

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle forme sur la nuance 254SMO est fortement enrichie en fer. Malgr ces diffrentes volutions des couches passives, le courant anodique entre 0,6 et 1,1 V/ECS varie dans le mme sens au cours de limmersion. Sur le site de Flins, lvolution de la composition chimique du film passif au contact de leau de rivire naturelle a pour consquence une lgre augmentation du courant anodique aux potentiels suprieurs au potentiel de corrosion libre (entre +600 et +1100 mV/ECS), quelle que soit la nuance considre. La surtension anodique ncessaire la production doxygne nvolue pas significativement au cours du temps. Elle reste comprise entre +0,95 et +1,1 V/ECS. En revanche, aux potentiels suprieurs 1,1 V/ECS, la pente de la courbe est plus faible aprs un long temps dimmersion (9 mois) que sur lchantillon immerg pendant 30 minutes. La ractivit de la surface vis--vis de loxydation de leau et du dgagement gazeux de O2 semble diminuer au cours de limmersion, pour les deux nuances testes. Cette ractivit dpend de la composition chimique de lextrme surface du film passif, qui volue lors de limmersion dans leau de Seine.
700

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600
100

500

j (A.cm )

300

j (A.cm )
-2

-2

400

30 minutes (Ecorr = -123 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 344 mV/ECS)

10

200

100
1

30 minutes (Ecorr = -123 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 344 mV/ECS)

0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

1,8

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Acier 304L (coordonnes linaires)

600

b- Acier 304L (coordonnes semi-log)

500

400

30 minutes (Ecorr = -156 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 336 mV/ECS)

j (A.cm )
-2

100

j (A.cm )
-2

300

10

200

100
1

30 minutes (Ecorr = -156 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 336 mV/ECS)

0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8

E (V/ECS)

E (V/ECS)

c- Acier 254SMO (coordonnes linaires)

d- Acier 254SMO (coordonnes semi-log)

Figure 53 : courbe de polarisation anodique dchantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine sur le site de Flins, deux temps dimmersion diffrents, avant et aprs augmentation de Ecorr (vitesse de balayage : 5 mV/s, chelles linaire et semi-logarithmique, protocole quasi in situ )

Les rsultats obtenus par polarisation anodique ne sont pas parfaitement identiques dun site lautre. Dans les deux cas, la densit de courant augmente faiblement durant limmersion pour des potentiels compris grosso modo entre 0,5 et 1 V/ECS. Dans cette gamme de potentiels, le courant anodique est gnr par loxydation du fer(II) en fer(III) et/ou par loxydation du chrome(III) en chrome(VI). Lvolution des couches passives des diffrents aciers inoxydables au contact de leau de rivire naturelle gnre le mme courant doxydation des espces rductrices du film passif (fer(II) et chrome(III)) durant un balayage en potentiel. En revanche, la ractivit de surface vis--vis de loxydation de leau en oxygne ne varie pas de la mme faon au cours de limmersion sur les deux sites. 119

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Sur les deux sites dimmersion, le comportement anodique ne varie que trs peu durant lexposition des chantillons dacier inoxydable au milieu eau de rivire naturelle . 4.1.3.2 Chronopotentiomtrie galvanostatique Cette mthode, dveloppe par Frangini et al. [233-235], est employe uniquement sur le site de Flins. Elle consiste mesurer lvolution du potentiel au cours du temps lorsque lchantillon est soumis une polarisation galvanostatique de 10 A.cm-2. Les rsultats obtenus sur les trois nuances dacier inoxydable, soit aprs 30 minutes, soit aprs 9 mois dimmersion dans leau de Seine du site de Flins, sont donns sur la figure 54. Ils sont identiques pour les trois nuances dacier inoxydable et confirment que la corrosion par piqre ne peut pas se dvelopper dans les conditions exprimentales du milieu naturel. Pour lchantillon immerg depuis 30 minutes, le potentiel augmente rapidement jusqu atteindre 1,1 V/ECS aprs environ 5 minutes. Cette valeur correspond la surtension ncessaire la production doxygne sur le matriau. Pour lchantillon immerg depuis 9 mois, laugmentation du potentiel est plus lente entre 0,6 et 0,9 V/ECS. Linflexion de la courbe aux alentours de +750 mV/ECS indique quune oxydation se produit. Cette oxydation correspond loxydation du fer(II) en fer(III) et/ou loxydation du chrome(II) en chrome(III). Puis le potentiel atteint une valeur stationnaire denviron 1 V/ECS partir de laquelle a lieu le dgagement de dioxygne sur le matriau. Cette technique complmentaire permet de mettre en perspective les rsultats obtenus par polarisation potentiodynamique sur le site de Flins. Les courbes de polarisation anodique ne montrent pas de relle volution du potentiel de la production doxygne, alors que la mthode galvanostatique indique que ce potentiel diminue avec le temps dimmersion. De plus, la mthode galvanostatique rvle une diffrence au niveau de loxydation du fer(II) et/ou du chrome(III) entre les deux types dchantillons : les courbes traces 30 minutes ne prsentent pas dinflexion entre 0,6 et 0,9 V/ECS, ce qui veut dire que loxydation du fer(II) et/ou du chrome(III) est ngligeable en dbut dimmersion, alors quelle devient quantitative aprs 9 mois de contact avec leau de rivire naturelle. Ce rsultat accentue linterprtation des courbes de polarisation anodique, sur lesquelles le courant doxydation entre 0,6 et 1 V/ECS diffre lgrement 30 minutes et 3 mois. Les rsultats acquis par cette mthode stationnaire et les rsultats obtenus par le balayage potentiodynamique 5 mV/s sont complmentaires. Cette vitesse de balayage rapide a t choisie notamment pour viter des perturbations dues des volutions de la couche passive, mais elle ne permet pas de mesurer des courants stationnaires. La mthode galvanostatique, qui nutilise pas de balayage, permet de suivre les volutions du film passif. Il semble que sur le site de Flins, la surtension du dgagement gazeux de O2 diminue lgrement avec le temps dimmersion, ce qui est mis en vidence par les expriences de chronopotentiomtrie mais pas par les balayages en potentiel vers les valeurs anodiques. Il semble aussi que loxydation des lments rducteurs du film passif (fer(II), chrome(III), autres espces rductrices ventuellement dposs ou biodposs) devienne plus quantitative au fur et mesure de limmersion, ce qui est dmontr par les deux techniques.

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120

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

1,2
1,2

1,0

1,0

0,8

0,8

E (V/ECS)

E (V/ECS)

0,6

0,6

0,4

30 minutes (Ecorr = -168 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 237 mV/ECS)

0,4

0,2

0,2

30 minutes (Ecorr = -168 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 293 mV/ECS)

0,0 0 5 10 15 20

0,0 0 5 10 15 20

temps (minutes)

temps (minutes)

a- Acier 304L
1,2 1,0

b- Acier 316L

0,8

E (V/ECS)

0,6

0,4

0,2

30 minutes (Ecorr = -167 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 357 mV/ECS)

0 5 10 15 20

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

0,0

temps (minutes)

Figure 54 : chronopotentiomtrie 10 A.cm-2 dchantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine sur le site de Flins, deux temps dimmersion diffrents, avant et aprs augmentation de Ecorr

c- Acier 254SMO

4.1.3.3 Synthse
Absence de corrosion par piqres pour le type dchantillons utilis Leau de rivire naturelle considre contient suffisamment peu dions chlorures agressifs et une quantit suffisante dions inhibiteurs (nitrates, sulfates) pour empcher lapparition de la corrosion par piqres. Aucun chantillon immerg dans leau de Seine ne prsente de piqre de corrosion, et les courbes intensit-potentiel ct anodique (ainsi que les chronopotentiomtries galvanostatiques 10 A.cm-2) montrent que, mme des potentiels levs, aucune piqre de corrosion ne se forme. Pour le type dchantillons utilis, le risque de dveloppement de corrosion par piqres est donc quasiment nul dans les conditions exprimentales de cette tude, et ce mme lorsque le potentiel de corrosion libre des chantillons augmente. Toutefois, pour des chantillons prsentant des prparations de surface et/ou des gomtries diffrentes, un dveloppement de corrosion localise (par effet de crevasse par exemple) est toujours possible. Laugmentation du potentiel de corrosion libre reprsente alors une augmentation relle du risque de corrosion localise. Evolution du courant anodique au cours de limmersion : Les manipulations effectues sur la nuance 304L au niveau du site de Choisy-le-Roi montrent que la couche passive volue au contact de leau de rivire naturelle. La ractivit de la surface vis--vis du dgagement gazeux de O2 augmente lgrement avec le temps dimmersion. De plus, les espces du film passif susceptibles dtre oxydes (majoritairement le fer(II) et le chrome(III)) ont une stoechiomtrie qui varie au cours de limmersion. Le courant doxydation de ces espces (entre 0,4 et 1 V/ECS) est plutt plus important aprs 48 jours dimmersion quaprs 1 jour. Lvolution de la composition chimique du film passif

121

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle semble se faire au bnfice de lespce dont loxydation est majoritaire dans cette gamme de potentiels. Cette lvation du courant anodique parait dans tous les cas trs faible. Les rsultats obtenus sur les trois nuances dacier inoxydable au niveau du site de Flins montrent que le temps dimmersion na quune trs lgre influence sur le courant anodique. Leffet de limmersion sur la ractivit de surface vis--vis de loxydation de leau en oxygne semble diffrer dun site lautre : cette ractivit augmente au cours du temps Choisy-le-Roi mais diminue Flins. Toutefois, dans les deux cas, cette volution reste faible. Les courbes de polarisation anodique et les chronopotentiomtries galvanostatiques mettent en vidence le mme phnomne qu Choisy-le-Roi. Elles tendent montrer quaprs 9 mois dimmersion sur le site de Flins, la quantit de matire des espces rductrices (potentiellement oxydables) du film passif (et des ventuels dpts de surface pouvant tre oxyds) soit un peu plus importante quaprs 30 minutes. Ceci provient soit de lvolution de la composition chimique de la couche passive (au bnfice de lespce dont loxydation est majoritaire entre 0,6 et 0,9 V/ECS), soit du dpt dune espce rductrice sur la surface des chantillons (assez peu probable, les dpts tant gnralement des oxydes). Les trois nuances ont un comportement anodique identique, la composition de lalliage ne modifie pas lvolution du courant passif dans leau de rivire naturelle.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Laugmentation de Ecorr est due principalement lvolution des ractions cathodiques. Pour conclure, lvolution du courant anodique sur un chantillon dacier inoxydable en contact avec une eau de rivire naturelle peut tre significative mais est faible en valeur absolue. Le courant varie trs peu entre une mesure effectue avant et une mesure effectue aprs laugmentation de Ecorr. Les lgres variations du comportement anodique, en particulier les variations du courant doxydation du fer(II) et/ou du chrome(III) et de la ractivit de la surface par rapport loxydation de leau en oxygne, sont probablement dues lvolution de la couche passive au contact de leau de rivire naturelle. Les analyses XPS permettront de connatre cette volution.

Toutefois, lvolution du courant anodique est trop faible pour pouvoir entraner une variation significative du potentiel de corrosion libre. La cause principale de laugmentation de Ecorr est donc lvolution du courant cathodique.
4.1.4 Impdance lectrochimique en eau de rivire naturelle

Des mesures dimpdance lectrochimique sont effectues sur les trois sites (Choisy-le-Roi, Flins et Poses-Amfreville) pour caractriser les interfaces du systme mtal/film passif/biofilm/lectrolyte en eau de rivire naturelle. Comme pour les autres mesures dynamiques, ces expriences sont ralises selon le protocole quasi in situ avant et aprs augmentation du potentiel de corrosion libre. Les mesures dimpdance sur les sites de Choisy-le Roi et de Flins sont visibles respectivement sur les figures 55 et 56. Les chantillons du site de Poses-Amfreville sont utiliss dune manire diffrente mais servent aussi tudier leffet du biofilm sur limpdance du systme lectrochimique. Ils sont prlevs dans leau de Seine du site de Poses puis rintroduits en bcher dans cette mme eau. Une mesure dimpdance est alors effectue (jusquici, le mode opratoire est conforme au protocole quasi in situ ). Le biofilm des chantillons est ensuite dcroch mcaniquement par couvillonnage, puis une mesure dimpdance est ralise. La comparaison des diagrammes dimpdance en la 122

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle prsence et en labsence du biofilm peut donner des indications sur la contribution du biofilm limpdance des chantillons (figure 57). 4.1.4.1 Influence du lieu dexposition Les diagrammes de Nyquist des trois nuances dacier inoxydable sur le site de Choisy-le-Roi indiquent que limpdance varie peu durant limmersion. Les autres reprsentations graphiques des donnes exprimentales, non reprsentes ici, nindiquent pas non plus dvolution de limpdance. Le contact avec leau de rivire naturelle na pas deffet majeur sur limpdance. La capacit et la rsistance du film passif nvoluent pas significativement.
1,2x10
6

1,2x10

3 jours (Ecorr = -55 mV/ECS 23 jours (Ecorr = 271 mV/ECS 23 jours chantillon n2 (Ecorr = 167 mV/ECS)

1,0x10

1,0x10

8,0x10

8,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

-Im(Z) (ohm.cm )

6,0x10

6,0x10

10 mHz

10 mHz

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

4,0x10

4,0x10

2,0x10

3 jours (Ecorr = -200 mV/ECS) 23 jours (Ecorr = 161 mV/ECS) 48 jours (Ecorr = 98 mV/ECS) Re(Z) (ohm.cm )
0,0 2,0x10
5

2,0x10

0,0
2

0,0
6

2,0x10

4,0x10

6,0x10

8,0x10
2

1,0x10

1,2x10

0,0 4,0x10
5

6,0x10

8,0x10

1,0x10

1,2x10

Re(Z) (ohm.cm )

a- Acier 304L
1,2x10
6

b- Acier 316L

1,0x10

8,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

6,0x10

10 mHz

4,0x10

2,0x10

3 jours (Ecorr = -106 mV/ECS) 23 jours (Ecorr = 252 mV/ECS) 48 jours (Ecorr = 254 mV/ECS) Re(Z) (ohm.cm )
0,0 2,0x10
5

0,0 4,0x10
5

6,0x10

8,0x10

1,0x10

1,2x10

c- Acier 254SMO
Figure 55 : diagrammes dimpdance lectrochimique obtenus quasi in situ sur des chantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi, diffrents temps dimmersion, avant et aprs augmentation de Ecorr (avec correction de la chute ohmique)

Sur le site de Flins, la comparaison des diagrammes de Nyquist tracs aprs 30 minutes ou 3 mois dimmersion montre que limpdance augmente avec le temps dimmersion. Il a t prouv auparavant que les chantillons ne peuvent pas subir de la corrosion par piqres. Il semble ici que dans ce milieu naturel peu charg en ions chlorures, lvolution de la couche doxydes amliore lgrement sa passivit. La rsistance du film passif a sensiblement augment aprs 9 mois dimmersion. Ceci peut aussi tre visualis sur le diagramme de Bode en module reprsent en figure 56b pour lchantillon dacier 304L. Laugmentation du module de limpdance traduit laugmentation de la rsistance de la couche passive.

123

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

30 minutes (E corr = -168 mV/ECS) 9 mois (E corr = 237 mV/ECS)
5x10
5

5
4x10
5

-Im(Z) (ohm.cm )

4
3x10

4 mHz

log |Z|

2x10

2
1x10
5

30 minutes (Ecorr = -168 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 237 mV/ECS)

-3 -2 -1 0 1 2 3

1
0 0 1x10
5

2x10

3x10

4x10
2

5x10

log (frquence)

Re(Z) (ohm.cm )

a- Acier 304L (Nyquist)

5x10
5

b- Acier 304L (Bode en module)

5x10
5

4x10

4x10

-Im(Z) (ohm.cm )

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

3x10

-Im(Z) (ohm.cm )

6,5 mHz

3x10

10 mHz

2x10

2x10

1x10
1x10
5

30 minutes (Ecorr = -162 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 282 mV/ECS)

0 0 1x10
5

30 minutes (Ecorr = -159 mV/ECS) 9 mois (Ecorr = 366 mV/ECS)

0 1x10
5

0 2x10
5

3x10

4x10
2

5x10

2x10

3x10

4x10
2

5x10

Re(Z) (ohm.cm )

Re(Z) (ohm.cm )

c- Acier 316L

d- Acier 254SMO

Figure 56 : diagrammes dimpdance lectrochimique obtenus quasi in situ sur des chantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine sur le site de Flins, diffrents temps dimmersion, avant et aprs augmentation de Ecorr (avec correction de la chute ohmique)

4.1.4.2 Influence du biofilm sur limpdance lectrochimique Daprs les diagrammes de Nyquist tracs sur les trois nuances dacier inoxydable immerges dans leau de Seine du site de Poses-Amfreville, la prsence du biofilm a une influence ngligeable sur les valeurs dimpdance : les boucles capacitives sont peu prs confondues avec et sans biofilm. Le dcrochage du biofilm par couvillonnage naffecte pas limpdance du systme lectrochimique. Le biofilm, qui par son mtabolisme gnre une forte augmentation du potentiel de corrosion libre (prouve sur les trois sites) et est capable de modifier le courant cathodique (dmontr sur les sites de Choisy-le-Roi et Flins), ne semble pas modifier significativement limpdance lectrochimique des chantillons, donc les caractristiques lectriques du film passif (capacit et rsistance).

124

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

6

1,5x10

Sans biofilm (Ecorr = -106 mV/ECS) Avec biofilm (Ecorr = 30 mV/ECS)

4 mHz

3,0x10

2 mHz
2,5x10
6

1,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

2,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

6 mHz
5,0x10
5

1,5x10

1,0x10

4 mHz
5,0x10
5

Sans biofilm (Ecorr = 50 mV/ECS) Avec biofilm (Ecorr = 267 mV/ECS)

0,0 5,0x10
5

0,0 0,0 5,0x10

5

0,0

1,0x10
2

1,5x10

1,0x10

1,5x10

2,0x10
2

2,5x10

3,0x10

Re(Z) (ohm.cm )

Re(Z) (ohm.cm )

a- Acier 304L

b- Acier 316L

Figure 57 : diagrammes dimpdance lectrochimique dchantillons dacier inoxydable prlevs dans la Seine sur le site de Poses-Amfreville et rimmergs en laboratoire dans leau du site, avec effet dun dcrochage mcanique du biofilm par couvillonnage (avec correction de la chute ohmique)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

4.1.4.3 Synthse Le biofilm peut gnrer certaines modifications lectrochimiques sur les chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle : augmentation du potentiel de corrosion libre (systmatique sur les trois sites), modification du courant cathodique (par formation dun nouvel oxydant rduit des potentiels relativement levs sur le site de Choisy-le-Roi, par catalyse de la rduction de O2 ou par formation dun nouvel oxydant en contact direct avec la surface et rduit des potentiels relativement levs sur le site de Flins), modification de la ractivit de la surface vis--vis du dgagement doxygne, modification du courant anodique entre 0,5 et 1 V/ECS (oxydation du fer(II) et/ou du chrome(III)). Toutefois, le biofilm ne semble pas affecter significativement limpdance lectrochimique des aciers inoxydables. La seule volution de limpdance au cours de limmersion correspond une lgre amlioration de la passivit de la couche doxydes, visualise par une augmentation de la rsistance lectrique de la couche passive.
4.1.5 Synthse : mesures lectrochimiques Evolution de Ecorr en eau de rivire naturelle : Tout chantillon dacier inoxydable immerg dans une eau de rivire naturelle voit son potentiel de corrosion libre augmenter au cours du temps. La valeur la plus leve est gnralement comprise entre +100 et +400 mV/ECS et atteinte au maximum 26 jours aprs immersion dans les conditions exprimentales de ce travail. La composition de lacier inoxydable na pas dinfluence sur llvation de son potentiel dabandon. De plus, ce phnomne daugmentation de Ecorr ne concerne pas que les aciers inoxydables, dautres matriaux y sont aussi sujet (le platine par exemple). Le temps de latence avant augmentation de Ecorr dpend des conditions exprimentales, et en particulier de la temprature de leau de rivire naturelle. La hausse du potentiel dabandon, dj connue en eau de mer naturelle, est systmatique en eau de rivire naturelle, dans la limite des conditions exprimentes dans cette tude. De nombreux travaux antrieurs ont prouv (par comparaison avec une eau strile) que cette augmentation est due la colonisation de la surface des chantillons par le biofilm.

125

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Evolution des comportements cathodique et anodique : Le dveloppement du biofilm ne provoque pas dvolution significative de limpdance lectrochimique des chantillons, mais entrane des modifications du comportement cathodique et anodique des aciers inoxydables. Les modifications du comportement cathodique et du comportement anodique ne sont pas exactement identiques dun site lautre mais impliquent des volutions de potentiel de corrosion libre comparables. Sur le site de Choisy-le-Roi, laugmentation du potentiel de corrosion libre est due la production et la rduction subsquente dun nouvel oxydant, absent en dbut dimmersion mais prsent en solution proximit de llectrode aprs un temps dimmersion suffisamment long. La rduction de cet oxydant se fait entre -0,45 et 0,2 V/ECS environ. Par ailleurs, une lgre augmentation du courant anodique apparat entre Ecorr et +750 mV/ECS, due lvolution de la couche doxydes au contact de llectrolyte. Sur le site de Flins, laugmentation du potentiel de corrosion libre provient majoritairement de laugmentation du courant cathodique entre -0,3 V/ECS et Ecorr. Cette augmentation du courant faible polarisation cathodique reflte soit une catalyse de la rduction de loxygne dissous, soit la rduction dun nouvel oxydant tant en contact direct avec llectrode (pas de palier de diffusion). Leffet global rsultant est une acclration de la cintique des processus de rduction durant le contact avec leau de rivire naturelle. A cette tape du raisonnement, aucun choix ne peut tre effectu entre les deux hypothses envisages.

Sur les deux sites, laugmentation de Ecorr est majoritairement due lvolution des processus cathodiques au cours de limmersion.
Pluralit des mcanismes : Lvolution du courant cathodique sur les chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle nest pas identique sur les diffrents sites dimmersion considrs. Les mcanismes de laugmentation de Ecorr peuvent mettre en jeu soit une catalyse de la rduction de loxygne, soit la rduction dun nouvel oxydant. Quel que soit le mcanisme impliqu, lvolution du courant cathodique gnre une augmentation similaire du potentiel de corrosion libre. Ainsi, deux hausses comparables de Ecorr pourraient provenir de deux mcanismes diffrents, dans un mme cours deau. La gnralisation des mcanismes est difficile, et chaque site doit tre tudi isolment, en tenant compte de toutes ses spcificits.

4.2 Observations et analyses de surface

Des observations et analyses de surface sont effectues sur les chantillons dacier inoxydable immergs dans leau de rivire naturelle, afin de mieux connatre le biofilm et davancer des hypothses quant au mcanisme de laugmentation du potentiel de corrosion libre.
4.2.1 Observations de surface (MEB)

4.2.1.1 Influence du temps dexposition Des observations sont ralises au microscope lectronique balayage (MEB), afin de visualiser la colonisation de la surface des chantillons par le biofilm. La figure 58 prsente 126

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle des observations ralises sur des coupons dacier inoxydable immergs pendant 3 jours dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi. La colonisation est trs discontinue et peu quantitative (vue globale 58a). Des dpts organiques ont adhr sur la surface. Peu de microorganismes sont prsents ; les microorganismes majoritaires sont les diatomes (58-b et -c), quelques bacilles sont aussi visibles. Aucune diffrence notable nest constate entre les trois nuances dacier inoxydable.

a- 316L (X 1100)
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

b- 316L (X 700)

c- 316L (X 700)

d- 254SMO (X 35100)

Figure 58 : observations de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi pendant 3 jours (MEB)

Les observations de la surface des chantillons dacier inoxydable immergs pendant une dure plus longue (4 mois) dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi sont visibles sur la figure 59. Les trois nuances dacier inoxydable ne rvlent aucune diffrence au niveau de leur colonisation de surface comme de leur aspect visuel. Aprs 4 mois dimmersion, le biofilm ne recouvre toujours pas toute la surface des chantillons (59-a). Discontinu, il recouvre toutefois une surface beaucoup plus importante quaprs 3 jours dimmersion. De nombreuses structures dorigine biologique font partie du biofilm. En particulier, le biofilm comprend de nombreux bacilles (59-b -d), de nombreuses diatomes (59-e et -f) et une grande quantit dexopolymres (59-a par exemple). Ces observations sont conformes au concept actuel de biofilm, qui, loin dtre une couche compacte et continue de microorganismes, est en ralit une matrice de microorganismes et de macromolcules imbriques formant des agglomrats discontinus la surface du support.

127

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

a- 316L (X 2500)

b- 304L (X 6000)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

c- 316L (X 6000)

d- 254SMO (X 7000)

e- 304L (X 4500)

f- 304L (X 1500)

Figure 59 : observations de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi pendant 4 mois (MEB)

4.2.1.2 Influence du lieu dexposition Les observations de surface dchantillons immergs durant 43 jours dans leau de Seine sur le site de Flins sont assez semblables (figure 60). Le biofilm ne recouvre pas la totalit de la surface des chantillons (60-a). Il renferme de nombreux microorganismes ainsi que leurs exopolymres, et rvle une grande diversit et une forte htrognit (60-b). Les microorganismes majoritaires sont les bacilles (60-c et -d) et les diatomes (60-a, -b et -e). Des levures sont aussi observes (60-f). Le biofilm prend une allure localement trs glatineuse , une couche de macromolcules recouvre la surface et mme certains microorganismes (60-c et -d). Les microorganismes semblent ainsi pris dans une gangue polymrique. Les trois nuances dacier inoxydable sont colonises de manire identique.

128

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

a- 304L (X 1800)

b- 304L (X 2000)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

c- 304L (X 7980)

d- 304L (X 18000)

e- 316L (X 3000)

f- 316L (X 4000)

Figure 60 : observations de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Flins pendant 43 jours (MEB)

Les observations de surface sont similaires sur le site de Poses-Amfreville (figure 61). Les surfaces ne sont pas totalement recouvertes par le biofilm, mais le taux du recouvrement de surface par le voile biologique est loin dtre ngligeable (vues globales 61-a, -b et -c). Le biofilm est complexe, fortement htrogne, discontinu. Les microorganismes majoritaires sont les bacilles (61-d) et les diatomes (61-e et -f). Une couche organique semble recouvrir le biofilm : les bacilles de la figure -d sont comme englus sous une gangue polymrique.

a- 304L (X 2500)

b- 316L (X 1000) 129

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

c- 254SMO (X 1100)

d- 316L (X 11000)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

e- 254SMO (X 5000)

f- 254SMO (X 3500)

Figure 61 : observations de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Poses-Amfreville pendant 43 jours (MEB)

4.2.1.3 Synthse Tous les chantillons dacier inoxydable 304L, 316L et 254SMO immergs en eau de rivire naturelle sont recouverts par un biofilm. Les biofilms observs la surface des coupons dacier inoxydable sont semblables sur les trois sites dexposition. Les surfaces sont recouvertes par un ensemble complexe, discontinu et trs htrogne de macromolcules et de microorganismes. Les microorganismes prdominants dans ces biofilms deau de rivire naturelle sont les diatomes et des bacilles bactriens. Quelques levures et coques sont aussi visibles. Un voile de molcules organiques recouvre gnralement la surface de lchantillon et le biofilm. La colonisation de la surface et le dveloppement du biofilm ne sont pas instantans. Aprs 3 jours dimmersion, les surfaces sont trs peu colonises. Le biofilm se forme assez lentement et nest pas continu, mme aprs 43 jours dexposition.
4.2.2 Analyses de surface (MEB/EDS)

Les observations MEB ont permis de visualiser les biofilms dvelopps dans leau de Seine. En complment, les analyses EDS permettent de caractriser la composition chimique lmentaire de la surface des chantillons. Elles sont pratiques sur des chantillons dacier inoxydable immergs pendant 9 mois sur le site de Flins et sur des chantillons immergs pendant 3 mois sur le site de Choisy-le-Roi, et sont plus particulirement intressantes sur les chantillons provenant de Flins, comme cela va tre montr ci-dessous.

130

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle 4.2.2.1 Influence du lieu dexposition
Site de Flins Le spectre dun chantillon tmoin dacier 316L (poli au micron puis immerg pendant 20 heures dans leau de Seine du site de Flins) est donn sur la figure 62. Les lments majoritaires sont le fer, le chrome, le nickel et le molybdne, cest--dire les lments constitutifs du matriau. La composition chimique de lacier inoxydable 316L est retrouve. Par ailleurs, du silicium est aussi dtect, il provient des disques de polissage en carbure de silicium SiC.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Figure 62 : spectre EDS dun chantillon tmoin dacier inoxydable 316L immerg pendant 20 heures dans leau de rivire naturelle du site de Flins (absence de biofilm, Ecorr = -169 mV/ECS)

Des observations MEB couples avec des analyses EDS sont effectues sur des chantillons dacier inoxydable 316L immergs pendant 9 mois dans leau de Seine sur le site de Flins. La surface des chantillons est partiellement recouverte par un biofilm complexe, form dune matrice de macromolcules et de nombreux microorganismes, parmi lesquels les diatomes et les bacilles bactriens semblent prdominants (figure 63). La densit de diatomes est trs leve. Entre les diatomes, les grains de lacier inoxydable sont parfois visibles. -a -b

2 1

Figure 63 : observations MEB de la surface dun chantillon dacier inoxydable 316L immerg dans leau de Seine sur le site de Flins pendant 9 mois (Ecorr = +298 mV/ECS)

Deux spectres EDS locaux sont raliss sur la zone visualise dans la figure 63-b. Le spectre 1 (figure 64-a) est acquis dans la zone de grains sparant les diatomes (note 1); le spectre de lacier inoxydable est retrouv : les lments majoritaires sont le fer, le chrome et le nickel.

131

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Il est noter que les deux pics K (5,414 keV) et K (5,947 keV) du chrome sont visibles, et que laire du pic K est nettement suprieure laire du pic K. Ceci est conforme avec lattribution de ces deux pics aux raies K et K du chrome : lintensit du pic K dun lment (transition lectronique du niveau L au niveau K) est toujours suprieure laire du pic K du mme lment (transition lectronique du niveau M au niveau K). Le chrome est correctement identifi. Le spectre 2 (figure 64b) ralis sur la zone blanche note 2 est trs diffrent du spectre prcdent. En effet, le pic prsent 5,947 keV a une aire largement suprieure celle du pic 5,414 keV : le ratio des intensits de pic sest invers. Ceci ne peut sexpliquer que si le pic 5,947 keV comprend une contribution supplmentaire au K du chrome, contribution qui nest pas prsente sur le spectre 1. Or le pic de la transition K1 du manganse se trouve une nergie de 5,899 keV et est donc trs proche du pic K du chrome. Ainsi, le pic obtenu serait une superposition du pic K1 du manganse et du pic K du chrome. Linversion de pics ne peut a priori pas provenir du manganse inclus dans la matrice mtallique de lchantillon (teneur trs faible). Par consquent, du manganse a vraisemblablement t dpos sur lchantillon au cours des 9 mois dimmersion.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

a- Spectre 1

b- Spectre 2
Figure 64 : spectres EDS locaux raliss un chantillon dacier inoxydable 316L immerg pendant 9 mois dans leau de Seine sur le site de Flins, au niveau des zones notes 1 et 2 sur la figure 63

La cartographie de la figure 65 prsente les rsultats danalyse EDS sur limage de la figure 63. Le silicium dtect provient de la paroi des diatomes. Le chrome et le fer sont dtects dans toutes les zones non recouvertes par les diatomes. Enfin, le manganse est dtect en particulier dans la zone en haut gauche, note 2 sur la figure 63. Les coups attribus au manganse dans la zone 1 de limage peuvent tre en ralit lis une prsence de chrome, en raison de la superposition des pics prcdemment voque. Toutefois, linterprtation du

132

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle spectre 2 prouve que les coups attribus au manganse au niveau de la zone 2 sont bien lis la prsence de manganse.

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Figure 65 : cartographie EDS de la zone visualise sur la figure b dun chantillon dacier inoxydable 316L immerg pendant 9 mois dans leau de Seine sur le site de Flins

Ainsi, les analyses EDS indiquent la prsence de manganse la surface des chantillons dacier 316L immergs pendant 9 mois dans leau de rivire naturelle du site de Flins. La prsence de manganse ne dpend pas de la nuance dacier inoxydable considre. Pour exemple, une image de la surface dun chantillon dacier 254SMO immerg 9 mois dans leau de Seine du site de Flins est donne sur la figure 66, ainsi que le spectre EDS acquis au niveau de la zone marque dun X. Comme sur le spectre 2, laire du pic 5,947 keV est nettement suprieure laire du pic 5,414 keV. Ceci reprsente une inversion des intensits des pics attribus aux raies K et K du chrome par rapport un chantillon tmoin. Comme pour le 316L, ceci sexplique par la superposition du pic K du chrome et du pic K1 du manganse.

Figure 66 : observation MEB de la surface dun chantillon dacier inoxydable 254SMO immerg dans leau de Seine sur le site de Flins pendant 9 mois et spectre local EDS acquis sur la zone marque dun X (Ecorr = +187 mV/ECS)

133

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Les analyses EDS de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Flins montrent que du manganse a t dpos sur la surface des coupons.
Site de Choisy-le-Roi : Des analyses EDS locales sont aussi ralises sur des chantillons dacier inoxydable immergs 3 jours (chantillons tmoins) et sur des chantillons immergs 3 mois dans leau de Seine du site de Choisy-le-Roi. Linversion de lintensit des pics 5,414 keV et 5,947 keV nest pas retrouve. Aucune preuve dun ventuel dpt de manganse nest dcele. Sur le site de Choisy-le-Roi, aucun dpt de manganse ne semble se former sur la surface des chantillons, dans la limite de dtection de la technique employe.

4.2.2.2 Synthse
Dtection de manganse la surface des chantillons sur un seul site (Flins) Les chantillons daciers inoxydables mis en contact pendant 9 mois avec leau de Seine du site de Flins sont couverts dun biofilm principalement constitu de macromolcules organiques, dalgues diatomes et de bacilles bactriens. Le biofilm contient aussi quelques levures et coques. Des dpts de manganse pars et peu recouvrants ont t trouvs la surface des chantillons. Les biofilms observs sur les chantillons immergs Choisy-le-Roi ont la mme allure gnrale que les biofilms dvelopps sur acier inoxydable au niveau du site de Flins. Toutefois, aucun dpt de manganse na t trouv sur les chantillons immergs dans leau de Seine du site de Choisy-le-Roi. Ces rsultats peuvent tre compars aux tracs des courbes de polarisation cathodique dans leau des deux sites. Sur le site de Flins, aprs augmentation de Ecorr, la densit de courant cathodique augmente fortement (en valeur absolue) ds que le potentiel devient infrieur environ 0,2 V/ECS, ce qui a t attribu soit une catalyse de la rduction de loxygne, soit la rduction dun nouvel oxydant synthtis durant limmersion et dpos sur lchantillon (contact direct, pas de palier de diffusion). Sur le site de Choisy-le-Roi, la rduction dune nouvelle espce oxydante prsente en solution (existence dun palier de diffusion) apparat, se traduisant par une augmentation du courant cathodique entre -0,4 et 0,2 V/ECS environ.

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Le manganse dpos la surface des chantillons sur le site de Flins est vraisemblablement sous forme oxyde. La rduction des oxydes de manganse pourrait engendrer une augmentation du courant aux faibles surtensions cathodiques, daprs un mcanisme classique et reconnu en eau de rivire naturelle (1.2.2.1). Il a effectivement t montr que les oxydes de manganse peuvent tre un meilleur oxydant que loxygne dissous dans les conditions exprimentales rgnant au sein dune eau naturelle. Ils sont alors rduits un potentiel plus lev que loxygne, autrement dit la surtension cathodique de la rduction des oxydes de manganse est plus faible que la surtension cathodique de la rduction de O2. Laugmentation du courant aux faibles surtensions cathodiques qui se produit au cours de limmersion peut tre due la rduction doxydes de manganse biodposs. La quantit de manganse dpose sur la surface semble faible (dpts pars), mais elle pourrait nanmoins influencer significativement le courant cathodique. Au niveau du site de Choisy-le-Roi, une nouvelle rduction apparat aux faibles surtensions cathodiques, cependant aucun dpt doxyde de manganse nest trouv la surface des chantillons. La technique de dtection du manganse nest toutefois pas infaillible, dautant plus que les dpts de manganse peuvent tre trs localiss et recouvrir des aires trs faibles.

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Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Toutefois, lespce oxydante forme est dissoute dans llectrolyte et non dpose la surface du matriau. A priori, le nouvel oxydant form au cours de limmersion Choisy nest pas un oxyde de manganse.
Identification du mcanisme de laugmentation de Ecorr sur le site de Flins Sur le site de Flins, lexplication propose pour laugmentation de Ecorr est que la prsence de manganse la surface des chantillons affecte significativement le courant cathodique. Laugmentation (en valeur absolue) du courant cathodique ds que le potentiel devient infrieur environ 0,2 V/ECS parait lie la rduction des oxydes de manganse prcipits la surface des chantillons au cours de limmersion.

Les mesures et observations ralises au niveau du site de Flins sont conformes au mcanisme de laugmentation de Ecorr li la rduction des oxydes de manganse dposs la surface des aciers inoxydables. Quant au site de Choisy, la nouvelle rduction apparaissant au cours de limmersion ne semble pas tre la rduction doxydes de manganse. Par limination, au vu des deux grands modles proposs dans la littrature (1.2), lespce oxydante provoquant laugmentation de Ecorr pourrait tre le peroxyde dhydrogne. Sa prsence en solution et la nouvelle vague de rduction apparue durant lexposition (maximum enregistr entre -460 et -380 mV/ECS) sont en accord avec les observations effectues en eaux de mer naturelle [17, 66] et artificielle [73]. Le modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase et son adaptation aux eaux peu chlorures sont tudis au chapitre suivant.

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4.2.3 Synthse : observations et analyses de surface

Les exprimentations dcrites dans cette partie ont permis la fois de connatre laspect gnral du biofilm et de la surface des chantillons et de poursuivre lidentification des mcanismes provoquant laugmentation du potentiel de corrosion libre.
Colonisation des surfaces par le biofilm Lorsquun acier inoxydable est immerg dans une eau de rivire naturelle, sa surface est colonise par un biofilm complexe, htrogne, discontinu, comprenant une grande quantit dexopolymres et des microorganismes, parmi lesquels les diatomes et les bacilles bactriens sont majoritaires. Cette colonisation nest pas immdiate, il faut un certain temps pour que le taux de recouvrement de la surface augmente et atteigne une valeur stationnaire. Ce temps est vraisemblablement li au temps de latence avant augmentation de Ecorr. Mcanismes de laugmentation de Ecorr Les mcanismes de laugmentation de Ecorr en eau de rivire naturelle semblent dpendre fortement du lieu dimmersion. Les rsultats obtenus sur les deux sites tudis plus particulirement dans ce travail montrent cette diversit des mcanismes. Sur le site de Flins, du manganse se dpose sur la surface des chantillons dacier inoxydable durant limmersion. La rduction du manganse (vraisemblablement biodpos sous forme oxyde) correspond laugmentation de la densit de courant faible polarisation cathodique sur les courbes intensit-potentiel. La faible quantit de manganse oxyd dpose dlivre un courant non ngligeable. Laugmentation de Ecorr est due la rduction des oxydes de manganse dposs par le biofilm durant limmersion.

135

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

Sur le site de Choisy-le-Roi, lespce oxydante rduite des valeurs de potentiel assez leves nest pas un oxyde de manganse. A cette tape de ltude, il peut tre suppos que cette espce oxydante est le peroxyde dhydrogne H2O2. Le mcanisme de laugmentation de Ecorr li la production enzymatique de H2O2 est tudi et transpos en eau de rivire artificielle au chapitre 5. La preuve de la validit de ce mcanisme sur le site de Choisy-le-Roi y est effectue.

4.3 Dnombrements bactriens

Les observations au microscope lectronique balayage ont montr que les microorganismes prdominants dans les biofilms se dveloppant sur acier inoxydable en eau de rivire naturelle sont certaines diatomes et certains bacilles bactriens. Le choix de sintresser plus particulirement la composante bactrienne du biofilm a t fait la lueur des connaissances actuelles en Corrosion Induite par les Microorganismes (CIM). En effet, la plupart des tudes de CIM portent de faon quasi-exclusive sur le rle jou par le mtabolisme bactrien. Les bactries sont trs souvent considres comme les microorganismes les plus dangereux pour les matriaux mtalliques. Dans le cas des aciers inoxydables, la plupart des articles traitant de laugmentation du potentiel de corrosion libre en eaux naturelles incriminent les bactries et leur mtabolisme. Toutefois, comme il a t prcis auparavant, plusieurs auteurs ont montr que certaines espces dalgues (et en particulier de diatomes) sont aussi capables dengendrer une augmentation de Ecorr, en particulier par le biais de leur production locale doxygne par photosynthse au sein du biofilm [27, 28, 32, 33]. De plus, les suivis du potentiel de corrosion libre sur le site de Choisy-le-Roi ont mis en vidence une influence du cycle jour/nuit, vraisemblablement attribuable la variation dclairement et son impact sur le mtabolisme des microorganismes photosynthtiques du biofilm. Les algues sont donc tout fait susceptibles de contribuer au phnomne dlvation du potentiel dabandon. Le choix de se focaliser sur la fraction bactrienne du biofilm est critiquable mais dpend aussi fortement des facilits dexprimentation.
4.3.1 Dnombrements bactriens dans le milieu naturel

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Pour avoir une meilleure connaissance de la flore bactrienne du milieu naturel, des dnombrements bactriens sont effectus sur des prlvements de leau des trois sites (Choisy-le-Roi, Flins, Poses-Amfreville), sur des prlvements de crote (feuillets de produits de corrosion) arrache de palplanches (Flins, Poses-Amfreville), sur des couvillonnages de palplanches (Flins, Poses-Amfreville) et sur des prlvements de boue (Flins, Poses-Amfreville). Les diffrents dnombrements effectus concernent la flore totale arobie (milieu glos PCA), la flore totale anarobie (milieu glose PCA), les entrobactries (milieu glos Mc Conkey), les bactries sulfato-rductrices BSR (milieu liquide de Starkey, technique NPP) et les bactries thiosulfato-rductrices BTR (milieu liquide de Magot, technique NPP). 4.3.1.1 Dnombrements bactriens sur le site de Choisy-le-Roi Sur le site de Choisy-le-Roi, de leau de Seine est prleve deux saisons diffrentes, en hiver (mois de Dcembre) et en t (mois de Juillet). Des dnombrements bactriens sont effectus sur ces deux types de prlvements (tableau 15). 136

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

Mois Dcembre Juillet

Flore totale arobie (UFC/mL) 1,1.103 1,4.104 7,9.103

Flore totale anarobie (UFC/mL) 1,1.103 9,3.103 3,7.103

Entrobactries BSR BTR (UFC/mL) (bactries/mL) (bactries/mL) <1 ND 2,5.102 4,2.101 1,8.101 6.103 1,3.105 1,2.105

Tableau 15 : dnombrements bactriens de prlvement deau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi, en fonction de la saison (ND : non dtect)

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Quelle que soit la saison, le milieu naturel est peu charg en bactries viables cultivables. Comme bien souvent en conditions naturelles, les BTR sont beaucoup plus nombreuses que les BSR. La temprature est favorable au dveloppement bactrien : globalement, les bactries sont plus nombreuses en t quen hiver. Leffet de la saison (et de la temprature) sur les diffrents dnombrements bactriens peut tre mis en parallle avec leffet de la saison sur lvolution du potentiel de corrosion libre : le temps de latence avant augmentation de Ecorr diminue lorsque la temprature augmente. Le nombre de bactries est plus lev et le temps de latence plus faible en t quen hiver. 4.3.1.2 Dnombrements bactriens sur le site de Flins Sur le site de Flins, des prlvements deau de Seine, de boue, dcouvillonnages et de crote de palplanches sont effectus au mois de Dcembre. Les dnombrements bactriens raliss sur ces prlvements sont donns dans le tableau 16. Flore totale arobie 5,6.104 Eau de Seine UFC/mL 1,4.104 Boue UFC/g Ecouvillons de 1,5.105 palplanche UFC/cm2 Crote de 1,6.106 palplanche UFC/g Echantillon Flore totale Entrobactries BSR BTR anarobie 3,0.104 2,5.104 2,5.104 5,0.105 UFC/mL UFC/mL bactries/mL bactries/mL 4 4 3,9.10 3,3.10 1,9.103 3,8.107 UFC/g UFC/g bactries/g bactries/g 5 4 2 1,9.10 3,1.10 1,7.10 3,7.104 2 2 2 UFC/cm UFC/cm bactries/cm bactries/cm2 2,2. 106 1,1. 106 1,9.104 2,0.104 UFC/g UFC/g bactries/g bactries/g

Tableau 16 : dnombrements bactriens sur diffrents prlvements du milieu naturel sur le site de Flins au mois de Dcembre

A la mme date de prlvement, leau de Seine contient beaucoup plus de bactries sur le site de Flins que sur le site de Choisy-le-Roi. Lcart atteint des valeurs suprieures un facteur 10 sur tous les dnombrements except le dnombrement en bactries sulfato-rductrices. En particulier, leau de Seine contient ici un grand nombre de BSR et de BTR : la flore sulfurogne totale est leve. Comme Choisy-le-Roi, la quantit de BTR est plus importante que la quantit de BSR. Les entrobactries sont prsentes en grande quantit dans la crote.

137

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle 4.3.1.3 Dnombrements bactriens sur le site de Poses-Amfreville Les mmes types de prlvements sont effectus sur le site de Poses-Amfreville. Les rsultats des dnombrements bactriens sur les prlvements deau de Seine, de boue, dcouvillonnages de palplanche et de crote de palplanche peuvent tre lus dans le tableau 17. Echantillon Eau de Seine Boue Ecouvillons de palplanche
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Crote de palplanche

Flore totale arobie 1,5.103 0,1.103 UFC/mL 4.106 UFC/g 9.104 4.104 UFC/cm2 2,5.106 UFC/g

Flore totale Entrobactries BSR BTR anarobie 1,3.103 1,5.101 4,2.104 5.101 3 1 0,3.10 1.10 1,8.104 UFC/mL UFC/mL bactries/mL bactries/mL 2,6.107 3,5.106 1,3.103 2,5.105 UFC/g UFC/g bactries/g bactries/g 5 1,1.10 2,8.104 2,5.105 2,6.104 ND 2 UFC/cm bactries/cm2 UFC/cm2 3,4.106 2,6.106 0,6.101 2,5.105 UFC/g UFC/g bactries/g bactries/g

Tableau 17 : dnombrements bactriens sur diffrents prlvements du milieu naturel sur le site de Poses-Amfreville au mois de Septembre

Leau de la Seine sur le site de Poses-Amfreville nest pas trs charge microbiologiquement. Les flores totales arobies et anarobies sont comparables celles du site de Choisy-le-Roi et nettement infrieures celles du site de Flins dun facteur 10 environ. Leau contient toutefois une quantit importante de bactries thiosulfato-rductrices. Il est galement important de souligner que les entrobactries sont largement prsentes dans la boue et la crote. Comme sur les deux autres sites, la quantit de BTR est beaucoup plus importante que la quantit de BSR, dans tous les types de prlvements. 4.3.1.4 Synthse Leau de Seine du site de Choisy-le-Roi est un milieu microbiologiquement assez pauvre : les flores totales arobies et anarobies sont relativement faibles. Leau ne contient quasiment pas dentrobactries. Un effet de la saison est visible : lorsque la temprature augmente, les flores totales et la quantit de bactries thiosulfato-rductrices augmentent. La quantit de BTR est leve en t. Leau de Seine du site de Flins est la plus charge en bactries. En particulier, la flore sulfurogne est trs leve. Beaucoup de bactries sont trouves dans tous les types de prlvements, quil sagisse de leau du site, de la boue ou de la surface des palplanches. Les flores totales arobie et anarobie ainsi que la quantit de BTR sont trs leves la surface des palplanches. Leau de Seine du site de Poses-Amfreville est un milieu microbiologiquement assez pauvre, comparable leau du site de Choisy-le-Roi. La quantit dentrobactries y est lgrement plus forte et la quantit de bactries sulfato-rductrices lgrement plus faible. Les quantits de bactries sont en revanche trs importantes dans la boue et la surface des palplanches. Ces surfaces prsentent plutt moins de BSR mais plus de BTR que les surfaces des palplanches immerges sur le site de Flins. 138

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Dans les trois eaux de site, le nombre de bactries thiosulfato-rductrices est toujours plus lev que le nombre de bactries sulfato-rductrices. Ceci est aussi valable la surface des pices mtalliques immerges dans leau de rivire naturelle (palplanches).
4.3.2 Dnombrements bactriens sur des chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle

Des dnombrements bactriens sont aussi effectus sur des chantillons dacier inoxydable et sur des chantillons dacier au carbone XC18 (pour comparaison) immergs depuis 6 mois dans leau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi. Ils sont raliss aprs dcrochage du biofilm par passage des chantillons aux ultrasons. Les rsultats obtenus sont prsents dans le tableau 18. Echantillon
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Ecorr (mV/ECS) 190 78 92 9

304L 316L 254SMO XC18

Flore totale arobie (UFC/cm2) 7,6.103 1,1.104 3,2.105 8,6.103

Flore totale anarobie (UFC/cm2) 8,2.103 1,3.104 2,3.105 9,8.103

BSR (bactries/cm2) 8,1.100 3,4.101 3,4.101 3,4.103

BTR (bactries/cm2) > 1.6.105 4,4.104 > 1,6.105 4,4.104

Tableau 18 : dnombrements bactriens effectus sur des chantillons dacier immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi prlev en Juillet aprs 6 mois dimmersion

Tous les chantillons sont recouverts par un biofilm dont la fraction bactrienne viable cultivable est non ngligeable : les flores totales sont suprieures 103 UFC.cm-2. Il semblerait que la quantit de bactries prsentes la surface de lchantillon soit plus importante sur le 254SMO que sur le 316L, et quelle soit aussi plus importante sur le 316L que sur le 304L. Ceci est valable pour les flores totales arobie et anarobie ainsi que pour les BSR. Cette disparit dadhsion pourrait tre due aux diffrences dans la composition chimique de la couche passive et/ou la teneur en molybdne dans la composition des matrices des diffrentes nuances dacier inoxydable. La prsence de molybdne dans lalliage semble favoriser ladhsion bactrienne. Linfluence du molybdne sur ladhsion bactrienne est controverse dans la littrature ; les cations issus de la dissolution des atomes de molybdne pourraient faciliter le processus dattachement des cellules microbiennes la surface du support mtallique [243]. Toutefois, une fois que les cellules sont adhres, leffet du molybdne serait inverse, en raison dune toxicit envers certaines bactries sessiles remarque dans plusieurs publications [244-246]. Des diffrences de dnombrements bactriens ont t remarques en eau potable sur des chantillons dacier inoxydable 304 et 316 (moins de bactries sessiles sur le 316) et ont t attribues un rle nfaste du molybdne sur la viabilit des bactries du biofilm [247-249]. Il semblerait en particulier que le molybdne soit nfaste la colonisation par la flore sulfurogne [250, 251]. Dans les conditions exprimentales de cette tude, la prsence de molybdne semble plutt favoriser ladhsion bactrienne. Ladhsion est plutt faible sur lacier au carbone XC18, dont les dnombrements sont assez proches de ceux obtenus sur le 304L. La seule diffrence notable est que les BSR semblent se dvelopper beaucoup plus fortement sur le XC18 que sur les trois nuances dacier inoxydable.

139

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Les BTR sont quant elles trs nombreuses sur toutes les surfaces. Dautres prlvements sont effectus sur le site de Choisy-le-Roi en Octobre aprs 3 mois dimmersion pour amliorer la caractrisation de ladhsion des BTR. Lorsque ces rsultats (prsents dans le tableau 19) sont compars aux rsultats prcdents, aucune tendance ne se dgage. Des BTR sont en tout cas retrouves sur toutes les surfaces immerges. Des dnombrements de BSR sur ces mmes chantillons ont donn une quantit non dtectable de BSR viables cultivables. La quantit de BSR adhre tait trs faible. Les BTR sont trouves en plus grand nombre la fois dans leau de rivire naturelle sur les diffrents sites dimmersion mais aussi au sein des biofilms recouvrant les aciers. Echantillon BTR (bactries/cm2) 304L 2,5.102 316L 2,5.103 254SMO 6.103

Tableau 19 : dnombrements bactriens effectus sur des chantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi prlevs en octobre aprs 3 mois dimmersion

4.4 Caractrisation des films passifs en eau de rivire naturelle

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Lobjectif de ce paragraphe est de caractriser le film passif des aciers inoxydables dans le milieu eau de rivire naturelle (chantillons immergs dans la Seine), afin de dterminer linfluence du biofilm sur la couche doxydes, en particulier en terme de composition chimique. La couche doxydes forme en eau de rivire naturelle est analyse par XPS, et ses proprits de semi-conductivit sont tudies par la technique de Mott-Schottky.
4.4.1 Analyse des couches doxydes par spectromtrie de photolectrons (XPS)

Des chantillons dacier 304L et dacier 254SMO immergs pendant 6 mois dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi sont analyss par XPS. Ils ont t prlevs du milieu naturel, stocks pendant une heure dans un flacon contenant leau du site, nettoys par couvillonnage ( grattage ) du biofilm, puis introduits dans la chambre danalyse du spectroscope. Ces analyses sont faites en incidence normale. 4.4.1.1 Spectre gnral Un spectre gnral est trac en premier lieu, afin de connatre les lments prsents la surface des chantillons. Les spectres des deux nuances dacier inoxydable sont visibles sur la figure 67.

140

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

a- Acier 304L

b- Acier 254SMO

Figure 67 : spectre gnral obtenu sur un chantillon dacier 304L et sur un chantillon dacier 254SMO immergs pendant 6 mois dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi

Le choix a t fait dacqurir de faon plus fine les pics obtenus sur le spectre gnral. Les pics tudis sont indiqus dans le tableau 20.
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Spectre Gnral Gamme 0-1300 dnergie (eV) Pas (eV) 1

C1s 274294 0,1

Cr2p 570595 0,1

Fe2p 700740 0,1

Mo3d 223240 0,1

Ni2p 848888 0,1

O1s 522542 0,1

Si2p 96110 0,1

N1s 393404 0,1

Tableau 20 : spectres enregistrs lors dune acquisition

Les spectres vont dabord tre prsents lments par lments, puis la discussion portera sur les deux quantifications relatives effectues. 4.4.1.2 Spectres obtenus Les diffrents spectres obtenus (C1s, O1s, Cr2p, Fe2p) sont visibles sur les figures 68 et 69.
C1s
18 16 14 12
30

O1s

304L 254SMO
kcoups/s

304L 254SMO
25

kcoups/s

20

10 8 6

oxydes
15

10

4 2 270 275 280 285 290 295

5 540 535 530 525 520

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Spectre de C1s

b- Spectre de O1s

Figure 68 : spectres de C1s et O1s sur les chantillons daciers 304L et 254SMO prlevs aprs 6 mois dimmersion dans leau de rivire naturelle (site de Choisy)

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Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

Cr2p
24 22 20 18 16 14 12

oxy-hydroxydes de Cr

304L 254SMO

Fe2p
34 32 30 28 26

304L 254SMO

kcoups/s

kcoups/s

Cr mtal

24 22 20 18 16

oxy-hydroxydes de Fe

Fe mtal

10 8 595 590 585 580 575 570

14 12 740 735 730 725 720 715 710 705 700

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Spectre de Cr2p

b- Spectre de Fe2p

Figure 69 : spectres de Cr2p et Fe2p sur les chantillons daciers 304L et 254SMO prlevs aprs 6 mois dimmersion dans leau de rivire naturelle (site de Choisy)

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4.4.1.3 Quantification relative de tous les lments La quantification relative de tous les lments pris en compte est faite en incidence normale (tableau 21). Le Fe mtal et le Cr mtal sont dtects, des photolectrons proviennent dune zone mtallique plus profonde que la couche doxydes, par consquent la totalit de la couche doxydes est analyse. Lpaisseur de la couche doxydes est infrieure lpaisseur de la zone analyse, ce qui est cohrent avec les valeurs dpaisseur de quelques nanomtres donnes dans la littrature pour des couches doxydes dveloppes en milieux aqueux sur des aciers inoxydables. Les deux lments les plus prsents sont le carbone et loxygne. Ces deux lments proviennent la fois de contaminations, mais aussi (et surtout) de ladsorption de molcules organiques au cours des six mois dimmersion dans leau de rivire naturelle, ainsi que de ladhsion de microorganismes. Le voile biologique, ou biofilm, form par lensemble des micro-organismes adhrs et des macromolcules organiques adsorbes la surface de lchantillon est la source principale de carbone et doxygne, et ce malgr lcouvillonnage ralis. Le biofilm (microorganismes et macromolcules organiques) est aussi responsable de la teneur leve en azote. Du silicium est trouv en trs faible quantit la surface des chantillons. Il provient la fois de leau de rivire naturelle et de la prsence sur la surface de microorganismes possdant un exosquelette base de silicium, comme les diatomes par exemple. Cette quantification semble indiquer que lchantillon dacier 254SMO est particulirement enrichi en fer. Toutefois, pour amliorer la connaissance de la couche doxydes, une quantification relative ne prenant en compte que les deux lments prdominants du film passif, le chrome et le fer, doit tre effectue. 304L 254SMO C 42,6 55,3 O 42,0 28,4 Cr 6,6 1,7 Fe 4,5 8,6 Ni 0,5 0,5 N 2,8 5,4 Si 1,0 0,1

Tableau 21 : composition du film passif (en pourcentages atomiques relatifs) obtenus sur des chantillons daciers 304L et 254SMO immergs 6 mois dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi

142

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle 4.4.1.4 Quantification relative des lments fer et chrome Les rsultats sont donns en terme de pourcentage de fer mtal, de chrome mtal, de fer oxyd et de chrome oxyd dans le tableau 22. Les deux nuances dacier inoxydable ont des compositions de couche doxydes trs diffrentes. Le film passif de lacier 304L est constitu majoritairement de chrome, alors que llment prdominant du film passif de lacier 254SMO est le fer. Le rapport Fe/Cr dans le film est de 3,56 pour lacier 254SMO, alors quil nest que de 0,26 pour lacier 304L. Limmersion en eau de rivire naturelle ninduit pas la mme volution de composition chimique dans la couche doxydes. Les paisseurs de film semblent en revanche sensiblement identiques (rapports %mtal / %oxydes voisins). Nuance dacier 304L 254SMO %Fe mtal 28,1 37 %Cr mtal 13,1 1,9 % Fe oxyd 12,3 47,7 % Cr oxyd 46,5 13,4

Tableau 22 : rsultats XPS (en pourcentages atomiques relatifs) obtenus sur le film passif dchantillons daciers 304L et 254SMO immergs 6 mois dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi

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La caractrisation de la couche doxydes forme sur les deux nuances dacier inoxydable en eau de rivire naturelle est reprsente sur la figure 70. La quantit de mtal total dtecte (fer et chrome) est sensiblement la mme sur les deux aciers inoxydables, ce qui traduit des paisseurs de film passif comparables. La diffrence de composition est en revanche trs nette. Le pourcentage de fer oxyd est trs lev dans le film passif de lacier 254SMO. Lenrichissement en fer du film passif de lacier 254SMO immerg en eau de rivire naturelle est analogue son enrichissement lors dune immersion en eau de rivire naturelle [73]. La diffrence de composition chimique mise en vidence en XPS nest pas retrouve sur les courbes de polarisation anodique effectues sur le site de Flins (site dimmersion diffrent), qui ont une allure tout fait comparable pour les deux nuances dacier inoxydable.
60 Mtal Fe oxyd Cr oxyd 40 % 20 0 304L 254SMO

Figure 70 : pourcentages de mtal total (Fe + Cr), de Fe oxyd et de Cr oxyd obtenus par analyse XPS sur des chantillons dacier inoxydable 304L et 254SMO immergs en eau de rivire naturelle

Ces rsultats seront compars au chapitre 5 avec les caractrisations des couches doxydes formes dans les diffrentes solutions mises en jeu dans ltude du modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase de production de peroxyde dhydrogne.

143

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle

4.4.2 Dtermination des proprits de semi-conductivit des couches doxydes par la technique de Mott-Schottky

Lobjectif de ce paragraphe est de dterminer linfluence du biofilm sur les proprits semiconductrices du film passif. Il semblerait que certaines espces bactriennes soient capables de modifier ces proprits [265]. Des chantillons dacier inoxydable 304L et 254SMO immergs pendant 6 mois dans leau de la Seine sur le site de Choisy-le-Roi sont prlevs, stocks pendant une heure dans leau du site, puis introduits dans un bcher contenant de leau de Seine. Des mesures de capacit de Mott-Schottky sont ensuite ralises sur ces chantillons, afin de connatre les proprits semi-conductrices de ces chantillons dans le milieu naturel. Les rsultats (diagrammes de Mott-Schottky et valeurs calcules de Ufb, Nd, Na et W) sont prsents sur la figure 71. Le potentiel de bandes plates Ufb est proche de -0,5 V/ECS, ce qui est compatible avec les rsultats de la bibliographie pH neutre ou lgrement basique (1.3.4.1). En effet, le pH de leau de la Seine est denviron 7,9. Il a t montr dans plusieurs travaux que le potentiel de bandes plates Ufb varie avec le pH. Plus le pH est acide, plus Ufb est lev. Ufb augmente de 60 mV lorsque le pH diminue de 1 [73, 224]. Les deux types dchantillons prsentent un caractre semi-conducteur type p aux potentiels infrieurs Ufb et un caractre semi-conducteur type n aux potentiels suprieurs Ufb. Les valeurs de Ufb, des densits de porteurs de charge (Nd pour la zone de semi-conductivit de type n, Na pour la zone de semi-conductivit de type p) et de lpaisseur de la couche de charges despace (pour les deux types de semi-conductivit) sont indiques dans le tableau de la figure 71. Pour la zone linaire de type n, les densits de donneurs sont faibles, proches de celles calcules en eau de rivire artificielle pour lacier 316L (chapitre 3). Nd ne semble pas voluer significativement au contact de leau de rivire naturelle, qui ne parait pas avoir dinfluence notable sur les proprits de semi-conductivit du film passif.
7x10
10

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6x10

10

304L 254SMO

5x10

10

C (F 2.m )

4x10

10

Nuance 304L 254SMO

-1,0 -0,5 0,0 0,5

Ufb (V/ECS)

Nd/Na (cm-3) W (nm) 2,0.1019 /3,8.1019 9,3.1018 /8,4.1019 0,26 /0,20 0,25 /0,16

3x10

10

-0,49 -0,53

-2

2x10

10

1x10

10

0 -1,5

E (V/ECS)

Figure 71 : diagrammes de Mott-Schottky et valeurs calcules des paramtres de semi-conductivit (n/p) pour des chantillons dacier 304L et 254SMO immergs en eau de rivire naturelle

Dans la zone linaire de pente ngative, correspondant une semi-conductivit de type p, la densit Na des porteurs de charge (accepteurs : lacunes dlectrons ou trous ) est de 3,8.1019 cm-3 pour lacier 304L et de 8,4.1019 cm-3 pour lacier 254SMO. Les paisseurs de couches de charge despace respectivement associes sont 0,20 nm et 0,16 nm. Les tudes de film passif par la technique de Mott-Schottky attribuent gnralement cette semi-conductivit de type p aux potentiels infrieurs Ufb aux oxydes de chrome [175, 178, 182, 184]. Pour rappel, la densit de trous pour un chantillon dacier 316L ayant subi un dcapage nitro144

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle fluorhydrique et immerg en eau de rivire artificielle est denviron 2,3.1019 cm-3. Lordre de grandeur est le mme, limmersion en eau de rivire naturelle ne semble pas affecter significativement les proprits de semi-conductivit de type p dtectes aux potentiels infrieurs -0,5 V/ECS. En revanche, cette semi-conductivit semble prsente sur tous les chantillons, ce qui ntait pas le cas des chantillons dacier 316L ayant subi les diffrents traitements de surface. Ces rsultats seront compars au chapitre 5 avec les proprits de semi-conductivit des couches doxydes formes dans les diffrentes solutions mises en jeu dans ltude du modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase .

4.5 Synthse gnrale

Biofilms deau de rivire naturelle : tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lorsquun chantillon dacier inoxydable est immerg dans une eau de rivire naturelle, sa surface se recouvre progressivement dun voile biologique discontinu contenant des microorganismes, parmi lesquels les diatomes et les bacilles bactriens sont prdominants, et des exopolymres. Les molcules organiques entrant dans la composition du biofilm sont produites par les microorganismes mais peuvent aussi provenir de llectrolyte.
lvation du potentiel de corrosion libre :

Le potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle augmente au cours du temps. Llvation du potentiel se fait toujours aprs un certain temps de latence, qui dpend fortement de la temprature de leau. Ce temps de latence est vraisemblablement li un temps caractristique du biofilm, correspondant un certain taux de recouvrement, un certain stade de dveloppement cellulaire, ou une dure ncessaire pour que les consquences des modifications mtaboliques soient prennes linterface couche passive/biofilm.
Mcanismes de laugmentation de Ecorr :

Les causes de cette augmentation peuvent tre multiples, ce qui parait tre le cas dans cette tude sur les deux sites dimmersion choisis dans un mme fleuve. Sur le site de Flins, un dpt de manganse discontinu se forme sur lchantillon. Il contient probablement du manganse sous forme oxyde, et la rduction de ce manganse des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr entrane le dplacement du potentiel dabandon vers des valeurs plus anodiques. Sur le site de Choisy-le-Roi, une espce oxydante prsente dans llectrolyte proximit de la surface est rduite des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr, ce qui provoque laugmentation du potentiel de corrosion libre. Cette espce nest pas un oxyde de manganse mais pourrait tre du peroxyde dhydrogne. Le comportement lectrochimique des aciers inoxydable en prsence de H2O2 est tudi en eau de rivire artificielle au chapitre 5, afin de dterminer la validit de ce mcanisme (valable en eau de mer) dans les eaux peu chlorures.

145

Chapitre 4 : Aciers inoxydables en eau de rivire naturelle Le dpt de manganse oxyd (Flins) et la synthse de lautre espce oxydante prsente en solution (Choisy) sont trs certainement engendrs par le biofilm.

Evolution de la couche passive sous linfluence du biofilm Sous linfluence du biofilm, il semblerait que le film passif de lacier 304L soit enrichi en chrome au dtriment du fer, alors que la couche doxydes de lacier 254SMO serait enrichie en fer au dtriment du chrome. Les paisseurs des deux films sont en revanche comparables. Concernant les proprits de semi-conductivit, les diagrammes de Mott-Schottky indiquent un potentiel de bandes plates Ufb denviron -0,5 V/ECS. La couche doxydes prsente un caractre semi-conducteur de type n aux potentiels suprieurs Ufb et un caractre semiconducteur de type p moins marqu aux potentiels infrieurs Ufb.

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146

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

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5 Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalaseperoxydase - Production de peroxyde dhydrogne

147

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

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148

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Comme cela a t rappel au chapitre 1, laugmentation du potentiel de corrosion libre Ecorr des aciers inoxydables observe en eaux naturelles est due la prsence et au mtabolisme du biofilm qui se dveloppe la surface des chantillons. Un des mcanismes proposs pour expliquer cette augmentation de Ecorr est un mcanisme enzymatique : la valeur du potentiel de corrosion libre serait lie la prsence dune enzyme catalysant la production de peroxyde dhydrogne H2O2 et dune enzyme catalysant sa dgradation (1.2.1). Dans les tudes de laboratoire, les deux enzymes utilises sont gnralement la glucose-oxydase (GOD) et la catalase, qui catalysent respectivement les ractions (9) et (22).
C 6 H 12 O 6 + O 2 + H 2 O C 6 H 12 O 7 + H 2 O 2 GOD
2 H 2O 2 2 H 2O + O 2
catalase

(9)

(22)

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C6H12O6 est le glucose et C6H12O7 lacide gluconique. Le terme ractifs enzymatiques sera utilis pour dcrire lensemble constitu de la glucose-oxydase (GOD) et de son substrat le glucose. Si les concentrations ne sont pas explicites, elles sont alors de 100 u/L pour la GOD et de 20 mmol/L pour le glucose (solution ractifs enzymatiques ) [73]. Le terme produits enzymatiques dsignera le peroxyde dhydrogne H2O2 et lacide gluconique. Il a t montr dans diffrents types deau de mer que lintroduction de la glucose-oxydase et de son substrat entrane une augmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables, et que cette augmentation est trs semblable celle obtenue en eau de mer naturelle [71, 72, 80]. Dans ce chapitre, la transposition du modle oxydases/catalase-peroxydase de production enzymatique de H2O2 va tre transpose au cas des eaux de rivire. Aprs avoir prcis la physico-chimie des solutions du modle enzymatique et leur influence sur le film passif des aciers inoxydables, le comportement lectrochimique sera tudi en prsence des diffrents composs du modle enzymatique, afin de voir si ce modle peut expliquer certains cas daugmentation de Ecorr dans les eaux naturelles faible teneur en chlorures.

5.1 Physico-chimie de la solution

La cintique de la raction enzymatique (9) va tre tudie dans ce paragraphe. Elle aura une influence sur les expriences dlectrochimie et peut aider choisir les paramtres exprimentaux, en particulier lchelle de temps utiliser. De plus, la connaissance de la cintique de la raction enzymatique est ncessaire linterprtation des rsultats lectrochimiques. Llectrolyte est ici leau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl.
5.1.1 Cintique enzymatique dans la solution ractifs enzymatiques

5.1.1.1 Evolution de la concentration en peroxyde dhydrogne Le peroxyde dhydrogne H2O2 est un produit de la raction enzymatique (9). Lorsque le glucose et la glucose-oxydase sont introduits dans la solution, des molcules de H2O2 sont produites, ce qui a tendance faire augmenter la concentration en H2O2. 149

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Toutefois, il est connu que le peroxyde dhydrogne est une espce instable (cf. p.12) qui peut se dismuter en formant de leau et de loxygne selon lquation (14). Cette dismutation est susceptible dtre assez quantitative, dans la mesure o elle est catalyse par la prsence des ions Cl- et par la prsence dun mtal dans la solution, ce qui est le cas dans cette tude. La cintique de la raction de dismutation dpend aussi du pH : la vitesse de dcomposition du peroxyde dhydrogne atteint un maximum pour un pH denviron 3,7 [58]. Les conditions peuvent donc tre runies pour favoriser la dismutation du peroxyde dhydrogne, qui a tendance faire diminuer la concentration en H2O2. Ces deux phnomnes vont entrer en comptition. Durant cette exprience, la solution est agite en permanence par un barreau magntique. La concentration en peroxyde dhydrogne est mesure rgulirement aprs lajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose dans leau de rivire artificielle. 48 heures aprs lajout de la glucose-oxydase et de son substrat, la catalase est introduite une activit de 3370 u/L. Les rsultats sont prsents sur la figure 72. Lorigine de laxe temporel est linstant o la GOD et le glucose sont mis en solution.
ajout de 3370 u/L de catalase

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2,0

1,5

[H2O2] (mmol/L)

1,0

0,5

0,0 0 10 20 30 40 50

temps (heures)

Figure 72 : volution de [H2O2] en eau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (solution agite). Effet dun ajout de catalase aprs 48 heures.

Lajout de glucose-oxydase et de glucose entrane la formation de H2O2. La concentration en peroxyde dhydrogne atteint une valeur stationnaire proche de 2 mmol/L aprs environ 20 heures en solution agite. Cette exprience montre aussi que jusqu 48 heures, la dismutation du peroxyde dhydrogne nest pas suffisamment importante pour que leffet en soit visible. Il parait vraisemblable que la dure de stabilit de H2O2 dpasse les 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques . Elle est mesure prcisment au paragraphe 7.1.2. Lorsque la catalase est ajoute, la concentration en H2O2 chute brutalement et tend vers 0. Une heure aprs lintroduction de la catalase, [H2O2] est infrieure 0,2 mmol/L. Le rendement de la catalase une heure, dfini ci-dessous comme le rapport r, est suprieur 90%.
r (catalase)1h = [H 2 O 2 ] consomm t = 49 h [H 2 O 2 ] avant catalase = [H 2 O 2 ] t = 48h [H 2 O 2 ] t = 49 h [H 2 O 2 ] t = 48h > 90 %

150

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.1.1.2 Evolution du pH Lacide gluconique C6H12O7 (pKa(25C) = 3,6) est un produit de la raction enzymatique (9). Lajout de glucose-oxydase et de glucose dans la solution deau de rivire artificielle entrane la formation de molcules dacide gluconique, ce qui a tendance abaisser le pH. Ces rsultats ont t acquis en mme temps que ceux du paragraphe prcdent (mme exprience). La solution est agite. Lvolution du pH de la solution est reprsente sur la figure 73. La valeur initiale du pH (solution 0,3 g/L de NaCl) est comprise entre 5,8 et 6. Lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits dans la solution, le pH chute fortement. 48 heures aprs lajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, le pH de la solution est de 3,3 environ. La stabilisation du pH prend au maximum 36 heures.
6,0 1,4 1,2 1,0 5,0 0,8 0,6 0,4 3,5 0,2 0,0 0 2 4 6 8

[acide gluconique] (mmol/L)

5,5

pH

4,5

pH [Acide gluconique]

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4,0

3,0

temps (jours)

Figure 73 : volution du pH en eau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (solution agite)

La concentration en acide gluconique peut tre calcule partir de la valeur du pH selon lquation (59) :
[C 6 H 12 O 7 ] = 10 2 pH 10 2 pH = Ka 0,00025

(59)

La valeur stationnaire de concentration en acide gluconique est denviron 1,2 mmol/L. 5.1.1.3 Evolution de la concentration en oxygne dissous Loxygne dissous est un ractif de la raction enzymatique (9). Lorsque le glucose et la glucose-oxydase sont introduits en solution, des molcules de dioxygne dissous sont consommes, ce qui a tendance abaisser la concentration en O2 dissous. Toutefois, les manipulations sont effectues dans lair ambiant du laboratoire, et la solution est en quilibre avec lair. Du dioxygne de lair peut passer en solution, ce qui a tendance faire augmenter la concentration en O2 dissous. Ces deux phnomnes vont entrer en comptition. La consommation de O2 par la raction enzymatique et son apport par lair ambiant sont lorigine de modifications de la concentration en oxygne dissous. Celle-ci a t mesure dans une solution deau de rivire artificielle dans laquelle les ractifs enzymatiques sont introduits t = 0. Lvolution de [O2]dissous est reporte sur la figure 74.

151

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

[O2] (mg/L)

0 0 1 2 3 4 5 6 7

temps (jours)

Figure 74 : volution de la concentration en O2 dissous dans une solution deau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

La concentration en oxygne dissous diminue quasi-instantanment aprs lajout des ractifs enzymatiques. Elle est de lordre de 0,6 mg/L aprs seulement deux heures. Cette valeur reste stable pendant la premire journe. Puis, environ 24 heures aprs lajout de la GOD et du glucose, la concentration augmente progressivement jusqu atteindre une valeur stable denviron 6 mg/L aprs 5 jours. En dbut dexprience, la cintique enzymatique est trs rapide (la vitesse de formation de H2O2 est leve, cf. figure 72). Les molcules de O2 sont consommes trs rapidement, et la compensation par lapport doxygne de lair ambiant (sous leffet du gradient de concentration de O2 gnr par la consommation du gaz dissous dans la solution) est insuffisante. Par consquent, la concentration en O2 chute rapidement et conserve une valeur faible (0,6 mg/L). La cintique enzymatique dcrot au cours du temps (la vitesse de formation de H2O2 diminue, cf. figure 72). Il existe donc une date o la vitesse de consommation de O2 par la raction enzymatique va devenir infrieure la vitesse de dissolution dans la solution de loxygne de lair. Cette date est denviron 1 jour. Aprs la premire journe, lapport doxygne est plus important que sa consommation, et la concentration en oxygne dissous augmente au cours du temps, jusqu atteindre une valeur stable o la solution non agite est en quilibre avec lair ambiant. Il est noter quau-del de 48 heures, lapport doxygne peut ventuellement provenir de la dismutation de H2O2. Des mesures de concentration de H2O2 doivent tre ralises sur des temps plus longs que 48 heures, afin de connatre la dure de vie de H2O2 en eau de rivire artificielle (cf. 5.1.2). 5.1.1.4 Influence de lagitation de la solution Le but de cette manipulation est de voir leffet de lagitation de la solution sur la cintique enzymatique. Deux manipulations identiques sont ralises dans deux bchers diffrents. A t = 0, 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose sont introduits dans une solution deau de rivire artificielle. Un des bchers est agit, lautre non. La concentration en peroxyde dhydrogne est suivie au cours du temps dans les deux bchers, les rsultats obtenus sont indiqus sur la figure 75.

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152

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

2,2 2,0 1,8 1,6

Solution agite Sans agitation

[H2O2 mmol/L]

1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5

temps (jours)

Figure 75 : volution de la concentration en H2O2 en eau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, avec et sans agitation

Dans le cas o la solution est agite, [H2O2] se stabilise autour de 2 mmol/L aprs environ 20 heures. Dans le cas o la solution nest pas agite, la cintique de laugmentation de [H2O2] est beaucoup plus lente, et natteint pas la mme valeur stationnaire : aprs 78 heures, la concentration en H2O2 natteint que 1,2 mmol/L. Lagitation de la solution augmente la probabilit de rencontre entre une molcule denzyme et une molcule de substrat. La cintique est par consquent plus rapide lorsque la solution est agite. De plus, il a t montr que la concentration en O2 dans la solution non agite est trs faible aprs lajout de la GOD et du glucose. Sans agitation, O2 peut donc tre le ractif limitant. En revanche, lagitation de la solution a tendance augmenter la concentration en O2 dissous, en favorisant les changes gazeux avec lair ambiant. Dans la solution agite, loxygne ne peut plus limiter la cintique enzymatique, do une formation de H2O2 plus rapide que dans la solution non agite. Ces considrations expliquent les diffrences de cintique de la raction (9) apportes par lagitation de la solution. Le fait que la concentration en H2O2 dans la solution non agite natteigne pas la mme valeur stationnaire que dans la solution agite sexplique srement par le fait que la cintique tant plus lente, la dismutation de H2O2 commence alors que la valeur maximale de concentration du peroxyde dhydrogne nest pas encore atteinte. Sans la dismutation, en attendant suffisamment longtemps, les concentrations finales en H2O2 devraient tre les mmes dans les deux conditions exprimentales. Ceci montre que la dismutation empche la concentration en peroxyde dhydrogne datteindre son maximum lorsque la solution nest pas agite. Dans la suite, le choix a t fait de travailler sans agitation. En effet, lagitation produit des variations de concentration en oxygne dissous, en particulier lorsque la vitesse dagitation est mal contrle (ce qui est souvent le cas avec un agitateur magntique classique). Ces variations sont nfastes linterprtation des courbes de polarisation cathodique effectues sur les chantillons dacier inoxydable, puisquelles modifient la valeur du courant cathodique sur le palier de rduction de loxygne dissous. 5.1.1.5 Influence de lactivit enzymatique Linfluence de lactivit de la GOD en solution sur la cintique de la raction enzymatique (9) va tre tudie dans ce paragraphe.

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153

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 a) Evolution de la concentration en peroxyde dhydrogne Dans cette exprience, diffrentes activits de glucose-oxydase sont ajoutes dans une solution contenant 0,3 g/L de NaCl et 20 mmol/L de glucose. Les concentrations en peroxyde dhydrogne mesures sont reportes sur la figure 76. Lorigine de laxe des temps est linstant o la GOD et son substrat sont introduits dans le bcher.
2,4 2,2 2,0 1,8 1,6

50 u/L GOD 100 u/L GOD 500 u/L GOD 1000 u/L GOD 5000 u/L GOD

[H2O2] (mmol/L)

1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5

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temps (jours)

Figure 76 : volution de [H2O2] en eau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 20 mmol/L de glucose et de diffrentes activits de GOD (sans agitation)

La concentration maximale en H2O2 augmente globalement avec lactivit de la GOD (cf. tableau 23). Activit GOD (u/L) log(activit GOD en u/L) [H2O2] maximale (mmol/L) pH 72h 50 1,699 0,92 3,3 100 2 1,2 3,26 500 2,699 1,09 3,16 1000 3 1,43 3,1 5000 3,699 2,14 3,03

Tableau 23 : valeurs de lactivit de la GOD, du logarithme de lactivit de la GOD, de la concentration maximale en H2O2 atteinte et du pH 72 heures des diffrentes solutions de GOD et de glucose

La lgre diminution de la concentration en H2O2 dans les solutions de GOD 500 et 1000 u/L aprs 2 jours pourrait tre due un dbut de dismutation du peroxyde dhydrogne. Toutefois, dans le cas de la solution 1000 u/L, la variation de [H2O2] reste dans la marge derreur de la mesure. Nanmoins, leffet de la dismutation de H2O2 pourrait apparatre ds 48 heures. b) Evolution du pH A la fin de lexprience dcrite dans le paragraphe prcdent, le pH est mesur dans les diffrentes solutions. Les valeurs de pH 72 heures sont indiques dans le tableau 23 et traces en fonction du logarithme de lactivit de la GOD sur la figure 77.

154

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Courbe exprimentale Rgression linaire

3,3

3,2

pH = -0,139 log(activit GOD) + 3,534 R = 0,9917

2

pH
3,1 3,0 1,5 2,0 2,5

3,0

3,5

4,0

log (activit GOD en u/L)

Figure 77 : valeurs de pH dune solution deau de rivire artificielle, 3 jours aprs ajout de 20 mmol/L de glucose et de diffrentes activits de GOD (solution non agite)

Le pH dcrot (la concentration en acide gluconique augmente) lorsque lactivit de la GOD augmente. La dcroissance du pH en fonction de log(activit) est linaire de pente -0,14 environ. Cette diminution du pH est cohrente avec le fait que lautre produit enzymatique, le peroxyde dhydrogne, voit aussi sa concentration augmenter avec lactivit de la GOD.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 5.1.2 Dismutation du peroxyde dhydrogne

Lvolution de la concentration en H2O2 dans la solution ractifs enzymatiques est fonction du phnomne de dismutation de ce compos instable. La dgradation de H2O2 en H2O et O2 pourrait apparatre, dans certaines conditions exprimentales, ds 2 jours aprs lintroduction des ractifs enzymatiques. La dure de stabilit du peroxyde doit tre value prcisment, en labsence des ractifs enzymatiques. Pour cela, la physico-chimie dune solution de peroxyde dhydrogne (produit commercial) ajoute de 0,3 g/L de NaCl est suivie au cours du temps. 5.1.2.1 Dismutation de H2O2 dans la solution deau de rivire artificielle Lvolution de la concentration en peroxyde dhydrogne aprs ajout de 1 mmol/L de peroxyde dans leau de rivire artificielle a t suivie pour diffrents pH de la solution. Le pH est ajust par ajout dacide gluconique. Le pH de leau de rivire artificielle est de 6. Les rsultats obtenus sont visibles sur la figure 78.
1,2 1,0

[H2O2] (mmol/L)

0,8

0,6

0,4

0,2

pH6 pH5 pH4 pH3

0,0 0 2 4 6 8

temps (jours)

Figure 78 : volution de [H2O2] aprs ajout de 1 mmol/L de peroxyde dhydrogne dans leau de rivire artificielle ajuste diffrents pH par ajout dacide gluconique

155

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Les concentrations ont t mesures ponctuellement 15 jours aprs lajout de 1 mmol/L de H2O2 dans leau de rivire artificielle. Quel que soit le pH, la concentration en peroxyde dhydrogne est infrieure 0,08 mmol/L ; la dgradation de H2O2 peut tre considre comme totale 15 jours aprs lintroduction de ce compos dans leau de rivire artificielle. Dans leau de rivire artificielle (pH 6), la dgradation du peroxyde dhydrogne ne commence qu partir de 6 jours environ, alors qu pH 4 le phnomne de dismutation se met en oeuvre quasi-instantanment. A pH 3 (la valeur la plus proche des solutions de glucoseoxydase), la dismutation de H2O2 commence aprs 4 jours. Ces rsultats confirment les donnes bibliographiques. Le pH o la vitesse de dismutation est la plus leve est compris entre 3 et 4. Dans le cas dune eau 0,3 g/L de NaCl, ce pH semble plus prs de 4 que de 3, ce qui est en accord avec la valeur de 3,7 trouve dans la littrature [58]. 48 heures aprs lajout du peroxyde dhydrogne, la seule solution o la dismutation a dj dbut est la solution de pH 4. Finalement, daprs les mesures ralises en labsence des ractifs enzymatiques, il est tout fait possible que la dismutation de H2O2 puisse apparatre ds 48 heures dans les solutions de GOD 500 et 1000 u/L (figure 76), qui ont un pH compris entre 3,1 et 3,2. 5.1.2.2 Dismutation de H2O2 dans la solution ractifs enzymatiques Il a t dit auparavant que la dismutation du peroxyde dhydrogne ne se rpercute pas sur la concentration en H2O2 avant 48 heures passes dans la solution contenant la GOD et le glucose, mais que le temps dinitiation de la dismutation pourrait y tre assez proche de 48 heures. Pour tudier la dure de vie de H2O2 en solution ractifs enzymatiques , des mesures de la concentration en peroxyde dhydrogne ont t effectues sur une dure de 9 jours. Les rsultats sont visibles sur la figure 79.
1,0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

0,8

[H2O2] (mmol/L)

0,6

0,4

0,2

0,0 0 2 4 6 8

temps (jours)

Figure 79 : volution de la concentration en H2O2 en eau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (solution non agite)

La courbe de la figure 79 montre que la dismutation de H2O2 devient suffisamment quantitative pour abaisser la concentration partir dune date comprise entre 2,5 et 4 jours. La dismutation commence donc au plus tard 4 jours aprs lintroduction des ractifs enzymatiques. Ce temps caractristique est compatible avec les rsultats du paragraphe prcdent obtenus pH 3 et pH 4. Pour rsumer, lvolution de la concentration en peroxyde dhydrogne se fait en trois phases : 156

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

De 0 2 jours aprs lintroduction des ractifs enzymatiques, la vitesse de formation de H2O2 par la raction enzymatique est importante, alors que la vitesse de dgradation de H2O2 par dismutation est nulle ou trs faible. Par consquent, la concentration en H2O2 augmente rapidement. De 2 jours 4 jours, la vitesse de formation de H2O2 par la raction enzymatique diminue tandis que la vitesse de dgradation par dismutation augmente. Laugmentation de la concentration en peroxyde dhydrogne se fait donc de moins en moins rapidement, puis cesse compltement. Une valeur stable comprise entre 1 et 1,2 mmol/L est atteinte pendant quelques heures. Au-del de 4 jours, la vitesse de dismutation de H2O2 devient trs leve, et la concentration en H2O2 dcrot rapidement. Elle peut tre considre comme nulle audel de 8 jours.

5.1.2.3 Influence de la prsence dun mtal dans la solution Il est connu que la plupart des mtaux, et en particulier le fer, le chrome, le nickel et le molybdne, catalyse la dismutation du peroxyde dhydrogne. Le but de cette exprience est dvaluer le rle de catalyseur du platine et des aciers inoxydables 304L et 254SMO sur la dcomposition de H2O2. Dans cette exprience, les concentrations en peroxyde dhydrogne et en oxygne dissous sont suivies dans plusieurs solutions ractifs enzymatiques contenant ou non un chantillon de mtal (acier inoxydable ou platine). Les rsultats obtenus sont visibles sur la figure 80.
1,2

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

1,0

Sans mtal 304L 254SMO Platine

0,8

[H2O2] (mmol/L)

[O2] (mg/L)

0,6

0,4

1
0,2

Sans mtal 304L 254SMO Platine

0
0,0 0 2 4 6 8

temps (jours)

temps (jours)

Figure 80 : volution des concentrations en H2O2 et O2 dissous dans des solutions deau de rivire artificielle, aprs ajout t = 0 de 20 mmol/L de glucose et de 100 u/L de GOD, avec prsence ou non dun chantillon mtallique dans la solution (sans agitation)

a- [H2O2] = f(t)

b- [O2]dissous = f(t)

Durant la premire (entre 0 et 2 jours) et la deuxime (entre 2 et 4 jours) phase, les concentrations en peroxyde dhydrogne sont sensiblement identiques dans les 4 bchers. Dans la troisime phase, durant laquelle la dismutation de H2O2 devient prpondrante, les concentrations en peroxyde dans la solution ne contenant pas de mtal, dans la solution contenant un chantillon dacier 304L et dans la solution contenant un chantillon dacier 254SMO sont identiques. Les chantillons dacier inoxydable ne semblent pas avoir deffet catalytique sur la dismutation de H2O2. Le platine quant lui semble abaisser lgrement la vitesse de dcomposition du peroxyde dhydrogne. Le platine aurait plutt tendance inhiber faiblement la dismutation de H2O2.

157

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Les concentrations en oxygne dissous ne diffrent pas significativement dun bcher lautre. Cette observation est cohrente avec les mesures de [H2O2]. Dans les conditions exprimentales de cette tude, la prsence dun mtal en solution na deffet majeur ni sur lvolution de la concentration en peroxyde dhydrogne, ni sur lvolution de la concentration en oxygne dissous.

5.1.3 Synthse : physico-chimie de la solution

Ltude de la physico-chimie de leau de rivire artificielle ajoute soit des ractifs enzymatiques, soit de peroxyde dhydrogne commercial, a permis de mettre en vidence des points importants pour la suite de ltude, et en particulier pour linterprtation des courbes de polarisation cathodique. Ces courbes ont t traces dans les mmes conditions exprimentales que les diffrents titrages exposs dans ce chapitre et sont toujours ralises 48 heures aprs lintroduction des ractifs (ou des produits) enzymatiques. .
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lorsque du peroxyde dhydrogne est introduit dans leau de rivire artificielle (pH 6), la concentration reste constante pendant environ 6 jours. Lorsque la courbe de polarisation est trace, 48 heures aprs l'introduction du peroxyde, la concentration en H2O2 est encore gale la concentration initiale. En revanche, lorsque les ractifs enzymatiques sont ajouts dans leau de rivire artificielle (pH 3,1-3,2), la concentration peut diminuer bien avant 4 jours. Vraisemblablement, la concentration en H2O2 aura dj commenc diminuer lorsque la courbe de polarisation cathodique sera trace. En consquence, les concentrations en solution tant diffrentes, il est attendu que le courant du palier de diffusion de H2O2 soit plus faible (en valeur absolue) dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle additionne de peroxyde dhydrogne.

5.2 Caractrisation des couches doxydes formes dans le modle enzymatique

Ce paragraphe a pour objectif danalyser les couches doxydes formes sur les nuances 304L et 254SMO dans les diffrentes solutions mises en jeu dans le modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase de production de peroxyde dhydrogne, afin de dterminer linfluence des divers composs (GOD et glucose, H2O2, acide gluconique, catalase) sur le film passif, en particulier en terme de composition chimique et dpaisseur. Une comparaison avec les analyses XPS effectues sur des chantillons immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi (prsentes au chapitre 4) sera enfin effectue. Les couches passives formes dans les diverses solutions du modle enzymatique sont caractrises par XPS et par photolectrochimie, et leurs proprits de semi-conductivit sont tudies par la technique de Mott-Schottky.

158

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.2.1 Caractrisation des couches doxydes par photolectrochimie

Des mesures de micro- et de macro-photolectrochimie sont effectues pour dterminer linfluence dune solution de glucose-oxydase et de glucose sur la couche doxydes des aciers inoxydables. Les deux conditions dimmersion exprimentes sont les suivantes : 24h en eau de rivire artificielle (0,3 g/L de NaCl) : chantillons tmoins ou chantillons NaCl ; 24h dans une solution 0,3 g/L de NaCl, puis introduction de 1000 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose et attente de 48h : chantillons GOD . Lactivit choisie pour lenzyme est plus leve que les 100 u/L de la solution ractifs enzymatiques , afin daccentuer les modifications apportes aux oxydes du film passif. 5.2.1.1 Acier 304L tmoin immerg en eau de rivire artificielle Ces conditions exprimentales sont tudies par des mesures macro-photolectrochimiques. Les manipulations ralises sur ce type dchantillons sont dlicates, du fait de limportant niveau de bruit observ sur les diffrentes caractristiques enregistres. De plus, dans la solution deau de rivire artificielle, lacier inoxydable 304L a un potentiel de piqre relativement bas (compris entre +380 et +400 mV/ECS, cf. 5.5.1) quil ne faut pas dpasser, sous peine de dgrader totalement la couche passive. En raison du niveau de bruit particulirement lev, la caractristique en potentiel de ce type dchantillons ne peut tre trace. Une tude prliminaire est mene afin de connatre le type de polarisation appliquer pour raliser les mesures. Elle montre que le photocourant est non ngligeable uniquement sous polarisation anodique par rapport au potentiel de corrosion libre Ecorr (proche de 50 mV/ECS). Ceci prouve que les phases prsentes ont des proprits semiconductrices de type n (photocourant positif aux potentiels de polarisation anodiques par rapport au potentiel de bande plate, suppos relativement voisin de Ecorr). Les figures 81a et b prsentent respectivement la caractristique en nergie et sa transforme linaire (Iph.E)1/2 obtenues un potentiel de polarisation anodique de +150 mV/ECS. Le spectre nest pas enregistr aux nergies infrieures 2,5 eV en raison de labsence total de signal photolectrochimique. Le premier signal sur le spectre en nergie est visible partir de 3 eV. Cette premire contribution de photocourant est appele C1. Puis une volution du signal apparat aux alentours de 4 eV, ce qui indique la prsence d'une deuxime contribution de photocourant appele C2. La transforme linaire (Iph.E)1/2 permet de dfinir les valeurs de gap des diffrentes contributions de photocourant. Elle prsente deux zones de linarit indiquant clairement des contributions photolectrochimiques C1 et C2 ayant des valeurs de gap respectives de 3 eV et 4 eV environ. Il semble dlicat de se prononcer sur les valeurs des deux gaps de faon plus prcise en raison du niveau de bruit leve constat sur le spectre. Les deux valeurs de gaps correspondent a priori deux phases semi-conductrices de type n prsentes dans le film passif.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

159

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

2e-9 2e-9 2e-9 1e-9

1.10-4 8.10-5
1/2 (I .E) 1/2

0.00010

0.00008

C2
E ~ 3 eV E ~ 4 eV

1e-9

Iph (A)

1e-9 8e-10 6e-10 4e-10 2e-10 0

C2

ph (Iph*E)

-5 0.00006 6.10 -5 4.10 0.00004 -5 2.10 0.00002

C1
3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

C1
2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

0
0.00000

2.5

Energie (eV)

Energie (eV)

Figure 81 : courbe en nergie et transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E) ralises sur un chantillon dacier inoxydable 304L immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle et polaris +150 mV/ECS

a- Spectre en nergie

b- Transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E)

5.2.1.2 Acier 304L immerg dans la solution de GOD 1000 u/L

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Ce paragraphe prsente les rsultats de macro-photolectrochimie obtenus sur des chantillons dacier 304L immergs dans la solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose. Comme pour le type dchantillons tudi prcdemment, les manipulations se sont rvles dlicates, encore une fois cause du niveau de bruit fortement lev et de la limite impose par le potentiel de piqre. Une caractristique en potentiel exploitable ne peut tre trace. Une tude prliminaire montre que le photocourant gnr par la couche passive est non ngligeable uniquement pour des potentiels appliqus anodiques par rapport au potentiel de corrosion libre (environ -70 mV/ECS). Ceci indique que les phases semi-conductrices prsentes sont de type n. Les figures 82a et b prsentent respectivement la caractristique en nergie et sa transforme linaire (Iph.E)1/2 obtenues un potentiel de polarisation de +200 mV/ECS. Comme pour les chantillons tmoins immergs dans leau de rivire artificielle, la rponse spectrale en nergie prsentent deux contribution photolectrochimiques C1 et C2. La courbe (Iph.E)1/2 donne des rsultats quasiment analogues aux prcdents. La transforme permet en effet de dterminer deux zones de linarit indiquant des contributions photolectrochimiques C1 et C2 ayant des valeurs de gap respectives de 3 eV et 4 eV environ. Ces deux contributions en photocourant correspondent a priori deux phases semiconductrices de type n distinctes au sein de la couche doxydes. A cette tape du travail, la conclusion intermdiaire sur lacier 304L est que quel que soit le milieu de formation de la couche passive (eau de rivire artificielle ou solution de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose), deux phases semi-conductrices, probablement de type n, sont dtectes avec des valeurs de gap respectives proches de 3 et 4 eV.

160

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5e-9
0.00018 0.00016

4e-9

0.00014 0.00012

C2
E ~ 3 eV E ~ 4 eV

1/2

3e-9

1/2 (Iph (I .E) *E)

Iph(A)

ph

C2

0.00010 0.00008 0.00006 0.00004

2e-9

1e-9

C1
2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

C1
2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0

0.00002 0.00000

Energie (eV)

Energie (eV)

Figure 82 : courbe en nergie et transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E) ralises sur un chantillon dacier inoxydable 304L immerg depuis 48 heures dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose, polaris +200 mV/ECS

a- Spectre en nergie

b- Transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

5.2.1.3 Acier 254SMO tmoin en eau de rivire artificielle a) Etude macro-photolectrochimique La figure 83 prsente la caractristique en potentiel ( une longueur donde de 280 nm soit 4,4 eV, valeur choisie aprs tude prliminaire) sur une plage de potentiel allant de -400 mV/ECS +400 mV/ECS, obtenue sur un chantillon dacier inoxydable 254 SMO immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle. La valeur du potentiel dabandon mesure sur cet chantillon est de -150 mV/ECS. Le photocourant gnr par le film passif augmente partir dune valeur proche de -200 mV/ECS, ce qui indique que les phases semi-conductrices prsentes dans la couche doxydes sont de type n (photocourant positif aux potentiels de polarisation anodiques par rapport au potentiel de bande plate, considr comme relativement proche du potentiel d'abandon).
2.5e-10

2.0e-10

1.5e-10

Iph (A)
1.0e-10 5.0e-11 0.0 -600 -400 -200 0 200 400 600

Figure 83 : courbe en potentiel ralise sur un chantillon dacier inoxydable 254 SMO immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle ( =280 nm)

V (mV/ECS)

Les figures 84-a et -b prsentent respectivement lvolution du photocourant en fonction de lnergie du rayonnement incident (spectre en nergie) et sa transforme linaire (Iph.E)1/2. Le spectre na pas t enregistr aux nergies infrieures 3 eV en raison de labsence total de signal photolectrochimique.

161

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 A nouveau, comme sur lacier 304L, deux contributions de photocourant C1 et C2 sont dtectes sur la rponse spectrale en nergie, respectivement partir dune nergie de 3 et de 4 eV. La transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E) permet quant elle destimer les valeurs de gap des diffrentes contributions photolectrochimiques. Dans cette exprience, les deux contributions de photocourant C1 et C2 ont des valeurs de gap respectives de 3 eV et 4 eV environ. Ces deux contributions correspondent deux phases semi-conductrices de type n prsentes dans le film passif. Une estimation plus prcise des nergies de gap est difficile en raison du niveau de bruit lev.
6e-11

2e-5

5e-11

4e-11

2e-5

C2
E ~ 3 eV

Iph(A)

1/2 (IphI.E) ph (A)

3e-11

C2
1e-5

2e-11

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

1e-11

C1
2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

E ~ 4 eV
5e-6

C1

Energie (eV)

0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

Figure 84 : courbe en nergie et transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E) ralises sur un chantillon dacier 254SMO immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle et polaris +300 mV/ECS

a- Spectre en nergie

b- Transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E)

Energie (eV)

b) Etude micro-photolectrochimique Les chantillons dacier inoxydable 254 SMO NaCl (immerg pendant 24 heures dans leau de rivire artificielle) sont le seul type dchantillons pour lequel une image en photocourant a pu tre ralise (figure 85). Cette image, de dimension 800 m x 800 m, est enregistre la longueur donde de 351,1 nm (3,53 eV > gap(C1) 3 eV) et devrait donc permettre de signer la prsence de la contribution C1 dans le film passif. Limage de la figure 85 montre que le photocourant est assez uniforme sur lensemble de la surface analyse. Cependant, de lgres variations locales sont visibles, en particulier sur limage en photocourant en trois dimensions prsente en figure 86. Cette observation indique que la phase semi-conductrice associe la contribution de photocourant C1 semble tre couvrante : elle recouvre la totalit de la surface des chantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle. Par ailleurs, plusieurs tentatives denregistrement dimages aux plus basses nergies se sont rvles infructueuses, notamment 2,41 eV et pleine puissance laser (2 W). Aucun photocourant na pu tre dtect, ce qui confirme clairement labsence totale de signal pour des nergies infrieures 3 eV et corrobore les rsultats macroscopiques. La couche passive ne contient pas de phase semi-conductrice ayant une nergie de gap infrieure 3 eV.

162

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Figure 85 : Image optique et en photocourant dun chantillon dacier inoxydable 254 SMO immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle et polaris +240 mV/ECS. Energie = 3,53 eV ( = 351,1 nm), image 800 800 m, pas de 8 m.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Figure 86 : Image en photocourant de la figure 85 reprsente en trois dimensions

5.2.1.4 Acier 254SMO immerg dans la solution de GOD 1000 u/L La caractristique en potentiel prsente en figure 87 montre quun photocourant non nul est obtenu autant pour les potentiels anodiques que pour les potentiels cathodiques par rapport au potentiel de corrosion libre (environ -80 mV/ECS). Cependant, tous les essais dacquisition de caractristiques en nergie des potentiels cathodiques nont donn aucun rsultat. Ces rsultats difficilement interprtables cette heure sembleraient indiquer quil puisse co-exister des phases semi-conductrices de type n et de type p dans le film. Ceci irait dans le sens des rsultats obtenus par les mesures de capacit suivant la technique de Mott-Schottky, qui dans certaines conditions exprimentales indiquent la prsence de phase(s) semi-conductrice(s) de type p (cf. 3.4). Toutefois, cette hypothse reste vrifier.

163

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

3.5e-10 3.0e-10 2.5e-10 2.0e-10

Iph (A)

1.5e-10 1.0e-10 5.0e-11 0.0 -100 0 100 200 300 400 500

Points raliss lobscurit = bruit

V (mV/ECS)

Figure 87 : courbe en potentiel ralise en lumire blanche sur un chantillon dacier inoxydable 254SMO immerg depuis 48 heures dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Les figures 88-a et b prsentent respectivement la caractristique en nergie et la transforme linaire (Iph.E)1/2 obtenues un potentiel de polarisation anodique de +300 mV/ECS. A nouveau, les contributions photolectrochimiques C1 et C2 sont retrouves sur la rponse spectrale en nergie. La transforme linaire permet de dterminer deux contributions photolectrochimiques C1 et C2 avec des valeurs de gap respectives de 3 eV et 4 eV environ. Par analogie avec les rsultats prcdents, ces deux contributions de photocourant correspondent a priori deux phases semi-conductrices de type n diffrentes.
1.4e-11

1e-5

1.2e-11

8e-6
1.0e-11

Iph (A)

6.0e-12

1/2 (Iph.E) (Iph*E)1/2

8.0e-12

C2

6e-6

E ~ 3 eV

C2
E ~ 4 eV

4e-6

4.0e-12

2.0e-12

C1
2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

2e-6

C1
2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5

0.0

Energie (eV)

Figure 88 : courbe en nergie et transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E) ralises sur un chantillon dacier 254SMO immerg depuis 48 heures dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose, polaris +300 mV/ECS

a- Spectre en nergie

b- Transforme linaire (Iph.E)1/2 = f(E)

Energie (eV)

La conclusion intermdiaire sur lacier inoxydable 254 SMO est que, quel que soit le milieu de formation de la couche passive (eau de rivire artificielle ou solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose), le film doxydes contient toujours 2 phases semi-conductrices, probablement de type n, ayant des valeurs de gap respectives de 3 et 4 eV. Ces deux phases semi-conductrices sont retrouves pour les deux nuances dacier inoxydable testes.

164

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.2.1.5

Diagramme comparatif des rapports C1/C2

Afin de pouvoir discuter par la suite de linfluence du milieu de formation de la couche doxydes sur sa composition, la figure 89 prsente lvolution du rapport de phases C1/C2 en fonction du matriau et des conditions dimmersion. Ce diagramme est obtenu en utilisant les valeurs de photocourant releves sur les caractristiques en nergie des valeurs arbitrairement choisies de 3,75 eV pour C1 et de 4,75 eV pour C2. En raison des niveaux de bruits levs constats sur les rponses spectrales, il devra tre en consquence comment avec prudence. Le but est ici dobserver lvolution relative dune contribution par rapport une autre, considrant quen photolectrochimie, la valeur absolue du signal dune contribution nest pas reprsentative de la quantit dune phase considre. En effet, un nombre important de paramtres peut influer sur le module du photocourant, entre autres le taux de centre de recombinaison des paires lectron trou, la densit dtats accepteurs dans la bande de conduction, la longueur de pntration de la lumire dans la phase, etc. Le rapport C1/C2 est plus lev dans la solution contenant la GOD et le glucose que dans leau de rivire artificielle, et ce quel que soit le matriau considr. Par consquent, il peut tre admis que la quantit de phase semi-conductrice de gap de plus faible nergie (3eV, contribution C1) augmente en prsence de glucose oxydase.
0.18 0.16 0.14 0.12 sans GOD GOD 1000 u/L GOD 1000 u/L

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C1/C2

0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00

sans GOD

254 SMO 304L 304L 254SMO Figure 89 : diagramme comparatif des rapports C1/C2 en fonction du matriau et de la solution dimmersion

5.2.1.6 Attribution des contributions photolectrochimiques C1 et C2 des phases semiconductrices Une discussion va tre mene afin dattribuer les contributions C1 et C2 des phases semiconductrices prsentes dans les films passifs tudis. Les diffrents oxydes pouvant faire partie du film sont envisags lment par lment.
Les oxydes de fer : lexprience et les calculs thermodynamiques montrent que les oxydes rencontrs dans les films passifs (anodiques et/ou thermiques) sont notamment les oxydes de degr III : lhmatite Fe2O3 et la solution solide infinie rhombodrique (Fe,Cr)2O3. Ces deux phases ont pu tre clairement associs des valeurs de gap respectives de 2,2 eV pour lhmatite Fe2O3 et de 2,65 eV pour la solution solide infinie rhombodrique (Fe,Cr)2O3 [252, 253].

165

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Pour les autres oxydes de fer de degr intermdiaires comme la magntite Fe3O4 ou la wustite (FeO), des modles semi-empiriques de prdiction montrent que les valeurs de gap, peu connues (voire totalement inconnues) dans la littrature, ne doivent pas scarter significativement des valeurs reportes pour Fe2O3 et (Fe,Cr)2O3. Par ailleurs, la thermodynamique indique clairement que ces oxydes sont instables. En consquence, il est trs peu probable que les contributions C1 et C2 puissent correspondrent aux oxydes de fer voqus ici.
Les oxydes de nickel : la seule phase semi-conductrice susceptible de contenir du nickel dans les films passifs (anodiques et/ou thermiques) est loxyde de nickel stable NiO (bunsnite), connu pour tre un semi-conducteur de type p avec un gap de lordre de 3,8 eV. Les contributions C1 et C2 tant semi-conductrices de type n, il est trs peu probable quelles correspondent loxyde de nickel NiO. Les oxydes de chrome : lexprience montre que seule la chromine Cr2O3 est susceptible de se former dans les films passifs (anodiques et/ou thermiques). La littrature portant sur cet oxyde ne donne gnralement quune valeur unique de gap, aux alentours de 3,5 eV, correspondant une semi-conductivit de type p. Pourtant, un certain nombre dtudes photolectrochimiques menes rcemment sur les films doxydation formes sur alliages chrominoformeurs et/ou chrome pur ont montr que la chromine Cr2O3 peut tre associe deux valeurs de gaps : 2,91 (semi-conductivit type n) et 3,55 eV (semi-conductivit type p) [252, 253]. Ces tudes ont mis en vidence quun comportement semi-conducteur de type n pour la chromine serait d la prsence dimpurets dans loxyde de chrome, crant ainsi des tats supplmentaires dans la bande dnergie interdite. Ce comportement de type n, avec un gap de 2,91 eV pourrait correspondre la contribution de photocourant C1. Les oxydes de molybdne : lexprience montre nouveau que seuls les oxydes de degr suprieurs (MoO2, MoO3) semblent stables dans les films passifs (anodiques et/ou thermiques) avec des valeurs de gaps peu connues, probablement autour de 3 eV. Lexprience montre cependant que ces oxydes ne sont que trs rarement dtects dans les films doxydation. Oxydes mixtes : dautres oxydes sont susceptibles de se former dans les conditions de cette tude, notamment certains spinelles de type NixFe(1-x)Cr2O4. Des tudes rcentes sur alliages de type Inconel ont montr, en couplant une analyse XPS et une analyse photolectrochimique, que ce type de spinelle peut prsenter une valeur de gap proche de 4 eV [254].

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5.2.1.7 Conclusion Compte tenu de la discussion qui a t mene, la contribution C1, prsente dans la couche passive des deux aciers inoxydables et ayant une nergie de gap de 3 eV environ, est attribue la chromine Cr2O3 semi-conductrice de type n. La contribution C2, prsente dans la couche passive des deux aciers inoxydables et ayant une nergie de gap de 4 eV environ, semble quant elle correspondre un spinelle de la forme NixFe(1-x)Cr2O4 semi-conducteur de type n.

166

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.2.1.8 Synthse Les films passifs tudis semblent tre essentiellement constitus de chromine Cr2O3 semiconductrice de type n (contribution C1) et de spinelle de la forme NixFe(1-x)Cr2O4 semiconducteur de type n (contribution C2). La chromine forme un film couvrant continment lacier 254SMO immerg dans leau de rivire artificielle. La prsence en solution des ractifs enzymatiques (GOD et glucose) favorise le dveloppement de la chromine au dtriment du spinelle au sein de la couche passive. Ni lhmatite Fe2O3, ni la solution solide (Fe,Cr)2O3 ne sont dtectes dans cette tude.

5.2.2 Analyse des couches doxydes par spectromtrie de photolectrons

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Les modifications apportes la composition chimique de la couche passive, ainsi qu son paisseur, par les diffrents composs mis en jeu dans le modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase (ractifs enzymatiques : GOD, glucose, catalase, et produits enzymatiques : acide gluconique et H2O2) sont tudies par XPS. Les diffrentes conditions dimmersion sont les suivantes : 72h dans une solution deau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl : chantillons tmoins ou chantillons NaCl ; 24h en eau de rivire artificielle, puis introduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose et attente de 48h (solution ractifs enzymatiques ) : chantillons GOD ou ractifs enzymatiques ; 24h en eau de rivire artificielle, puis introduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose et attente de 48h, puis introduction de 3370 u/L de catalase et attente de 24h : chantillons GOD-catalase ; 24h en eau de rivire artificielle, puis introduction de 10 mmol/L de H2O2 et attente de 48h : chantillons H2O2 . Cette concentration est assez leve par rapport aux valeurs de concentration en H2O2 obtenues en prsence de 20 mmol/L de glucose et 100 u/L de GOD ; 24h en eau de rivire artificielle, puis introduction de 1 mmol/L dacide gluconique et attente de 48h : chantillons acide gluconique . Deux chantillons (A et B) de chaque nuance ont t immergs pour chaque condition dimmersion, afin de vrifier la reproductibilit des rsultats. Sauf mention contraire, les rsultats indiqus sont identiques sur les deux chantillons, donc considrs comme reproductibles. 5.2.2.1 Rsultats obtenus sur lacier 304L (incidence normale) Les spectres vont dabord tre prsents (figures 90 93), puis la discussion portera sur les deux quantifications relatives effectues.

167

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 a) Spectres obtenus

C1s
28 26 24 22 20 18

NaCl GOD GOD puis catalase

CH-CH

C1s
28 26 24 22 20

NaCl H 2 O2 acide gluconique

C-O CH-CH O-C=O

C-O

kcoups/s

kcoups/s
290 285 280 275 270

16 14 12 10 8 6 4 2 0 295

O-C=O

18 16 14 12 10 8 6

295

290

285

280

275

270

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Ractifs enzymatiques

b- Produits enzymatiques

Figure 90 : spectres de C1s sur les chantillons dacier 304L, en fonction de la solution dimmersion

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O1s
55 50 45 40

C-O et H2O adsorbe

NaCl GOD GOD puis catalase

O1s
50 45

C=O et H2N-C=O OH adsorbs

H2O adsorbe OH adsorbs C-O

NaCl H2O2 acide gluconique

40 35

kcoups/s

kcoups/s

35 30 25 20

oxydes

C=O
30

oxydes
25 20 15

15
10

10
5

545

540

535

530

525

520

545

540

535

530

525

520

Energie de liaison

Energie de liaison (eV)

a- Ractifs enzymatiques

b- Produits enzymatiques

Figure 91 : spectres de O1s sur les chantillons dacier 304L, en fonction de la solution dimmersion

Cr2p
45

NaCl GOD GOD puis catalase

Cr2p
28 27

NaCl H2O2 acide gluconique

Cr oxy-hydroxydes
40

26 25 24

Cr oxy-hydroxydes

35

23

kcoups/s

kcoups/s

22 21 20 19 18 17

Cr mtal

30

Cr mtal
25

20

16 15

15 595 590 585 580 575 570

14 595 590 585 580 575 570

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Ractifs enzymatiques

b- Produits enzymatiques

Figure 92 : spectres de Cr2p sur les chantillons dacier 304L, en fonction de la solution dimmersion

168

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Fe2p
65 60

Fe oxy-hydroxydes

NaClA GODA GODcataA

50

Fe2p Fe oxy-hydroxydes

NaCl H2O2 acide gluconique

45
55 50 45

40

kcoups/s

kcoups/s

Fe mtal

Fe mtal
40 35 30 25 740 730 720 710 700

35

30

25

20 740 730 720 710 700

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

a- Ractifs enzymatiques

b- Produits enzymatiques

Figure 93 : spectres de Fe2p sur les chantillons dacier 304L, en fonction de la solution dimmersion

b) Quantification relative de tous les lments La quantification relative de tous les lments pris en compte est faite en incidence normale (tableau 24). Le fer mtal et le chrome mtal sont dtects, par consquent la totalit de la couche doxydes est analyse. Les deux lments les plus prsents sont le carbone et loxygne. Le carbone provient des diffrentes sources de pollution (air ambiant, polissage) dans le cas des chantillons NaCl et des chantillons H2O2 . Dans le cas des chantillons GOD et GOD-catalase , le spectre du carbone tient aussi compte de ladsorption de lenzyme, du glucose, de lacide gluconique sur la surface des chantillons. Ces trois molcules organiques carbones sont susceptibles de contribuer au pic de C1s. Il est intressant de comparer les deux chantillons dacier 304L immergs dans la solution ractifs enzymatiques . Lchantillon A contient 45,1% de carbone, alors que lchantillon B en contient 64,2 %. Cette diffrence sexplique par une diffrence dadsorption des trois molcules organiques. Leur adsorption a t beaucoup plus quantitative sur la surface de lchantillon B. Cette adsorption semble tre peu reproductible, ou tout le moins les paramtres influenant ladsorption nont certainement pas t contrls durant lexprience. Pour les comparaisons ultrieures, seul lchantillon GOD-A sera pris en compte. Lchantillon GOD-B permet de mettre en vidence une adsorption des molcules organiques, quantitativement peu reproductible. Par ailleurs, lchantillon GOD-catalase prsente des pourcentages atomiques en carbone et en azote levs ; l aussi, la surface de lchantillon est recouverte dune couche de molcules organiques. Loxygne dtect est indicateur, outre dune pollution par molcule organique contenant des atomes doxygne, de la prsence doxydes et dhydroxydes constituant le film passif. Le chrome et le fer sont prsents sous forme mtallique et sous des formes oxydes, en revanche le nickel est uniquement ltat de mtal. La teneur relative en nickel nvolue pas significativement. Cette premire quantification fait dj apparatre des tendances. Lchantillon ayant t en contact avec la solution de glucose-oxydase contient plus de chrome et moins de fer que lchantillon NaCl immerg en eau de rivire artificielle. En prsence de la GOD, un enrichissement en Cr et un appauvrissement en Fe sont observs. Lchantillon GOD-catalase ne peut tre caractris convenablement par cette quantification. La couche de molcules organiques adsorbes est trop importante, seuls le
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169

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 carbone, loxygne et lazote ressortent vraiment. En particulier, la forte teneur en azote reflte ladsorption de la catalase, qui semble former facilement une couche dadsorption supplmentaire recouvrant les autres molcules organiques adsorbes. La quantification relative en lments Fe et Cr sera dterminante pour ltude de la composition chimique du film passif. Lchantillon ayant t en contact avec la solution de H2O2 semble, linverse des chantillons GOD , tre recouvert dune couche passive enrichie en fer au dtriment du chrome. Le peroxyde dhydrogne favoriserait llment fer au dtriment du chrome. Lchantillon ayant t en contact avec lacide gluconique semble tre recouvert dune couche organique adsorbe. Ladsorption constate sur lchantillon GOD-A pourrait tre due ladsorption de lacide gluconique. Les quantits relatives de Fe et de Cr diminuent. Leffet de lacide gluconique sur la couche doxydes est masqu par la prsence de la pellicule de molcules dacide gluconique adsorbes. La quantification en terme de pourcentages relatifs de fer et de chrome permettra de le mettre en vidence. NaCl GOD-A GOD-B GOD-catalase H2O2 acide gluconique C 44,1 45,1 64,2 57 54,9 60,9 O 41,7 41,9 33 29,8 35,6 28 Cr 3,8 6,1 0,1 3,2 1,9 2 Fe 5,8 4,5 0,1 2,1 6,3 1,8 Ni 0,3 0,7 0 0,3 0,1 0,1 N 1,7 0,8 0 7,3 1,1 1,5 Cl 2,6 0,9 0 0,8 0,1 5,7

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Tableau 24 : composition du film passif (en pourcentages atomiques relatifs) obtenu sur des chantillons dacier 304L dans diffrentes conditions dimmersion

Cette tude va tre affine laide de la quantification relative ne prenant en considration que le chrome et le fer. c) Quantification relative des lments Fe et Cr Les rsultats sont donns en terme de pourcentages de mtal total dtect (fer et chrome), de fer oxyd et de chrome oxyd dans le tableau 25. La dernire colonne indique le rapport fer oxyd/chrome oxyd. Nuance dacier NaCl GOD (A) GOD-catalase H2O2 Acide gluconique % mtal total (Fe + Cr) 37,5 43,6 39,7 13,1 42,2 % Fe oxyd 33,9 8,6 10,1 63 19,3 % Cr oxyd 28,6 47,8 50,2 23,8 38,5 Fe ox/Cr ox 1,18 0,18 0,2 2,65 0,27

Tableau 25 : rsultats XPS (en pourcentages atomiques relatifs) obtenus sur le film passif dchantillons dacier 304L dans diffrentes conditions dimmersion, valeurs normalises par la quantit totale de Fe et de Cr

Actions des ractifs enzymatiques La GOD provoque un fort enrichissement de la couche doxydes en chrome au dtriment du fer. Lpaisseur de la couche passive ne semble pas tre affecte significativement dans la solution ractifs enzymatiques .

170

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Laddition ultrieure de catalase ne modifie ni les teneurs relatives en chrome et en fer dans la couche doxydes, ni lpaisseur du film passif.
Actions des produits enzymatiques : Laddition de 10 mmol/L de H2O2 en solution est lorigine dune forte augmentation de la teneur relative en fer dans le film passif (au dtriment du chrome). Le peroxyde dhydrogne gnre une trs forte croissance de la couche doxydes, dont lpaisseur est beaucoup plus importante (faible quantit de mtal dtecte). Ceci sexplique par le caractre oxydant puissant de H2O2. Cet effet nest pourtant pas retrouv en prsence de glucose-oxydase catalysant la production de H2O2. Ceci pourrait tre d la prsence dacide gluconique, autre produit de la raction qui doit tre pris en compte. Par ailleurs, il faut rappeler que la concentration du peroxyde dhydrogne est de 10 mmol/L dans le cas des chantillons H2O2, tandis quelle atteint au maximum 2 mmol/L en solution de glucose-oxydase 100 u/L. Le choix dune aussi forte concentration en H2O2, suprieure celle obtenue dans le cadre du modle enzymatique, a t fait afin damplifier leffet du peroxyde dhydrogne sur le film passif. Les rsultats obtenus montrent que lpaisseur de la couche doxydes nest pas modifie lorsque la concentration en H2O2 reste faible (infrieure 2 mmol/L), en tout cas en prsence dacide gluconique. Les chantillons immergs 48h dans la solution dacide gluconique ont une couche passive enrichie en chrome au dtriment du fer. Lacide gluconique semble favoriser le chrome au sein de la couche doxydes. A linverse de H2O2, lacide gluconique est prsent une concentration proche de celle obtenue dans la solution GOD. Lpaisseur du film nest pas modifie significativement aprs ajout de lacide gluconique.

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La composition chimique du film passif dans la solution ractifs enzymatiques (chantillons GOD ) est trs proche de la composition du film dans la solution dacide gluconique 1 mmol/L. Il semble que laction de lacide gluconique sur la couche doxydes (enrichissement relatif en chrome, pas de variation de lpaisseur) soit prpondrante devant celle du peroxyde dhydrogne (enrichissement relatif en fer, forte augmentation de lpaisseur) dans la solution ractifs enzymatiques . d) Conclusion Lenrichissement en chrome du film passif form au contact de la solution ractifs enzymatiques (en prsence de GOD et de glucose) est d la prsence de lacide gluconique. En effet, le peroxyde dhydrogne a plutt tendance former une couche doxydes paisse et trs enrichie en fer, alors que lacide gluconique ne modifie pas lpaisseur du film et a plutt tendance lenrichir en chrome. Leffet de lacide gluconique semble lemporter sur leffet de H2O2. Il est noter que leffet de H2O2 est accentu dans cette tude, en raison du choix dune concentration en peroxyde dhydrogne trs leve. Laction des enzymes sur la couche passive de lacier inoxydable 304L est donc due laction de lacide gluconique, qui privilgie un enrichissement en chrome sans modifier lpaisseur du film. La catalase na pas deffet sur le film passif.

5.2.2.2 Rsultats obtenus sur le 254SMO (incidence normale) Les spectres vont dabord tre prsents (figures 94 97), puis la discussion portera sur les deux quantifications relatives effectues. 171

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

a) Spectres obtenus
C1s
24 22

C-O

NaCl GOD GOD puis catalase

C1s

22 20

NaCl H2O2 acide gluconique

20 18

CH-CH
18

C-O O-C=O CH-CH

kcoups/s

O-C=O
16 14 12 10 8 6 295 290 285 280 275 270

kcoups/s

16 14 12 10 8 6 295

Energie de liaison (eV)

290

285

280

275

Energie de liaison (eV)

Ractifs enzymatiques
NaCl GOD GOD puis catalase
C-O et H2O adsorbe

Produits enzymatiques
O1s
45

Figure 94 : spectres de C1s sur les chantillons dacier 254SMO, en fonction de la solution dimmersion
NaCl H2O2 acide gluconique

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50 45 40 35

C=O
40

C=O et OH adsorbs

OH adsorbs
35 30

kcoups/s

30 25 20 15 10

kcoups/s

25 20 15 10

oxydes

oxydes

5 545 540 535 530 525 520

545

540

535

530

525

520

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

Ractifs enzymatiques
Cr2p
26

Produits enzymatiques
Cr2p

Figure 95 : spectres de O1s sur les chantillons dacier 254SMO, en fonction de la solution dimmersion
NaCl GOD GOD puis catalase

NaCl H2O2 acide gluconique

28 26 24

Cr oxy-hydroxydes

24

Cr oxy-hydroxydes

Cr mtal

22

kcoups/s

kcoups/s

22 20 18 16

20

Cr mtal

18

16

14 12 595 590 585 580 575 570

595

590

585

580

575

570

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

Ractifs enzymatiques

Produits enzymatiques

Figure 96 : spectres de Cr2p sur les chantillons dacier 254SMO, en fonction de la solution dimmersion

172

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Fe2p
46 44 42 40 38

NaCl GOD GOD puis catalase

Fe2p
52 50 48 46 44 42 40

Fe oxy-hydroxydes

NaCl H2O2 acide gluconique

kcoups/s

kcoups/s

36 34 32 30 28 26 24 22 740

Fe oxy-hydroxydes Fe mtal

38 36 34 32 30 28 26 24 22 20

Fe mtal

730

720

710

700

740

730

720

710

700

Energie de liaison (eV)

Energie de liaison (eV)

Ractifs enzymatiques

Produits enzymatiques

Figure 97 : spectres de Fe2p sur les chantillons dacier 254SMO, en fonction de la solution dimmersion

b) Quantification relative de tous les lments La quantification relative de tous les lments pris en compte a t faite en incidence normale (tableau 26). Le fer mtal et le chrome mtal sont dtects, des photolectrons proviennent dune zone mtallique plus profonde que la couche doxydes, par consquent la totalit de la couche doxydes est analyse. Lpaisseur de la couche doxydes est infrieure la profondeur analyse, de lordre de quelques nanomtres. Les teneurs en molybdne et en nickel nvoluent pas significativement. Cette premire quantification permet dentrevoir quelques tendances. En prsence des enzymes, les teneurs relatives en carbone et en azote sont plus leves que dans le cas des chantillons tmoin NaCl . En particulier, la teneur en carbone augmente lorsque la glucose-oxydase est introduite, et la teneur en azote augmente crot fortement lorsque la catalase est ajoute (comme pour le 304L). Cette tendance dmontre ladsorption de molcules organiques sur la surface des chantillons dacier inoxydable. Les molcules de GOD, de glucose et/ou dacide gluconique sadsorbent sur la surface durant les 48 heures conscutives lajout de la GOD et du glucose. Puis lajout de catalase entrane une forte augmentation de lazote dans la couche organique adsorbe. La catalase semble sadsorber facilement par-dessus les molcules dj prsentes la surface. Lajout de H2O2 ou dacide gluconique na aucun effet sur les teneurs relatives en carbone et en azote. Lajout de peroxyde dhydrogne semble provoquer un enrichissement en fer au dtriment du chrome dans la couche doxydes. Ltude de la composition chimique du film passif va tre prcise par la quantification relative en lment chrome et fer. NaCl GOD GOD-catalase H2O2 acide gluconique C 42,4 55,5 63,7 40,4 39 O 43,4 37,6 26,2 41,6 44,3 Cr 4,1 1,7 1,2 3,7 5,3 Fe 6,2 1,5 0,5 7,6 3,8 Ni 0,6 0,3 0,3 0,4 1 Mo 0,2 0,9 0,7 0,4 0,7 N 0,9 1 6,5 1,7 1,3 Cl 2,4 1,5 0,9 4,2 5
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Tableau 26 : composition du film passif (en pourcentages atomiques relatifs) obtenu sur des chantillons dacier 254SMO dans diffrentes conditions dimmersion

173

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 c) Quantification relative des lments Fe et Cr Les rsultats sont donns en terme de pourcentages de mtal total dtect (fer et chrome), de fer oxyd et de chrome oxyd dans le tableau 27. La dernire colonne indique le rapport fer oxyd/chrome oxyd. % mtal total Nuance dacier % Fe oxyd % Cr oxyd Fe ox/Cr ox (Fe + Cr) NaCl 34,6 34 31,4 1,08 GOD (A) 20,2 34,3 45,5 0,76 GOD-catalase 40,5 4 55,5 0,07 H2O2 35,3 37,7 27 1,4 Acide gluconique 40,7 11,9 47,4 0,25
Tableau 27 : rsultats XPS (en pourcentages atomiques relatifs) obtenus sur le film passif dchantillons dacier 254SMO dans diffrentes conditions dimmersion, valeurs normalises par la quantit totale de fer et de chrome

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Actions des ractifs enzymatiques Lajout de glucose-oxydase et de glucose provoque un enrichissement du film passif en chrome au dtriment du fer. La GOD semble favoriser llment chrome. Lpaisseur de la couche doxydes augmente aprs ajout des ractifs enzymatiques. Lajout ultrieur de catalase accentue lenrichissement en chrome. En revanche, lpaisseur de la couche doxydes diminue et revient sa valeur initiale avant ajout de la GOD et du glucose. Actions des produits enzymatiques Les chantillons mis en contact pendant 48 heures avec la solution de H2O2 ont un film doxydes enrichi en lment fer au dtriment de llment chrome (moins marqu que pour la nuance 304L). Le peroxyde dhydrogne ne donne donc pas les mmes modifications de la composition chimique du film passif que la glucose-oxydase. Lpaisseur de la couche doxydes nest pas affecte par H2O2. Les chantillons mis en contact pendant 48 heures avec la solution dacide gluconique ont une couche passive enrichie en chrome. Lpaisseur du film doxydes nest pas modifie.

Comme pour lacier 304L, leffet de lacide gluconique (enrichissement en chrome) semble lemporter sur leffet de H2O2 (enrichissement en Fe) lorsque la raction de production de ces deux composs est catalyse par la glucose-oxydase. d) Conclusion Lenrichissement en chrome du film passif form en prsence de GOD et de glucose est d la prsence de lacide gluconique. En effet, le peroxyde dhydrogne a plutt tendance former une couche doxydes enrichie en fer, alors que lacide gluconique favorise un enrichissement en chrome. Leffet de lacide gluconique semble lemporter sur leffet de H2O2. Laction des enzymes sur la couche passive de lacier inoxydable 254SMO est donc due laction de lacide gluconique, qui privilgie un enrichissement en chrome au dtriment du fer. Il est noter que lpaisseur de la couche doxydes augmente en prsence de la GOD puis rediminue lorsque la catalase est ajoute. Lajout des produits enzymatiques ne permet pas dobtenir ces variations dpaisseur. Lpaississement de la couche doxydes dans la solution de glucose-oxydase semble ne pas tre d aux produits enzymatiques.

174

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.2.2.3 Rsultats obtenus sur lacier 254SMO (angle rsolu) Ces rsultats ont t obtenus sur les mmes chantillons dacier 254SMO que prcdemment, mais avec une inclinaison de 10 entre le plan de la surface et le dtecteur. Ceci permet de caractriser lextrme surface des chantillons et de voir si sa composition relative est diffrente de la composition relative de lensemble de la couche doxydes. Une quantification relative en lments fer et chrome a t ralise sur les chantillons dacier 254SMO immergs dans les solutions de NaCl (eau de rivire artificielle), de GOD ( ractifs enzymatiques ) et de H2O2. Les rsultats sont indiqus dans le tableau 28. Nuance dacier NaCl incidence 90 NaCl incidence 10 GOD incidence 90 GOD incidence 10 H2O2 incidence 90 H2O2 incidence 10 % mtal total % Fe oxyd (Fe + Cr) 34,6 34 4,1 68,1 20,2 34,3 7 37,6 35,3 37,7 3,3 77,4 % Cr oxyd 31,4 27,8 45,5 55,4 27 19,3 Fe ox/Cr ox 1,08 2,45 0,76 0,68 1,4 4,01

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Tableau 28 : rsultats XPS (en pourcentages atomiques relatifs) obtenus sur le film passif dchantillons dacier 254SMO dans diffrentes conditions dimmersion, avec deux angles dincidence diffrents, valeurs normalises par la quantit totale de fer et de chrome

Extrme surface enrichie en fer en eau de rivire artificielle En eau de rivire artificielle, lextrme surface du film passif est enrichie en fer. Pour aller plus loin dans la connaissance de la structure interne du film passif, il faudrait utiliser un plus grand nombre dangles dincidence. Une structure stratifie, o les oxydes de chrome formeraient une couche interne proche de linterface mtal/couche doxydes et les oxydes de fer une couche externe proximit de linterface film passif/lectrolyte, reste ltat dhypothse dans ce travail. Toutefois, cette tude permet daffirmer que le film passif est enrichi en Fe proximit de llectrolyte. Actions des ractifs enzymatiques et du peroxyde dhydrogne sur lextrme surface du fil passif Leffet denrichissement en chrome dans la solution ractifs enzymatiques est encore plus important lextrme surface de la couche doxydes. La teneur relative en chrome oxyd est en effet encore plus leve angle dincidence 10 qu angle dincidence 90. Leffet denrichissement en fer par le peroxyde dhydrogne est trs accentu lextrme surface du film passif. La teneur relative en fer est effectivement plus leve faible angle dincidence. Globalement, lextrme surface du film passif subit les mmes variations de composition chimique que la totalit de la couche doxydes, mais ces variations sont encore plus prononces. Ceci sexplique par le fait que la zone externe du film est en contact direct avec les espces chimiques incrimines (H2O2, acide gluconique) et en ressent plus fortement les effets.

175

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.2.2.4 Synthse : modle enzymatique Pour les diffrents types dchantillons analyss, les rapports fer oxyd/chrome oxyd et mtal/oxydes permettent dvaluer respectivement lvolution des teneurs relatives en fer et chrome et lvolution de lpaisseur du film passif. Ils sont reports dans les tableaux 29-30. Les rsultats en terme de pourcentages sont prsents sur les figures 98 et 99. Mtal/oxydes Fe ox/Cr ox NaCl 0,60 1,18 NaCl 0,53 1,08 GOD 0,77 0,18 GOD 0,25 0,76 GOD-catalase 0,66 0,2 GOD-catalase 0,68 0,07 H2O2 0,15 2,65 H2O2 0,55 1,4 Acide gluconique 0,73 0,27 Acide gluconique 0,69 0,25

Tableau 29 : ratios mtal/oxydes et Fe/Cr des chantillons dacier 304L en fonction de la solution dimmersion

Mtal/oxydes Fe ox/Cr ox

Tableau 30 : ratios mtal/oxydes et Fe oxyd/Cr oxyd dchantillons dacier 254SMO en fonction de la solution dimmersion

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80

Mtal Fe oxyd

60 %

Cr oxyd

40

20

0
NaCl GOD GOD-catalase

H2O2 H2O2

acide gluconique

Figure 98: pourcentage en mtal, fer oxyd et chrome oxyd des chantillons dacier 304L en fonction de la solution dimmersion
60
Mtal Fe oxyd

40 %

Cr oxyd

20

0
NaCl GOD GOD-catalase

H2 O 2 H2O2

acide gluconique

Figure 99 : pourcentage en fer, chrome, mtal, mtal oxyd des chantillons dacier 254SMO en fonction de la solution dimmersion

176

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

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Effet des diffrents composs sur le rapport Fe/Cr Leffet des diffrents composs tudis sur la composition chimique des couches doxydes est sensiblement le mme pour les deux nuances dacier inoxydable. Les couches doxydes dveloppes en solution ractifs enzymatiques sont enrichies en lment chrome au dtriment du fer. Un ajout ultrieur de catalase peut accentuer cet enrichissement en chrome (surtout sur lacier 254SMO). Cet enrichissement est encore plus prononc lextrme surface du film passif, zone en contact avec llectrolyte. Les couches doxydes dveloppes en solution dacide gluconique sont aussi enrichies en lment chrome. En revanche, les films doxydes forms en solution de peroxyde dhydrogne H2O2 sont enrichis en lment fer au dtriment du chrome. Ici aussi, ces enrichissements sont plus intenses dans la zone externe du film. Les deux produits enzymatiques ont un effet inverse sur la composition chimique du film passif. Etant donn lenrichissement en chrome observ dans la solution ractifs enzymatiques , il sensuit que leffet de lacide gluconique est prpondrant sur leffet de H2O2, en termes de composition chimique de la couche doxydes protectrice. Ces rsultats sont tout fait comparables aux analyses du film passif de lacier 254SMO lors dimmersion en eau de mer artificielle ASTM. Laction des diffrents composs ( ractifs enzymatiques , peroxyde dhydrogne, acide gluconique) sur la composition chimique de la couche doxydes prsente les mmes tendances dans les deux milieux. Effet des diffrents composs sur lpaisseur du film passif Leffet des diffrents composs tudis sur lpaisseur du film passif semble diffrer dun acier inoxydable lautre. Pour lacier inoxydable 304L, les deux enzymes et lacide gluconique nont pas deffet sur lpaisseur de la couche doxydes. En revanche, la prsence de H2O2 en solution entrane un paississement de la couche doxydes, qui pourrait varier avec la concentration en H2O2. Ce rsultat tait prvisible tant donn le caractre oxydant puissant du peroxyde dhydrogne, qui amliore la passivation de lalliage. Pour lacier inoxydable 254SMO, H2O2 et lacide gluconique nont pas deffet sur lpaisseur de la couche doxydes. En revanche, la prsence de GOD en solution provoque un paississement du film passif, puis lintroduction de catalase fait revenir la couche doxydes peu prs son paisseur initiale. Leffet des enzymes sur lpaisseur du film passif nest pas retrouv en utilisant les produits enzymatiques.

Pour conclure, leffet de la glucose-oxydase sur les films passifs des aciers inoxydables est le mme que leffet de lacide gluconique. Cet effet consiste en un enrichissement en chrome au dtriment du fer au sein de la couche doxydes, et en particulier lextrme surface. La catalase peut accentuer cet effet denrichissement en chrome (254SMO). La seule diffrence entre les films doxydes forms en solution de GOD et les films dvelopps en prsence dacide gluconique est observe sur les chantillons dacier 254SMO. La GOD a tendance faire augmenter lpaisseur du film, qui rediminue aprs une introduction ultrieure de catalase, alors que lacide gluconique ne modifie pas lpaisseur de la couche doxydes.

177

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.2.2.5 Conclusion : comparaison eau de rivire naturelle-modle enzymatique Tous les rsultats obtenus sont indiqus sur les figures 100 et 102 et en terme de pourcentage de mtal total (fer et chrome), de fer oxyd et de chrome oxyd. Les compositions chimiques des films passifs forms sur les deux nuances dans les diffrents environnement sont reprsentes sur les figures et 101 et 103. Pour lacier inoxydable 304L, les conditions dimmersion donnant la couche doxydes la plus proche de la couche doxydes forme en eau de rivire naturelle sont runies la fois dans la solution ractifs enzymatiques (note ici GOD ), dans la solution ractifs enzymatiques additionne de catalase, et dans une moindre mesure dans la solution dacide gluconique 1 mmol/L (figure). Les couches doxydes obtenues dans ces conditions sont globalement enrichies en lment chrome par rapport lchantillon NaCl immerg en eau de rivire artificielle. La couche doxydes dveloppe dans la solution dacide gluconique contient moins de chrome, vraisemblablement en raison de la faible concentration de la solution. Leffet denrichissement en chrome pH acide est retrouv dans leau de rivire naturelle. Leffet denrichissement en fer, constat dans une solution de peroxyde dhydrogne, est au contraire absent dans leau de Seine sur le site de Choisy.
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Du point de vue de la composition chimique et de lpaisseur, leffet (sur une longue chelle de temps) de limmersion dans une eau de rivire naturelle sur la couche passive dun chantillon dacier 304L est modlis correctement par la solution ractifs enzymatiques . Une solution dacide gluconique (1 mmol/L, voire une concentration lgrement plus leve) modlise aussi assez bien cet effet.
80
Mtal

Fe oxyd

60

Cr oxyd

40

20

0
NaCl GOD GODcatalase

H H2O2 2O2

acide gluconique

Seine

Figure 100 : pourcentage en mtal, fer oxyd et chrome oxyd des chantillons dacier 304L en fonction de la solution dimmersion
100%

80%

Cr oxyd
60%

Fe oxyd

40%

20%

0% NaCl GOD GODcatalase

H2O2 H2O2

acide gluconique

Seine

Figure 101 : composition de la couche passive dchantillons dacier 304L dans diffrentes conditions dimmersion

178

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Le comportement de lacier inoxydable 254SMO en eau de rivire naturelle est diffrent du comportement de lacier 304L. Le film doxydes dvelopp sur 254SMO lors de limmersion dans leau de Seine est en effet trs fortement enrichi en fer par rapport lchantillon tmoin NaCl immerg en eau de rivire artificielle. Le pourcentage de fer oxyd (oxydes et hydroxydes) est suprieur 45 %. Cette composition chimique est trs diffrente des compositions de film obtenues dans la solution ractifs enzymatiques , dans la solution ractifs enzymatiques additionne de catalase et dans la solution dacide gluconique 1 mmol/L. Il a t prouv que limmersion dun chantillon dacier 254SMO dans une solution de peroxyde dhydrogne 10 mmol/L provoque un enrichissement en fer de la couche doxydes. Dans le modle enzymatique, cette solution dimmersion est la seule dans laquelle le film passif senrichit en fer (comme en eau de rivire naturelle). Lenrichissement en fer est toutefois moins intense dans la solution de H2O2 que dans leau de Seine. Du point de vue de la composition chimique et de lpaisseur, leffet (sur une longue chelle de temps) de limmersion dans une eau de rivire naturelle sur la couche passive dun chantillon dacier 254SMO peut tre modlis par une solution de peroxyde dhydrogne 10%. Lenrichissement en fer est cependant moins pouss dans cette solution modle que dans leau de rivire naturelle.
60
Mtal Fe oxyd Cr oxyd

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40 % 20 0
NaCl GOD GODcatalase

H H2O2 2O2

acide gluconique

Seine

Figure 102 : pourcentage en fer, chrome, mtal, mtal oxyd des chantillons dacier 254SMO en fonction de la solution dimmersion
100%

80%

60%

Cr oxyd Fe oxyd

40%

20%

0% NaCl GOD GODcatalase H2O2 H2O2 acide gluconique Seine

Figure 103 : composition de la couche passive dchantillons dacier 254SMO dans diffrentes conditions dimmersion

179

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.2.3 Dtermination des proprits de semi-conductivit des couches doxydes par la technique de Mott-Schottky

Les modifications de la couche doxyde au contact des diffrents composs mis en jeu dans le modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase sont tudies par la technique de Mott-Schottky, qui permet de caractriser les proprits semi-conductrices des aciers inoxydables. Les diffrentes conditions dimmersion sont les suivantes : 24 heures en eau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl : chantillons NaCl ; 24 heures en eau de rivire artificielle, puis introduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose et attente de 48 heures (solution ractifs enzymatiques ) : chantillons 100 u/L GOD ; 24 heures en eau de rivire artificielle, puis introduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose et attente de 48 heures, puis introduction de 3370 u/L de catalase et attente de 48 heures : chantillons GOD puis catalase ; 24 heures en eau de rivire artificielle, puis introduction de 2 mmol/L de H2O2 et attente de 48 heures : chantillons H2O2 2mM. Cette concentration est en adquation avec les concentrations de peroxyde dhydrogne mesures dans la solution ractifs enzymatiques 48 heures (entre 1 et 2 mmol/L). 24 heures en eau de rivire artificielle, puis introduction de 1 mmol/L dacide gluconique et attente de 48 heures : chantillons acide gluconique 1mM . Des mesures de capacit par la mthode de Mott-Schottky sont ralises sur des chantillons daciers inoxydables 304L et 254SMO dans ces cinq conditions dimmersion. Leffet de la solution ractifs enzymatiques , leffet dun ajout ultrieur de catalase, et leffet des produits enzymatiques (peroxyde dhydrogne et acide gluconique) sur les proprits semiconductrices sont ainsi mis en vidence. 5.2.3.1 Rsultats obtenus sur lacier 304L Les diagrammes de Mott-Schottky obtenus sur les chantillons dacier inoxydable 304L sont prsents sur la figure 104. Les rsultats sont assez bruits : la dispersion des valeurs mesures est importante. Toutefois, la tendance gnrale des courbes permet linterprtation et le calcul des proprits semi-conductrices de lalliage. Les valeurs calcules du potentiel de bandes plates Ufb, de la densit des porteurs de charge Nq et de lpaisseur de la zone de charges despace W dans la zone de semi-conductivit de type n (entre -0,4 et 0,2 V/ECS) sont indiques dans le tableau de la figure 104. Le potentiel de bandes plates est denviron -0,5 V/ECS pour lchantillon tmoin immerg dans leau de rivire artificielle. Cette valeur est gnralement trouve en milieu aqueux ayant un pH proche de la neutralit (solution tampon lgrement basique [175], eau de mer artificielle [73, 179, 182], eau de mer naturelle [73]). Le potentiel de bandes plates dans la solution contenant du peroxyde dhydrogne est lgrement infrieur, proche de -0,6 V/ECS. Cette diffrence nest pas significative, elle peut provenir des incertitudes intrinsques la rgression linaire. En revanche, dans le cas des chantillons immergs dans les solutions GOD 100 u/L , GOD puis catalase et acide gluconique 1 mM , Ufb est proche de 180

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Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 0,2 V/ECS. Cette variation est un effet du pH. En effet, dans les deux solutions enzymatiques, le pH passe grosso modo de 5,8 avant lajout de la GOD et du glucose 3,3 aprs lajout. La catalase na pas deffet sur le pH. La variation pH denviron 2,5 devrait engendrer une augmentation de Ufb de 60x2,5, soit 0,15 V. Cette augmentation thorique est plus faible que laugmentation calcule partir des donnes exprimentales. Cest aussi le cas dans la solution dacide gluconique 1 mmol/L : le pH passe de 5,8 environ 4,2, soit une variation de 1,6, qui devrait engendrer une augmentation de 0,1 V de Ufb. Laugmentation thorique est l encore plus faible que laugmentation exprimentale . Cette diffrence peut provenir aussi de lincertitude de la rgression linaire. Toutefois, le rle du pH est bien confirm, et lvolution du pH explique correctement les dcalages du potentiel de bandes plates observs dans les solutions ractifs enzymatiques , GOD puis catalase , et acide gluconique 1 mM . La densit de donneurs Nd est denviron 2,3.1019 cm-3 pour lchantillon tmoin NaCl , valeur tout fait compatible avec les rsultats donns au chapitre 3 pour lacier inoxydable 316L en eau de rivire artificielle. La densit de donneurs augmente de faon consquente lorsque la GOD et son substrat sont introduits dans la solution de NaCl. Cet effet daugmentation de Nd est li la prsence des produits enzymatiques. Effectivement, une augmentation de Nd est aussi trouve dans la solution de peroxyde dhydrogne et dans la solution dacide gluconique. Les deux produits enzymatiques provoquent une augmentation de la densit de donneurs, et leurs deux effets se conjuguent lorsque les deux composs sont prsents en solution. Lorsque la catalase est introduite dans la solution ractifs enzymatiques (solution GOD puis catalase ), la densit de donneurs Nd diminue et revient une valeur proche de sa valeur initiale. Or lajout de catalase dans la solution ractifs enzymatiques ne modifie pas le pH mais catalyse la dismutation de H2O2. Il a t montr que, lorsque la catalase est introduite, la totalit du peroxyde dhydrogne est dgrade trs rapidement. Le pH acide ne semble donc pas suffire pour maintenir une valeur leve de Nd. Le rle du peroxyde dhydrogne dans laugmentation de la densit de porteurs de charge semble primordial. Lorsque la densit de porteurs de charge (lectrons) Nd est leve, comme cest le cas dans les solutions ractifs enzymatiques , H2O2 2 mM et acide gluconique 1 mM , le nombre dlectrons susceptibles de participer aux ractions cathodiques augmente, autrement dit la ractivit de la surface par rapport aux rduction des espces oxydantes (O2, H2O2) augmente.
NaCl 100 u/L GOD GOD puis catalase H2O2 2mM acide gluconique 1mM

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Solution NaCl GOD 100 u/L GOD puis catalase H2O2 2 mM

Ufb (V/ECS)

Nd (cm-3) 2,3.1019 7,2.1019 3,4.1019 1,2.1020 8,8.1019

W (nm) 0,22 0,11 0,15 0,14 0,12

4x10

10

-0,45 -0,15 -0,18 -0,61 -0,20

3x10

10

1/C (F .cm )

-2

2x10

10

1x10

10

0 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2

E (V/ECS)

Acide gluconique 1 mM

Figure 104 : diagrammes de Mott-Schottky et valeurs calcules des paramtres de semi-conductivit pour des chantillons dacier inoxydable 304L immergs dans les 5 solutions diffrentes

181

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Par ailleurs, la semi-conductivit de type p observe entre -0,8 et -0,6 V/ECS est marque pour les solutions GOD 100 u/L , GOD puis catalase et acide gluconique 1 mM , alors quelle nest pas visible dans les solutions NaCl et H2O2 2mM . Cette semiconductivit de type p pourrait tre due aux oxy-hydroxydes de chrome du film passif. Lenrichissement de la couche doxydes en chrome dans la solution ractifs enzymatiques et en prsence dacide gluconique serait alors lorigine de cette diffrence dans les diagrammes de Mott-Schottky. Cependant, les mesures de photocourant nont pas dtectes de phase semi-conductrice de type p (photocourant positif pour un potentiel de polarisation cathodique par rapport Ufb, considr voisin de Ecorr). Il se pourrait quune phase semi-conductrice de type p non dtecte lors des mesures de photolectrochimie soit prsente dans le film passif, dans certaines conditions exprimentales. La polarisation cathodique applique lors des mesures de photocourant pourrait tre trop faible par rapport au potentiel de bandes plates (environ -0,5 V/ECS daprs les diagrammes de Mott-Schottky) pour dtecter les phases semi-conductrices de type p.
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5.2.3.2 Rsultats obtenus sur lacier 254SMO Les diagrammes de Mott-Schottky et les valeurs calcules de Ufb, de Nq et de W (dans la zone de semi-conductivit de type n) peuvent tre lus sur la figure 105. Le potentiel de bandes plates Ufb est compris entre -0,4 et -0,3 V/ECS dans les solutions ayant un pH proche de la neutralit ( NaCl et H2O2 2 mM ). Il est compris entre -0,2 et -0,1 V/ECS dans les solutions plus acides ( GOD 100 u/L , GOD puis catalase , acide gluconique 1 mM ). Leffet du pH sur le potentiel de bandes plates est retrouv. Ufb augmente quand le pH diminue. La densit de donneurs Nd est denviron 1,7.1019 cm-3 pour lchantillon tmoin NaCl , valeur tout fait compatible avec les rsultats donns au chapitre 3 pour lacier inoxydable 316L. Cette densit augmente fortement lorsque la GOD et le glucose sont introduits dans la solution : elle atteint alors 8,9.1019 cm-3. Laugmentation de la densit de porteurs de charge est lie la prsence des produits enzymatiques en solution. En effet, une augmentation de Nd est aussi trouve dans la solution de peroxyde dhydrogne et dans la solution dacide gluconique. Les deux produits enzymatiques ont tendance faire augmenter la densit de donneurs. Dans la solution ractifs enzymatiques , la prsence des deux produits enzymatiques mne la superposition de leurs deux effets, et il en rsulte une augmentation de Nd. Lorsque la catalase est introduite dans la solution ractifs enzymatiques , la densit de donneurs augmente lgrement, contrairement au cas du 304L, o un ajout de catalase entrane une forte diminution de Nd. La solution GOD puis catalase a le mme pH acide que la solution ractifs enzymatiques mais ne contient plus de peroxyde dhydrogne. Le pH acide semble donc suffire pour maintenir une valeur leve de Nd. Pour lacier inoxydable 254SMO, lacide gluconique est le facteur principal de laugmentation de la densit de porteurs de charge.

182

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5x10

10

NaCl 100 u/L GOD GOD puis catalase 2 mM H2O2 1 mM acide gluconique

Solution NaCl GOD 100 u/L GOD puis catalase H2O2 2 mM

Ufb Nd (cm-3) W (nm) (V/ECS)

4x10

10

-0,39 -0,18 -0,11 -0,34 -0,13

1,7.1019 8,9.1019 1,0.1020 6,1.1019 5,0.1019

0,24 0,15 0,12 0,15 0,15

1/C (F .cm )

-4

3x10

10

-2

2x10

10

1x10

10

0 -1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

E (V/ECS)

Acide gluconique 1 mM

Figure 105 : diagrammes de Mott-Schottky et valeurs calcules des paramtres de semi-conductivit pour des chantillons dacier inoxydable 254SMO immergs dans diffrentes conditions exprimentales

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Comme pour lacier 304L, une semi-conductivit de type p est observe dans certaines solutions ( GOD puis catalase , H2O2 2 mM , acide gluconique 1 mM ) entre -0,8 et 0,6 V/ECS. Elle correspond une (ou plusieurs) phase(s) non dtecte(s) lors des mesures de photocourant, lexception des rsultats obtenus sur un chantillon dacier 254SMO immerg dans une solution contenant 1000 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose (cf. 5.2.1.4). L aussi, une phase semi-conductrice de type p non dtecte lors des mesures de photolectrochimie pourrait tre prsente dans le film passif, dans certaines conditions exprimentales. 5.2.3.3 Synthse : modle enzymatique Dans leau de rivire artificielle, les aciers inoxydables ont un potentiel de bandes plates Ufb proche de -0,5 V/ECS. Celui-ci varie avec le pH de la solution. Aux potentiels infrieurs Ufb, dans certaines conditions exprimentales (prsence de GOD et de glucose, prsence dacide gluconique), un comportement de semi-conducteur type p peut apparatre. La phase correspondante, non dtecte lors des mesures de photocourant, na pas pu tre identifie. Aux potentiels suprieurs Ufb (jusqu environ 0,2 V/ECS), les aciers inoxydables prsentent un caractre semi-conducteur de type n, gnralement attribu aux oxy-hydroxydes de fer. Cette semi-conductivit de type n a t plus particulirement tudie. Lajout de glucose-oxydase et de glucose dans une solution deau de rivire artificielle contenant un chantillon dacier inoxydable entrane une augmentation de la densit de porteurs de charge dans la couche de charges despace du film passif. Cet effet est d aux deux produits enzymatiques, le peroxyde dhydrogne H2O2 et lacide gluconique, qui ont tous les deux tendance faire augmenter la densit de donneurs Nd. Toutefois, en fonction du matriau, un produit enzymatique joue un rle plus important que lautre. Dans le cas de lacier inoxydable 304L, le compos principal entranant laugmentation de Nd est le peroxyde dhydrogne. Dans le cas de lacier inoxydable 254SMO, cest au contraire lacide gluconique qui semble jouer le rle prpondrant dans laugmentation de la densit de donneurs, ce qui est cohrent avec les tudes portant sur cette nuance en milieu eau de mer [73]. Cette augmentation de Nd a une influence sur les ractions cathodiques. Une densit de donneurs (lectrons pour un semi-conducteur type n) plus leve signifie un nombre dlectrons disponibles pour participer aux ractions de rduction sur les sites cathodiques

183

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 plus lev. La surface dun chantillon ayant une forte densit Nd est plus ractive vis--vis des ractions de rduction qui peuvent sy produire.

5.2.3.4 Conclusion : comparaison eau de rivire naturelle-modle enzymatique Les proprits de semi-conductivit des films passifs dacier inoxydables immergs en eau de rivire naturelle (cf. chapitre 4) sont proches de celles mesures en eau de rivire artificielle. Limmersion en eau de Seine ne semble affecter significativement ni les densits de porteurs de charge, ni le potentiel de bandes plates. En revanche, les valeurs de densit de porteurs de charge dans leau de Seine sont nettement infrieures aux valeurs trouves dans la solution ractifs enzymatiques et dans les solutions de produit enzymatique (H2O2, acide gluconique). Le modle enzymatique ne gnre pas les mmes proprits semi-conductrices que leau de rivire naturelle. Il affecte beaucoup plus ces proprits que ne le fait limmersion dans leau de Seine.
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Le modle enzymatique ne permet pas dobtenir un comportement semi-conducteur similaire celui observ dans leau de rivire naturelle.
5.2.4 Synthse : caractrisation des couches doxydes Composition du film passif : Les caractrisations prsentes dans ce chapitre montrent que le film passif des aciers inoxydables immergs en eau de rivire (naturelle ou artificielle) est constitu de deux phases semi-conductrices de type n : la chromine Cr2O3 et une phase contenant du fer, vraisemblablement un spinelle de la forme NixFe(1-x)Cr2O4. Les diagrammes de Mott-Schottky indiquent que le film passif pourrait aussi renfermer une phase semi-conductrice de type p (non dtecte en photolectrochimie), qui na pas pu tre identifie. Influence des diffrents composs du modle enzymatique sur le film passif : La prsence en solution des ractifs enzymatiques (GOD et glucose) favorise le dveloppement de la chromine au dtriment du spinelle au sein de la couche passive. Un ajout ultrieur de catalase peut accentuer lenrichissement en chrome. Les couches doxydes dveloppes en solution dacide gluconique sont aussi enrichies en lment chrome. Cet enrichissement en chrome semble ainsi tre un effet du pH acide. En revanche, les films doxydes forms en solution de peroxyde dhydrogne H2O2 sont enrichis en lment fer au dtriment du chrome. Les deux produits enzymatiques ont un effet inverse sur la composition chimique du film passif. Etant donn lenrichissement en chrome observ dans la solution ractifs enzymatiques , il sensuit que leffet de lacide gluconique est prpondrant sur leffet de H2O2, en termes de composition chimique de la couche doxydes. La prsence de H2O2 en solution entrane un paississement de la couche doxydes sur lacier 304L. Pour lacier inoxydable 254SMO, la prsence de GOD et de glucose en solution provoque un paississement du film passif, puis lintroduction de catalase fait revenir la couche doxydes peu prs son paisseur initiale. Dans le cadre du modle enzymatique, la solution reproduisant le mieux la composition chimique du film passif (rapport fer/chrome) form en eau de rivire naturelle est pour lacier

184

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 304L la solution ractifs enzymatiques (ainsi que la solution ractifs enzymatiques additionne de catalase, et dans une moindre mesure une solution dacide gluconique) et pour lacier 254SMO une solution de peroxyde dhydrogne.
Proprits semi-conductrices du film passif : Les proprits semi-conductrices de la couche passive forme en eau de rivire naturelle sont sensiblement identiques celles dune couche forme en eau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl. Lajout de glucose-oxydase et de glucose dans une solution deau de rivire artificielle entrane une augmentation de la densit de porteurs de charge dans la couche de charges despace du film passif. Cet effet est d aux deux produits enzymatiques, le peroxyde dhydrogne H2O2 et lacide gluconique, qui ont tous les deux tendance faire augmenter la densit de donneurs Nd. La solution ractifs enzymatiques , qui reproduit correctement lvolution de Ecorr du milieu eau de rivire naturelle , ne gnre pas les mmes proprits de semi-conductivit de la couche doxydes.

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185

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.3 Evolution du potentiel de corrosion libre en eau de rivire artificielle

Lvolution de Ecorr en fonction de la prsence des diffrents composs mis en jeu dans ce modle enzymatique (GOD, glucose, H2O2, acide gluconique) dans une solution deau de rivire artificielle va tre tudie.
5.3.1 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des ractifs enzymatiques

5.3.1.1 Evolution de Ecorr en prsence de glucose seul ou de GOD seule Des chantillons dacier inoxydable 304L, 316L et 254SMO sont immergs dans une solution deau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl. Aprs 24 heures dimmersion, 20 mmol/L de glucose ou 100 u/L de glucose-oxydase sont ajoutes dans la solution. Le potentiel de corrosion libre des chantillons est suivi tout au long de lexprience. Le tableau 31 rsume les valeurs de Ecorr mesures. Avant ajout de glucose Valeur moyenne de Ecorr (mV/ECS) -170 48 heures aprs ajout du glucose -150 Avant ajout de la GOD -165 48 heures aprs ajout de la GOD -135

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Tableau 31 : valeurs moyennes du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire artificielle, avec ajouts spars de 20 mmol/L de glucose ou de 100 u/L de glucose-oxydase

Ni le glucose seul, ni la GOD seule nont dinfluence significative sur le potentiel de corrosion libre. Lventuelle adsorption de ces composs ne modifie pas le potentiel dabandon. 5.3.1.2 Evolution de Ecorr en prsence de glucose et de GOD Llectrolyte est ici leau de rivire artificielle dfinie au chapitre 2 (0,3 g/L de NaCl). Leffet des ractifs enzymatiques est visualis par ajout de 20 mmol/L de glucose et 100 u/L de GOD (lorsque aucune autre valeur de concentration nest indique) aprs 24 heures dimmersion des chantillons mtalliques, selon le protocole dfini auparavant (chapitre 3). Tous les potentiels sont mesurs par rapport lECS. a) Influence de la nuance dacier inoxydable Lvolution du potentiel de corrosion libre Ecorr dchantillons dacier inoxydable des trois nuances slectionnes en prsence des ractifs enzymatiques est reprsente en figure 106. Acier 304L : la valeur stable atteinte au bout des premires 24 heures, avant ajout des ractifs enzymatiques, est comprise entre -150 et -50 mV/ECS. Lorsque lenzyme et son substrat sont introduits, le potentiel augmente trs rapidement. Ensuite, lallure peut tre assez variable, en raison dune mauvaise reproductibilit des valeurs de Ecorr. Gnralement, Ecorr augmente fortement puis chute brutalement aprs quelques heures.

186

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 La valeur finale est toujours comprise entre -20 et +80 mV/ECS. Dventuels sauts de potentiel entre une valeur haute et une valeur basse peuvent tre rencontrs (chantillon 3, figure). Les instabilits de Ecorr tmoignent vraisemblablement dune volution du film passif. Avant les chutes brutales, lorsque celles-ci surviennent suffisamment tard, Ecorr prend des valeurs denviron +350 +400 mV/ECS, comparables aux valeurs hautes obtenues lors de limmersion en eau de rivire naturelle. Nanmoins, les modifications du film passif induisant de fortes instabilits de Ecorr ne sont observes que dans le cadre du modle enzymatique, et pas en eau de rivire naturelle. Cest la diffrence principale qui peut tre releve entre ces deux milieux.
Acier 316L : les valeurs atteintes avant introduction de lenzyme et du glucose sont comprises entre -120 et -50 mV/ECS. Lorsque les ractifs enzymatiques sont ajouts en solution, Ecorr augmente brutalement et atteint des valeurs comprises entre +250 et +450 mV/ECS. Puis, dans la plupart des cas, le potentiel devient trs instable et peut chuter assez fortement. Les valeurs finales atteintes 48h sont trs disperses (de +100 mV +450 mV/ECS). Avant les ventuelles instabilits (ou lorsque le potentiel reste stationnaire), les valeurs de Ecorr en prsence des ractifs enzymatiques sont proches des valeurs trouves en eau de rivire naturelle. Toutefois, les instabilits notes dans la plupart des expriences dimmersion dchantillons dacier 316L en solution ractifs enzymatiques ne sont pas reprsentatives de lvolution de Ecorr en eau de rivire naturelle. Comme pour lacier 304L, le film passif semble subir des modifications dans la solution ractifs enzymatiques qui ne sont pas retrouves en eau de rivire naturelle. Acier 254SMO : les valeurs 24 heures sont dans lintervalle [-100 ;-50 mV/ECS]. Ensuite, lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits dans la solution, Ecorr augmente brutalement pour atteindre des valeurs comprises entre +280 et +440 mV/ECS. L encore, des instabilits apparaissent gnralement, toutefois la valeur moyenne de Ecorr (gnralement proche de 400 mV/ECS) nest pas affecte par ces instabilits. Comme pour les deux autres nuances dacier inoxydable, le modle enzymatique donne des valeurs de Ecorr proches des valeurs en eau de rivire naturelle, mais lapparition dinstabilits (non observes en milieu naturel) montrent que le film passif subit de fortes modifications en prsence de glucose-oxydase. Ces modifications semblent toutefois moins affecter lacier 254SMO que les deux autres nuances dacier inoxydable, ce qui est cohrent avec le fait que la couche doxydes de cet alliage (contenant plus de chrome et de molybdne) est plus passivante ou plus stable, donc plus rsistante un lectrolyte agressif.
0,4

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0,5

0,3

0,2

Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4

0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1

Ecorr (V/ECS)

0,1

0,0

Ecorr (V/ECS)

-0,1

-0,2

-0,2 -0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4

-0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

2,5

3,0

3,5

temps (jours)

temps (jours)

a- Acier 304L

b- Acier 316L 187

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,6 0,5 0,4

Ecorr (V/ECS)

0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4

temps (jours)

c- Acier 254SMO
Figure 106 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 20 mmol/L de glucose et de 100 u/L de GOD t = 24h environ

b) Influence de lactivit de la glucose-oxydase

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Diffrentes activits de GOD ont t testes, afin de dterminer linfluence de lactivit enzymatique sur le potentiel de corrosion libre. La concentration en glucose est toujours de 20 mmol/L. Les rsultats obtenus sur lacier 304L sont reprsents sur la figure 107. Quelle que soit lactivit enzymatique ajoute dans la solution, le potentiel Ecorr augmente fortement ds lajout des ractifs enzymatiques puis prsente des instabilits. Les valeurs finales sont comprises entre -100 et 80 mV/ECS.
5O u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L 10 000 u/L
0,2

0,3

0,2

0,1

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L 10 000 u/L

Ecorr (V/ECS)

0,1

Ecorr (V/ECS)
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

0,0

0,0

-0,1

-0,1

-0,2
-0,2

temps (jours)

10

15

20

temps (minutes)

a- Valeurs mesures sur 2 jours

b- Zoom des 20 premires minutes

Figure 107 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, aprs introduction de 20 mmol/L glucose et de diffrentes activits de GOD t = 0

Lactivit enzymatique na pas dimpact sur lallure globale de la courbe Ecorr = f(t), en revanche elle a une influence sur les premiers instants de lvolution de Ecorr. Le zoom de la figure 107b montre que la vitesse daugmentation dEcorr/dt augmente avec lactivit enzymatique. Laugmentation du potentiel dabandon se fait plus vite lorsque lactivit enzymatique augmente, mais ni la valeur finale atteinte au bout de 48 heures, ni le temps avant instabilit ne dpendent de lactivit enzymatique. c) Synthse Lintroduction de GOD et de glucose dans leau de rivire artificielle permet de gnrer une augmentation de Ecorr similaire laugmentation constate en eau de rivire naturelle (tout au moins pendant les premiers temps dimmersion). En prsence dune activit en GOD de 100 188

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 u/L et une concentration en glucose de 20 mmol/L en solution, le potentiel dabandon atteint des valeurs comprises entre 350 et 450 mV/ECS, correspondant aux valeurs les plus leves mesures dans leau de Seine. Toutefois, la prsence des ractifs enzymatiques entrane des modifications du film passif, induisant une forte diminution du potentiel dabandon, ce qui diffrencie le modle enzymatique du milieu naturel. A lexclusion de ce phnomne dinstabilits, le modle enzymatique reproduit bien lvolution de Ecorr en eau de rivire. Cette volution est acclre, puisque laugmentation du potentiel de corrosion libre est immdiate lorsque les ractifs enzymatiques sont ajouts, alors quen eau de rivire naturelle un certain temps de latence prcde laugmentation de Ecorr. Il ny a pas deffet de chacun des deux ractifs enzymatiques seul sur le potentiel de corrosion libre. Laugmentation de Ecorr na lieu que lorsque les deux ractifs sont simultanment prsents en solution. Ce sont par consquent les deux produits de la raction enzymatique, le peroxyde dhydrogne et lacide gluconique, qui modifient la valeur de Ecorr, comme le paragraphe suivant va le dmontrer.
5.3.2 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence de peroxyde dhydrogne

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Llectrolyte est ici leau de rivire artificielle, laquelle une certaine teneur en peroxyde dhydrogne est ajoute. Le choix de la concentration en H2O2 est fond sur la bibliographie. La concentration en H2O2 trouve au sein de biofilms naturels marins est comprise entre 1 et 10 mg/L (0,03-0,3 mmol/L) dans le travail dun auteur [3, 68], entre 0,3 et 30 mg/L (0,01-0,9 mmol/L) dans le travail dun autre [66], et est de 3 mg/L (0,09 mmol/L) dans une dernire publication [255]. La teneur en H2O2 dans un biofilm dvelopp en eau de mer naturelle peut mme atteindre la mmol/L [66]. En labsence dinformations suffisantes sur la teneur en H2O2 dans les biofilms naturels deau de rivire, le choix a t fait dutiliser une concentration en peroxyde dhydrogne comprise entre 1 et 10 mmol/L. Cette gamme de concentrations contient globalement les valeurs de [H2O2] mesures dans leau de rivire artificielle additionne de 20 mmol/L de glucose et de diffrentes activits de GOD (entre 50 et 5000 u/L), comprises entre 0,9 et 2,2 mmol/L en labsence dagitation de la solution (cf. figure 76). De plus, il est connu que la valeur maximale de Ecorr dpend fortement de la concentration en H2O2 [1]. Le choix de la concentration en peroxyde dhydrogne nest donc pas anodin. Des travaux prcdents ont montr que lajout de H2O2 dans une solution deau de mer artificielle entrane une augmentation de Ecorr. Ceci peut sexpliquer la fois par la rduction de H2O2 qui se superpose aux autres processus cathodiques [73] et par lvolution de la couche doxydes [17]. Les caractrisations prsentes au paragraphe 5.2 ont montr que la prsence de H2O2 dans leau de rivire artificielle provoque un enrichissement en fer (probablement sous la forme dun spinelle de type NixFe(1-x)Cr2O4) au dtriment du chrome au sein du film passif. 5.3.2.1 Influence de la nuance dacier inoxydable Lvolution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L est suivie en fonction du temps dimmersion dans leau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 1 mmol/L de H2O2 (figure 108). Avant introduction du peroxyde, la valeur de Ecorr est dans lintervalle [230 ; -80 mV/ECS]. Lorsque H2O2 est additionn dans la solution, Ecorr augmente brutalement

189

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 denviron 250-330 mV. Ensuite des instabilits apparaissent, Ecorr chute et termine des valeurs comprises entre -100 et -40 mV/ECS.
Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4

0,2

0,1

Ecorr (V/ECS)

0,0

-0,1

-0,2

-0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

temps (jours)

Figure 108 : volution du potentiel de corrosion libre de 4 chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 1 mmol/L de H2O2 t = 24h environ

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Cette exprience montre que la valeur maximale de Ecorr obtenue en prsence de 1 mmol/L de H2O2 est leve (environ +230 mV/ECS) mais quelle reste infrieure aux valeurs mesures en prsence des ractifs enzymatiques pouvant atteindre +450 mV/ECS. Le peroxyde dhydrogne en solution entrane une rapide augmentation du potentiel de corrosion libre mais ne semble pas tre en mesure dexpliquer la totalit de laugmentation de Ecorr dans la solution ractifs enzymatiques . La mme manipulation a t ralise sur des chantillons dacier inoxydable 316L, avec une concentration en H2O2 de 2 mmol/L. Le suivi du potentiel dabandon au cours du temps est reprsent sur la figure 109. Le potentiel en eau de rivire artificielle se stabilise entre -80 et 50 mV/ECS. Lorsque les 2 mmol/L de peroxyde dhydrogne sont introduites, le potentiel augmente brusquement et prend rapidement une valeur stationnaire denviron +430 mV/ECS.
0,5 0,4 0,3 0,2

Ecorr (V/ECS)

0,1 0,0 -0,1 -0,2 -0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

Echantillon 1 Echantillon 2

temps (jours)

Figure 109 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier 316L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 2 mmol/L de H2O2 t = 24h environ

Cette exprience permet de montrer qu la concentration de 2 mmol/L, le peroxyde dhydrogne peut expliquer laugmentation de Ecorr dans la solution de ractifs enzymatiques. Dans cette manipulation, peu dinstabilits sont visibles le trac du potentiel dabandon en fonction du temps. Ceci ne permet pas de conclure labsence de modifications fortes du film passif dans ces conditions exprimentales, puisque les valeurs de Ecorr et le phnomne dvolution de la couche doxydes semblent tre peu reproductibles.

190

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Leffet dun ajout de 10 mmol/L de H2O2 sur lvolution du potentiel dabandon dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle est reprsent sur la figure 110. La valeur de Ecorr aprs 24 heures dimmersion dans la solution de NaCl est denviron -70 mV/ECS. Lintroduction de H2O2 provoque une rapide augmentation de Ecorr qui atteint une valeur stationnaire proche de +390 mV/ECS. Quelques instabilits apparaissent sur le trac de Ecorr en fonction du temps.
0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2 -0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0

Ecorr (V/ECS)

Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4

temps (jours)

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Figure 110 : volution du potentiel de corrosion libre de 4 chantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 10 mmol/L de H2O2 t = 24h environ

La valeur finale de Ecorr est proche de celle obtenue en prsence des ractifs enzymatiques (100 u/L de GOD, 20 mmol/L de glucose). Lajout de 10 mmol/L de peroxyde dhydrogne dans la solution de NaCl permet de retrouver laugmentation du potentiel de corrosion libre. Il faut toutefois remarquer que, comme dans la solution ractifs enzymatiques , des instabilits apparaissent sur le trac du potentiel dabandon. La prsence du peroxyde dhydrogne en solution entrane des modifications du film passif induisant de fortes variations de Ecorr. Les instabilits releves dans cette exprience sont nanmoins trs peu nombreuses et assez faibles en terme de valeur de potentiel, et la valeur moyenne de Ecorr reste leve et proche de +390 mV/ECS. Les instabilits du film doxydes paraissent se rsorber delles-mmes, dans le cas du 254SMO dont la couche passive est particulirement efficace . 5.3.2.2 Influence de la concentration en peroxyde dhydrogne Diffrentes concentrations en peroxyde dhydrogne sont testes pour connatre leffet de ce facteur sur le potentiel de corrosion libre des chantillons dacier inoxydable. Les rsultats sont donns pour les nuances 304L et 254SMO.
Acier 304L La figure 111 expose le suivi du potentiel Ecorr en fonction du temps pour des chantillons dacier 304L en contact avec des solutions deau de rivire artificielle contenant soit 1 mmol/L (une exprience prsente), soit 10 mmol/L de H2O2 (deux expriences prsentes). La concentration en H2O2 semble avoir un effet sur laugmentation de Ecorr : plus la concentration en peroxyde dhydrogne est leve et plus le E initial est lev. Les valeurs finales de Ecorr sont aussi plus leves dans la solution contenant 10 mmol/L que dans la solution contenant 1 mmol/L. Toutefois, les instabilits de potentiel apparaissent dans les trois cas. La prsentation des rsultats de 2 chantillons identiques immergs dans une solution contenant 10 mmol/L de H2O2 dans des conditions identiques montre que la reproductibilit

191

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 de Ecorr nest pas assure. Dans un cas, le potentiel de corrosion libre subit des irrgularits mais garde sa valeur moyenne leve (environ 460 mV/ECS). Dans lautre cas, le potentiel subit des irrgularits peu prs au mme moment, mais sa valeur moyenne chute pour terminer aux alentours de 160 mV/ECS. Le phnomne dvolution du film passif semble tre stochastique.
0,5 0,4 0,3

Ecorr (V/ECS)

0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2

1 mM H2O2 10 mM H2O2 10 mM H2O2

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

temps (jours)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Figure 111 : volution du potentiel de corrosion libre de 3 chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de diffrentes concentrations de H2O2 t = 24h environ

Acier 254SMO Le trac de Ecorr en fonction du temps pour des chantillons dacier 254SMO en contact avec une solution deau de rivire artificielle contenant soit 1 mmol/L, soit 10 mmol/L de H2O2 est visible en figure 112. Comme dans le cas de lacier 304L, plus la concentration en peroxyde dhydrogne est leve et plus laugmentation de potentiel est importante. Des instabilits de Ecorr peuvent aussi apparatre, sans quil y ait de lien apparent entre ces instabilits et la concentration en peroxyde dhydrogne.
0,4 0,3 0,2

1 mM H2O2 10 mM H2O2

Ecorr (V/ECS)

0,1 0,0 -0,1 -0,2 -0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

temps (jours)

Figure 112 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de diffrentes concentrations de H2O2 t = 24h environ

5.3.2.3 Synthse Lintroduction de peroxyde dhydrogne dans une solution deau de rivire artificielle contenant un chantillon dacier inoxydable entrane une augmente du potentiel de corrosion libre. Une concentration de 2 mmol/L semble suffisante pour obtenir des potentiels proches de +420 mV/ECS, voisins de ceux obtenus dans la solution ractifs enzymatiques . Comme

192

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 dans cette solution, le film passif semble subir des modifications lorsque H2O2 est en solution. Des instabilits de Ecorr mettent en vidence lvolution de la couche doxydes. Il a t montr que le peroxyde dhydrogne peut expliquer tout ou partie de laugmentation du potentiel dabandon qui a lieu dans la solution ractifs enzymatiques . Le rle de lautre produit enzymatique, lacide gluconique, doit aussi tre pris en considration.
5.3.3 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence dacide gluconique

Llectrolyte est ici leau de rivire artificielle, laquelle une certaine concentration dacide gluconique est ajoute. Les rsultats sont prsents pour les nuances 304L et 254SMO. 5.3.3.1 Influence de la nuance dacier inoxydable La figure 113 reprsente le suivi du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier inoxydable 304L. Lacide gluconique est introduit en solution aprs 24 heures dimmersion une concentration de 10 mmol/L. Ds lajout de lacide, le potentiel de corrosion libre augmente rapidement denviron 130 mV. Ensuite, deux cas de figure apparaissent : soit le potentiel garde une valeur leve et atteint une valeur stationnaire denviron +150 mV/ECS, malgr des instabilits (chantillon 1), soit le potentiel diminue assez rapidement pour atteindre une valeur denviron -70 mV/ECS (chantillon 2). La mauvaise reproductibilit des mesures de Ecorr est retrouve avec lacide gluconique. Laugmentation instantane de Ecorr aprs ajout de lacide peut tre explique par lvolution du pH de la solution. Le pH avant ajout dacide gluconique est denviron 6. Lorsque lacide est introduit, le pH diminue assez rapidement jusqu une valeur denviron 3,8 (tableau 32). La diffrence de pH peut engendrer un saut de potentiel de 130 mV ( 2,2 X 60 mV) selon lquation de Nernst. Laugmentation de Ecorr dans les premier temps aprs lajout de lacide gluconique est due uniquement la baisse du pH. Laugmentation du potentiel dabandon denviron 130 mV (due la baisse de pH) est suivie pour lchantillon 2 dune diminution qui rapproche la valeur de Ecorr de sa valeur initiale. Cette diminution de Ecorr subsquente leffet pH a dj t dtecte dans dautres travaux [73]. Elle se produit des valeurs de potentiel trop leves pour correspondre une rduction de la couche doxydes. De plus, lacide gluconique est une espce oxydante (au sein du couple redox D-glucose/acide gluconique) qui ne peut rduire les oxydes du film passif. Lacide gluconique semble toutefois tre en mesure de modifier la couche doxydes (il a t montr par XPS que sa prsence dans leau de rivire artificielle entrane un enrichissement en chrome, sous forme de chromine Cr2O3 vraisemblablement, au sein du film passif), ce qui se ressent au niveau des valeurs du potentiel dabandon.

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193

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,1

Ecorr (V/ECS)

0,0

Echantillon 1 Echantillon 2

-0,1

-0,2 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

temps (jours)

Figure 113 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 10 mmol/L dacide gluconique t = 24h environ

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Leffet dun ajout de 1 mmol/L dacide gluconique sur le potentiel de corrosion libre dun chantillon dacier 254SMO et dun chantillon dacier 304L est reprsent sur la figure 114. Dans un premier temps, le potentiel dabandon des deux chantillons augmente fortement denviron 90 (304L) 130 mV (254SMO), ce qui est compatible avec les valeurs de pH mesures en solution (respectivement 4,25 et 4,1). Aprs ce pur effet pH, le potentiel dabandon diminue, ce qui traduit une volution de la couche passive des chantillons au contact de lacide gluconique. Le potentiel a ensuite tendance lgrement raugmenter, en particulier sur lchantillon dacier 254SMO. La diffrence de comportement entre les deux nuances dacier inoxydable ne parait pas significative, dautant plus que cette raugmentation a t trouve plus intense lors dautres expriences portant sur lacier 304L (cf. paragraphe suivant). La valeur finale de Ecorr est plus leve pour lchantillon dacier 254SMO que pour lchantillon dacier 304L.
0,1

0,0

Ecorr (V/ECS)

-0,1

304L 254SMO
-0,2

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

temps (jours)

Figure 114 : volution du potentiel de corrosion libre dun chantillon dacier 304L et dun chantillon dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 1 mmol/L dacide gluconique t = 24h environ

Leffet de lacide gluconique sur le potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables se dcompose en deux phnomnes ayant des temps caractristiques diffrents. Lorsque lacide est mis en solution, le pH diminue trs rapidement, ce qui provoque une augmentation rapide de Ecorr de 60 mV X pH dans les premiers instants. Par ailleurs, la prsence de lacide gluconique modifie la couche doxydes sur une chelle de temps plus longue, et cette volution du film passif se traduit par une diminution de Ecorr qui nest visible quune fois leffet pH termin.

194

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.3.3.2 Influence de la concentration dacide gluconique Quatre concentrations diffrentes (1, 5, 10 et 50 mmol/L) ont t utilises pour valuer leffet de la concentration en acide gluconique sur lvolution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L. Le pH initial de leau de rivire artificielle est dans cette exprience denviron 5,7. Les rsultats sont prsents sur la figure 115. La hausse de potentiel dans les premiers instants aprs ajout de lacide gluconique semble tre directement lie la valeur de concentration en acide introduite dans la solution. Le tableau 32 rsume les valeurs exprimentales des variations de Ecorr et de pH en fonction de la concentration [C6H12O7] en acide gluconique.
1 mM acide gluconique 5 mM acide gluconique 10 mM acide gluconique 50 mM acide gluconique

0,1

Ecorr (V/ECS)

0,0

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-0,1

-0,2

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

temps (jours)

Figure 115 : volution du potentiel de corrosion libre de 4 chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de diffrentes concentrations dacide gluconique t = 24h environ

[C6H12O7] pH mesur pH Ecorr (premiers instants) Ecorr/ pH

1 mmol/L 4,24 1,46 90 mV 61,64

5 mmol/L 4 1,7 130 mV 76,47

10 mmol/L 3,8 1,9 145 mV 76,32

50 mmol/L 3,43 2,27 190 mV 83,7

Tableau 32 : valeurs de pH et augmentation initiale de Ecorr pour diffrentes concentrations dacide gluconique introduites dans leau de rivire artificielle

Il apparat que la valeur du saut de Ecorr est bien gale environ 60 mV X pH. Laugmentation de Ecorr dans les premiers instants aprs lajout dacide gluconique est une consquence de la baisse du pH de la solution. Pour toutes les concentrations en acide gluconique testes, elle est automatiquement suivie dune diminution traduisant une volution de la couche doxydes sous leffet de lacide. 5.3.3.3 Synthse Lajout dacide gluconique dans leau de rivire artificielle entrane une modification du potentiel de corrosion libre des chantillons dacier inoxydable. Juste aprs lintroduction de lacide organique, une augmentation trs rapide de Ecorr est constate. Elle est lie la baisse de pH et gale 60 mV X pH. Ensuite, le potentiel de corrosion libre est affect sur une dure plus ou moins longue par des modifications du film passif dues laction de lacide gluconique. Ces rsultats permettent de montrer que : lacidit de la solution contribue laugmentation de Ecorr ;

195

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

lvolution de la couche doxydes peut jouer un rle non ngligeable dans les variations du potentiel de corrosion libre dans la solution ractifs enzymatiques . 5.3.4 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des produits enzymatiques

Leffet de lajout successif des produits enzymatiques (2 mmol/L de H2O2 et 1 mmol/L dacide gluconique, dans les deux ordres possibles) sur lvolution du potentiel dabandon dchantillons dacier 316L est montr sur la figure 116.
2 mM H2O2, puis 1 mM acide gluconique 1 mM acide gluconique, puis 2 mM H2O2
0,5 0,4 0,3

Ecorr (V/ECS)

0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2 0 1 2 3 4 5

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temps (jours)

Figure 116 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier 316L immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction successive de 2 mM de H2O2 et de 1 mM dacide gluconique, dans les deux ordres possibles

Lorsque le peroxyde dhydrogne est introduit en premier dans la solution, le potentiel libre augmente rapidement et fortement denviron 430 mV jusqu atteindre +370 mV/ECS. Leffet oxydant de H2O2, dj explicit auparavant, est retrouv. Un ajout ultrieur dacide gluconique fait tout dabord augmenter instantanment Ecorr (denviron 125 mV), en raison de la baisse de pH provoque par la dissociation de lacide, puis la tendance sinverse et Ecorr dcrot rgulirement, phnomne attribu des modifications apportes au film doxydes par lacide gluconique. Lorsque lacide gluconique est introduit en premier dans la solution, le potentiel dabandon augmente instantanment denviron 125-130 mV, en raison de labaissement du pH de 2 units. La prsence dacide gluconique dans le milieu entrane des modifications du film passif impliquant une diminution de Ecorr qui suit immdiatement la forte hausse initiale. Cette diminution de Ecorr parait plus faible que dans le cas o lajout dacide gluconique se fait aprs lajout de peroxyde dhydrogne : dans ce dernier cas, loxydation pralable de lchantillon par H2O2 a tendance limiter laction de lacide gluconique sur la couche doxydes. 48 heures aprs lajout dacide gluconique, le peroxyde dhydrogne est introduit dans la solution, causant une augmentation rapide de Ecorr denviron 250 mV. Cette augmentation est plus faible que dans le cas o le peroxyde dhydrogne est introduit en premier. Les modifications provoques au sein de la couche passive par lacide gluconique semblent dfavoriser loxydation ultrieure ralise par H2O2. Dans les deux cas de figure, la valeur finale de Ecorr est la mme. Les deux courbes deviennent quasiment superposes quelques heures aprs lajout du deuxime produit enzymatique.

196

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.3.5 Synthse

La prsence de glucose-oxydase et de glucose en solution est capable de modliser convenablement laugmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables. Cette enzyme permet de reproduire en laboratoire leffet dun biofilm deau de rivire naturelle sur lvolution du potentiel dabandon : lorsque la solution deau de rivire artificielle contient 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose, le potentiel augmente jusqu des valeurs comprises entre +350 et +450 mV, gales aux valeurs les plus leves mesures lors des immersions en eau de rivire. Ces quantits de ractifs enzymatiques simulent ainsi convenablement laugmentation du risque de corrosion localise induite par le biofilm. Leffet des ractifs enzymatiques sur le potentiel dabandon est uniquement d leffet des produits enzymatiques, le peroxyde dhydrogne et lacide gluconique. Le caractre oxydant de H2O2 et un effet de lacide gluconique sur le film passif ont t mis en vidence en eau de rivire artificielle, de manire assez similaire des travaux antrieurs portant sur une eau de mer artificielle [73]. Lacide gluconique engendre rapidement une augmentation de Ecorr en raison de son acidit, mais il est en mme temps capable de modifier la couche doxydes et de provoquer consquemment lannulation (ou lattnuation) de cette augmentation. Le bilan global de lintroduction dacide gluconique sur le potentiel de corrosion libre en eau de rivire artificielle est une faible augmentation. En revanche, lintroduction de peroxyde dhydrogne une concentration de lordre de la mmol/L dans leau de rivire artificielle fait augmenter le potentiel de corrosion libre jusqu environ +420 mV/ECS (pour une concentration de 2 mmol/L). Autrement dit, la prsence du peroxyde dhydrogne en solution permet de retrouver la mme volution de Ecorr que dans la solution ractifs enzymatiques . Il parait important de souligner que dans le modle enzymatique, laugmentation du potentiel dabandon est trs rapide ds les ractifs enzymatiques ajouts en solution, alors que la cintique de production de H2O2 est relativement lente (5.1). Une trs faible quantit de H2O2 (en ralit infrieure 1 mmol/L) semble suffire faire augmenter considrablement le potentiel de corrosion libre. Deux diffrences distinguent le comportement des aciers inoxydables en eau de rivire naturelle de leur comportement dans le modle enzymatique. En eau de rivire naturelle, laugmentation du potentiel de corrosion libre nest pas immdiate, et le temps de latence qui la prcde est de plusieurs jours (jusqu 25 jours en janvier sur le site de Choisy-le-Roi). En revanche, lorsque les ractifs enzymatiques sont ajouts dans leau de rivire artificielle, laugmentation de Ecorr est instantane. Lvolution du potentiel dabandon est fortement acclre dans le modle enzymatique. Lautre diffrence est quen eau de rivire naturelle, le potentiel de corrosion libre ne prsente pas (ou peu) dinstabilits, alors que lajout des ractifs ou des produits enzymatiques dans leau de rivire artificielle gnre de fortes instabilits de Ecorr. Les diffrents composs mis en jeu dans le modle enzymatique modifient fortement le film passif, ce qui gnre ces variations de potentiel.
5.3.6 Complments : nature des instabilits de Ecorr et rle de la couche passive

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Dans ce paragraphe, quelques considrations et rsultats exprimentaux vont tre donns pour baucher une premire proposition dexplication des variations de Ecorr. 197

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Il a t montr dans la bibliographie [49] et dans ce travail (chapitre 4) que le phnomne daugmentation du potentiel de corrosion libre gnr par le biofilm ne concerne pas que les aciers inoxydables, mais aussi de nombreux autres matriaux : platine, cupronickels Le fait que le potentiel dabandon du platine augmente au cours du temps sous laction du biofilm va lencontre du rle possible jou par la couche doxydes dans laugmentation de Ecorr sur les aciers inoxydables. En effet, le platine ne possde pas de couche doxydes, le mtal est nu, pourtant son potentiel dabandon augmente en milieu naturel non strile. Ce rsultat semble indiquer que lvolution de la couche doxydes nest pas le facteur principal de laugmentation du potentiel de corrosion libre, mais que cest plutt la modification des processus cathodiques et/ou anodiques qui explique lvolution de Ecorr. Cette tude a t mene dans un milieu diffrent du milieu eau de rivire artificielle utilis auparavant. En effet, les instabilits de Ecorr releves dans le modle enzymatique pourraient correspondre au dveloppement de piqres de corrosion la surface des chantillons. Cette forme de corrosion localise est due aux ions chlorures prsents dans la solution. En supprimant les ions chlorures, lventuelle apparition de corrosion par piqres est inhibe. Si les instabilits du potentiel dabandon sont retrouves en milieu Na2SO4 (lion sulfate SO42tant de plus un inhibiteur de corrosion), il pourra tre conclu que ces instabilits ne correspondent pas la formation de piqres. Le cation Na+ a t conserv teneur identique dans le nouvel lectrolyte, et lanion choisi pour remplacer Cl- est SO42-. Llectrolyte utilis dans cette partie de ltude est une solution 0,6 g/L de Na2SO4. 5.3.6.1 Evolution du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables en prsence des ractifs enzymatiques en milieu aqueux non chlorur Dans cette exprience, le potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable est mesur dans la solution de Na2SO4 avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose. Les rsultats obtenus sur la nuance 304L peuvent tre lus sur la figure 117, lorigine de laxe temporel tant linstant o les ractifs enzymatiques sont introduits dans la solution. Comme dans leau de rivire artificielle, le potentiel de corrosion libre avant lajout de la GOD et du glucose est compris entre -150 et -100 mV/ECS. Lajout des ractifs enzymatiques induit une forte et rapide augmentation de Ecorr, qui atteint au bout de 48 heures une valeur comprise entre +10 et +90 mV/ECS. Laugmentation du potentiel dabandon des aciers inoxydables en prsence de GOD et de glucose ne dpend pas du milieu aqueux (et en particulier ne dpend pas de la prsence de chlorures dans llectrolyte).
0,1

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Ecorr (V/ECS)

0,0

-0,1

Echantillon 1 Echantillon 2

-0,2 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45

temps (heures)

Figure 117 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons dacier 304L immergs dans 0,6 g/L Na2SO4, aprs introduction de 20 mmol/L glucose et de 100 u/L GOD

198

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Dautres expriences identiques ont montr que le potentiel de corrosion libre final peut atteindre des valeurs aussi leves que +250 mV/ECS, plus en adquation avec les valeurs attendues. Il semble donc que le potentiel Ecorr des chantillons 1 et 2 de la figure 117 soit nettement infrieur aux valeurs attendues. Moins de deux heures aprs lajout de lenzyme et du glucose, le potentiel dabandon de lchantillon 2 subit une cassure, son augmentation cesse, puis Ecorr diminue assez lgrement. Cette courbe prsente des ressemblances avec celles obtenues en eau de rivire artificielle. Comme en milieu chlorur, le phnomne daugmentation de Ecorr semble pouvoir tre interrompu par lapparition dinstabilits. Le milieu tant dpourvu dions Cl-, ces instabilits ne peuvent provenir dune corrosion par piqres. Laugmentation du potentiel de corrosion libre en milieu Na2SO4 contenant 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose est retrouve sur les aciers 316L et 254SMO. Les valeurs du potentiel dabandon avant et aprs ajout des ractifs enzymatiques sont indiques dans le tableau 33. Pour chaque nuance, une seule valeur de Ecorr (reproductible) est donne avant lajout des ractifs enzymatique. Les valeurs de Ecorr aprs introduction de la GOD et du glucose sont donnes pour deux chantillons diffrents.
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Ecorr (mV/ECS)

316L avant -102

316L aprs 135 ; 375

254SMO avant - 62

254SMO aprs 297 ; 342

Tableau 33 : valeurs du potentiel de corrosion libre dchantillons daciers inoxydables 316L et 254SMO avant et aprs introduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose dans une solution 0,6 g/L de Na2SO4

La dispersion des valeurs de Ecorr aprs lintroduction des ractifs enzymatiques montre que les instabilits du potentiel dabandon, trouves sur la nuance 304L en milieu Na2SO4, sont retrouves sur lacier 316L. Elles semblent toutefois moins frquentes. Ces instabilits de Ecorr ne sont pas dtectes sur lacier 254SMO. 5.3.6.2 Evolution du potentiel de corrosion libre du platine en prsence des ractifs enzymatiques Lvolution de Ecorr en fonction du temps pour des chantillons de platine immergs dans une solution 0,6 g/L de Na2SO4, laquelle sont ajoutes 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose, est trace sur la figure 118. Lchelle de temps dmarre au moment de lajout des ractifs enzymatiques. A t = 0, avant introduction de lenzyme et de son substrat, Ecorr est compris entre +115 et +230 mV/ECS. Une augmentation du potentiel dabandon est note ds que la GOD et le glucose sont ajouts dans la solution. La valeur finale de Ecorr est denviron 320 mV/ECS.

199

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,35

0,30

0,25

Ecorr (V/ECS)

0,20

Echantillon 1 Echantillon 2

0,15

0,10

10

20

30

40

50

temps (heures)

Figure 118 : volution du potentiel de corrosion libre de 2 chantillons de platine immergs dans 0,6 g/L Na2SO4, aprs introduction de 20 mmol/L glucose et de 100 u/L GOD

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Cette exprience permet de montrer que lajout de GOD et de glucose dans la solution de Na2SO4 entrane une augmentation consquente du potentiel de corrosion libre du platine. En labsence dune couche doxydes la surface du matriau, cette augmentation ne peut tre attribue qu des variations des ractions de rduction cathodiques et/ou des processus anodiques. Lattribution de laugmentation de Ecorr une modification des processus cathodiques est dailleurs de loin lexplication la plus reconnue par la communaut scientifique (1.1.2). Par ailleurs, la figure 118 montre que le potentiel de corrosion libre du platine subit aussi de nombreuses instabilits au cours du temps. Etant donn llectrolyte (absence de Cl-) et le matriau (platine) employs, ces instabilits ne peuvent tre dues lapparition de piqres la surface du mtal. Les instabilits de Ecorr releves dans la solution ractifs enzymatiques ne sont en aucun cas dues des piqres de corrosion. Elles ne peuvent pas non plus provenir de phnomnes interfaciaux lis ladsorption de lenzyme sur la surface des chantillons, puisquelles sont aussi dtectes lorsque du peroxyde dhydrogne ou de lacide gluconique ont t ajouts dans leau de rivire artificielle. Ces deux composs semblent capables de modifier la surface du matriau (la couche doxydes dans le cas des aciers inoxydables, les premires couches atomiques du mtal dans le cas du platine) et dinduire ainsi des instabilits de Ecorr. 5.3.6.3 Rle de la couche doxydes Dans cette exprience, deux chantillons de chaque nuance dacier inoxydable (304L, 316L, 254SMO) et deux chantillons de platine sont immergs pendant 24 heures en eau de rivire artificielle, puis les ractifs enzymatiques sont ajouts (100 u/L de GOD, 20 mmol/L de glucose) et le potentiel mesur pendant 48 heures. 48 heures aprs lintroduction des ractifs enzymatiques, les chantillons sont sortis de la solution et immdiatement rimmergs dans une solution contenant uniquement 0,3 g/L de NaCl. Le potentiel est alors remesur. La figure 119 prsente lvolution de Ecorr au cours du temps. Les chantillons dits couvillonns ont subi un frottement de la surface laide dun couvillon strile entre le prlvement dans la solution ractifs enzymatiques et la rimmersion dans leau de rivire artificielle, afin de sassurer que les molcules de GOD, de D-glucose, dacide gluconique et de H2O2 ventuellement adsorbes soient limines de la surface.

200

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Lide directrice de cette manipulation est dvaluer la contribution de la modification de la couche doxydes dans le phnomne daugmentation du potentiel de corrosion libre. Le temps caractristique dvolution de la couche doxydes en prsence dun nouvel environnement extrieur est assez long, son ordre de grandeur est suprieur la minute. Par consquent, si le potentiel Ecorr diminue immdiatement aprs limmersion finale en milieu chlorur sans enzyme, il peut tre conclu que laugmentation de Ecorr est principalement due la modification des processus cathodiques en prsence de la GOD et de son substrat. En revanche, si le potentiel dabandon conserve une valeur leve, alors le rle de la couche doxydes est ncessairement non ngligeable.
304L 304L couvillonn 316L 316L couvillonn

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1

0,6 0,5 0,4 0,3

254SMO 254SMO couvillonn Platine Platine couvillonn

Ecorr (V/ECS)
0 1 2 3 4 5

Ecorr (V/ECS)

0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,2 0 1 2 3 4 5

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-0,2

temps (jours)

temps (jours)

a- Aciers inoxydables 304L et 316L

b- Acier inoxydable 254SMO et platine

Figure 119 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons mtalliques immergs dans la solution ractifs enzymatiques depuis 48h, prlevs et rimmergs en eau de rivire artificielle ne contenant aucun ractif enzymatique

Les rsultats obtenus montrent que le potentiel de corrosion libre chute brutalement (et revient peu prs sa valeur initiale) lorsque les chantillons sont rintroduits dans le milieu NaCl priv de ractifs enzymatiques. La modification de la couche doxydes au contact de la solution ractifs enzymatiques pendant 48 heures ne permet pas elle seule de conserver une valeur leve de Ecorr. La prsence effective des deux ractifs enzymatiques en solution est ncessaire pour que le potentiel dabandon soit stable des valeurs leves. Pour conclure, laugmentation de Ecorr semble principalement due la modification des processus cathodiques (et/ou anodiques) en prsence de glucose-oxydase et de glucose. La couche doxydes volue au contact de la solution ractifs enzymatiques , comme cela a t dmontr au paragraphe 5.2, mais la contribution de cette volution au phnomne daugmentation du potentiel de corrosion libre est ngligeable. 5.3.6.4 Rle de H2O2 Dans cette exprience, les ractifs enzymatiques (100 u/L de GOD, 20 mmol/L de glucose) sont introduits dans leau de rivire artificielle aprs 1 jour dimmersion, puis 3370 u/L de catalase sont ajoutes aprs 3 jours. Lvolution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier 304L et dacier 254SMO est reprsente sur la figure 120.

201

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,3

0,2

Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3

0,5 0,4 0,3

Echantillon 1 Echantillon 2

0,1

Ecorr (V/ECS)

Ecorr (V/ECS)

0,2 0,1 0,0

0,0

-0,1

-0,2

-0,1 -0,2

-0,3 -1 0 1 2 3 4 5 6 7

temps (jours)

temps (jours)

a- Acier 304L

b- Acier 254SMO

Figure 120 : volution du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire artificielle, avec introduction de 20 mmol/L glucose et de 100 u/L GOD t = 1 jour, puis de 3370 u/L de catalase t = 3 jours

Pour les chantillons dacier 304L, avant lintroduction de la GOD et du glucose, le potentiel dabandon est compris entre -125 et -95 mV/ECS. Aprs lajout des ractifs enzymatiques, lvolution de Ecorr est fidle aux rsultats dj exposs prcdemment (augmentation puis instabilits). Enfin, lorsque, aprs trois jours dexprience, la catalase est mise en solution, le potentiel Ecorr diminue fortement et rapidement, pour terminer gnralement aux alentours de -180 mV/ECS (chantillons 2 et 3). 48 heures aprs lajout de catalase, le potentiel dabandon des chantillons est revenu des valeurs faibles proches des valeurs mesures avant ajout de la GOD. Pour les chantillons dacier 254SMO, avant lintroduction des ractifs enzymatiques, le potentiel dabandon est compris entre -40 et -10 mV/ECS. Aprs lajout de la GOD et du glucose, le potentiel de Ecorr augmente rapidement et fortement jusqu atteindre des valeurs comprises entre +350 et +450 mV/ECS. Lvolution du potentiel dabandon prsente des instabilits. Enfin, aprs ajout de la catalase, le potentiel Ecorr diminue fortement : 5 jours aprs le dbut de lexprience, Ecorr est compris entre -30 et +120 mV/ECS. 48 heures aprs lintroduction de catalase, le potentiel dabandon des chantillons est revenu des valeurs faibles assez proches des valeurs initiales. Cette exprience montre que lajout de catalase annihile laugmentation de Ecorr induite par la prsence de GOD et de glucose en solution. Il a t montr auparavant que cette augmentation en solution ractifs enzymatiques est en ralit due aux produits enzymatiques (et en particulier H2O2) dont la formation est catalyse par la GOD. Ainsi, ce sont lacide gluconique et surtout le peroxyde dhydrogne qui sont lorigine de laugmentation de Ecorr dans le modle enzymatique. Cette nouvelle exprience confirme ce rsultat. En effet, la catalase est une enzyme catalysant la dgradation de H2O2 selon la raction :
2 H 2O2 2 H 2O + O2
catalase

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(22)

Lintroduction de catalase abaisse fortement et rapidement la concentration en H2O2 dans la solution (sans modification notable du pH) et annihile laugmentation de Ecorr provoque par la glucose-oxydase. Par consquent, leffet de la GOD sur le potentiel de corrosion libre est trs majoritairement leffet du peroxyde dhydrogne.

202

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.3.7 Synthse gnrale : volution de Ecorr

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lintroduction de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose dans leau de rivire artificielle reproduit assez bien laugmentation de Ecorr observe en eau de rivire naturelle. De mme, lintroduction de 1 2 mmol/L de H2O2 provoque une augmentation de Ecorr similaire laugmentation trouve dans leau de la Seine. Lajout des ractifs enzymatiques ou du peroxyde dhydrogne permet de modliser correctement en laboratoire lvolution du potentiel de corrosion libre constate en eau de rivire naturelle, tout en acclrant le phnomne (pas de temps de latence). Cependant, une diffrence notable apparat entre le milieu naturel et le modle enzymatique : dans ce dernier, des instabilits du potentiel dabandon rvlent une modification forte de la surface du matriau, qui nest pas retrouve dans leau de Seine. Ces instabilits sont trouves la fois sur les aciers inoxydables et sur le platine, et ne dpendent donc pas du matriau. Ces instabilits sont trouves la fois en milieu chlorur et en milieu dpourvu dions chlorures, et ne dpendent donc pas de la prsence des ions Cl- en solution. Ces instabilits ne peuvent tre causes par la formation de piqres. Dans le cas des aciers inoxydables, elles semblent correspondre des modifications de la couche doxydes sous laction des produits enzymatiques. Laugmentation du potentiel de corrosion libre dans le modle enzymatique est due la fois lacide gluconique, qui abaisse le pH (contribution minoritaire), et au caractre oxydant de H2O2 (contribution majoritaire). Le peroxyde dhydrogne contribue laugmentation de Ecorr par deux processus diffrents : La prsence de H2O2 en solution modifie les ractions cathodiques. La rduction de O2 peut tre affecte par la prsence du peroxyde dhydrogne et par la raction enzymatique, et la raction de rduction de H2O2 se rajoute dans les ractions cathodiques. Il peut en rsulter une modification du courant cathodique pouvant tre lorigine de laugmentation de Ecorr. Linfluence des ractifs et des produits enzymatiques sur le courant cathodique va tre tudie dans la partie suivante. La prsence de H2O2 en solution modifie la couche doxydes recouvrant les aciers inoxydables. Il semblerait toutefois que cet effet nait quune influence ngligeable sur lvolution de Ecorr. Ainsi, lintroduction de GOD et de glucose (ou de H2O2 et dacide gluconique) dans la solution aurait pour consquence premire et quasi-immdiate de faire augmenter le courant cathodique, engendrant alors une augmentation du potentiel de corrosion libre. Le peroxyde dhydrogne et lacide gluconique de la solution modifient progressivement la couche doxydes, mais cette volution de la couche doxydes parait indpendante de laugmentation du potentiel dabandon, ce qui serait cohrent avec laugmentation de Ecorr constate sur des matriaux non passivables tels que le platine. Laugmentation du courant cathodique expliquerait laugmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables dans le modle enzymatique. Pour confirmer cette hypothse, des polarisations cathodiques doivent tre effectues.

203

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.4 Ractions cathodiques en eau de rivire artificielle

Que le peroxyde dhydrogne soit ajout directement en solution ou quil soit form par la raction enzymatique, il semble tre en mesure de gnrer une forte augmentation du potentiel de corrosion libre. Ceci serait principalement d un effet du peroxyde sur la valeur du courant cathodique. En effet, H2O2 est un oxydant puissant au sein du couple redox H2O2/H2O, dont la demi-quation lectronique scrit : H 2 O 2 + 2 H + + 2 e 2 H 2 O (12) E (H2O2/H2O) = 1,764 V/ESH 1,52 V/ECS Cet oxydant peut tre rduit au niveau des sites cathodiques et contribuer ainsi faire augmenter le courant cathodique. De plus, la prsence de cet oxydant en solution peut entraner des modifications de la couche doxydes [17] et ainsi affecter la valeur de Ecorr. Il a t dmontr dans une eau de mer artificielle que lintroduction de glucose-oxydase et de glucose (ou de peroxyde dhydrogne) entrane une augmentation du courant cathodique sur des chantillons dacier inoxydable 254SMO [73]. Linfluence des ractifs et des produits enzymatiques sur les ractions cathodiques va tre tudie dans cette partie laide du trac de courbes intensit-potentiel. Llectrolyte est la solution deau de rivire artificielle.
5.4.1 Ractions cathodiques en prsence des ractifs enzymatiques

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

5.4.1.1 Courbes de polarisation cathodique en prsence des ractifs enzymatiques Afin de dterminer linfluence des ractifs enzymatiques sur le courant cathodique, une courbe de polarisation cathodique est ralise sur un chantillon dacier inoxydable dans la solution deau de rivire artificielle (sans aucun ajout), ce qui constituera le tmoin, et une autre courbe de polarisation cathodique est ralise sur un autre chantillon de la mme nuance dans la solution eau de rivire artificielle laquelle ont t ajoutes 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose (solution ractifs enzymatiques ). La comparaison de ces deux courbes permet didentifier dventuelles nouvelles rductions et de voir les modifications des rductions dj existantes dans la solution tmoin. Ces courbes ont t traces pour les trois nuances dacier inoxydable tudies. Les solutions ne sont pas agites, afin que la rduction de loxygne soit faite dans des conditions exprimentales les plus semblables possibles dune exprience lautre. Ceci constitue une premire approche ; dautres expriences seront prsentes par la suite, durant lesquelles le transport de matire la surface sera contrl par un montage dlectrode tournante. Ces courbes sont traces 48 heures aprs lajout des ractifs enzymatiques ; cette date, le potentiel de corrosion libre est stationnaire (sauf instabilits susmentionnes). A cet instant, la concentration en peroxyde dhydrogne est denviron 1 mmol/L et le pH est compris entre 3,2 et 3,3. La concentration en oxygne dissous est comprise entre 1,9 et 2,4 g/L. Les courbes de polarisation effectues sur des chantillons dacier inoxydable (304L, 316L, 254SMO) sans et avec ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose sont prsentes sur la figure 121. Acier 304L : sur la courbe tmoin trace en eau de rivire artificielle (note NaCl ), un seul palier de rduction est visible, centr autour de -1 V/ECS. Le seul oxydant prsent en solution est le dioxygne dissous, cette raction lectrochimique est par consquent la rduction de loxygne. Pour rappel, cette raction peut scrire en milieu 204

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 acide selon lquation (1) (le pH de la solution deau douce artificielle est compris entre 5,7 et 6) : O 2 + 4 H 3 O + + 4 e 6 H 2 O (1) E = 1,229 V/ESH Aux potentiels infrieurs -1,1 V/ECS, la rduction de leau en hydrogne gazeux apparat. Cette raction nest pas limite par la diffusion ( mur du solvant ) et la courbe intensitpotentiel tend vers -. Sur la courbe trace dans la solution ractifs enzymatiques , deux paliers de rduction apparaissent. Sur le premier palier, centr autour de -0,45 V/ECS, le courant est denviron -24 A.cm-2. La deuxime rduction a lieu depuis -0,8 jusqu -1,2 V/ECS. Le courant cathodique est denviron -160 A.cm-2 -1,1 V/ECS.
Acier 316L : dans la solution tmoin, la rduction de loxygne dissous se fait depuis 0,4 V/ECS jusqu -1,1 V/ECS. Le courant sur le palier de diffusion est denviron -61 A.cm-2. La rduction de leau en hydrogne a lieu aux potentiels infrieurs -1,1 V/ECS. Dans la solution ractifs enzymatiques , deux rductions ont lieu. La premire se fait sur un palier de rduction centr autour dune valeur comprise entre -0,5 et -0,45 V/ECS. Le courant y est de -93 A.cm-2. La deuxime se fait depuis -0,8 jusqu -1,2 V/ECS, le courant cathodique est de -186 A.cm-2 -1,1 V/ECS. Les deux rductions observes sur lacier 304L dans les mmes conditions exprimentales sont retrouves. Acier 254SMO : les mmes diffrences que sur les autres nuances sont observes. En prsence de glucose-oxydase et de glucose, une rduction apparat des potentiels plus levs que la rduction de loxygne. Le palier de rduction est centr autour de 0,45 V/ECS, et le courant cathodique est denviron -71 A.cm-2. Une autre rduction a lieu depuis -0,8 jusqu -1,2 V/ECS. Le courant est de -205 A.cm-2 -1,1 V/ECS. Les deux rductions observes sur les nuances 304L et 316L dans les mmes conditions exprimentales sont retrouves.
0
0

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-10

-200

-20

j (A/cm )

-400

NaCl GOD

j (A/cm )
2

-30

NaCl GOD
-40

-600

-800 -1,6

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

-50 -0,7

-0,6

-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Acier 304L : depuis Ecorr jusqu -1,6 V/ECS

0

b- Acier 304L : zoom entre -0,7 et 0 V/ECS

0 -20

-200

-40 -60

j (A/cm )

j (A/cm )
2

-400

-80 -100 -120 -140 -160 -0,7

-600

NaCl GOD

NaCl GOD

-800 -1,6

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

-0,6

-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

c- Acier 316L : depuis Ecorr jusqu -1,6 V/ECS

d- Acier 316L : zoom entre -0,7 et 0 V/ECS

205

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0
0

-200

-20

-400

-40

j (a/cm )

j (a/cm )
2

-600

NaCl GOD

-60

-800

-80

-1000

-100

NaCl GOD

-1200 -1,6

-120

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

E (V/ECS)

E (V/ECS)

e- Acier 254SMO : depuis Ecorr jusqu -1,6 V/ECS f- Acier 254SMO : zoom entre -0,7 et 0 V/ECS Figure 121 : courbes intensit-potentiel ct cathodique dchantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (5 mV/s)

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Globalement, tous les potentiels, le courant cathodique est toujours plus lev en valeur absolue dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle, pour les trois nuances dacier inoxydable testes. La prsence des ractifs enzymatiques fait augmenter le courant cathodique, ce qui entrane laugmentation du potentiel de corrosion libre. Les deux rductions qui ont lieu en prsence de la GOD et du glucose vont tre tudies en dtail dans la suite de ce travail. Leffet de la glucose-oxydase et du glucose sur le courant cathodique est vrifi par le trac de courbes de chronoampromtrie ralises -0,45 V/ECS et -1,1 V/ECS, en prsence ou non de lenzyme et de son substrat. 5.4.1.2 Chronoampromtries en prsence des ractifs enzymatiques Dans les deux solutions (eau de rivire artificielle et ractifs enzymatiques ), un chantillon est polaris -0,45 V/ECS et le courant est mesur au cours du temps. Cette exprience a t mene sur des chantillons des aciers 304L et 254SMO. Les rsultats sont identiques pour les deux nuances et peuvent tre tendus lacier 316L. Seules les courbes obtenues sur lacier 304L vont tre prsentes. Elles sont visibles sur la figure 122. La figure 122a correspond la polarisation -0,45 V/ECS et la figure 122b la polarisation -1,1 V/ECS. Ces courbes montrent que le courant -0,45 V/ECS est beaucoup plus important lorsque lenzyme et son substrat sont prsents dans la solution. Dans leau de rivire artificielle, la valeur stationnaire du courant est de -4,2 A.cm-2. Elle est de -21,3 A.cm-2 dans la solution ractifs enzymatiques . De mme, le courant -1,1 V/ECS est plus lev dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle. Les valeurs stationnaires du courant cathodique sont respectivement -113 A.cm-2 et -37,5 A.cm-2.

206

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

-10

-100

j -450 mV/ECS (a/cm )

-20

j -1100 mV/ECS (a/cm )

2

-200

-30

-300

-40

NaCl GOD

-400

NaCl GOD

-50

-500

-60
-600 0 2 4 6 8 10 12 14

10

11

12

13

temps (minutes)

temps (minutes)

a- Polarisation -0,45 V/ECS

b- Polarisation -1,1 V/ECS

Figure 122 : chronoampromtries ralises sur chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

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Les chronoampromtries confirment les rsultats obtenus grce aux courbes de polarisation cathodique. Lintroduction de la GOD et du glucose entrane une augmentation du courant cathodique. En prsence des ractifs enzymatiques, la courbe intensit-potentiel comporte deux rductions, lune aux alentours de -0,45 V/ECS et lautre vers -1,1 V/ECS. Ces deux rductions vont tre identifies dans la suite de ce travail. 5.4.1.3 Squence de chronoampromtries diffrents potentiels ractifs enzymatiques en prsence des

Linfluence des ractifs enzymatiques sur le courant cathodique a aussi t value par la mesure du courant lors de lapplication dune suite dchelons de potentiels. Cette mthode permet dobtenir des valeurs de courant stationnaires (contrairement un balayage en potentiel vitesse rapide) dans toute une gamme de potentiels (ici entre -350 et -1100 mV/ECS). Les rsultats sont prsents sur les figures 123a et b. Les points (E, I) peuvent alors tre reports sur une courbe intensit-potentiel, qui prsente ainsi uniquement des points stationnaires. Les courbes intensit-potentiel stationnaires sont visibles sur les figures 123c et d.
- 350 mV/ECS
0

- 550 mV/ECS

NaCl ractifs enzymatiques

- 700 mV/ECS - 900 mV/ECS - 1100 mV/ECS

-50

NaCl - 350 mV/ECS ractifs enzymatiques - 450 mV/ECS - 550 mV/ECS - 700 mV/ECS - 900 mV/ECS

- 450 mV/ECS
-50

- 1100 mV/ECS

j (A.cm )

-100

j (A.cm )
-2

-2

-100

-150
-150

10

20

30

40

50

60

10

20

30

40

50

60

temps (minutes)

temps (minutes)

a- Chronoampromtries (304L)

b- Chronoampromtries (254SMO)

207

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

-20

-20

-40
-40

j (A.cm )

-60

j (A.cm )
-2

-2

-60

-80

-100

NaCl ractifs enzymatiques

-80

NaCl ractifs enzymatiques

-1,1 -1,0 -0,9 -0,8 -0,7 -0,6 -0,5 -0,4 -0,3

-120 -1,2

-1,1

-1,0

-0,9

-0,8

-0,7

-0,6

-0,5

-0,4

-0,3

-100 -1,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

c- Courbe intensit-potentiel stationnaire sur un chantillon dacier 304L

d- Courbe intensit-potentiel stationnaire sur un chantillon dacier 254SMO

Figure 123 : chronoampromtries successives sur des chantillons daciers 304L et 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, sans ajout ou 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

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Comme sur les courbes de polarisation cathodique dtailles prcdemment, le courant cathodique est toujours suprieur (en valeur absolue) dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle. Un palier de courant est retrouv aux potentiels -350, -450 et -550 mV/ECS. Aux environs de -600 mV/ECS, les valeurs de courant ont tendance se rapprocher, puis une forte diffrence apparat de nouveau. A -1,1 V/ECS, le courant cathodique est beaucoup plus lev dans la solution ractifs enzymatiques . Cette mthode stationnaire confirme les rsultats prcdents. 5.4.1.4 Influence de lactivit enzymatique La prsence de lenzyme et de son substrat a pour consquence une augmentation du courant cathodique. Le but de ce paragraphe est dtudier leffet de lactivit enzymatique sur les ractions de rduction. Une large gamme dactivits de GOD est teste, depuis 50 u/L jusqu 10000 u/L. Des courbes de polarisation cathodique effectues sur des chantillons dacier 304L 48 heures aprs leur immersion en eau de rivire artificielle contenant 20 mmol/L de glucose et diffrentes activits de GOD sont traces sur la figure 124-a. Lactivit de lenzyme semble avoir une influence sur la premire rduction observe aux alentours de -0,45 V/ECS. En effet, le courant sur le palier de rduction varie avec lactivit de la GOD (figure 124b). Toutefois, cette variation nest pas monotone. Par exemple, le courant -0,45 V/ECS est de -12,8 A.cm-2 lorsque lactivit est de 500 u/L, alors quil est de -58,3 A.cm-2 pour une activit de 50 u/L. Il atteint -81,5 A.cm-2 pour 5000 u/L, mais nest que de -29,1 A.cm-2 pour 10 000 u/L. Linfluence de lactivit de la GOD sur le courant 0,45 V/ECS est relle mais nest pas simple. En revanche, la deuxime rduction, observe autour de -1,1 V/ECS, varie simplement avec lactivit de la GOD. Plus lactivit augmente, plus le sommet (en valeur absolue) de la vague de rduction augmente (figure 124c). La densit de courant -1,1 V/ECS est une fonction croissante de lactivit enzymatique (figure 124d).

208

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

-20

-200

-400

-600

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L 10000 u/L

-40

j (A/cm )

j (A/cm )
2

-60

-80

-100

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L 10000 u/L
-0,6 -0,4 -0,2 0,0

-800 -1,6

-120

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Depuis Ecorr jusqu -1,6 V/ECS

0

b- Zoom entre -0,7 et 0 V/ECS

350 300

-100

j -1,1 V/ECS (a/cm )

2

250 200 150 100 50 0 100 1000 10000

-200

j (A/cm )
2

-300

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-400

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L 10000 u/L
-1,3 -1,2 -1,1 -1,0 -0,9 -0,8

-500 -1,4

E (V/ECS)

activit GOD (u/L)

c- Zoom entre -1,4 et -0,8 V/ECS

d- j(-1,1 V/ECS)=f(activit GOD)

Figure 124 : courbes intensit-potentiel ct cathodique dchantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, 48h aprs ajout de 20 mmol/L de glucose et de GOD diffrentes activits (5 mV/s)

5.4.1.5 Effet dun ajout de catalase sur le courant cathodique Une premire exprience a t ralise pour valuer le rle jou par le peroxyde dhydrogne dans les ractions cathodiques. Des courbes de polarisation cathodique sont traces sur des chantillons dacier 254SMO immergs dans la solution ractifs enzymatiques . Pour lun des chantillons, ce trac est effectu 48 heures aprs ajout de 3370 u/L de catalase dans la solution. Les rsultats peuvent tre vus sur la figure 125. La prsence de catalase a peu (ou na pas) dinfluence sur la deuxime rduction (entre -1,2 et -0,7 V/ECS). En revanche, la premire rduction (entre -0,7 et 0,1 V/ECS) disparat compltement lorsque la catalase est prsente en solution. Le courant cathodique -0,45 V/ECS est de -67 A.cm-2 dans la solution ractifs enzymatiques , alors quil nest que de -8 A.cm-2 dans la solution o la catalase a t rajoute. Or la catalase catalyse la dgradation de H2O2. La rduction qui se fait depuis 0,1 jusqu -0,7 V/ECS est vraisemblablement la rduction du peroxyde dhydrogne. Dautres expriences prsentes plus loin permettront de conclure ce sujet.

209

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0 -10

-500

-20 -30

-1000

j (A/cm )
2

j (A/cm )
2

-1500

NaCl GOD GOD puis catalase

-40 -50 -60

-2000

-70
-2500 -2,0

NaCl GOD GOD puis catalase

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

-80 -0,7

-0,6

-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

Figure 125 : courbes intensit-potentiel ct cathodique dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, avant ajout, 48 heures aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, et 48 heures aprs lajout ultrieur de 3370 u/L de catalase (5 mV/s)

a- Depuis Ecorr jusqu -2 V/ECS

b- Depuis 0,2 jusqu -0,7 V/ECS

5.4.1.6 Synthse
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Lajout de glucose-oxydase et de glucose dans une solution deau de rivire artificielle contenant un chantillon dacier inoxydable fait augmenter le courant cathodique sur cet chantillon. Lorsque lenzyme et son substrat sont prsents dans la solution depuis 48 heures, la courbe de polarisation cathodique rvle deux rductions. La premire, dsigne dornavant par lexpression rduction n1 , a lieu autour de -0,45 V/ECS. Le courant du palier de cette rduction varie de faon complexe avec lactivit de la GOD. Cette rduction disparat lorsque la catalase est ajoute dans la solution ; ceci semble indiquer que la rduction n1 est la rduction du peroxyde dhydrogne. La deuxime, appele rduction n2 , se fait autour de -1,1 V/ECS. Le courant du palier de cette rduction augmente avec lactivit de la GOD. Ces deux rductions doivent tre tudies sparment afin didentifier les oxydants qui sont rduits ces potentiels. Elles ne mettent en jeu ni la glucose-oxydase ni le glucose, qui nont pas de proprits doxydorduction majeures. Ce sont donc vraisemblablement les produits enzymatiques, H2O2 et lacide gluconique, qui sont lorigine de ces deux rductions. Il faut aussi conserver lesprit que la couche doxydes formant le film passif et le dioxygne dissous font partie des espces oxydantes rduites durant le balayage en potentiel. Par ailleurs, les courbes de polarisation cathodique acquises sur les trois nuances dacier inoxydable indiquent des phnomnes identiques. Les processus cathodiques ne semblent pas dpendre de la nuance teste. Dans la plupart des expriences dcrites dans la suite de ce chapitre, les rsultats ne seront plus prsents que pour une nuance, auquel cas il faudra considrer que les observations sont comparables sur les deux autres types dacier inoxydable.
5.4.2 Identification de la rduction n1

Cette partie est base sur ltude des ractions cathodiques en prsence de peroxyde dhydrogne dans leau de rivire artificielle.

210

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 5.4.2.1 Ractions cathodiques en prsence de peroxyde dhydrogne Le peroxyde dhydrogne est un oxydant, il est ncessairement rduit dans un certain intervalle de potentiels lorsque lchantillon est polaris depuis son potentiel de corrosion libre jusqu -2 V/ECS. Sa rduction doit tre visible sur le trac dune courbe intensitpotentiel dans la direction des potentiels cathodiques. Ltude des courbes intensit-potentiel en prsence de H2O2 va permettre la fois de voir linfluence de ce compos sur le courant cathodique et de voir si sa rduction est lie aux rductions observes en solution ractifs enzymatiques (rductions n1 et n2). a) Courbes intensit-potentiel en prsence de H2O2 Dans ce paragraphe, des courbes de polarisation cathodique sont traces sur des chantillons dacier 254SMO immergs dans une solution deau de rivire artificielle, additionne ou non de peroxyde dhydrogne. La diffrence entre la courbe sans H2O2 et la courbe avec H2O2 permet de visualiser la rduction de H2O2, sans oublier que la modification de la couche doxydes au contact du peroxyde dhydrogne peut aussi affecter le courant cathodique. Deux concentrations en peroxyde dhydrogne diffrentes ont t testes (1 et 10 mmol/L). Les courbes de polarisation cathodique en eau de rivire artificielle avec et sans ajout de H2O2 sont traces en coordonnes linaires et semi-logarithmiques sur la figure 126. Dans leau de rivire artificielle, la rduction de loxygne dissous se fait depuis -0,4 jusqu 1,1 V/ECS. Quand H2O2 est prsent dans la solution, le courant cathodique est plus lev en valeur absolue depuis Ecorr jusqu -1 V/ECS. La rduction de H2O2 se superpose la rduction de O2. Le courant de rduction du peroxyde dhydrogne peut commencer augmenter ds des potentiels proches de 0 V/ECS. La plage de potentiels o se fait la rduction du peroxyde semble slargir lorsque [H2O2] augmente. Le palier nest centr ni autour de -0,45 V/ECS (rduction n1), ni autour de -1,1 V/ECS (rduction n2). Toutefois, le pH proche de 5,7 nest pas le mme que dans la solution ractifs enzymatiques (environ 3,3), et il est connu que le pH a une forte influence sur la gamme de potentiels o les rductions peuvent avoir lieu. En effet, lorsque la demi-quation lectronique comporte des protons H+, le pH intervient dans lexpression du potentiel lectrochimique. Cest le cas pour la rduction de H2O2, qui peut scrire ainsi :
H 2O2 + 2 H + + 2 e 2 H 2O

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(12) E (H2O2/H2O) = 1,764 V/ESH

Le potentiel de la raction suit la formule de Nernst :

E (H 2 O 2 / H 2 O) = 1,764 + 0,03 log [H 2 O 2 ] 0,06 pH

Il diminue lorsque le pH augmente. La rduction observe sur la figure 126 pourrait donc correspondre une rduction se produisant des potentiels plus levs lorsque le pH est plus faible. Cette rduction pourrait alors tre la rduction n1. Lcart de pH entre la solution de NaCl contenant du peroxyde dhydrogne (pH 6 environ) et la solution ractifs enzymatiques (pH 3,3 environ) pourrait expliquer le dcalage du potentiel de la rduction de H2O2.

211

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0

1000

log | j | (A.cm )
-2

-500

j (A/cm )

100

-1000

-1500

NaCl 1 mmol/L H2O2 10 mmol/L H2O2

10

NaCl 1 mmol/L H2O2 10 mmol/L H2O2

-1,5 -1,0 -0,5 0,0

-2,0

-1,8

-1,6

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- j = f(E)

b- log | j | = f(E)

Figure 126 : courbes intensit-potentiel ct cathodique dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 1 ou 10 mmol/L de H2O2 (5 mV/s)

Leffet dun ajout de peroxyde dhydrogne sur le courant cathodique est aussi mis en vidence par des chronoampromtries.
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b) Chronoampromtrie en prsence de H2O2 Des chronoampromtries -0,45 V/ECS (potentiel central du palier de diffusion de la rduction n1 dans la solution ractifs enzymatiques ) ont t ralises sur des chantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, immdiatement aprs ajout de 1 ou 10 mmol/L de peroxyde dhydrogne. Lorsque la concentration en peroxyde dhydrogne est de 1 mmol/L, la valeur stationnaire du courant -0,45 V/ECS est denviron -60 A.cm-2. Lorsque la concentration est de 10 mmol/L, la densit de courant stationnaire est environ -285 A.cm-2. Le peroxyde dhydrogne a un impact direct et fort sur la valeur du courant cathodique au potentiel -0,45 V/ECS. La rduction de H2O2 se fait donc aux alentours de ce potentiel. Toutefois, comme les courbes intensit-potentiel lont montr, la rduction du peroxyde dhydrogne na pas lieu tout fait dans la mme gamme de potentiels que la rduction n1, et ceci a t attribu hypothtiquement la diffrence de pH des deux solutions. Lexprience dcrite ci-dessous permet de prouver cette hypothse. c) Effet du pH sur la rduction de H2O2 Pour vrifier ce qui a t dit prcdemment, des courbes de polarisation cathodique successives ont t traces sur un chantillon dacier 316L immerg en eau de rivire artificielle contenant 1 mmol/L de H2O2 aprs ajustements successifs de pH par ajout dacide gluconique. La gamme de pH couverte est [3 ; 6,5]. Pour rappel, les valeurs de pH de la solution ractifs enzymatiques et de la solution de peroxyde dhydrogne 1 mmol/L sont respectivement denviron 3,2 et 6. Les diffrentes courbes obtenues sont visibles sur la figure 127. Les courbes obtenues pour un pH compris entre 4,3 et 6,5 ont la mme allure que la courbe de polarisation cathodique dans la solution de peroxyde dhydrogne. La rduction de H2O2 se fait des potentiels proches de la rduction de loxygne. Il peut tre remarqu que le courant de rduction du peroxyde dhydrogne augmente des valeurs de potentiel leves, par exemple sur la courbe trace pH 5,5, le courant augmente en valeur absolue ds +150 mV/ECS (figure 127b).

212

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Lallure des courbes est compltement modifie lorsque le pH devient infrieur une valeur seuil proche de 4 (comprise entre 3,6 et 4,3). Linflexion constate autour de -0,45 V/ECS dans la solution ractifs enzymatiques est retrouve. La surtension cathodique de la rduction de H2O2 est (en valeur absolue) beaucoup plus faible pH acide infrieur la valeur-seuil. Un pH acide amliore la ractivit de la surface vis--vis de la rduction du peroxyde dhydrogne. Il peut aussi tre remarqu que les valeurs de courant limite sur le palier de diffusion sont beaucoup plus faibles pH 3 et 3,6 quaux valeurs de pH plus leves. Ceci est mettre en relation avec la variation de la vitesse de dcomposition de H2O2 en fonction du pH (cf. figure 78). Aux faibles valeurs de pH (infrieures 4), la concentration du peroxyde dhydrogne en solution est dj plus faible 48 heures qu pH plus lev. La rduction du peroxyde dhydrogne est trs fortement influence par le pH de la solution. Cette exprience dmontre que la rduction n1 est la rduction de H2O2 un pH acide compris entre 3 et 3,5. La diffrence de pH explique la diffrence entre les surtensions cathodiques de la rduction de H2O2 dans leau de rivire artificielle et de la rduction n1 dans la solution ractifs enzymatiques .
0
0

-50

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-5

-100

j (A.cm-2)

-150

-200

pH 6,5 pH 5,5 pH 4,8 pH 4,3 pH 3,6 pH 3

j (A.cm )

-10

-15

pH 6,5 pH 5,5 pH 4,8 pH 4,3 pH 3,6 pH 3

-250
-20

-2

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

Figure 127 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur un chantillon dacier 316L immerg depuis 48 heures dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 1 mmol/L de H2O2, avec ajustements successifs de pH avant chaque polarisation cathodique (5 mV/s)

a- Depuis Ecorr jusqu -0,9 V/ECS

b- Zoom entre -150 et +200 mV/ECS

Linfluence du pH sur la rduction du peroxyde dhydrogne sera nouveau visualise dans ltude de la solution produits enzymatiques ( 5.4.4). d) Synthse A cette tape du raisonnement, il est vraisemblable daffirmer que la rduction n1 qui apparat centre autour de -0,45 V/ECS dans la solution ractifs enzymatiques est la rduction du peroxyde dhydrogne. Toutefois, dans la mme gamme de potentiels, la rduction de loxygne et la rduction des oxydes du film passif peuvent intervenir. Avant de conclure au sujet de lidentit de la rduction n1, la contribution de la rduction de loxygne dissous et la contribution de la rduction des oxydes du film passif doivent tre values quantitativement. 5.4.2.2 Contribution de la rduction de loxygne dissous la rduction n1 La figure 121 montre que la rduction de loxygne se fait dans un domaine de potentiels compris entre -0,4 et -1,1 V/ECS sur les chantillons immergs dans la solution tmoin deau de rivire artificielle. Elle pourrait donc influencer la rduction n1, qui a lieu autour de -0,45

213

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 V/ECS. Le courant cathodique est plus lev entre -1,1 V/ECS et -0,4 V/ECS lorsque la GOD et le glucose ont t introduits depuis 48 heures. Cette augmentation est due principalement la rduction de H2O2 qui se superpose la rduction de O2, comme cela a t prouv dans le paragraphe prcdent. Toutefois, la rduction de O2 est susceptible dvoluer. Les mesures de concentration en oxygne dissous montrent que 48 heures aprs lajout des ractifs enzymatiques, [O2] nest que denviron 2 mg/L (en raison de sa consommation par la raction enzymatique), alors que dans leau de rivire artificielle la solution est en quilibre (mais non agite) avec lair ambiant, donc [O2] est comprise entre 6 et 9 g/L. Le courant de rduction de loxygne doit par consquent tre plus faible dans la solution ractifs enzymatiques que dans la solution deau de rivire artificielle. Lvolution de la rduction de O2 ne peut a priori pas expliquer laugmentation du courant cathodique entre -1,1 et -0,4 V/ECS observe dans la solution ractifs enzymatiques . Pour confirmer labsence de contribution de la rduction de O2 dans la rduction n1, des manipulations ont t ralises dans des solutions dsoxygnes. Lide est de raliser des chronoampromtries -0,45 V/ECS en labsence doxygne dissous dans la solution (ou avec une concentration en oxygne dissous fortement diminue). Dans un premier temps, lexprience est identique aux manipulations prcdentes. Deux chantillons sont immergs 24 heures dans la solution deau de rivire artificielle, puis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques . A ce stade de lexprience, la solution contient de loxygne dissous, qui a permis la formation de peroxyde dhydrogne en tant consomm par la raction enzymatique. La concentration en oxygne est denviron 2 g/L. Dans un des deux bchers, un bullage de diazote N2 est effectu pendant 30 minutes. La solution est alors fortement appauvrie en oxygne dissous. La polarisation -0,45 V/ECS est ensuite ralise, tout en maintenant un ciel de diazote au-dessus de la solution. La chronoampromtrie obtenue est compare la courbe obtenue dans le deuxime bcher, o la concentration en oxygne a t laisse libre dvoluer. Pour la nuance 304L, la densit de courant stationnaire mesure aprs 20 minutes de polarisation est de -8,9 A.cm-2 dans la solution en quilibre avec lair ambiant et de -5,2 A.cm-2 dans la solution appauvrie en oxygne dissous. Pour la nuance 254SMO, elle est de 2,6 A.cm-2 dans la solution en quilibre avec lair du laboratoire et de -7 A.cm-2 dans la solution partiellement dsoxygne. Ces variations sont faibles et peuvent tre considres comme non significatives. Le courant stationnaire mesur -0,45 V/ECS lorsque la solution est en contact avec lair ambiant est peu prs gal au courant mesur lorsque la solution est fortement appauvrie en oxygne. Le courant de rduction de loxygne dissous nintervient donc pas dans la rduction n1. Ceci est confirm par le trac de courbes intensit-potentiel ralises sur des chantillons dacier 254SMO immergs dans les deux types de solution (en contact avec lair du laboratoire et fortement appauvrie en oxygne) et reprsentes sur la figure 128. Dans les deux solutions, la rduction n1 se fait entre -0,6 et 0,1 V/ECS. Le courant de cette rduction nest pas du tout modifi lorsque la solution est fortement appauvrie en oxygne. Cette exprience dmontre que le courant de rduction de O2 ne contribue pas la rduction n1.

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214

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

-10

-20

j (A/cm )
2

-30

-40

-50

Prsence de O2 Appauvrie en oxygne

-60

-70 -0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2

E (V/ECS)

Figure 128 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 254SMO immergs depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , avec et sans dsoxygnation ralise avant polarisation (5 mV/s)

Au final, la rduction n1 nest pas affecte par la concentration en oxygne dissous de la solution. La rduction n1 ne comporte pas de contribution de la rduction de loxygne.
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5.4.2.3 Contribution de la rduction des oxydes du film passif la rduction n1 a) Rduction de la couche doxydes dans la solution ractifs enzymatiques Des courbes intensit-potentiel du ct cathodique ont t traces (figure 129) pour un chantillon dacier 304L immerg depuis 24 heures en eau de rivire artificielle (courbe NaCl ), pour un chantillon dacier 304L immerg depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , et pour un chantillon dacier 304L ayant t en contact pendant 48h avec la solution ractifs enzymatiques mais prlev et rintroduit dans leau de rivire artificielle (courbe 100 u/L GOD puis remis dans 0,3 g/L NaCl). Ce dernier chantillon a subi la modification de la couche doxydes gnre par la solution ractifs enzymatiques (enrichissement global en chrome, entre autres) et est immerg dans une solution ne contenant plus ni de peroxyde dhydrogne, ni dacide gluconique. Le trac de sa courbe de polarisation cathodique doit montrer la rduction de la couche doxydes mais ne comprendra pas lventuelle rduction de ces deux espces. La diffrence entre la courbe intensit-potentiel de cet chantillon et la courbe intensit-potentiel de lchantillon tmoin sera uniquement la modification du courant de rduction de la couche doxydes, ainsi que lventuelle modification du courant de rduction de O2 due lvolution de la couche doxydes. Effectivement, la rduction de O2 peut varier avec ltat de surface. Il a par exemple t montr quen eau de mer naturelle la cintique de la rduction de loxygne est acclre en raison dun enrichissement en fer(III) (catalyseur de la rduction de O2) de lextrme surface du film passif [17, 46, 47].

215

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0

-100

-200

j (A/cm )
2

-300

-400

NaCl 100 u/L GOD 100 u/L GOD puis remis dans 0,3 g/L NaCl
-1,2 -1,0 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2

-500 -1,4

E (V/ECS)

Figure 129 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, avec et sans ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (5 mV/s)

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Les rsultats obtenus montrent que les deux rductions observes autour de -0,45 et de -1,1 V/ECS en prsence de lenzyme et du glucose ne sont plus prsentes lorsque lchantillon est remis dans leau de rivire artificielle. Ces deux rductions mettent donc en jeu des espces oxydantes prsentes uniquement lorsque la GOD et le glucose ont t introduits. Ceci confirme les rsultats prcdents et permet daffirmer que la rduction n1 est la rduction de H2O2. Les courbes NaCl et 100 u/L GOD puis remis dans 0,3 g/L de NaCl ne sont pas superposables aux potentiels infrieurs -0,4 V/ECS. Lvolution de la couche doxydes au contact de la solution ractifs enzymatiques est visible entre -0,8 et -0,4 V/ECS. La somme du courant de rduction de la couche doxydes et du courant de rduction de loxygne est plus importante dans le cas o lchantillon a t en contact avec la solution ractifs enzymatiques . Toutefois, lvolution de la couche doxydes ne gnre une modification du courant cathodique qu des potentiels faibles, loigns du potentiel de corrosion libre. Cette modification ne peut pas avoir dimpact sur la valeur de Ecorr. Ceci explique le fait que le potentiel dabandon rechute sa valeur initiale lorsque lchantillon est prlev de la solution ractifs enzymatiques et rintroduit dans leau de rivire artificielle. Ce rsultat confirme que la contribution de la rduction des oxydes du film passif au processus global daugmentation de Ecorr est ngligeable. Le facteur principal de laugmentation du potentiel dabandon est laugmentation du courant cathodique aux potentiels cathodiques proches de Ecorr (contribution primordiale de la rduction de H2O2, ou rduction n1). La couche doxydes volue au contact de la solution ractifs enzymatiques (enrichissement en chrome, courant de rduction plus lev en valeur absolu), mais cette volution na pas dinfluence notable sur la valeur du potentiel de corrosion libre. b) Influence de la couche doxydes sur la rduction du peroxyde dhydrogne Lvolution de la couche doxydes au contact de la solution ractifs enzymatiques est lie la prsence du peroxyde dhydrogne et de lacide gluconique. Ces deux composs ont des influences opposes sur la composition chimique du film passif : lacide favorise llment chrome au dtriment du fer, alors que le contact avec H2O2 entrane une augmentation de la teneur en lment fer au dtriment du chrome au sein de la couche doxydes. Les modifications du film passif peuvent gnrer des diffrences au niveau du courant de rduction du peroxyde dhydrogne. Dans ce paragraphe, linfluence de H2O2 sur la couche doxydes va tre tudie isolment.

216

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Dans cette exprience, des chantillons dacier 254SMO sont immergs pendant 48 heures dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 10 mmol/L de H2O2. Une courbe intensitpotentiel est alors trace depuis Ecorr jusqu -2 V/ECS. Puis lchantillon est repoli, rimmerg dans la solution, et une nouvelle courbe de polarisation cathodique (note chantillon repoli ) est trace. La comparaison de ces courbes est faite sur la figure 130. Les courbes de polarisation cathodique avant et aprs polissage sont superposes. Lvolution de la couche doxydes au contact du peroxyde dhydrogne semble ne pas avoir de consquence sur le courant cathodique de la rduction du peroxyde.
0 -200 -400 -600

j (a/cm )
2

-800 -1000 -1200 -1400 -1600 -1,5 -1,0 -0,5 0,0

Echantillon 1 (48h) Echantillon 1 repoli Echantillon 2 (48h) Echantillon 2 repoli

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E (V/ECS)

Figure 130 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 254SMO immergs depuis 48h dans une solution 0,3 g/L de NaCl contenant 10 mmol/L de H2O2, avec effet du polissage (5 mV/s)

5.4.2.4 Synthse : influence du peroxyde dhydrogne Lintroduction de peroxyde dhydrogne dans une solution deau de rivire artificielle contenant un chantillon dacier inoxydable fait augmenter le potentiel de corrosion libre instantanment. Cette augmentation est due la rduction de loxydant H2O2 qui se superpose la rduction de loxygne dissous. Lexistence de cette nouvelle rduction entrane une augmentation du courant cathodique faible polarisation (la surtension cathodique de la rduction de H2O2 est faible, le courant pouvant augmenter ds que le potentiel devient infrieur +100 mV/ECS), ce qui implique une augmentation du potentiel de corrosion libre. Le pH de la solution a une influence notable sur la concentration et sur le courant de rduction du peroxyde dhydrogne. Dans la solution ractifs enzymatiques , le pH est denviron 3,3, le peroxyde dhydrogne instable a dj commenc fortement son auto-dcomposition, et lallure de la courbe de rduction est trs diffrente de celle obtenue au pH de leau de rivire artificielle. Ltude de la rduction de H2O2 en fonction du pH permet de comprendre lallure des courbes de polarisation cathodique dans la solution ractifs enzymatiques et de conclure dfinitivement lidentit de la raction n1 et de la rduction du peroxyde dhydrogne. Par ailleurs, la modification de la couche doxydes au contact de la solution ractifs enzymatiques engendre une lgre augmentation du courant de rduction des oxydes, mais cette diffrence napparat quaux potentiels infrieurs -0,4 V/ECS et ne peut avoir dincidence sur le potentiel de corrosion libre. Ainsi, le rle jou par le peroxyde dhydrogne dans le phnomne daugmentation de Ecorr semble primordial. Sa rduction pouvant stendre entre -600 et +150 mV/ECS entrane une augmentation du courant (en valeur absolue) faible polarisation cathodique. 217

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.4.3 Identification de la rduction n2

Cette partie est base sur ltude des ractions cathodiques en prsence dacide gluconique. 5.4.3.1 Ractions cathodiques en prsence dacide gluconique Lvolution du potentiel de corrosion libre et du courant cathodique dans la solution ractifs enzymatiques est due la prsence du peroxyde dhydrogne et de lacide gluconique. Le rle de H2O2 vient dtre prcis. Dans cette partie, linfluence de lacide gluconique va tre considre. En particulier, le lien ventuel entre la rduction n2 et lacide gluconique va tre tudi, laide de courbes de polarisation cathodique et de chronoampromtries. Pour rappel, la rduction n2 se fait dans la solution ractifs enzymatiques autour de -1,1 V/ECS, et le courant du palier de cette rduction augmente avec lactivit de la GOD.
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Des courbes intensit-potentiel ont t ralises sur des chantillons dacier 304L immergs dans des solutions deau de rivire artificielle additionnes de diffrentes concentrations dacide gluconique. Le trac de ces courbes est visible sur la figure 131. La concentration en acide gluconique a une influence sur le courant cathodique entre -1,5 et -0,5 V/ECS. En effet, le courant cathodique est beaucoup plus important dans cette gamme de potentiels lorsque lacide est prsent en solution. Lintroduction dacide gluconique ne modifie pas la concentration en oxygne dissous, par consquent cette augmentation du courant ne peut tre lie une modification de la rduction de loxygne. Il apparat sur la figure 131b que le maximum local du courant cathodique augmente linairement avec la concentration en acide gluconique. Lespce oxydante qui est ici rduite est lie la prsence de ce compos. Cette rduction est donc la rduction des protons H+ provenant de la dissociation de lacide :
C 6 H 12 O 7 C 6 H 11 O 7 + H +

Ka(25C) = 10-3,6

La rduction de ces protons se fait dans des potentiels comparables la rduction n2 dans la solution ractifs enzymatiques . Les chronoampromtries ralises sur des chantillons dacier 304L polariss -1,1 V/ECS montrent dailleurs que le courant cathodique cette valeur de potentiel augmente en valeur absolue lorsque la concentration en acide gluconique augmente (figure 132). Le courant du palier de la rduction n2 augmente avec lactivit de la GOD, et le courant du palier de la rduction des protons issus de la dissociation de lacide gluconique augmente avec la concentration en acide gluconique. Or la concentration en acide gluconique crot avec lactivit de la GOD (cf. figure 77). La rduction des protons provenant de la dissociation de lacide gluconique est donc trs vraisemblablement la rduction n2. Toutefois, pour pouvoir conclure lidentit des deux rductions, il faut valuer quantitativement les contributions de la rduction de loxygne et de la rduction des oxydes du film passif.

218

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

|j maximum entre -1,5 et -0,7 V/ECS| (a.cm )

-2

2000

-500

1500

-1000

j (a/cm )
2

-1500

-2000

NaCl 1 mmol/L acide gluconique 5 mmol/L acide gluconique 10 mmol/L acide gluconique 50 mmol/L acide gluconique
-1,6 -1,4 -1,2 -1,0 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2

1000

500

-2500

0 0 10 20 30 40 50

E (V/ECS)

Concentration en acide gluconique (mmol/L)

a- Depuis Ecorr jusqu -1,7 V/ECS

b- Valeurs absolues de la densit de courant maximale entre -1,5 et -0,7 V/ECS

Figure 131 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, sans ajout et 48h aprs ajout de 1, 5, 10 ou 50 mmol/L dacide gluconique (5 mV/s)

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j -1100 mV/ECS (A/cm )

-500

j -1100 mV/ECS (a/cm2)

-200

-400

1 mmol/L acide gluconique 10 mmol/L acide gluconique

-1000

-600

-1500

1 mmol/L acide gluconique 5 mmol/L acide gluconique 50 mmol/L acide gluconique

-800

-2000 0 5 10 15 20 25 30

20

40

60

80

100

temps (minutes)

temps (minutes)

a- Echantillons dacier 304L

b- Echantillons dacier 254SMO

Figure 132 : chronoampromtries ralises -1,1 V/ECS sur des chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire artificielle, 48 heures aprs ajout de diffrentes concentrations dacide gluconique

5.4.3.2 Contribution de la rduction de loxygne dissous la rduction n2 Llectrolyte considr ici est la solution ractifs enzymatiques . Il a t montr prcdemment que la rduction de loxygne dissous se fait depuis -0,4 jusqu -1,1 V/ECS lors dune polarisation cathodique. Il est donc attendu que le courant de rduction de O2 apparaisse entre -1,1 et -0,7 V/ECS, dans la gamme de potentiels de la rduction n2. Pour exclure une modification de la rduction de O2 comme source potentielle daugmentation du courant cathodique dans ce domaine de potentiels dans la solution ractifs enzymatiques , le raisonnement du paragraphe 7.15.2 est repris ici. Des courbes de polarisation cathodique et des chronoampromtries -1,1 V/ECS sont ralises en solution ractifs enzymatiques fortement appauvrie en oxygne. La comparaison entre le courant cathodique en solution ractifs enzymatiques usuelle et le courant cathodique dans la solution ractifs enzymatiques fortement appauvrie en oxygne (par bullage pendant 30 minutes de N2, puis maintien dun ciel dazote pendant la dure de lexprience) permet dvaluer la contribution du courant de rduction de O2 dans la rduction n2. Les rsultats sont prsents pour les nuances 304L et 316L ; ils sont identiques sur lacier 254SMO.

219

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Acier 304L Les expriences menes sur les chantillons dacier 304L montrent que la rduction de loxygne dissous se fait manifestement depuis -0,7 jusqu -1,1 V/ECS. La densit de courant est en effet beaucoup plus faible dans cet intervalle de potentiels lorsque la solution est fortement appauvrie en oxygne (figure 133a). La rduction de loxygne se fait donc dans la gamme de potentiels de la rduction n2. Toutefois, le courant cathodique en labsence doxygne dissous est non ngligeable dans toute la gamme de potentiels de la rduction n2. Les rsultats de chronoampromtrie (figure 133b) montrent que linfluence de la dsoxygnation de la solution sur le courant stationnaire -1,1 V/ECS nest pas trs importante. Il y a donc -1,1 V/ECS une rduction autre que celle de loxygne dissous.
0

j -1100 mV/ECS (A/cm )

2

-100

-100

j (A/cm )
2

-200

Prsence de O2 Dsoxygn
-300

-200

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Prsence de O2 Dsoxygn

-1,1

-1,0

-0,9

-0,8

-0,7

-400 0 5 10 15 20

E (V/ECS)

temps (minutes)

a- Courbe intensit-potentiel depuis -0,7 jusqu -1,1 V/ECS (5 mV/s)

b- Polarisation -1,1 V/ECS

Figure 133 : courbes intensit-potentiel ct cathodique et chronoampromtries -1,1 V/ECS ralises sur chantillons dacier 304L immergs depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , avec et sans dsoxygnation ralise avant polarisation

Acier 316L De manire semblable lacier 304L, le courant cathodique est plus faible entre -1,1 et -0,7 V/ECS lorsque la solution est fortement appauvrie en oxygne (figure 134b). Ceci confirme que la rduction de O2 a lieu dans cet intervalle de potentiels. Toutefois, le courant cathodique nest pas uniquement d la rduction de loxygne dissous, puisquil prend une valeur non ngligeable dans la solution fortement appauvrie en O2. Une espce oxydante autre que loxygne dissous, pouvant tre les protons issus de la dissociation de lacide gluconique, est rduite.
0
-50

-100
-100

j (a/cm )

-200

Prsence de O2 Dsoxygn
-300

j (a/cm )
2

-150

Prsence de O2 Dsoxygn

-400 -1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

0,4

-200 -1,2

-1,1

-1,0

-0,9

-0,8

E (V/ECS)

E (V/ECS)

Figure 134 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 316L immergs depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , avec et sans dsoxygnation ralise avant polarisation (5 mV/s)

a- Depuis Ecorr jusqu -1,4 V/ECS

b- Depuis -0,8 jusqu -1,4 V/ECS

220

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Synthse

La rduction de loxygne dissous se fait dans le mme domaine de potentiels que la rduction n2, entre -1,1 et -0,7 V/ECS. Toutefois, la contribution du courant de la rduction de O2 dans le courant de la rduction n2 est minoritaire. La rduction n2 ne peut donc pas tre attribue loxygne dissous. Une autre espce oxydante est rduite entre -1,1 et -0,7 V/ECS. Il peut sagir de la rduction des protons issus de la dissociation de lacide gluconique. 5.4.3.3 Contribution de la rduction des oxydes du film passif la rduction n2 La prsence dacide gluconique en solution entrane des modifications dans la couche doxydes (enrichissement en chromine). Ces modifications du film passif pourraient provoquer des variations du courant de rduction des oxydes, ce qui pourrait se ressentir dans la gamme de potentiels de la rduction n2. Le trac de chronoampromtries ralises une polarisation de -1,1 V/ECS sur des chantillons immergs dans une solution deau de rivire artificielle additionne dacide gluconique avant et aprs repolissage (pour diminuer fortement la contribution du courant de rduction des oxydes du film passif) est donn sur la figure 135. Quelle que soit la concentration en acide gluconique dans la solution, le courant stationnaire est peu prs gal avant et aprs le polissage de la surface. Le courant de rduction des oxydes semble tre ngligeable. La mise en contact des chantillons dacier inoxydable avec une solution dacide gluconique nentrane pas daugmentation notable du courant de rduction des oxydes constitutifs de la couche passive.
repolissage
0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

j -1100 mV/ECS (A/cm )

2

-500

-1000

1 mmol/L acide gluconique 5 mmol/L acide gluconique 50 mmol/L acide gluconique

-1500

-2000 0 20 40 60

temps (minutes)

Figure 135 : chronoampromtries -1,1 V/ECS sur des chantillons dacier 304L immergs depuis 48 heures en eau de rivire artificielle, contenant diffrentes concentrations dacide gluconique, avec effet du repolissage

5.4.3.4 Synthse La rduction n2 ne fait pas intervenir la rduction des oxydes du film passif. Une partie du courant de la rduction n2 est due la rduction de loxygne, mais la majeure partie du courant est imputable la rduction des protons issus de la dissociation de lacide gluconique.

221

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.4.4 Ractions cathodiques en prsence des produits enzymatiques

Aprs avoir tudi sparment les rles du peroxyde dhydrogne et de lacide gluconique dans le phnomne daugmentation du courant cathodique, leffet conjugu de ces deux composs va tre considr. Pour cela, deux chantillons dacier 316L ont t immergs pendant 24 heures dans deux solutions deau de rivire artificielle, la suite de quoi 2 mmol/L de H2O2 et 1 mmol/L dacide gluconique ont t ajoutes successivement (dans les deux ordres possibles). 48 heures sparent les deux ajouts. Des courbes de polarisation cathodique ont alors t traces. Elles sont compares sur la figure 136 avec la courbe intensit-potentiel ct cathodique obtenue dans la solution ractifs enzymatiques (note 100 u/L GOD).
0

-200

j (A/cm )

-400

aprs ajout successifs de 2 mM H2O2 et de 1 mM acide gluconique aprs ajouts successifs de 1 mM acide gluconique et de 2 mM H2O2 solution "ractifs enzymatiques"

-600

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-800

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

E (V/ECS)

Figure 136 : courbes intensit-potentiel ralises sur des chantillons dacier 316L immergs en eau de rivire artificielle, aprs ajouts successifs (2 ordres possibles) de 2 mmol/L de H2O2 et de 1 mmol/L dacide gluconique, ainsi quaprs ajout de 20 mmol/L de glucose et de 100 u/L de GOD (5 mV/s)

Le courant cathodique dans la solution ractifs enzymatiques (100 u/L de GOD et 20 mmol/ de glucose) est bien modlis par lajout successif dacide gluconique puis de peroxyde dhydrogne. Le milieu du palier de la rduction de H2O2 (rduction n1) est compris entre -0,45 et -0,4 V/ECS dans les deux solutions. La concentration du peroxyde dhydrogne en solution, value par la mesure du courant limite de rduction sur le plateau de diffusion, est sensiblement identique dans les deux milieux. La rduction des protons provenant de lacide gluconique est aussi retrouve entre -1,1 et -0,7 V/ECS. Dans le cas o H2O2 est introduit avant lacide gluconique, la polarisation cathodique est effectue 96 heures aprs lintroduction du peroxyde dhydrogne. Celui-ci est dans une solution de pH acide (4,2 environ) depuis 48 heures. Ces deux facteurs permettent dexpliquer la courbe de la figure 136, qui indique que H2O2 est dj trs fortement dgrad. La concentration qui subsiste en solution et le courant limite de rduction -0,45 V/ECS sur le plateau de diffusion sont trs faibles.
5.4.5 Synthse

Le courant cathodique dchantillons dacier inoxydable immergs dans une solution deau de rivire artificielle est plus lev ( tous les potentiels) lorsque la glucose-oxydase et le glucose sont prsents dans la solution. Lintroduction des deux ractifs enzymatiques gnre lapparition de deux nouvelles rductions, notes n1 et n2 sur la figure 137 (courbe de polarisation cathodique sur chantillons dacier 304L, avec prsence ou non des ractifs enzymatiques dans la solution).

222

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

rduction n1 : H2O2 et oxydes

0

-200
-10

j (A/cm )
2

-400

rduction n2 : NaCl protons (acide gluconique) GOD et oxygne

j (A/cm )
2

-20

-30

-600
-40

NaCl GOD

-800 -1,6

-50 -0,7

-0,6

-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

E (V/ECS)

E (V/ECS)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

La rduction n1 est la rduction du peroxyde dhydrogne, qui se fait entre -0,6 et 0,1V/ECS au pH acide de la solution ractifs enzymatiques , infrieur une valeurseuil proche de 4. La rduction des oxydes du film passif se fait entre -0,8 et -0,4V/ECS. La modification de ces oxydes au contact des produits enzymatiques entrane une lgre augmentation du courant de leur rduction, mais des potentiels trop loigns de Ecorr pour avoir une influence sur sa valeur. Le courant de la rduction n1 est trs majoritairement le courant de rduction de H2O2. La rduction n2 est la rduction des protons librs par la dissociation de lacide gluconique, qui se fait entre -1,1 et -0,7 V/ECS. La rduction de loxygne dissous a lieu dans ce domaine de potentiels. Toutefois, ni la variation de la concentration en oxygne (plus faible dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle 48 heures) ni lvolution de la couche passive ne peut expliquer laugmentation du courant cathodique. Le courant de la rduction n2 est trs majoritairement le courant de rduction des protons provenant de lacide gluconique.

Laugmentation de Ecorr dans la solution ractifs enzymatiques est due la rduction n1, cest--dire la rduction du peroxyde dhydrogne. En effet, cette rduction se fait des potentiels plus levs que le potentiel de corrosion libre initial (elle peut dbuter des valeurs de potentiel aussi leves que +150 mV/ECS), ce qui a pour consquence une augmentation de Ecorr. Le peroxyde dhydrogne apparat comme le compos dangereux pour le mtal dans le cadre du modle enzymatique.
5.4.6 Ractions cathodiques en eau de rivire artificielle avec lectrode tournante

Cette partie du travail a pour but de voir leffet du transport de masse sur la rduction du peroxyde dhydrogne (n1) et sur la rduction des protons issus de la dissociation de lacide gluconique (n2), ainsi que dtudier la cintique de ses ractions. Un montage dlectrode tournante est utilis afin de contrler la diffusion proximit de la surface de lchantillon. Des courbes de polarisation ( diffrentes vitesses de balayage) et des chronoampromtries sont ralises avec llectrode tournante. Les courbes de polarisation ne donnent pas de valeurs stationnaires mais permettent de choisir une valeur de potentiel appliquer durant les 223

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 expriences de chronoampromtrie. Ces dernires permettent de mesurer des valeurs stationnaires de courant. Elles sont effectues diffrentes vitesses de rotation ; il parait prfrable dappliquer des vitesses de rotation dcroissantes, afin dviter tout problme dhomognisation de la solution provoquant des artefacts transitoires en dbut de mesure. Les chantillons sont immergs pendant 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , puis les polarisations sont appliques et les mesures effectues. Les rsultats ne sont indiqus que pour la nuance 304L et peuvent tre tendus aux deux autres nuances. La figure 138 indique le trac de courbes intensit-potentiel ct cathodique sur des chantillons dacier 304L. Le palier de rduction du peroxyde dhydrogne est retrouv, avec un potentiel central compris entre -0,5 et -0,4 V/ECS. Seule la courbe correspondant une vitesse de balayage trs lente et une vitesse de rotation nulle (figure 138-b, 0,05 mV/s, 0 rpm) ne prsente pas ce palier de rduction. Si, sur la figure 138b, la valeur du courant sur le palier de diffusion augmente en valeur absolue avec la vitesse de rotation ( vitesse de balayage gale), les courbes de la figure 138a montrent que la relation entre le courant du palier de diffusion et la vitesse de rotation nest pas si simple : le courant 1000 rpm (-11,4 A.cm-2) est plus faible en valeur absolue que le courant 200 rpm (-21,6 A.cm-2). La relation de Levich nest pas suivie. La figure 138a permet aussi de montrer nouveau quau contact de la solution ractifs enzymatiques , le courant de rduction des oxydes du film passif augmente lgrement (le courant cathodique sur lchantillon immerg depuis 48 heures est suprieur en valeur absolue au courant cathodique sur lchantillon repoli).
0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-50

-50
-100

j (A/cm )
2

j (A/cm )
2

-150

-100

-200

200 rpm, 0,15 mV/s 1000 rpm, 0,15 mV/s repoli, 1000 rpm, 0,15 mV/s

-150

-250

0 rpm, 5 mV/s 0 rpm, 0,05 mV/s 1000 rpm, 0,05 mV/s

-300 -1,6

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

-200 -1,6

-1,4

-1,2

-1,0

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Vitesse de balayage : 0,15 mV/s

b- Vitesses de balayage : 5 et 0,05 mV/s

Figure 138 : courbes intensit-potentiel ct cathodique ralises sur des chantillons dacier 304L immergs depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , en lectrode tournante

En revanche, la vague de rduction des protons provenant de lacide gluconique nest pas retrouve sur toutes les courbes. Elle nest visualise que pour la vitesse de balayage la plus rapide (5 mV/s). Cette vague de rduction des protons semble tre leffet dun balayage trop rapide en potentiel. Dans le cas dune vitesse de balayage leve, les protons adsorbs la surface de lchantillon sont rduits trs rapidement, crant lapparition dun pic de rduction. Puis le phnomne de diffusion entre en jeu, gnrant un flux stationnaire dions H+ parvenant jusqu lchantillon. La vitesse de balayage est dans ce cas trop leve par rapport au temps caractristique de diffusion. En revanche, lorsque le balayage est suffisamment lent, la rduction de tous les protons se fait simultanment, et aucun pic de rduction ne se distingue. Une vitesse de balayage lente permet de ne pas distinguer la rduction des protons adsorbs et la rduction des protons de la solution.

224

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Les chronomtries ralises -0,45 V/ECS sont visibles sur la figure 139. Elles montrent que le courant cette valeur de potentiel ne varie pas avec la vitesse de rotation de llectrode. Ce rsultat ntait pas attendu : -0,45 V/ECS, le courant est principalement d la rduction du peroxyde dhydrogne, donc une augmentation du transport de matire jusqu la surface (par augmentation de la vitesse de rotation) devrait entraner une augmentation du courant, ce qui nest manifestement pas le cas ici. Ceci prouve que la rduction de H2O2 nest pas contrle par le transport de masse. Le contrle est cintique, la raction lectrochimique de rduction du peroxyde est donc plus lente que le phnomne de diffusion.
-0,6
0

-0,8

-5

j -450 mV/ECS (A/cm )

2

-10

-1,0

j (A/cm )

-15

-1,2

-20

-1,4

-25

-1,6

-30

0 rpm

60 rpm

Augmentation de jusqu' 1000 rpm

1000 rpm

0 rpm
-35

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-1,8 0 1 2 3 4

10

20

30

40

temps (heures)

temps (minutes)

a- 2 heures 1000 rpm, puis arrt de la rotation

b- Augmentation progressive de la vitesse de rotation

Figure 139 : chronoampromtries ralises -0,45 V/ECS sur des chantillons dacier 304L immergs depuis 48 heures dans la solution ractifs enzymatiques , en lectrode tournante

5.4.7 Synthse gnrale : ractions cathodiques

Laugmentation du potentiel de corrosion libre dans la solution ractifs enzymatiques et dans une solution de peroxyde dhydrogne est la consquence de laugmentation (en valeur absolue) du courant faible polarisation cathodique, due la rduction du peroxyde dhydrogne. Cette rduction peut en effet se faire des potentiels aussi levs que +150 mV/ECS. La prsence de loxydant H2O2 en solution est le facteur principal de laugmentation de Ecorr. Combine un pH acide, elle implique une hausse du potentiel dabandon de plusieurs centaines de mV.

225

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.5 Effet des ractifs enzymatiques sur le comportement anodique des aciers inoxydables
Leffet des diffrents composs mis en jeu dans le modle enzymatique sur le comportement anodique des aciers inoxydables est tudi dans cette partie. Pour cela, des courbes de polarisation anodique sont effectues sur des chantillons des trois nuances dacier inoxydable. Des courbes de polarisation galvanostatique 10 A.cm-2 sont aussi traces.
5.5.1 Courbes intensit-potentiel ct anodique en prsence des ractifs enzymatiques

Leffet de lajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose sur le comportement anodique des aciers inoxydables immergs en eau de rivire artificielle est visualis par le trac de courbes intensit-potentiel (figures 140-142).
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Acier 304L Dans les deux solutions, lapparition dun hystrsis sur la courbe de polarisation anodique indique le dveloppement de la corrosion par piqres. La teneur en ions chlorures est suffisante pour gnrer lapparition de piqres lorsque le potentiel de lchantillon est suffisamment lev. Dans la solution deau de rivire artificielle, le potentiel de piqre Epiq est compris entre 380 et 400 mV/ECS, et le potentiel de repassivation Erep entre -10 et 10 mV/ECS. Au dessus de 400 mV/ECS, la pente de la courbe intensit-potentiel est denviron 848 A.cm-2.V-1. Dans la solution ractifs enzymatiques , le potentiel de piqre est compris entre 380 et 400 mV/ECS : la prsence de lenzyme et de son substrat na pas dinfluence sur la valeur du potentiel de piqre. Le potentiel de repassivation est denviron 120 mV/ECS, il a donc augment dune centaine de mV sous leffet de la GOD et du glucose. La pente de la courbe intensit-potentiel dans le domaine de la corrosion par piqres (E > 400 mV/ECS) est plus leve dans la solution ractifs enzymatiques que dans la solution de NaCl. Elle est en effet denviron 2251 A.cm-2.V-1 en prsence des ractifs enzymatiques.
1,0 0,9 0,8 0,7 0,6

100

NaCl GOD

75

j (mA/cm )

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1 -0,4

j (A/cm )
2

50

25

NaCl GOD

0
-0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Courbe aller-retour

b- Dtermination du potentiel de piqre Epiq (zoom entre 0,2 et 0,7 V/ECS)

Figure 140 : courbes de polarisation anodique dchantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (0,15 mV/s)

226

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

Ainsi, les ractifs enzymatiques ne modifient pas la valeur du potentiel de piqre, mais affectent fortement le potentiel de repassivation (augmentation de 100 mV) et la pente de la courbe intensit-potentiel au-dessus de Epiq (forte augmentation). A potentiel gal, la quantit de matire dissoute est plus importante dans la solution ractifs enzymatiques . La repassivation semble plus facile en prsence de la GOD.
Acier 316L Dans la solution deau de rivire artificielle, le potentiel de piqre est denviron 550 mV/ECS. Cette valeur nest pas modifie significativement lorsque lenzyme et le glucose sont introduits dans la solution, puisque la valeur de Epiq est alors 540 mV/ECS. Les ractifs enzymatiques nont pas dinfluence notable sur le potentiel de piqre de lacier 316L. En revanche, la pente de la courbe intensit-potentiel au-del du potentiel de piqre, dtermine partir de la figure 141-b, varie fortement en fonction de la prsence ou non des ractifs enzymatiques. Elle nest que de 721 A.cm-2.V-1 dans la solution deau de rivire artificielle, mais atteint 1133 A.cm-2.V-1 dans la solution contenant lenzyme et le glucose.
100

500

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

400

NaCl GOD
75

NaCl GOD

j (A/cm )

300

j (A/cm )
2

50

200

100

25

0
0

-0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Depuis Ecorr jusqu 1,4 V/ECS

b- Dtermination du potentiel de piqre Epiq (zoom entre 0,2 et 0,9 V/ECS)

Figure 141 : courbes de polarisation anodique dchantillons dacier 316L immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (0,15 mV/s)

La prsence de GOD et de glucose dans la solution ne modifient pas le potentiel de piqre, mais induit une augmentation de la pente de la courbe intensit-potentiel aux potentiels suprieurs Epiq. Comme pour lacier 304L, potentiel gal, la quantit de matire dissoute est plus leve dans la solution ractifs enzymatiques que dans la solution de NaCl.
Acier 254SMO Le trac de la courbe de polarisation anodique aller-retour dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle ne prsente pas de boucle hystrsis. Laller et le retour sont confondus. Par consquent, lacier 254SMO nest pas sujet la corrosion par piqres dans ce milieu peu chlorur. Il ny a pas suffisamment de chlorures pour avoir une corrosion par piqres. Si le trac de la courbe intensit-potentiel ne peut permettre de dterminer une valeur de Epiq (qui nexiste pas), il peut toutefois nous donner des indications sur la couche doxydes, et sur son ventuelle modification par la solution ractifs enzymatiques . Dans les deux solutions, la densit de courant augmente fortement ds que le potentiel dpasse 1,1 V/ECS. Cette augmentation est due lvolution de loxygne : au-dessus de cette valeur de potentiel, loxydation de leau en oxygne apparat.

227

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Les deux courbes diffrent notablement entre 0,7 et 0,95 V/ECS. Dans la solution contenant la GOD et le glucose, une augmentation de la densit de courant apparat, il se fait donc dans cet intervalle de potentiels une oxydation qui est beaucoup plus quantitative que dans leau de rivire artificielle, o aucun pic doxydation napparat dans lintervalle de potentiels considr. Ces valeurs de potentiel sont caractristiques de loxydation du chrome(III) en chrome(VI). Cette oxydation est plus importante dans la solution ractifs enzymatiques que dans la solution deau de rivire artificielle. Ceci est cohrent avec les caractrisations effectues par photolectrochimie et XPS, qui ont montr que la couche doxydes forme sur un chantillon dacier 254SMO immerg dans la solution ractifs enzymatiques est plus enrichie en chrome que la couche doxydes forme en eau de rivire artificielle. En XPS, le pourcentage total de chrome dans la couche doxydes passe de 39,7 % en eau de rivire artificielle 52,7 % dans la solution ractifs enzymatiques . Cette augmentation de la teneur en chrome est aussi visualise sur le trac des courbes de polarisation anodique, o le courant doxydation du chrome(III) en chrome(VI) est plus lev dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle. Loxydation du chrome(III) en chrome(VI) ne peut tre visualise sur les courbes ralises sur des chantillons dacier 304L et 316L (figures 140 et 141), car sur ces chantillons le potentiel de piqre est infrieur au potentiel de loxydation du chrome(III). Par consquent, la corrosion par piqres se dveloppe avant que loxydation du chrome(III) nait pu avoir lieu.
400
30

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

300

NaCl GOD

25

NaCl GOD

20

j (A/cm )

j (A/cm )
2

200

15

10

100
5

0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6

0 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1

E (V/ECS)

E (V/ECS)

Figure 142 : courbes de polarisation anodique dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (0,15 mV/s)

a- Depuis Ecorr jusqu 1,7 V/ECS

b- Zoom entre 0,6 et 1,1 V/ECS

5.5.2 Courbes de polarisation galvanostatique en prsence des ractifs enzymatiques

Le comportement anodique des chantillons dacier inoxydable a aussi t examin en ralisant des polarisations galvanostatiques [233-235]. Dans ces expriences, une densit de courant de 10 A.cm-2 est impos lchantillon, et le potentiel est mesur au cours du temps. Les volutions du potentiel permettent dtudier lventuel dveloppement de la corrosion par piqres. Les rsultats obtenus sont visible sur les figures 143-145.
Acier 304L Dans les deux solutions, le potentiel de dstabilisation du film passif Edest est compris entre 530 et 545 mV/ECS. Ce potentiel, qui est (comme le potentiel de piqre) caractristique de la rsistance de la couche doxydes la corrosion par piqres, nest pas modifi lorsque la glucose-oxydase et le glucose sont ajouts dans la solution deau de rivire artificielle.

228

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,6

0,5

0,4

E (V/ECS)

0,3

0,2

0,1

NaCl GOD

0,0

-0,1 0 2 4 6 8 10

temps (minutes)

Figure 143 : chronopotentiomtries ralises sur des chantillons dacier 304L polariss galvanostatiquement 10 A.cm-2 dans une solution deau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

Les rsultats obtenus par cette mthode permettent de confirmer les rsultats obtenus par le trac des courbes de polarisation anodique, savoir que lintroduction des ractifs enzymatiques ne favorise pas lamorage de la corrosion par piqres.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Acier 316L Dans la solution deau de rivire artificielle, le potentiel de dstabilisation est denviron 600 mV/ECS. La valeur de Edest est plus difficile dterminer avec prcision dans la solution ractifs enzymatiques , en raison de fortes instabilits de potentiel durant les premiers temps de la polarisation galvanostatique. Edest semble tre compris entre 570 et 680 mV/ECS. Le potentiel de dstabilisation de lacier 316L, comme le potentiel de piqre, ne semble pas tre modifi par lajout de glucose-oxydase et de son substrat.
0,7 0,6

0,5

E (V/ECS)

0,4

0,3

0,2

NaCl GOD

0,1

0,0 0 2 4 6 8 10

temps (minutes)

Figure 144 : chronopotentiomtries ralises sur des chantillons dacier 316L polariss galvanostatiquement 10 A.cm-2 dans une solution deau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

Les rsultats de cette polarisation galvanostatique confirment les rsultats obtenus par trac des courbes intensit-potentiel ct anodique. Lintroduction de GOD et de glucose dans la solution deau de rivire artificielle ne parait pas favoriser lamorage de la corrosion par piqres sur lacier inoxydable 316L.
Acier 254SMO Labsence dune chute de potentiel indique labsence de dveloppement de piqres. Le potentiel atteint assez rapidement (aprs 9 minutes) une valeur stable denviron 1,2 V/ECS dans la solution deau de rivire artificielle. Cette valeur de potentiel correspond au potentiel

229

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 doxydation de leau en dioxygne, comme cela a t prcis auparavant lors de ltude des courbes intensit-potentiel ct anodique obtenues sur des chantillons dacier 254SMO. Il est noter quune inflexion de la courbe apparat des valeurs proches de 0,8 V/ECS. Cette inflexion est due une oxydation (quantitativement faible) du chrome(III) en chrome(VI), qui ntait pas visible sur le trac des courbes intensit-potentiel. Dans la solution ractifs enzymatiques , il faut quasiment 20 minutes pour que le potentiel atteigne une valeur stationnaire proche de 1,05 V/ECS, o se fait loxydation de leau en oxygne. De plus, loxydation du chrome(III) est plus quantitative dans cette solution : en effet, dans les premiers instants de la polarisation galvanostatique, le potentiel augmente trs rapidement jusqu rester relativement stable dans un intervalle allant de 780 830 mV/ECS pendant quelques minutes. Cette stabilisation relative autour de 0,8 V/ECS pendant un temps non ngligeable indique quune oxydation se produit dans cette gamme de potentiels. Cette volution est mettre en parallle avec le pic doxydation observ entre 0,75 et 0,95 V/ECS sur la figure 142. Elle est due loxydation du chrome(III) en chrome(VI). Cette oxydation est beaucoup moins marque sur la courbe obtenue dans leau de rivire artificielle, ce qui tmoigne une nouvelle fois de lenrichissement en chrome de la couche doxydes dans la solution ractifs enzymatiques .
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007
1,2

1,0

0,8

E (V/ECS)

0,6

0,4

NaCl GOD

0,2

0,0 0 5 10 15 20

temps (minutes)

Figure 145 : chronopotentiomtries ralises sur des chantillons dacier 254SMO polariss galvanostatiquement 10 A.cm-2 dans une solution deau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose

5.5.3 Effet de lactivit enzymatique

Leffet de la glucose-oxydase sur le comportement anodique du film passif a pour linstant t tudi avec une activit enzymatique de 100 u/L. Une exprience complmentaire est ralise ici afin de voir si des activits enzymatiques diffrentes peuvent avoir une influence sur le comportement anodique des aciers inoxydables. Des courbes de polarisation anodique ont t traces sur des chantillons dacier 304L immergs dans des solutions deau de rivire artificielle contenant 20 mmol/L de glucose et diffrentes activits de glucose-oxydase (figure 146). Dans toutes les conditions exprimentales, le potentiel de piqre Epiq est compris entre 400 et 450 mV/ECS. Il est ici retrouv que la prsence des ractifs enzymatiques na pas dinfluence sur la valeur du potentiel de piqre. Lenzyme ne favorise pas lamorage de la corrosion par piqres. En revanche, toutes les courbes obtenues en prsence de lenzyme ont une pente plus leve dans le domaine de la corrosion par piqres (E > Epiq) que la courbe obtenue en eau de rivire artificielle sans aucun ajout. Ce rsultat a dj t trouv pour une activit de GOD de 100 u/L : potentiel gal, la quantit de matire dissoute est plus leve lorsque lenzyme et son substrat sont prsents dans la solution. 230

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

1500

100

1000

j (A/cm )

j (A/cm )

NaCl 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

NaCl 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

10

500

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

E (V/ECS)

E (V/ECS)

a- Entre 0,2 et 1 V/ECS

b- Dtermination du potentiel de piqre Epiq (zoom entre 0 et 0,5 V/ECS)

Figure 146 : courbes de polarisation anodique dchantillons dacier 254SMO immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans les autres cas 48h aprs ajout de 20 mmol/L de glucose et de diffrentes activits de GOD (0,15 mV/s)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

5.5.4 Synthse

Les aciers inoxydables 304L et 316L peuvent tre victimes de corrosion par piqres dans leau de rivire artificielle. En revanche, la teneur en chlorures est trop faible dans cette solution pour que lacier 254SMO puisse tre sujet la corrosion par piqres.
Effet des ractifs enzymatiques sur le comportement anodique des aciers inoxydables 304L et 316L : lintroduction de glucose-oxydase et de glucose dans la solution deau de rivire artificielle ne modifie pas la valeur du potentiel de piqre des aciers inoxydables 304L et 316L. En revanche, la quantit de matire dissoute au cours dun balayage au-dessus de Epiq est plus leve dans la solution ractifs enzymatique que dans leau de rivire artificielle. A potentiel gal, le volume total de matriau dissous (sans distinction entre les diffrents modes de propagation, que ce soit selon la normale la surface ou par un accroissement du nombre de piqres sur la surface), est plus lev lorsque lenzyme et le glucose sont prsents dans la solution. Lenzyme ne favorise pas lamorage de la corrosion par piqres (elle a mme tendance faire augmenter le potentiel de repassivation), mais a un rle amplificateur lors de la propagation des piqres : elle augmente le volume dacier inoxydable dissous, une fois la corrosion par piqres initie. Effet des ractifs enzymatiques sur le comportement anodique de lacier inoxydable 254SMO : loxydation du chrome(III) est beaucoup plus quantitative dans la solution ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle. La couche doxydes est fortement enrichie en chrome lorsque lchantillon est en contact avec la solution contenant la GOD et le glucose. Ce rsultat confirme les mesures de photocourant et les analyses XPS.

231

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.5.5 Effet des autres composs sur le comportement anodique des aciers inoxydables

Dans ce paragraphe, linfluence de H2O2 et de la catalase sur le comportement anodique des aciers inoxydables est tudie. Le choix a t fait de sintresser plus particulirement lacier inoxydable 316L. En effet, cette nuance prsente un potentiel de piqre, comme le 304L, et leffet des deux composs sur Epiq peut tre tudi. Des courbes de polarisation anodique sont traces pour des chantillons dacier 316L immergs en eau de rivire artificielle, dans un premier cas sans aucun ajout, dans un deuxime cas 48 heures aprs ajout de 20 mmol/L de glucose et de 100 u/L de GOD (solution ractifs enzymatiques , dans un troisime cas 48 heures aprs un ajout de 3370 u/L de catalase postrieur un ajout des ractifs enzymatiques, et dans un dernier cas 48 heures aprs ajout de 2 mmol/L de peroxyde dhydrogne. Les rsultats obtenus sont prsents sur la figure 147. Catalase : lajout de catalase dans la solution ractifs enzymatiques provoque une trs forte augmentation du potentiel de piqre. Celui-ci passe en effet denviron 540 910 mV/ECS. La catalase semble tre un excellent inhibiteur de corrosion. Les spectres XPS montrent que la catalase sadsorbe trs facilement sur la surface des supports en acier inoxydable (par-dessus la premire couche dadsorption pouvant dans ce cas contenir des molcules de glucose-oxydase, dacide gluconique et de glucose). Son adsorption pourrait bloquer une fraction des sites anodiques de dissolution du mtal et empcher le dveloppement de piqres. H2O2 : lajout de peroxyde dhydrogne dans leau de rivire artificielle entrane une augmentation du potentiel de piqre : celui-ci passe effectivement denviron 540 780 mV/ECS. La prsence de H2O2 induit une modification de couche doxydes qui amliore la rsistance de lacier la corrosion par piqres. Les analyses XPS rvlent un enrichissement en fer du film passif au contact dune solution de peroxyde dhydrogne. Dans la solution contenant du peroxyde dhydrogne, le courant anodique est dj fortement modifi avant la valeur de Epiq. En effet, un pic doxydation apparat juste avant le potentiel de piqre. Laugmentation du courant entre 400 et 750 mV/ECS pourrait tre due loxydation du fer(II) en fer(III), plus quantitative dans la solution de peroxyde dhydrogne que dans les autres solutions. Cette oxydation nest visible que lorsque le potentiel de piqre est suffisamment lev, cest pourquoi cette oxydation ne peut tre vue ni dans leau de rivire artificielle ni dans la solution ractifs enzymatiques , o le potentiel de piqre est infrieur au potentiel doxydation du fer(II) et o la quantit de fer totale dans la couche doxydes est relativement faible. La pente de la courbe intensit-potentiel (au-dessus de Epiq) dans la solution de peroxyde dhydrogne est denviron 1700 A.cm-2.V-1, elle est plus leve que dans leau de rivire artificielle. Comme dans la solution ractifs enzymatiques , la propagation au sens large (en terme de volume total dissous) est favorise dans la solution de peroxyde dhydrogne.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

232

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

100 1000

800

NaCl GOD GOD puis catalase H2O2 j (A/cm )

2

75

NaCl GOD GOD puis catalase H2O2

j (A/cm )
2

600

50

400

200

25

0 0 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2

E (V/ECS)

E (V/ECS)

Figure 147 : courbes de polarisation anodique sur des chantillons dacier 316L immergs dans leau de rivire artificielle (NaCl), dans la solution ractifs enzymatiques (GOD), dans la solution ractifs enzymatiques additionne de 3370 u/L de catalase (GOD puis catalase), et dans une solution 2 mmol/L de peroxyde dhydrogne (H2O2) (0,15 mV/s)

a- Depuis Ecorr jusqu 1,6 V/ECS

b- Entre 0,2 et 1,2 V/ECS

5.5.6 Synthse : comportement anodiques tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Corrosion par piqres Dans leau douce artificielle utilise dans cette tude, les aciers inoxydables 304L et 316L peuvent tre dgrads par corrosion par piqres. La teneur en chlorures est en revanche trop faible pour que lacier 254SMO soit sujet cette forme de corrosion. Action des ractifs enzymatiques Lajout de GOD et de glucose dans leau de rivire artificielle ne favorise pas lamorage de la corrosion par piqres (pas deffet notable sur Epiq), mais en augmente la propagation au sens large (volume dissous plus important). Il semblerait que le potentiel de repassivation soit plus lev en prsence des ractifs enzymatiques, ce qui indiquerait un rtrcissement du domaine dexistence des piqres mtastables. Par ailleurs, la prsence de GOD et de glucose semble entraner un enrichissement en chrome au sein de la couche doxydes (au moins sur lacier 254SMO), visible par lapparition dun pic doxydation entre 0,75 et 0,95 V/ECS lorsque le potentiel dapparition est suprieur ces valeurs. Action de la catalase Lajout de catalase dans la solution ractifs enzymatiques entrane une trs forte augmentation de Epiq. La catalase semble tre un inhibiteur de corrosion trs efficace. Action de H2O2 Lajout de peroxyde dhydrogne dans leau de rivire artificielle amliore la passivit de lalliage : le potentiel de piqre est nettement plus lev lorsque H2O2 est prsent en solution (augmentation denviron 250 mV dans le cas de lacier 316L). La propagation (au sens large) parait tre favorise dans la solution de peroxyde dhydrogne.

233

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.6 Influence des ractifs enzymatiques sur limpdance du systme

Il a t montr auparavant que les ractifs enzymatiques dune part, les produits enzymatiques (peroxyde dhydrogne et acide gluconique) dautre part, ont une influence sur la valeur du potentiel de corrosion libre et sur le courant cathodique. En particulier, la prsence de peroxyde dhydrogne ( une concentration de lordre de la mmol/L) modifie suffisamment le courant cathodique proximit de Ecorr (cest--dire de faibles surtensions cathodiques) pour engendrer une forte augmentation du potentiel dabandon. Le modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase reproduit correctement le comportement lectrochimique des aciers inoxydables en eau de rivire naturelle. La seule diffrence se situe au niveau de lvolution de Ecorr dans la solution ractifs enzymatiques : des instabilits de Ecorr nombreuses et frquentes perturbent le suivi du potentiel dabandon, en particulier sur lacier 304L. Ces instabilits traduisent des instabilits du film passif. Il a t prouv que cette fragilisation de la couche doxydes nest pas une forme de corrosion par piqres. Pour pousser plus loin linvestigation de ce phnomne, des mesures dimpdance lectrochimique ont t ralises, afin dtudier les modifications du film passif en prsence des diffrents composs mis en jeu dans le modle enzymatique. Les rsultats dimpdance qui vont tre exposs concernent principalement lacier inoxydable 304L, la nuance la plus affecte par les instabilits du potentiel dabandon. Il est rappel que lors de la mesure de limpdance lectrochimique dun systme, lorsque la capacit Cdl de la double couche est trs suprieure la capacit de la couche doxydes (cas gnral), la capacit mesure est gale la capacit du film doxydes Cox :
C dl >> C ox C = C ox

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

La mesure de limpdance dun chantillon dacier inoxydable immerg en eau de rivire artificielle permet de calculer la capacit de la couche doxydes qui le recouvre.
5.6.1 Diagrammes dimpdance en prsence des enzymes

La spectroscopie dimpdance lectrochimique a t utilise afin dtudier linfluence de la solution ractifs enzymatiques sur le film passif des aciers inoxydables. Le rle ultrieur de la catalase est aussi analys par cette technique. 5.6.1.1 Acier 304L Llectrolyte est ici la solution deau de rivire artificielle 0,3 g/L de NaCl. Les chantillons sont immergs pendant 24 heures dans cette solution (valeur stationnaire de Ecorr de -51 mV/ECS), puis un diagramme dimpdance avant ajout de la GOD est trac. Ensuite, 100 u/L de GOD et 20 mmol/L de glucose sont ajouts. Le potentiel de corrosion libre augmente fortement puis prsente des instabilits. Deux mesures dimpdance lectrochimique sont effectues, 24 heures (Ecorr = 48 mV/ECS) et 48 heures (Ecorr = 34 mV/ECS) aprs lajout des ractifs enzymatiques. Les rsultats obtenus sur des chantillons dacier 304L sont reprsents sous la forme dun diagramme de Nyquist sur la figure 148-a. Avant lajout des ractifs enzymatiques, le diagramme de Nyquist du systme lectrochimique est une portion de boucle capacitive ayant un diamtre lev, dun ordre de 234

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 grandeur de plusieurs dizaines de M.cm2 (figure a). Ce comportement est caractristique dun mtal passif, dont limpdance a une partie relle rsistive trs importante. Aprs ajout des ractifs enzymatiques, le diamtre de la boucle capacitive est beaucoup plus faible (environ 80 k.cm2). La diminution du diamtre de la boucle capacitive est suprieure un facteur 10. Les deux mesures effectues aprs ajout de la GOD et du glucose (24 heures et 48 heures) sont sensiblement identiques, et le comportement de limpdance en prsence des ractifs enzymatiques peut tre tudi en se limitant aux donnes acquises 24 heures. La forte diminution de limpdance est visible aussi sur les diagrammes de Bode en module et en phase (figure b et c). Sur le diagramme de Bode, le module de limpdance est nettement plus faible aux frquences infrieures 60 mHz dans la solution ractifs enzymatiques . La phase quant elle sloigne fortement des valeurs proches de -80 mesure dans la solution de NaCl : elle augmente ds 400 mHz pour terminer entre -9 et -5 4 mHz. Lvolution de la partie imaginaire de limpdance en fonction de la frquence en coordonnes logarithmiques est donne sur la figure d. Cette reprsentation permet dtudier le comportement capacitif du systme, en saffranchissant de la partie rsistive (partie relle de limpdance). A basse frquence, la prsence de la GOD et de son substrat implique une diminution de la partie imaginaire de limpdance. Puis, des frquences plus hautes, sur une large gamme allant de 100 mHz 100 Hz, Im(Z) varie linairement avec la frquence. Loppos de la pente de cette partie linaire est compris entre 0,87 et 0,91. La partie imaginaire de limpdance ne se comporte donc pas comme une capacit idale mais comme un CPE (Constant Phase Element). Autrement dit, la capacit du systme prsente une dispersion en fonction de la frquence. Le comportement capacitif est encore de type CPE dans la solution ractifs enzymatiques . Il est noter que, comme au chapitre 3, la courbe log|Im(Z)|=f(log(freq)) ne prsente pas une mais deux zones linaires. Comme il a t prcis, la zone de linarit aux hautes frquences est due aux distributions de courant et de potentiel dans llectrolyte proximit de la surface de llectrode [230, 240]. Dans la suite de ce paragraphe, toutes les valeurs des paramtres du CPE sont calcules partir des valeurs de la pente aux basses frquences.
4x10
5

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

3x10

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

-Im(Z) (ohm.cm )

10 mHz
2x10
5

log |Z|

1x10

0 0 1x10
5

10

-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

2x10

3x10
2

4x10

frquence (Hz)

Re(Z) (ohm.cm )

a- Diagramme de Nyquist : -Im(Z)= f(Re(Z))

b- Diagramme de Bode en module

235

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

20

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

5
-20

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

log |Im(Z)|
-3 -2 -1 0 1 2

phase ()

-40

-60

-80

-100

1
10 10 10 10 10 10

10

-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

frquence (Hz)

frquence (Hz)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 148 : diagrammes dimpdance lectrochimique dun chantillon dacier inoxydable 304L immerg dans leau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, avec correction de la chute ohmique (exprience 1)

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Toutefois, cette influence des ractifs enzymatiques sur limpdance est trs peu reproductible. Le diamtre de la boucle capacitive en solution ractifs enzymatiques peut diffrer fortement dune exprience lautre. La figure 149 reprsente les donnes dimpdance acquises lors de 4 expriences identiques celle dcrite prcdemment et illustre la variabilit des rsultats. Dans tous les cas, la partie imaginaire de limpdance haute frquence est plus faible en prsence des ractifs enzymatiques que dans leau de rivire artificielle.
1,0x10
6

8,0x10

2,5x10

2,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

6,0x10

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD

-Im(Z) (ohm.cm )

1,5x10

10 mHz

4,0x10

1,0x10

10 mHz

5,0x10

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD

0,0 5,0x10
4

2,0x10

0,0 1,0x10
5

1,5x10

2,0x10
2

2,5x10

3,0x10

Re(Z) (ohm.cm )
0,0 0,0 2,0x10
5

4,0x10

6,0x10
2

Re(Z) (ohm.cm )

a- Ecorr = 23 mV/ECS (exprience 2)

b- Ecorr = -31 mV/ECS (exprience 3)

236

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

3,5x10
5

6x10

3,0x10

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD

5x10

2,5x10

4x10

-Im(Z) (ohm.cm )

2,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

3x10

1,5x10

10 mHz

10 mHz

1,0x10

2x10

5,0x10

1x10

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD

0,0 0,0 5,0x10

4

0
1,0x10
5

1,5x10

2,0x10

2,5x10
2

3,0x10

3,5x10

1x10

2x10

3x10

4x10
2

5x10

6x10

Re(Z) (ohm.cm )

Re(Z) (ohm.cm )

Figure 149 : reprsentation de Nyquist de limpdance lectrochimique dchantillons dacier inoxydable 304L immergs dans leau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, avec correction de la chute ohmique

c- Ecorr = -26 mV/ECS (exprience 4)

d- Ecorr = 180 mV/ECS (exprience 5)

Leffet dun ajout ultrieur de 3370 u/L de catalase sur limpdance lectrochimique dun chantillon dacier inoxydable 304L est visible sur la figure 150, reprsentant les donnes dimpdance acquises 48 heures aprs lajout de la catalase (Ecorr 0 mV/ECS). Dans le diagramme de Nyquist, le diamtre de la boucle capacitive augmente fortement et revient peu prs sa valeur initiale, obtenue dans leau de rivire artificielle. Leffet de la catalase sur limpdance contrecarre et annihile leffet de la glucose-oxydase. Lintroduction de la GOD et du glucose dans leau de rivire artificielle entrane une diminution de limpdance basse frquence, et lajout ultrieur de catalase provoque une augmentation de limpdance. Le diagramme de Bode en module illustre bien cette variation aller-retour de limpdance. La valeur maximale du module de limpdance dans la solution de glucose-oxydase, atteinte basse frquence, est infrieure 100 k.cm2, alors quelle est suprieure 1 M.cm2 dans leau de rivire artificielle et dans la solution ractifs enzymatiques laquelle 3370 u/L de catalase ont t ajoutes. Le diagramme de Bode en phase et la courbe log|Im(Z)|)=f(frquence) refltent aussi ces volutions de limpdance. Le coefficient , loppos de la pente de la courbe log|Im(Z)|)=f(frquence) dans sa portion linaire, ne varie pas significativement lorsque la catalase est introduite dans la solution. Dans les trois lectrolytes, est compris entre 0,87 et 0,91 et le comportement capacitif est non idal de type CPE.

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

237

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

1,5x10

25 mHz

-Im(Z) (ohm.cm )

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD Aprs ajout de la catalase

1,0x10

log |Z|

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD Aprs ajout de la catalase

5,0x10

10 mHz
2

0,0
0,0 5,0x10
4

10
1,0x10
5

-2

10

-1

10

10

10

10

1,5x10
2

2,0x10

frquence (Hz)

Re(Z) (ohm.cm )

a- Diagramme de Nyquist : -Im(Z)= f(Re(Z))

0

b- Diagramme de Bode en module

6

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

-20

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD Aprs ajout de la catalase

log |Im(Z)|

Avant ajout de la GOD Aprs ajout de la GOD Aprs ajout de la catalase

-40

phase ()

-60

-80

-100 10
-2

10

-2

10

-1

10

10

10

10

-1

10

10

10

10

frquence (Hz)

frquence (Hz)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 150 : diagrammes dimpdance lectrochimique dun chantillon dacier inoxydable 304L immerg en eau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (exprience 2), puis aprs ajout de 3370 u/L de catalase (avec correction de la chute ohmique)

Calcul des paramtres du CPE

1 ( j) Q sin( ) 2

Rappel : limpdance dun lment phase constante (CPE) peut scrire sous la forme :
Z=

(57)

Par consquent, le paramtre Q du CPE peut tre calcul partir dune mesure de Im(Z) :
Q = Im(Z).

(58)

Le coefficient est gal loppos de la pente de la courbe log|Im(Z)|)=f(frquence) dans sa portion linaire. Les tableaux 34-35 rsument les valeurs de et de Q trouves pour les cinq expriences dtailles prcdemment.

238

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 N dexprience avant GOD aprs GOD aprs catalase 1 0,87 0,90 X 2 0,88 0,91 0,92 3 0,90 0,92 0,91 4 0,85 0,91 0,90 5 0,85 0,93 0,90

Tableau 34 : valeurs du coefficient calcul par rgression linaire partir des mesures dimpdance sur des chantillons dacier inoxydable 304L immergs dans leau de rivire artificielle, avec effet de lajout de la GOD et du glucose, puis de la catalase

N dexprience Q avant GOD Q aprs GOD Q aprs catalase

1 3,3.10-5 4,5.10-5 X

2 2,7.10-5 4,4.10-5 4,4.10-5

3 4,1.10-5 4,7.10-5 5,1.10-5

4 4,4.10-5 5,6.10-5 6,2.10-5

5 4,4.10-5 3,3.10-5 6,7.10-5

Tableau 35 : valeurs calcules du paramtre Q pour des chantillons dacier inoxydable 304L immergs dans leau de rivire artificielle, avec effet de lajout de GOD et de glucose, puis effet dun ajout ultrieur de catalase

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Ces valeurs de Q sont exprimes en -1.cm-2.s et ne sont donc ni comparables, ni assimilables des capacits (F.cm-2 ou -1.cm-2.s). Pour pouvoir comparer le comportement capacitif dans leau de rivire artificielle, le comportement capacitif dans la solution ractifs enzymatiques et le comportement capacitif aprs lajout de catalase, il faut transformer les valeurs de Q en valeurs de capacit. Pour ce faire, deux mthodes diffrentes ont t utilises et vont tre explicites par la suite. Globalement, en excluant lexprience n5, lajout de GOD et de glucose entrane une augmentation non ngligeable du coefficient et du paramtre Q. En revanche, lajout ultrieur de catalase naffecte pas significativement les valeurs de et de Q. Les ractifs enzymatiques sont donc lorigine de modifications du comportement capacitif des chantillons dacier 304L.
Calcul des capacits

Le paramtre Q du CPE na pas de sens physique. Les capacits sont calcules partir des valeurs de Q suivant deux mthodes, par la formule de Brug-den Eeden et par le modle 3D de couche doxydes de Young.
Mthode de Brug-den Eeden

Cette mthode permet dobtenir une estimation de la capacit de la couche doxydes partir des valeurs du paramtre Q et du coefficient . La rsistance basse frquence du systme RBF est dtermine par interpolation de la boucle capacitive : elle est gale labscisse du point dintersection entre linterpolation de la boucle et laxe des abscisses. Connaissant cette rsistance RBF, le coefficient et le paramtre Q du CPE, la capacit du film passif peut tre calcule laide de la formule de Brug-den Eeden :
C Brug = (Q.R BF
1 1 )

Cette mthode gnre une erreur due linterpolation de la boucle capacitive ncessaire pour dterminer RBF. Elle a t utilise pour calculer les capacits des couches doxydes lors des diffrentes phases des expriences 1 et 2, o limpdance est fortement modifie dans les conditions dimmersion testes.

239

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Pour lexprience n1, la capacit calcule par la formule de Brug-den Eeden passe de 15,2 F.cm-2 dans leau de rivire artificielle 17,9 F.cm-2 24 heures aprs lajout de la GOD et du glucose, puis 19,2 F.cm-2 48 heures aprs lajout des ractifs enzymatiques. Le diagramme de Nyquist montre qu 24 heures le diamtre de la boucle capacitive est dj trs rduit. Il semble donc que lvolution de limpdance sous leffet de laction de la glucoseoxydase se fasse sans modification majeure de la capacit, ce qui laisse penser que la rsistance est srement affecte trs fortement. Pour lexprience n2, la capacit passe de 16,5 F.cm-2 dans la solution de NaCl 27,5 F.cm-2 aprs ajout de la GOD et du glucose, puis 28,9 F.cm-2 aprs ajout ultrieur de la catalase. La capacit de la couche doxydes semble varier de faon plus importante au cours de cette exprience. Il semble toutefois que la forte variation de limpdance dans la solution de glucose-oxydase soit due une variation de la rsistance et non pas de la capacit du film passif. Les valeurs calcules restent toutefois trs leves pour des capacits de couches doxydes. Cette mthode nest pas adapte au cas de cette tude : il a t dmontr auparavant que le comportement en impdance locale des films passif est de type CPE, ce qui indique une variation des proprits du film doxydes dans la direction normale la surface utile. Or le comportement CPE utilis dans la formule de Brug-den Eeden est li des variations des proprits du film dans le plan de la surface utile. La formule de Brug ne peut donc pas tre applique une couche doxydes prsentant des variations le long de lpaisseur du film. Pour de telles couches doxydes, le modle de Young semble mieux adapt au calcul de la capacit.
Mthode de Young

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Cette mthode, dveloppe par Young [174] et reprise par Schiller [225], est particulirement adapte une couche doxydes dont les proprits (composition chimique, constante dilectrique) varient selon la normale la surface. Cette variation des proprits lectriques selon la normale a t mise en vidence sur les chantillons dacier inoxydable par des mesures dimpdance locale (3.3). La mthode de Young consiste envisager le film passif comme une suite infinie de circuits RC parallles lmentaires mis en srie. Le schma de la figure 151 reprsente le circuit global quivalent au film passif et le circuit lmentaire de Young. lectrolyte dR d Rfp Cox dR mtal
Figure 151 : circuit quivalent classique et circuit de Young modlisant le film passif (Cox : capacit de la couche doxydes, Rfp : rsistance du film passif)

dC

dC

Limpdance de la suite de circuits lmentaires scrit selon lquation (60) :

Z=

1 + j
0

dx /
0

(60)

240

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 o d est lpaisseur du film passif et sa conductivit. Lhypothse de dpart est que la conductivit varie exponentiellement avec la cote x (coordonne le long de laxe normal la surface) sur une paisseur de la couche doxydes :
x (x) = (0).exp -

(61)

(0) est la conductivit linterface mtal/film passif. Limpdance peut alors scrire de la faon suivante :
Z YG = p 1 + j exp(p 1 ) ln( ) j 0 S / d 1 + j

(62)

o S est la surface de lchantillon en contact avec llectrolyte, d lpaisseur de la couche doxydes, p la profondeur de pntration relative ( p = systme : =
0 . (0) ), et la constante de relaxation du d

La capacit de la couche doxydes Cox tant gale :

C ox =

0 S (63) d

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

limpdance de Young peut scrire :

Z YG = p 1 + j exp(p 1 ) ln( ) j C ox 1 + j

(64)

Les parties relle et imaginaire de limpdance de Young peuvent scrire selon les quations (65) et (66), ce qui permet de dfinir la rsistance de Young RYG et la capacit de Young CYG :
d exp( ) (65) Re( Z YG ) = R YG = . arctan d dC f 2 2 1 + exp( ) 2d 2 2 1 + exp( ) = 1 (66) Im(Z YG ) = . ln 2 2 .C YG 2dC f 1+

Globalement, limpdance du systme peut scrire comme la somme de ZYG et de la rsistance Re de llectrolyte. Une comparaison a t effectue entre les donnes exprimentales acquises dans lexprience n1 et les donnes thoriques fournies par les formules dtailles ci-dessus, afin dobtenir des valeurs de la capacit de Young CYG. Les rsultats du fitting sont prsents sur la figure 152. Ils indiquent que la capacit de la couche doxydes varie peu lorsque la GOD et le glucose sont ajout dans leau de rivire artificielle : CYG passe de 7 F.cm-2 avant lajout 7,5 F.cm2 aprs lintroduction des ractifs enzymatiques. En revanche, lajout ultrieur de catalase fait augmenter fortement CYG qui passe 18 F.cm-2. La profondeur de pntration relative p, quant elle, passe de 0,032 dans la solution de NaCl 0,039 dans la solution ractifs enzymatiques , puis 0,024 aprs lajout de la catalase. Les valeurs de capacits calcules ont cette fois le bon ordre de grandeur. Une capacit de 7 F.cm-2 correspond une paisseur de film denviron 1,5 nm, et une capacit de 18 F.cm-2 une paisseur denviron 0,6 nm. Cette dernire valeur est assez faible, mais une ventuelle variation de laire active du matriau ne peut tre exclue.

241

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Ces paisseurs sont globalement compatibles avec les valeurs trouves dans la littrature [256-258]. Les valeurs de capacits calcules laide du modle 3D de couche doxydes dvelopp par Young ont un sens physique.
200,0k

90k 80k 70k

Exprimental Thorique

150,0k

60k

-Im Z /
Exprimental Thorique

-Im Z /

50k 40k 30k 20k 10k

100,0k

50,0k

0,0 0,0

50,0k

100,0k

150,0k

200,0k

0 10k 20k 30k 40k 50k 60k 70k 80k 90k

Re Z /

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

a- Avant ajout de la GOD et du glucose

150,0k

Re Z / b- 48 heures aprs ajout de la GOD et du glucose

100,0k

-Im Z /

50,0k
Exprimental Thorique

0,0 0,0

50,0k

100,0k

150,0k

Re Z /

c- 48 heures aprs ajout ultrieur de la catalase

Figure 152 : donnes exprimentales (exprience n1) et donnes thoriques calcules par le modle de Young pour limpdance dun chantillon de 304L immerg en eau de rivire artificielle, avec effet dun ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, et effet dun ajout ultrieur de 3370 u/L de catalase

Lutilisation du modle 3D de couche doxydes de Young permet de montrer que leffet de la GOD sur limpdance des chantillons dacier 304L nest pas principalement un effet sur la capacit de la couche doxydes, mais plutt un effet sur la partie rsistive de limpdance. En revanche, lajout ultrieur de catalase, qui ramne limpdance des valeurs proches de ses valeurs initiales, modifie de faon importante la capacit de la couche doxydes. 5.6.1.2 Acier 316L Les diagrammes dimpdance effectus sur des chantillons dacier 316L immergs dans la solution deau de rivire artificielle ou dans la solution ractifs enzymatiques sont prsents sur la figure 153. Avant lajout des ractifs enzymatiques, le diagramme de Nyquist est une portion de boucle capacitive dont le diamtre a pour ordre de grandeur le M.cm2. Lajout des ractifs enzymatiques ne modifie que trs lgrement la boucle capacitive dans le diagramme de 242

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Nyquist, le diamtre est lgrement abaiss. Leffet de la GOD et du glucose sur limpdance des chantillons de 316L est ngligeable. Ceci est confirm par les autres reprsentations de limpdance lectrochimique : les courbes avant et aprs ajout de la GOD et du glucose sont quasiment superposables.
5x10
5

4 mHz
4x10
5

-Im(Z) (ohm.cm )

3x10

log |Z|

4 mHz

2x10

1x10

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

0 10
-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

0 0 1x10
5

2x10

3x10

4x10
2

5x10

frquence (Hz)

Re(Z) (ohm.cm )

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

a- Diagramme de Nyquist
40 20 0 -20 -40 -60 -80

b- Diagramme de Bode en module

6

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

log |Im(Z)|

phase()

-100 10
-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

10

-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

frquence (Hz)

frquence (Hz)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 153 : diagrammes dimpdance lectrochimique dun chantillon dacier inoxydable 316L immerg dans leau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, avec correction de la chute ohmique (avant ajout, Ecorr = -60 mV/ECS, puis aprs ajout forte augmentation, rupture et faibles instabilits, Ecorr = 185 mV/ECS 24 et 48 heures)

Contrairement au cas de lacier 304L, lajout de glucose-oxydase et de glucose dans leau de rivire artificielle a une influence ngligeable sur la valeur de limpdance lectrochimique de lacier inoxydable 316L. De la mme faon, un ajout ultrieur de catalase na pas dinfluence notable sur limpdance. 5.6.1.3 Acier 254SMO Des mesures dimpdance lectrochimique ont t ralises sur des chantillons dacier 254SMO polis au micron, passs aux ultrasons dans lthanol, et immergs en eau de rivire artificielle avec et sans ajout des ractifs enzymatiques. Les diffrentes reprsentations graphiques des rsultats obtenus sont visibles sur la figure 154. La boucle capacitive obtenue dans le diagramme de Nyquist nvolue pas lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits dans la solution de NaCl. Limpdance ne semble pas modifie en prsence de GOD et de glucose. Les autres reprsentations confirment cette observation : 243

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 le module, la phase et le coefficient du CPE (oppos de la pente de la courbe log |Im(Z)| = f(log(freq))) sont sensiblement identiques dans la solution ractifs enzymatiques et dans leau de rivire artificielle.
2,0x10
6

4 mHz

6
1,5x10
6

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

-Im(Z) (ohm.cm )

1,0x10

log |Z]

4 mHz

5,0x10

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

0
0,0 0,0 5,0x10
5

1,0x10

1,5x10
2

2,0x10

10

-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

Re(Z) (ohm.cm )

frquence (Hz)

a- Diagramme de Nyquist
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007
-50

b- Diagramme de Bode en module

7

-60

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

Avant ajout de la GOD 24h aprs ajout de la GOD 48h aprs ajout de la GOD

-70

log |Im(Z)|
-2 -1 0 1 2 3

phase ()

-80

1
-90 10 10 10 10 10 10

0 10
-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

frquence (Hz)

frquence (Hz)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 154 : diagrammes dimpdance lectrochimique dun chantillon dacier inoxydable 254SMO immerg dans leau de rivire artificielle, avant et aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose, avec correction de la chute ohmique

Comme dans le cas de lacier 316L, limpdance lectrochimique de lacier inoxydable 254SMO nest pas modifie par un ajout de GOD et de glucose dans leau de rivire artificielle. Ces deux aciers diffrent de lacier 304L, qui voit son impdance fortement abaisse lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits dans leau de rivire artificielle. 5.6.1.4 Influence de lactivit enzymatique sur limpdance de lacier inoxydable 304L Afin dtudier linfluence de la glucose-oxydase sur limpdance de lacier inoxydable 304L, diffrentes activits de GOD ont t introduites dans des solutions 0,3 g/L de NaCl contenant un chantillon dacier 304L. Les activits testes sont 50, 100, 500, 1000 et 5000 u/L. Limpdance des chantillons a t mesure aprs lajout de 20 mmol/L de glucose et de chaque activit de GOD. Les rsultats obtenus sont visibles sur la figure 155. Les valeurs de Ecorr sont indiques dans le tableau 36.

244

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 Les diamtres approximatifs (calculs par interpolation) des boucles capacitives dans le diagramme de Nyquist sont donns dans le tableau 36, ainsi que les valeurs du potentiel de corrosion libre des diffrents chantillons. Quelle que soit lactivit enzymatique, limpdance est beaucoup plus faible que dans la solution de NaCl, o RBF est de plusieurs dizaines de M.cm2. Toutefois, aucune tendance simple ne permet de relier lactivit de la glucose-oxydase et la rsistance de transfert de charge.
1,2x10
5

1,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

8,0x10

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

log |Z|

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

6,0x10

4,0x10

2,0x10

0 10
-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

10

10

0,0

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

0,0

2,0x10

4,0x10

6,0x10

8,0x10
2

1,0x10

1,2x10

frquence (Hz)

Re(Z) (ohm.cm )

a- Diagramme de Nyquist
20

b- Diagramme de Bode en module

5

-20

log |Im(Z)|

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

50 u/L 100 u/L 500 u/L 1000 u/L 5000 u/L

phase ()

-40

-60

-80

-100 10
-3

0
10
-2

10

-1

10

10

10

10

10

-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

10

log(f)

log(f)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 155 : diagrammes dimpdance lectrochimique dchantillons dacier inoxydable 304L, 24 heures aprs lajout de 20 mmol/L de glucose et de diffrentes activits de GOD, avec correction de la chute ohmique

Activit de la GOD (u/L) RBF (.cm2) Ecorr 24h (mV/ECS)

50 1,25.105 -10

100 2.104 -10

500 8.104 46

1000 3,5.104 7

5000 6.104 34

Tableau 36 : valeur du diamtre de la boucle capacitive dans le diagramme de Nyquist pour diffrentes activits enzymatiques

Lintroduction de glucose-oxydase et de glucose dans leau de rivire artificielle entrane bien une diminution de la partie rsistive de limpdance. Cette rsistance, note jusquici RBF, peut tre de deux natures, comme il apparat sur le schma de la figure 156 : Elle peut correspondre une rsistance de transfert de charge Rtc linterface mtal/lectrolyte, dans le cas o le film passif est perfor de piqres de corrosion 245

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 assimilables des pores dans la couche doxydes. Pour que lhypothse Rtc soit plausible, il faut que lchantillon soit sujet la corrosion par piqres (figure 156). Dans ce cas, la capacit totale du circuit est environ gale Cox (cf. formule (50)). Le pore court-circuite le film passif, le circuit lectrocintique quivalent au systme lectrochimique est alors Rtc//Cox. Elle peut correspondre la rsistance du film passif Rfp. Dans ce cas, o lchantillon ne subit pas de corrosion par piqre, le circuit quivalent est Rfp//Cox. Re pores = piqres
Electrolyte

Rfp

Cox Rtc Cdl

Film passif

Acier inoxydable tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Figure 156 : reprsentation schmatique de linterface mtal/film passif/lectrolyte et circuit lectrocintique quivalent

Trois lments permettent daffirmer que RBF est la rsistance de la couche doxydes : labsence dune deuxime constante de temps (se traduisant par labsence dune deuxime boucle capacitive dans le diagramme de Nyquist) ; le facteur 10 que peut atteindre la diminution de RBF. La courbe de la figure 157 indique que le courant dchange sur le palier passif ne varie pas dun facteur 10 lorsque les ractifs enzymatiques sont ajouts dans la solution deau de rivire artificielle. Si RBF tait une rsistance de transfert de charge, elle diminuerait du mme rapport que le courant passif augmente. la trs faible variation de RBF sur les deux autres nuances dacier inoxydable. En effet, la raction cathodique est sensiblement la mme sur les trois matriaux, donc la rsistance de transfert de charge est identique. Rtc ne variant pas sur les aciers 316L et 254SMO, elle ne varie pas plus sur lacier 304L. Par consquent, la variation de la partie rsistive de limpdance mesure ne peut tre imputable qu une variation de la rsistance Rfp de la couche doxydes.
100

NaCl GOD j (A/cm )

2

10

0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

E (V/ECS)

Figure 157 : courbes de polarisation anodique dchantillons dacier 304L immergs en eau de rivire artificielle, dans un cas sans aucun ajout dans la solution, dans lautre cas 48h aprs ajout de 100 u/L de GOD et de 20 mmol/L de glucose (0,15 mV/s)

246

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 La rsistance RBF est donc la rsistance du film passif Rfp, qui est trs fortement rduite (dans le cas de lacier 304L) lorsque lenzyme et son substrat sont prsents en solution. 5.6.1.5 Synthse Lajout de glucose-oxydase et de glucose dans leau de rivire artificielle entrane une forte diminution de limpdance lectrochimique de lacier inoxydable 304L. Les deux autres nuances sont moins (voire pas) sujettes cette diminution. Leffet de la GOD sur limpdance est en ralit un effet sur la rsistance du film passif, puisquil apparat que les valeurs de capacit de la couche doxydes values laide du modle de Young ne varient que trs peu lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits en solution. Lintroduction de la GOD et de son substrat entrane une forte diminution de la rsistance de la couche doxydes. Lenzyme rendrait ainsi le film passif plus conducteur. Lajout ultrieur de catalase provoque une lvation consquente de limpdance lectrochimique, qui atteint des valeurs proches de celles mesures avant lajout de la GOD ; il semble en particulier que la capacit de la couche doxydes augmente trs nettement lorsque la catalase est introduite.
tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 5.6.2 Diagrammes dimpdance en prsence des produits enzymatiques

Il a t montr que lajout des enzymes dans leau de rivire artificielle ne modifie que trs lgrement limpdance des nuances 316L et 254SMO. Les mesures dimpdance en prsence des ractifs enzymatiques ne sont prsentes que pour la nuance 304L. Les diagrammes tracs sur les aciers 316L et 254SMO montrent que leur impdance ne varie pas plus en prsence des produits que des ractifs enzymatiques. 5.6.2.1 Diagrammes dimpdance en prsence de peroxyde dhydrogne Les mesures dimpdance effectues sur lacier inoxydable 304L avant et aprs ajout de 1 mmol/L de peroxyde dhydrogne dans leau de rivire artificielle sont prsentes sur la figure 158. Limpdance, et en particulier la rsistance de la couche doxydes, sont plus faibles lorsque le peroxyde est prsent en solution. Leffet de la solution ractifs enzymatiques sur la rsistance du film passif est retrouv dans la solution de H2O2.
1,8x10 1,6x10 1,4x10 1,2x10
5

4 mHz
5

Avant ajout de H2O2 24h aprs ajout de H2O2 48h aprs ajout de H2O2

4
5

-Im(Z)

1,0x10 8,0x10 6,0x10 4,0x10

Avant ajout de H2O2 24h aprs ajout de H2O2 48h aprs ajout de H2O2

log |Z|

4 mHz 4 mHz

2,0x10

0 10
-3

10

-2

10

-1

10

10

10

10

0,0 0,0 5,0x10

4

frquence (Hz)
1,0x10
5

1,5x10

Re(Z)

a- Diagramme de Nyquist

b- Diagramme de Bode en module

247

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0

-20

Avant ajout de H2O2 24h aprs ajout de H2O2 48h aprs ajout de H2O2

Avant ajout de H2O2 24h aprs ajout de H2O2 48h aprs ajout de H2O2

phase ()

log |Im(Z)|
10
-3

-40

-60

-80

10

-2

10

-1

10

10

10

10

0 10
-3

frquence (Hz)

10

-2

10

-1

10

10

10

10

frquence (Hz)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 158 : diagrammes dimpdance lectrochimique dchantillons dacier inoxydable 304L, avec correction de la chute ohmique, avant et aprs ajout de 1 mmol/L de H2O2 dans leau de rivire artificielle

5.6.2.2 Diagrammes dimpdance en prsence dacide gluconique Les diagrammes dimpdance tracs sur lacier inoxydable 304L avant et aprs ajout de 1 mmol/L dacide gluconique dans leau de rivire artificielle sont prsents sur la figure 159. Le pH mesur est denviron 4,3. Limpdance nest que trs peu affecte par la prsence de lacide gluconique en solution.
8,0x10
5

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

4 mHz
6

Avant ajout d'acide gluconique 24h aprs ajout d'acide gluconique 48h aprs ajout d'acide gluconique

6,0x10

-Im(Z) (ohm.cm )

4,0x10

log |Z|
Avant ajout d'acide gluconique 24h aprs ajout d'acide gluconique 48h aprs ajout d'acide gluconique Re(Z) (ohm.cm )
0,0 2,0x10
5

2,0x10

0 -3 -2 -1 0 1 2 3

0,0 4,0x10
5

6,0x10

8,0x10

log(f)

a- Diagramme de Nyquist
-40

b- Diagramme de Bode en module

Avant ajout d'acide gluconique 24h aprs ajout d'acide gluconique 48h aprs ajout d'acide gluconique

-60

Avant ajout d'acide gluconique 24h aprs ajout d'acide gluconique 48h aprs ajout d'acide gluconique

phase ()

-80

log |Im(Z)|
-3 -2 -1 0 1 2 3

-100
1

0 -3 -2 -1 0 1 2 3

log(f)

log(f)

c- Diagramme de Bode en phase

d- log |Im(Z)| = f(log(frquence))

Figure 159 : diagrammes dimpdance lectrochimique dchantillons dacier inoxydable 304L, avec correction de la chute ohmique, aprs ajout de 1 mmol/L dacide gluconique dans leau de rivire artificielle

248

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

5.6.2.3 Synthse La diminution de la rsistance du film passif Rfp, constate dans la solution ractifs enzymatiques , nest pas retrouve dans une solution dacide gluconique. Elle est par contre relle lorsque du peroxyde dhydrogne ( une concentration de lordre de la mmol/L) est introduit dans leau de rivire artificielle. Il semble donc que le peroxyde dhydrogne soit responsable de la diminution de la rsistance de la couche doxydes.
5.6.3 Discussion

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Il a t montr par XPS que le film passif form dans la solution ractifs enzymatiques est fortement enrichi en lment chrome au dtriment de llment fer, alors que, au contraire, dans une solution de peroxyde dhydrogne, la couche doxydes est enrichi en fer au dtriment du chrome. La composition chimique de la couche doxydes nest pas du tout la mme dans ces deux solutions. Il semble toutefois que la variation de la rsistance de la couche doxydes se fasse dans les deux cas dans le sens dune diminution de ce paramtre. La valeur de Rfp ne peut pas tre relie simplement au rapport fer/chrome. Les variations de Rfp peuvent expliquer les chutes brutales de Ecorr constates dans la solution ractifs enzymatiques et dans leau de rivire artificielle additionne de peroxyde dhydrogne. Le potentiel du mtal en solution peut scrire sous la forme :
V = Vinterfacial + (R e + R fp ) i

o i est le courant faradique, dans ce cas gal au courant de passivit ipassif. Les deux premiers termes tant peu prs constants, les chutes brutales du potentiel mesur peuvent provenir dune variation de potentiel Efp = Rfp.i aux bornes du film passif. Lvolution du gradient de potentiel au sein de la couche doxydes pourrait expliquer les oscillations de Ecorr entre des valeurs leves, correspondant une chute ohmique importante dans le film passif, et des valeurs faibles, correspondant une chute ohmique beaucoup plus rduite. Leffet de la GOD (et en particulier du peroxyde dhydrogne) sur la rsistance du film passif ncessiterait un certain temps avant dtre stable, do le passage de Ecorr de valeurs leves des valeurs plus faibles pendant la phase transitoire de lvolution de Rfp. Puis la rsistance du film passif se stabiliserait une valeur faible (le film passif tant beaucoup plus conducteur que dans son tat initial), et le potentiel de corrosion libre prendrait sa valeur stationnaire aux alentours de 0 V/ECS. Les diffrentes phases de lvolution de Ecorr sont illustres sur la figure 160. La tendance laugmentation est due llvation (en valeur absolue) du courant cathodique faible polarisation (en raison de la rduction du peroxyde dhydrogne), tandis que la tendance la diminution est due lvolution de la rsistance de la couche doxydes.

249

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

0,4

0,3

0,2

Diminution de la chute ohmique dans la couche d'oxydes Augmentation du courant cathodique

Ecorr (V/ECS)

0,1

0,0

-0,1

-0,2

-0,3 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

temps (jours)

Figure 160 : volution du potentiel de corrosion libre dun chantillon dacier 304L dans leau de rivire artificielle, avec introduction de 20 mmol/L glucose et de 100 u/L GOD aprs 24 heures dimmersion

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lintroduction de GOD et de glucose entrane une forte diminution de la rsistance du film passif, en revanche, il apparat quelle na pas dinfluence notable sur la capacit du film. La spectromtrie de photolectrons X a montr que le rapport fer/chrome diminue dans la solution ractifs enzymatiques , mais que cette diminution ne saccompagne pas dune modification significative de lpaisseur de la couche doxydes, ce qui est cohrent avec la constance de la valeur de la capacit.

5.7 Mise en vidence du mcanisme de laugmentation de Ecorr sur le site de Choisy-le-Roi

Lors de ltude du comportement lectrochimique des aciers inoxydables immergs en eau de rivire naturelle au chapitre 4, il a t montr que sur le site de Choisy-le-Roi, une espce oxydante est synthtise dans llectrolyte proximit de la surface au cours de limmersion. Cet oxydant est rduit des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr, ce qui provoque laugmentation du potentiel de corrosion libre. Les analyses EDS et labsence de palier de diffusion sur les courbes de polarisation cathodique prouvent que ce compos oxydant nest pas un oxyde de manganse. Lhypothse alors mise a t la synthse de peroxyde dhydrogne par le biofilm. Il vient dtre dmontr que le modle de production enzymatique de H2O2, connu en eau de mer naturelle, est aussi capable de gnrer en eau de rivire artificielle une volution de Ecorr identique celle mesure en eau de rivire naturelle. Afin de valider la pertinence de ce mcanisme en eau de rivire naturelle, et en particulier ici au niveau du site de Choisy-le-Roi, il reste mettre en vidence la prsence de peroxyde dhydrogne dans les biofilms.
5.7.1 Dtermination de la prsence de peroxyde dhydrogne

Le mcanisme de laugmentation du potentiel de corrosion libre li la rduction de molcules de peroxyde dhydrogne synthtises au sein mme du biofilm a t prsent au 250

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 chapitre 1 (1.2.1). Ce modle est valable dans un grand nombre de cas daugmentation de Ecorr en eau de mer naturelle [3, 66, 68, 73]. Pour valuer sa pertinence dans leau de rivire naturelle, une exprience a t mise en uvre afin de rvler une ventuelle prsence de peroxyde dhydrogne dans les biofilms dvelopps sur acier inoxydable en eau de Seine. Cette exprience sappuie sur les travaux de Washizu et al. [66] Une bandelette analytique Merck 1.10081.0001 permettant de dtecter la prsence de peroxyde dhydrogne est mise en contact soit directement avec la surface dun chantillon, soit avec un couvillon recouvert dun prlvement du biofilm (par frottis). Une photographie de cette exprience est visible sur la figure 162. La bandelette a t mise en contact avec un prlvement de biofilm par couvillonnage dun chantillon dacier 304L immerg depuis 3 mois sur le site de Choisy-le-Roi. Le virage au bleu de la zone ractionnelle de la bandelette permet daffirmer que le biofilm contient du peroxyde dhydrogne. Cette manipulation a t ralise sur plusieurs chantillons et est reproductible quelle que soit la nuance dacier inoxydable teste. Tous les biofilms forms sur acier inoxydable dans leau du site de Choisy-le-Roi contiennent du peroxyde dhydrogne. La concentration trouve est gnralement proche de 10 mg/L de biofilm.
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Figure 162 : photographie dune bandelette analytique mise en contact avec un prlvement de biofilm par couvillonnage dun chantillon dacier inoxydable 304L immerg pendant 3 mois Choisy-le-Roi

Leau de Seine du site de Choisy-le-Roi a aussi t teste laide de ces bandelettes analytiques. La figure 163 montre que leau de rivire naturelle ne contient pas de peroxyde dhydrogne. Les molcules de H2O2 sont donc comprises dans le biofilm.

Figure 163 : photographie de bandelettes analytiques mises en contact avec leau de la Seine Choisy-le-Roi ou avec des prlvements de biofilms sur chantillons daciers inoxydables immergs dans la Seine sur ce mme site

Cette exprience permet daffirmer que les biofilms obtenus en eau de rivire naturelle sur acier inoxydable Choisy-le-Roi contiennent du peroxyde dhydrogne. La prsence de cet

251

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 oxydant est en adquation avec les valeurs leves du potentiel de corrosion libre du platine, compris entre +650 et +770 mV/ECS. Le peroxyde dhydrogne est un trs bon candidat lidentification de lespce oxydante prsente en solution proximit de la surface mtallique, dont la densit de courant maximale de rduction est visible entre -460 et -380 mV/ECS sur les courbes de polarisation cathodique au niveau du site de Choisy-le-Roi.
5.7.2 Effet dun ajout de catalase sur le courant cathodique

Leffet dun ajout dune forte activit de catalase (suprieure 5000 u/L) sur le courant cathodique a aussi t valu. Des courbes de polarisation cathodique ralises sur un chantillon dacier inoxydable 316L immerg dans leau de Seine du site de Choisy-le-Roi avant et aprs ajout de catalase sont reprsentes sur la figure 164.
0

-20

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-40

j (A.cm )
-2

-60

-80

-100

immerg depuis 3 mois (Ecorr = 395 mV/ECS) aprs ajout de catalase

-1,0 -0,5 0,0 0,5

-120 -1,5

E (V/ECS)

Figure 164 : courbes de polarisation cathodique ralises sur un chantillon dacier inoxydable 316L prlev aprs 3 mois dimmersion dans la Seine sur le site de Choisy-le-Roi et rimmerg dans un bcher contenant de leau du site, avant et aprs ajout de catalase (vitesse de balayage : 5 mV/s, protocole quasi in situ )

La courbe trace avant lajout de catalase a dj t dtaille prcdemment. Elle montre dabord la rduction (entre -0,4 et 0,2 V/ECS) dune nouvelle espce oxydante, produite en solution durant limmersion, puis la rduction de loxygne dissous entre -1,3 et -0,6 V/ECS. Elle a la mme allure que les courbes traces dans la solution ractifs enzymatiques . Aprs lajout de la catalase, la rduction qui se produit entre -0,4 et 0,2 V/ECS a compltement disparu. Lespce oxydante a t dgrade par la catalase. Il peut donc tre conclu de cette exprience que le peroxyde dhydrogne est lespce rduite entre -0,4 et 0,2 V/ECS dans leau de rivire naturelle du site de Choisy. Laugmentation du potentiel dabandon sur ce site est due la rduction de H2O2 de faibles surtensions cathodiques.
5.7.3 Synthse

Les biofilms recouvrant les chantillons dacier inoxydable immergs dans leau de Seine sur le site de Choisy-le-Roi contiennent une quantit non ngligeable de peroxyde dhydrogne. Leau de rivire nen contient pas, les molcules de H2O2 sont donc produites au sein du biofilm par le mtabolisme des microorganismes qui le constituent. Les courbes intensit252

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2 potentiel montrent quune rduction se produit de faibles surtensions cathodiques aprs un certain temps dimmersion ; cette rduction nest plus visible lorsque la catalase, une enzyme catalysant la dgradation du peroxyde dhydrogne, est introduite dans la solution. Par consquent, le modle de laugmentation de Ecorr lie la rduction du peroxyde dhydrogne est tout fait pertinent ici. La prsence de H2O2 dans le biofilm a t dmontre. Sa rduction se fait des potentiels suprieurs la valeur initiale de Ecorr, ce qui entrane une hausse du potentiel dabandon. Sur le site de Choisy-le-Roi, les biofilms contiennent du peroxyde dhydrogne. La rduction de ce compos oxydant des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr provoque une augmentation du potentiel de corrosion libre. Le modle enzymatique (solution ractifs enzymatiques ) reproduit correctement en eau de rivire artificielle les processus cathodiques observs en eau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi.
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5.8 Synthse gnrale : modle enzymatique de production de H2O2

Le modle enzymatique de production dun milieu oxydant (peroxyde dhydrogne) et acide par lenzyme glucose-oxydase permet de reproduire en eau de rivire artificielle lvolution de Ecorr et les modifications des processus cathodiques constates en eau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi.
Evolution de Ecorr : Le modle enzymatique permet dobtenir en eau de rivire artificielle la forte augmentation du potentiel de corrosion libre due en eau naturelle laction du biofilm. Il permet dacclrer le processus (pas de temps de latence lorsque les ractifs enzymatiques sont introduits en solution). En revanche, il engendre des instabilits de Ecorr (en particulier pour la nuance 304L) qui semblent dues une modification de la couche doxydes au contact du peroxyde dhydrogne (diminution de la rsistance du film passif). Modifications des processus cathodiques au cours de limmersion Le modle enzymatique permet de reproduire parfaitement le comportement cathodique mesur en eau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi. En particulier, la raction de rduction du peroxyde dhydrogne pH acide se fait des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr, ce qui entrane laugmentation du potentiel dabandon.

En revanche, le comportement anodique, limpdance lectrochimique, la composition chimique et les proprits de semi-conductivit du film passif dans le modle enzymatique peuvent prsenter des diffrences avec les mesures en eau de rivire naturelle. Le rle du peroxyde dhydrogne est double : en modifiant le courant cathodique par sa rduction potentiel lev, il entrane llvation de Ecorr [1, 73]; en modifiant la couche doxydes, il peut provoquer des instabilits du potentiel de corrosion libre [17, 47].

253

Chapitre 5 : Modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase - Production de H2O2

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254

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

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6 Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle - Influence sur le potentiel de corrosion libre

255

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

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256

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Les rsultats dtaills dans le chapitre prcdent montrent quun biofilm deau de rivire naturelle est capable de modifier suffisamment le courant cathodique faible polarisation pour engendrer une augmentation du potentiel de corrosion libre, augmentation consquente quivalant une augmentation de la probabilit dinitiation de corrosion par piqres des aciers inoxydables. Ce biofilm lectrochimiquement actif doit dans une premire tape adhrer la surface des chantillons afin de pouvoir ensuite modifier la physico-chimie locale linterface matriau/lectrolyte et provoquer laugmentation du courant cathodique (en valeur absolue). Dans ce chapitre, ladhsion de microorganismes provenant du milieu eau de rivire naturelle va tre tudie, afin de dtailler les mcanismes mis en jeu lors de ce processus. Des microorganismes modles isols partir du milieu naturel sont employs pour ltude de la biocontamination de supports en acier inoxydable. Limpact de leur adhsion sur le potentiel de corrosion libre est valu. Ce chapitre se dcompose en sept parties : Isolement de souches microbiennes sauvages et slection de trois isolats modles ; Caractrisation microbiologique des isolats ; Caractrisation physico-chimique surfacique des isolats ; Caractrisation physico-chimique de la surface des supports en acier inoxydable ; Adhsion des isolats sur supports en acier inoxydable en conditions statiques ; Justification des diffrents taux dadhsion laide des caractrisations physicochimiques de surface ; Consquence de la biocontamination sur le potentiel de corrosion libre.

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6.1 Isolement et slection de microorganismes provenant de biofilms forms en eau de rivire naturelle
Des souches microbiennes sauvages sont isoles partir dcouvillonnages de palplanches et de prlvements de leau de Seine, de crote arrache de palplanches (feuillets de produits de corrosion) et de boue du site de Poses-Amfreville. Les isolements sont raliss sur les milieux gloss utiliss pour les dnombrements bactriens et dtaills en annexe n9. Ils sont indiqus dans le tableau 37 selon la provenance de lchantillon. Flore arobie Plate Count Agar arobie 2 1 7 4 3 4 21 Flore anarobie Plate Count Agar anarobie 2 2 6 7 6 2 25 Entrobactries Mac Conkey 1 1 2 4 70 BSR Starkey 6 5 11 BTR Magot 5 4 9

Milieu de culture Eau 1 Eau 2 Crote Boue Ecouvillon 1 Ecouvillon 2 Total Total gnral

Tableau 37 : nombre de souches isoles sur les diffrents milieux de culture gloss en fonction de la provenance de lchantillon. Prlvements effectus sur le site de Poses-Amfreville.

257

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Au total, 70 souches sauvages a priori diffrentes provenant du milieu eau de rivire naturelle sont isoles. Devant la diversit et la complexit des biofilms obtenus sur les chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle, il a t dcid de procder un choix afin de slectionner quelques souches microbiennes sauvages pour la suite du travail, et en particulier pour ltude de la bioadhsion et de son influence sur Ecorr. Le premier critre de choix est le caractre arobie des souches. En effet, il a t prouv que la prsence doxygne est indispensable laugmentation du potentiel de corrosion libre [15], llvation du potentiel dabandon tant due majoritairement au mtabolisme de la fraction arobie du biofilm. Le deuxime critre de choix est le caractre sessile des isolats. Les modifications lectrochimiques qui apparaissent au cours de limmersion sont dues aux microorganismes sessiles faisant partie du biofilm, et non aux microorganismes planctoniques. Les isolats sessiles sont les souches microbiennes provenant des couvillonnages de palplanches et des prlvements de crote . Ces deux critres de choix permettent de diminuer le nombre de souches microbiennes considres de 70 14 : 7 souches isoles partir des prlvements de crote et 7 souches isoles partir des couvillonnages de palplanches (chiffres en rouge dans le tableau 37). Enfin, les caractrisations physico-chimiques de surface des souches microbiennes (cf. 6.3) conduisent slectionner trois souches diffrentes, prsentant des proprits physicochimiques trs distinctes permettant de balayer le spectre microbien des isolats du milieu naturel. La biocontamination des aciers inoxydables et son influence sur le potentiel de corrosion libre sont tudies laide de ces trois isolats modles.

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6.2 Caractrisations microbiologiques des trois isolats

6.2.1 Tests dorientation et identification des isolats

Les tests dorientation classiques (test de Gram, oxydase, catalase) et des observations au microscope optique sont effectus sur les trois souches. Les souches notes 1 et 2 sont des bactries de morphologie bacille, arobies, Gram-, catalase ngatives, oxydase positives. La souche note 3 est une levure. Le systme Biolog a t utilis pour identifier ces trois souches ; les plaques GN2 (spcifiques pour les bactries arobies Gram ngatif) ont permis didentifier les deux espces bactriennes et la plaque YT didentifier la levure. Les rsultats obtenus sont rsums dans le tableau 38. N de la souche Nature Morphologie Espce Gram Oxydase 1 Bactrie Bacille Brevundimonas diminuta 2 Bactrie Bacille Photobacterium logei Sporidiobolus johnsonii 3 Levure

+
258

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Catalase Diamtre moyen dune colonie Aspect visuel des colonies

1 mm brillantes, bombes, couleur beige

2 mm brillantes, bombes, couleur beige ple 5 mm couleur rouge orang

Photographie des colonies

Tableau 38 : identification et caractristiques microbiologiques des isolats modles cultivs sur milieu PCA-NaCl

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Lannexe 4 indique quelques proprits et utilisations de ces trois souches microbiennes. Les deux espces bactriennes 1 et 2 sont (oxydase + ; catalase -), ce qui est le cas de figure le plus favorable au modle enzymatique oxydases/catalase-peroxydase (1.2.1). Dans ce modle, laugmentation de Ecorr est lie la prsence de peroxyde dhydrogne dans le biofilm. La production de ce compos est catalyse par une enzyme de type oxydase, tandis que la catalase (ou la peroxydase) catalyse sa dgradation. Le caractre (oxydase+ ; catalase-) des souches 1 et 2 est ainsi favorable la production de H2O2.
6.2.2 Courbes de croissance en milieu de culture

Les modalits de prparation des suspensions [259], et en particulier leur phase de croissance [260, 261], ont une forte influence sur les proprits physico-chimiques de surface des microorganismes. Standardiser le protocole de prparation des suspensions permet de travailler sur des cellules microbiennes ayant toujours le mme tat physico-chimique de surface. Pour cela, le dveloppement des trois isolats est tudi en laboratoire. Le milieu de culture liquide employ pour la croissance des isolats est un bouillon nutritif (Becton Dickinson, USA) contenant 3 g/L dextrait de buf et 5 g/L de peptone. Le milieu de culture est ensemenc puis mis ltuve 20C. La densit optique (DO) 600 nm est mesure rgulirement sur le troisime repiquage des trois isolats, ce qui permet de tracer des courbes de croissance avec et sans agitation (figure 165).
0,9 0,8 0,7 0,6
0,9

Souche 1 Souche 2 Souche 3

DO (600 nm)

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0

Souche 1 Souche 2 Souche 3

DO (600 nm)

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

4,5

temps (jours)

temps (jours)

a- Sans agitation

b- Avec agitation

Figure 165 : courbes de croissance des trois isolats dans le milieu BN (troisime repiquage)

259

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr La souche 1 crot facilement en labsence dagitation. La phase stationnaire est atteinte aprs environ 4 jours, et la densit optique est alors de 0,8. La croissance est comparable lorsque le milieu est agit. En labsence dagitation, aprs 4 jours de croissance, les densits optiques des deux autres isolats sont nettement plus faibles. Lagitation des flacons de culture permet daugmenter la valeur de DO sur les plateaux stationnaires (figure b) traduisant un dveloppement plus important. 4 jours aprs le troisime repiquage, les suspensions ont atteint la phase stationnaire de leur dveloppement. Sur la base de ces donnes et compte-tenu de limportance des modalits de prparation des suspensions, il a t dcid dutiliser le protocole de mise en culture suivant : Jour 1 : pipetage d1 mL de suspension contenue dans un cryotube stock -20C (solution de glycrol 20%) et introduction dans un flacon contenant 200 mL de BN strile. Mise du flacon ltuve 20C sur table dagitation (premier repiquage). Jour 4 : pipetage d1 mL de suspension dans le flacon, introduction dans un nouveau flacon contenant 200 mL de BN strile, puis mise ltuve 20C sur table dagitation (deuxime repiquage). Jour 8 : pipetage d1 mL de suspension dans le flacon, introduction dans un nouveau flacon contenant 200 mL de BN strile, puis mise ltuve 20C sur table dagitation (troisime repiquage). Jour 11 : centrifugation (10 minutes 7000g) des 200 mL de BN ensemenc, puis rcupration du culot et introduction dans un certain volume deau de rivire artificielle (0,3 g/L de NaCl), afin dobtenir une suspension la densit optique voulue. Ce protocole de culture est mis en uvre avant toutes les autres manipulations (caractrisations physico-chimiques, adhsion statique) afin de standardiser la procdure de prparation des suspensions microbiennes.

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6.3 Caractrisations physico-chimiques de surface des trois isolats

La caractrisation des proprits physico-chimiques de surface des microorganismes est essentielle pour comprendre les interactions bactrie-substrat au sein du liquide environnant pouvant aboutir une adhsion. Le caractre hydrophile/hydrophobe, le caractre lectrondonneur/lectron-accepteur et la charge de surface des cellules sont dtermins par la technique MATS (Microbial Adhesion To Solvents) et par ztamtrie.
6.3.1 Hydrophilicit et caractre acide/base au sens de Lewis des microorganismes

Les caractres hydrophile/hydrophobe et acide/base au sens de Lewis des trois isolats microbiens sont dtermins laide de la technique MATS. Les rsultats obtenus sont prsents sur la figure 166.

260

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr
100 80
0,3 g/L NaCl
9 g/L NaCl

100 80
A ffinit (% )
0,3 g/L NaCl
9 g/L NaCl

100

0,3 g/L NaCl

80

A ffin it (% )

9 g/L NaCl

60 40 20 0 C HD D AE

60 40 20 0 C HD D AE

A ffin it (% )

60 40 20 0 C HD D AE

a- Souche 1

b- Souche 2
Figure 166 : MATS des 3 isolats en eau de rivire artificielle

c- Souche 3

La souche 1 a une forte affinit avec le chloroforme (acide de Lewis) et une faible affinit avec lhexadcane (apolaire), ce qui montre quelle a un fort caractre lectron-donneur. Son affinit avec lactate dthyle (base de Lewis) est trs faible, son caractre lectron-accepteur est trs faible. La souche 1 a trs peu daffinit avec les solvants apolaires (hexadcane, dcane), en particulier lorsque la force ionique est faible. Elle est donc trs hydrophile.
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La souche 2 a une forte affinit avec le chloroforme (acide de Lewis) et une affinit nulle avec lactate dthyle (base de Lewis), ce qui montre quelle a un fort caractre lectron-donneur. Son affinit avec les solvants apolaires (hexadcane, dcane) est plus faible que son affinit avec le chloroforme mais est toutefois non ngligeable (en particulier force ionique faible). Par consquent, la souche 2 est plutt hydrophile, mais lest moins que la souche 1. La souche 3 a une forte affinit avec lhexadcane et le dcane (apolaires), elle est donc hydrophobe.
6.3.2 Charge de surface des microorganismes

La charge de surface des trois isolats microbiens est dtermine par ztamtrie. Les rsultats obtenus sont visibles sur la figure 167.
2
ME

30 20 pH 10
M E (10 -8 m 2 s -1 V -1 )

2
ME

30 20 pH 0 1 2 3 4 5 6 7 10
ME (10 -8 m 2 s -1 V -1 )

1
ME

15
Zta

1
M E (1 0 -8 m 2 s -1 V -1 )

Zta

1 0 -1 -2 -3

Zta

0,5 0 0 -0,5 -1 -1,5 1 2 3 4 5 6

10 5 pH

0 0 -1 -2 -3 -4 1 2 3 4 5 6 7 8 9

0 -10 -20 -30 -40 -50

0 -10 -20 -30 -40 -50

0 -5 -10 -15 -20 -25

Zta (m V)

Z ta (m V )

Zta (m V)

-4

-2

a- Souche 1

b- Souche 2

c- Souche 3

Figure 167 : mobilit lectrophortique et potentiel zta des trois isolats en eau de rivire artificielle

La souche 1 a un point isolectrique denviron 2,8. Au pH de leau de rivire artificielle (environ 6), son potentiel zta de surface est de -36 mV environ. Sa charge de surface est ngative et assez leve en valeur absolue. La souche 2 a un point isolectrique denviron 2,6. Au pH de leau de rivire artificielle (environ 6), son potentiel zta de surface est de -33 mV environ. Sa charge de surface est ngative et assez leve (en valeur absolue), mais lgrement plus faible que la charge de surface de la souche 1.

261

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr La souche 3 a un point isolectrique denviron 3,2. Au pH de leau de rivire artificielle (environ 6), son potentiel zta de surface est de -12 mV environ. Sa charge de surface est ngative et assez faible (en valeur absolue), largement infrieure la charge de surface des souches 1 et 2.
6.3.3 Synthse

Les caractrisations physico-chimiques de surface des trois isolats sont rcapitules dans le tableau 39. N de la souche Hydrophile/hydrophobe Acide/base de Lewis Charge de surface
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1 Trs hydrophile Base

2 Hydrophile Base

3 Hydrophobe

- (leve)

- (leve)

- (faible)

Tableau 39 : identification et proprits physico-chimiques de surface des isolats utiliss dans ltude de la bioadhsion sur acier inoxydable

Les souches 1 et 2 ont un fort caractre lectron-donneur. Les trois souches peuvent tre classes de la plus hydrophile la plus hydrophobe : souche 1 > souche 2 > souche 3. Pour remarque, lhydrophilie de surface des bactries Gram- peut tre confre par les lipopolysaccharides prsents dans la paroi des cellules [262]. Les trois souches peuvent tre classes de la plus charge la moins charge (en valeur absolue, ces charges tant ngatives) : souche 1 > souche 2 > souche 3. La diffrence de charge entre les souches 1 et 2 est trs faible. La levure a de loin la charge de surface la plus faible.

6.4 Caractrisations physico-chimiques de surface des supports

Comme la surface des cellules microbiennes, la surface des aciers inoxydables est caractrise par son hydrophilicit, son caractre acide/base au sens de Lewis et sa charge globale de surface. La mesure du caractre accepteur/donneur dlectrons et de lhydrophilie /hydrophobie est ralise par goniomtrie par la mesure dangles de contact avec diffrents solvants, et la charge globale de surface est dtermine par la mesure du potentiel zta.

Les donnes nergtiques obtenues pour les trois nuances sont prsentes en dtail au chapitre 3 et sont rappeles dans le cas du protocole de prparation utilis ( ultrasons alcool ) dans le tableau 40.

Pour rappel, les surfaces sont basiques au sens de Lewis (elle prsentent un fort caractre lectron-donneur) et moyennement hydrophobes.

262

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

SLW SS+ SAB S formamide 58,7 52,4 47,9 32,9 22,8 0,8 8,3 41,2 304L 4,5 2,6 5,7 1,5 7,5 0,7 4,9 5,1 66,1 56,8 60,0 30,4 22,2 0,1 3 33,4 316L 9,1 5,1 10,5 2,9 15,8 0,6 9,9 10,3 66,1 45,1 50,3 37 15,3 0,4 4,6 41,6 254SMO 5,3 2,2 8,8 1,2 8,4 0,7 5,7 5,8 Tableau 40 : mesure des angles de contact de leau, du diiodomthane et du formamide () et valeurs des caractristiques nergtiques de surface (mJ.m-2) pour des chantillons dacier inoxydable ayant subi le traitement de surface ultrasons alcool Nuance eau diiodomthane

Par ailleurs, les mesures de potentiel dcoulement ralises sur des chantillons dacier 304L ont conduit la dtermination dun potentiel zta de -23,5 mV 3,5 mV.

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Quelle que soit la nuance considre, les surfaces des chantillons dacier inoxydable sont moyennement hydrophobes et ont un caractre lectron-donneur, ainsi quun potentiel zta ngatif.

6.5 Adhsion des isolats sur supports en acier inoxydable en conditions statiques
La biocontamination des supports en acier inoxydable par les trois isolats slectionns est mesure directement par des expriences dadhsion en conditions statiques. Les deux milieux dtude sont : leau de rivire artificielle (0,3 g/L de NaCl) ; le milieu de culture des souches (bouillon nutritif). Ladhsion de chaque souche est ralise sparment. Une suspension obtenue par mlange volume volume dun repiquage de chaque souche est aussi utilise, afin dexaminer ladhsion dun consortium microbien. Les 4 conditions microbiologiques testes sont ainsi : Souche 1 seule ; Souche 2 seule ; Souche 3 seule ; Consortium microbien mlange des trois isolats. Dans toutes les manipulations, la dure dadhsion est de 24 heures.
6.5.1 Adhsion statique en eau de rivire artificielle

6.5.1.1 Adhsion des trois souches microbiennes arobies

Les photographies rassembles sur la figure 168 sont reprsentatives des surfaces dacier inoxydable mises en contact pendant 24 heures avec les suspensions microbiennes en eau de rivire artificielle.

263

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr La souche 1 adhre assez fortement. Les cellules sont fixes individuellement sur le support. La souche 2 adhre aussi assez fortement ; les cellules sont gnralement fixes individuellement, mais elles peuvent aussi dvelopper des structures en rseaux, ce qui indique une interaction bactrie-support faible. En effet, lorsque linteraction cellule-mtal est faible, les rinages peuvent arracher certaines bactries adhrentes, tandis que dautres cellules peuvent se regrouper en amas ou en rseaux. La souche 3 adhre aussi fortement et de manire individualise; le taux de recouvrement semble important, toutefois la taille caractristique des levures tant nettement plus leve que celle des bactries, le nombre de cellules adhrentes pourrait tre plus faible. Des taux de recouvrement de surface sont calculs par traitement dimage. Les rsultats obtenus sont prsents par souche microbienne (-a -c) et par acier inoxydable (-d -f) sur la figure 169 sous la forme de graphiques botes moustaches . Une analyse de variance est effectue pour dterminer des diffrences statistiquement significatives entre les taux de recouvrement moyens dans les diffrentes conditions exprimentales. Les diffrences statistiquement significatives entre les diffrents taux de recouvrement sont les suivantes : Sur les trois nuances dacier inoxydable, la souche 3 adhre plus que les souches 1 et 2. Sur lacier 316L, la souche 2 adhre plus que la souche 1. Les trois nuances dacier inoxydable peuvent tre classes en fonction de leur adhsivit vis--vis de la souche 1. Lordre peut scrire, de lacier ayant la plus forte adhsivit lacier ayant la plus faible adhsivit : 254SMO > 316L > 304L. Les trois nuances dacier inoxydable peuvent tre classes en fonction de leur adhsivit vis--vis de la souche 3. Lordre peut scrire, de lacier ayant la plus forte adhsivit lacier ayant la plus faible adhsivit : 316L > 254SMO > 304L. La souche 1 semble tre un modle correct de souche sauvage provenant de leau de rivire naturelle du point de vue de ses proprits dadhsion. En effet, son taux de recouvrement des surfaces augmente avec le pourcentage de molybdne. Ceci est en accord avec les dnombrements de flore sessile effectus sur le site de Choisy-le-Roi (4.3.2), o les flores totales arobie et anarobie ainsi que le nombre de BSR augmentent avec le pourcentage de molybdne (254SMO > 316L > 304L). La teneur en molybdne de lacier inoxydable pourrait avoir un effet sur sa biocontamination.

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264

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Acier 304L Acier 316L Acier 254SMO

Souche 1

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Souche 2

Souche 3

Figure 168 : images reprsentatives (obtenues par microscopie en pifluorescence) de surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec diffrentes suspensions microbiennes en eau de rivire artificielle (grossissement X 400)

265

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

304L

304L

316L

316L

254SMO

254SMO

10

20 Taux de recouvrement (%)

30

40

20

40 Taux de recouvrement

60

80

a- Adhsion de la souche 1
304L

b- Adhsion de la souche 2
Souche 1

316L

Souche 2

254SMO

Souche 3
18 28 38 Taux de recouvrement (%) 48 58

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20 40 60 Taux de recouvrement (%)

80

c- Adhsion de la souche 3
Souche 1
Souche 1

d- Adhsion sur acier 304L

Souche 2

Souche 2

Souche 3

Souche 3

10

20 30 40 Taux de recouvrement (%)

50

60

10

20 30 40 Taux de recouvrement (%)

50

60

e- Adhsion sur acier 316L

f- Adhsion sur acier 254SMO

Figure 169 : taux de recouvrement (pourcentage de surface recouverte) des surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec les diffrentes suspensions microbiennes dans leau de rivire artificielle

6.5.1.2 Adhsion dun consortium microbien Les photographies de la figure 170 ont t acquises sur les surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures dimmersion dans une suspension du consortium microbien souche 1/souche 2/souche 3 en eau de rivire artificielle. Les surfaces peuvent prsenter deux aspects diffrents, ce qui est bien illustr par les images c et -e : soit les cellules adhrent quantitativement et de manire individualise (partie infrieure des deux images), soit les cellules se compactent et forment des structures en rseaux, en amas, en lots (partie suprieure des images). Un mme chantillon peut prsenter ces deux facis de colonisation en des zones distinctes. Ceci pourrait tre d des variations spatiales de la dshydratation de la surface. Les cellules des souches 1 et 2 (bactries) sont aisment diffrenciables des cellules de la souche 3 (levures), en particulier sur les images b, d, e et f, o les levures apparaissent de taille importante et prsentent une coloration rouge, alors que les bactries sont de petite taille
266

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr et colores en vert. La diffrence de focalisation indique que les bactries sont au contact direct de la paroi du substrat, alors que la plupart des levures sont situes au-dessus de la premire couche de microorganismes, forme principalement de bactries.

a- Adhsion consortium sur 304L (X100)

b- Adhsion consortium sur 304L (X400)

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c- Adhsion consortium sur 316L (X100)

d- Adhsion consortium sur 316L (X400)

e- Adhsion consortium sur 254SMO (X100)

f- Adhsion consortium sur 254SMO (X400)

Figure 170 : images reprsentatives (obtenues par microscopie en pifluorescence) de surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec une suspension dun consortium microbien en eau de rivire artificielle

6.5.2 Adhsion statique en bouillon nutritif

6.5.2.1 Adhsion des trois souches microbiennes arobies

Les photographies visibles sur la figure 171 sont reprsentatives des surfaces dacier inoxydable mises en contact pendant 24 heures avec les suspensions microbiennes (en bouillon nutritif, not BN). Les suspensions ont t dnombres en dbut et en fin dadhsion, aprs 24 heures dimmersion (tableau 41). En fin dadhsion, toutes les suspensions microbiennes contiennent plus de 107 UFC/mL.

267

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Souche 1 > 107 UFC/mL > 107 UFC/mL Souche 2 2,5.106 UFC/mL > 107 UFC/mL Souche 3 1,5.103 UFC/mL > 107 UFC/mL Consortium 8,6.105 UFC/mL 107 UFC/mL

Dnombrement en dbut dadhsion Dnombrement en fin dadhsion (24h)

Tableau 41 : dnombrements bactriens du milieu de culture en dbut et en fin dadhsion

La souche 1 adhre sous la forme de nombreux amas diffus. Trs peu de cellules isoles sont prsentes la surface des matriaux. La souche 2 adhre sous la forme de rseaux, prsentant aussi quelques gros amas ; toutefois, de nombreuses cellules isoles adhrent sur les supports. Enfin, la souche 3 adhre de manire totalement individualise. Les facis de colonisation sont proches de ceux observs en eau de rivire artificielle, lexception des amas diffus forms par la souche 1, dont ladhsion tait plus individualise dans leau de rivire artificielle. Des taux de recouvrement de surface ont t calculs par traitement dimage. Les rsultats obtenus sont prsents par souche microbienne (-a -c) et par acier inoxydable (-d -f) sur la figure 172 sous la forme de graphiques botes moustaches . Une analyse de variance a t ralise pour dterminer des diffrences statistiquement significatives entre les taux de recouvrement moyens des diffrentes conditions exprimentales. Les diffrences statistiquement significatives entre les diffrents taux de recouvrement sont les suivantes :
Sur les trois nuances dacier inoxydable, la souche 2 est celle qui adhre le moins. La souche 1 adhre plus sur lacier 254SMO que sur lacier 316L. La souche 2 adhre plus sur lacier 316L que sur lacier 254SMO.

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Leffet de la teneur en molybdne de lacier sur ladhsion de la souche 1 est retrouv. La biocontamination de la surface par la souche 1 est plus importante lorsque le pourcentage en molybdne est plus lev.

268

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Acier 304L Acier 316L Acier 254SMO

Souche 1

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Souche 2

Souche 3

Figure 171 : images reprsentatives (obtenues par microscopie en pifluorescence) de surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec diffrentes suspensions microbiennes en bouillon nutritif (grossissement X 400)

269

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

304L

304L

316L

316L

254SMO

254SMO

21

24

27 30 Taux de recouvrement (%)

33

36

12

15 18 21 Taux de recouvrement (%)

24

27

a- Adhsion de la souche 1
304L
Souche 1

b- Adhsion de la souche 2

316L

Souche 2

254SMO

Souche 3

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18

21

24 27 30 Taux de recouvrement

33

36

13

17 21 25 Taux de recouvrement (%)

29

33

c- Adhsion de la souche 3
Souche 1
Souche 1

d- Adhsion sur acier 304L

Souche 2

Souche 2

Souche 3

Souche 3

16

20

24 28 Taux de recouvrement (%)

32

36

10

14

18 22 26 Taux de recouvrement (%)

30

34

e- Adhsion sur acier 316L

f- Adhsion sur acier 254SMO

Figure 172 : taux de recouvrement (pourcentage de surface recouverte) des surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec les diffrentes suspensions microbiennes en bouillon nutritif

6.5.2.2 Adhsion dun consortium microbien Les photographies de la figure 173 ont t acquises sur les surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures dimmersion dans une suspension du consortium microbien souche 1/souche 2/souche 3 en bouillon nutritif. Le facis de colonisation est proche de celui de la souche 1 en bouillon nutritif : de nombreuses cellules adhres sont regroupes en amas, en lots. Des cellules isoles sont toutefois visibles la surface des chantillons. Les levures de la souche 3 sont visibles sur certaines photographies (figure 173f par exemple). La diffrence de focalisation indique que les cellules en contact direct avec le support sont majoritairement les bactries (souches 1 et 2), alors que les levures semblent ntre prsentes quau-dessus de la premire couche de bactries adhres.

270

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr

a- Adhsion consortium sur 304L (X100)

b- Adhsion consortium sur 304L (X400)

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c- Adhsion consortium sur 316L (X100)

d- Adhsion consortium sur 316L (X400)

e-Adhsion consortium sur 254SMO (X100)

f- Adhsion consortium sur 254SMO (X400)

Figure 173 : images reprsentatives (obtenues par microscopie en pifluorescence) de surfaces dacier inoxydable aprs 24 heures de contact avec une suspension dun consortium microbien en bouillon nutritif BN

6.5.3 Synthse

Les rsultats exprimentaux obtenus par exprience dadhsion en conditions statiques sont rsums dans le tableau 42, qui compare les taux de recouvrement de surface en fonction de la souche microbienne slectionne et de la nuance dacier inoxydable support. Acier 304L Eau de rivire artificielle BN 3>1 3>2 1>2 3>2 Acier 316L 3>2>1 1>2 3>2 Acier 254SMO 3>1 3>2 1>2 3>2 Souche 1 254SMO > 316L > 304L 254SMO > 316L Souche 2 Souche 3

304L 316L 316L > 254SMO 254SMO > 304L 304L 316L 316L > 254SMO 254SMO

Tableau 43 : comparaison des taux de recouvrement de surfaces en acier inoxydable aprs 24 heures de contact avec les suspensions des trois souches microbiennes dans deux milieux diffrents

271

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Sur une mme nuance dacier inoxydable, les taux de recouvrement des 3 isolats ne sont pas quivalents. Des diffrences dadhsion notables sont releves. Avec un mme isolat, les taux de recouvrement des trois nuances ne sont pas non plus quivalents. Toutefois, aucune tendance gnrale commune aux trois souches microbiennes ne peut tre dgage. La teneur en molybdne pourrait jouer un rle, en particulier au niveau des taux de recouvrement de surface par la souche 1 (effet bnfique du molybdne). Toutefois, comme il a t rappel plus haut, la prsence dune couche organique adsorbe la surface des chantillons est invitable et peut masquer un ventuel effet de la composition chimique sur la colonisation des diffrentes nuances. Par ailleurs, les expriences dadhsion dun consortium bactrien constitu des trois souches microbiennes ont montr que la premire couche adhrente est forme majoritairement de bactries (souches 1 et 2). Les levures (souche 3) sont aussi capables dadhrer, elles sont effectivement retrouves au-dessus de la premire couche adhre. Ladhsion des levures semble se faire aprs celle des bactries.
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6.6 Discussion
Les diffrences de taux dadhsion entre les diverses conditions exprimentales sont interprtables laide des caractrisations physico-chimiques de la surface des cellules microbiennes et des supports en acier inoxydable. En eau de rivire artificielle : La surface des supports est moyennement hydrophobe. La souche 3 est trs hydrophobe, alors que les souches 1 et 2 sont plutt hydrophiles. Les interactions lectrodynamiques sont plus favorables ladhsion de la souche 3, ce qui justifie le fort taux dadhsion relev pour cet isolat. La souche 3 est effectivement lisolat qui adhre le mieux dans ce milieu. La diffrence dadhsion entre la souche 1 et la souche 2 est plutt minime ; cest sur lacier 316L quelle est la plus importante, et la souche 2 adhre lgrement mieux que la souche 1. Ceci est en accord avec les charges de surface des microorganismes. En effet, la souche 1 a une charge ngative plus forte en valeur absolue que la souche 2. Or la surface des supports est aussi charge ngativement. Les interactions lectrostatiques sont donc plus rpulsives pour la souche 1 que pour la souche 2, qui adhre effectivement plutt mieux que la souche 1. Dans le bouillon nutritif, la souche 3 est aussi celle qui adhre le plus. Cette forte aptitude la biocontamination est confre aux cellules par leur fort caractre hydrophobe de surface. En revanche, les expriences dadhsion statique montrent que la souche 1 adhre plus quantitativement que la souche 2, ce qui est linverse des prvisions thoriques. Leffet de la charge de surface semble tre fortement diminu dans le bouillon nutritif. Comme en eau de rivire artificielle, aucune tendance gnrale ne permet de caractriser une diffrence significative dadhsivit entre les trois nuances dacier inoxydable. Par ailleurs, les expriences dadhsion statique du consortium microbien montrent que la premire couche de microorganismes adhrents, en contact direct avec lacier, est forme

272

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr majoritairement des bactries des souches 1 et 2, alors que les levures ne sont trouves quaudessus de cette premire couche. Pourtant, parmi les trois souches tudies, la souche 3 est celle qui adhre le plus. Cette diffrence entre le comportement du consortium microbien et le comportement des souches isoles provient de la diffrence de taille entre les bactries et les levures. La taille caractristique des bactries est en effet bien infrieure la taille caractristique des levures ; les cellules bactriennes plus petites sont plus proches de la surface du support, alors que leur taille importante limite le dplacement des levures. Les dimensions des levures semblent produire une gne strique qui retarde leur adhsion. La biocontamination dun matriau se fait en deux tapes successives : tape de transport de matire ; tape dinteraction physico-chimique avec la surface. Les rsultats obtenus montrent que le phnomne de transport de matire est une tape-cl de la biocontamination dune surface. Lapport de matire organique et de composs minraux se fait par mouvement du fluide (sdimentation, coulement, convexion, mouvement brownien). Le transport de cellules vivantes peut aussi se faire grce leur mobilit propre (flagelles). Dans le cas de ladhsion du consortium comprenant des bactries et des levures, ce sont les bactries (faibles dimensions) qui adhrent en premier, malgr leurs proprits physicochimiques moins favorables ladhsion que celles des levures (dimensions plus leves). Si ltude des caractristiques physico-chimiques de surface des cellules est indispensable la comprhension des diffrences dadhsion, le transport de matire doit aussi tre pris en compte dans une tude de la biocontamination.

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6.7 Evolution du potentiel de corrosion libre en prsence des isolats

Ltude de ladhsion des trois isolats sur les supports en acier inoxydable a montr quun biofilm se forme la surface du matriau dans toutes les conditions exprimentales testes. En particulier, lorsquun chantillon dacier inoxydable est introduit dans un milieu de culture (BN) contenant les trois microorganismes, sa surface est dabord colonise par les bactries (souches 1 et 2), puis les levures se greffent sur le biofilm. Un cosystme microbien se forme ainsi sur la paroi du substrat. Il a t montr que les deux bactries sont oxydase-positives et catalase-ngatives, cas de figure le plus favorable la production de H2O2 au sein du biofilm. Ces deux souches du milieu naturel sont susceptibles de gnrer du peroxyde dhydrogne proximit de la surface du mtal, et donc de provoquer une augmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables. Le potentiel dabandon dchantillons dacier inoxydable immergs dans une suspension du consortium microbien (en bouillon nutritif) a t suivi au cours du temps. Les rsultats sont reprsents sur la figure 174, ainsi que les valeurs de Ecorr dchantillons dacier inoxydable immergs dans du BN strile.

273

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr
Renouvellement du BN (V/2)

-0,1

-0,2

Ecorr (V/ECS)

-0,3

-0,4

316L (BN strile) 254SMO (BN strile) 304L (consortium) 316L (consortium) 254SMO (consortium)

-0,5

-0,6

-0,7 0 1 2 3 4 5 6

temps (jours)

Figure 174 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs dans du bouillon nutritif soit strile, soit ensemenc par les trois isolats t = 0, avec renouvellement du BN aprs 4 jours dimmersion environ

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Le potentiel de corrosion libre des chantillon immergs dans le BN strile est stable au cours du temps. Il est compris entre -220 et -80 mV/ECS. En revanche, le potentiel de corrosion libre des chantillons immergs dans le BN ensemenc avec les souches 1, 2 et 3 diminue au cours du temps jusqu atteindre une valeur stationnaire comprise entre -640 et -520 mV/ECS aprs 4 jours dimmersion. Ces valeurs de potentiel dabandon sont trs faibles et caractrisent un milieu appauvri en oxygne dissous. Cette diminution de la concentration en oxygne est due la respiration des souches microbiennes arobies. Le renouvellement du milieu de culture (la moiti du volume total) aprs 4 jours dexprimentation ne modifie pas les valeurs de Ecorr. La mme exprience a t ralise avec ajout dune solution de glucose strile dans le racteur aprs 6 jours dimmersion. Le suivi du potentiel de corrosion libre des diffrents chantillons est visible sur la figure 175, ainsi que les valeurs de Ecorr dun chantillon dacier 304L immerg dans un racteur contenant du BN strile.
Renouvellement du BN (V/2) + Ajout 5 mL d'une solution 50% de glucose strile
0,0

-0,1

-0,2

Ecorr (V/ECS)

-0,3

304L (strile) 304L (consortium) 316L (consortium) 254SMO (consortium)

-0,4

-0,5

-0,6 0 2 4 6 8 10 12

temps (jours)

Figure 175 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs dans du bouillon nutritif soit strile, soit ensemenc par les trois isolats t = 0, avec renouvellement du BN et ajout dune solution de glucose strile aprs 6 jours dimmersion

274

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr Comme dans la manipulation prcdente, lchantillon immerg dans le milieu de culture strile a un potentiel de corrosion libre stationnaire denviron -130 mV/ECS. Les potentiels dabandon des chantillons dacier inoxydable immergs dans le BN ensemenc sont trs faibles, prenant des valeurs stationnaires comprises entre -580 et -480 mV/ECS aprs 4 jours dimmersion. Ces valeurs sont caractristiques dun milieu appauvri en oxygne dissous. Le renouvellement de la moiti du volume total du BN et lajout dune solution de glucose strile entranent dans un premier temps une lgre augmentation de Ecorr (pouvant atteindre une centaine de mV), puis le potentiel dabandon diminue et reprend une valeur comprise entre 600 et -450 mV/ECS. De telles valeurs tmoignent dune forte diminution de la concentration en oxygne dissous. Une exprience dimmersion dchantillons dacier inoxydable dans du BN ensemenc a t ralise sous bullage dair strile (passant par plusieurs filtres successifs ayant des pores de diamtre 0,2 m) afin de pallier lappauvrissement en oxygne dissous d la respiration des microorganismes arobies. Lvolution du potentiel de corrosion libre au cours du temps a t mesure et est reprsente sur la figure 176.
-0,1

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renouvellement du BN (V/2) + ajout de 40 mL d'une solution 50% de glucose strile

-0,2

Ecorr (V/ECS)

-0,3

304L (consortium) 316L (consortium) 254SMO (consortium)

-0,4

-0,5

-0,6 0 5 10 15 20

temps (jours)

Figure 176 : suivi du potentiel de corrosion libre dchantillons dacier inoxydable immergs dans du bouillon nutritif ensemenc par les trois isolats t = 0, sous bullage dair strile dans le milieu de culture, avec renouvellement du BN et ajout dune solution de glucose strile aprs 5 jours dimmersion

Malgr lapport rgulier en oxygne, le potentiel de corrosion libre des chantillons diminue au cours du temps. Aprs 15 jours dimmersion dans le BN ensemenc, Ecorr est compris entre -560 et -450 mV/ECS. Le flux dair strile est vraisemblablement insuffisant pour compenser la consommation doxygne par la respiration des microorganismes.

6.8 Synthse
Trois souches microbiennes arobies sessiles (une levure et deux bactries) ont t isoles partir du milieu eau de rivire naturelle . Ltude de la biocontamination de supports en acier inoxydable par ces trois isolats a t effectue.

275

Chapitre 6 : Aptitude la biocontamination de supports en acier inoxydable par des microorganismes isols de leau de rivire naturelle Influence sur Ecorr
Adhsion des trois isolats : La levure (souche 3) est le microorganisme qui adhre en plus grande quantit sur tous les supports en acier inoxydable, ce qui est en accord avec lhydrophobicit de surface du matriau et des cellules. La lgre diffrence dadhsion des deux bactries en eau de rivire artificielle est explique par leurs charges de surface. Les interactions lectrostatiques sont plus rpulsives pour la souche 1 que pour la souche 2. En revanche, leur adhsion dans le milieu de culture (BN) ne correspond pas aux caractrisations physico-chimiques ; leffet des charges de surface semble tre masqu, ce qui pourrait tre d un affaiblissement des interactions lectrostatiques. Transport de matire : La biocontamination dune surface se fait en deux tapes : une premire tape de transport de matire la surface, et une tape dinteraction physico-chimique entre la surface des cellules et celle du support. Le transport de matire est une tape prliminaire indispensable la colonisation de la surface. Limportance des phnomnes de transport est ici mise en vidence par ltude de ladhsion dun consortium microbien, mettant en jeu deux espces bactriennes et une levure. La levure a des caractristiques physico-chimiques de surface (en particulier une hydrophobicit) trs favorable son adhsion ; elle adhre effectivement en plus grande quantit que les deux autres microorganismes, lorsque ladhsion se fait de manire isole. En revanche, lorsquun chantillon dacier inoxydable est introduit dans une suspension mlangeant les trois isolats, les microorganismes qui adhrent les premiers sont les bactries, qui ont une taille plus rduite et dont le transport est facilit. Les levures, capables de dvelopper de fortes interactions avec le support, sont handicapes par leur volume lev. Ladhsion du consortium est rgule en premier lieu par le transport de matire. Influence du biofilm (consortium) sur le potentiel de corrosion libre : Laugmentation du potentiel de corrosion libre au cours du temps, systmatique sur des chantillons dacier inoxydable immergs en eau de rivire naturelle, na pas t retrouve dans les suspensions des trois isolats microbiens (dont deux bactries oxydase +, catalase -). Les trois microorganismes isols du milieu eau de rivire naturelle ne sont pas capables de provoquer une augmentation de Ecorr significative dans les expriences de laboratoire.

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Discussion gnrale

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7 Discussion gnrale Conclusions et Perspectives

277

tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Discussion gnrale

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Discussion gnrale

Ce chapitre va se focaliser autour de plusieurs grands points abords successivement.

Mcanismes de laugmentation de Ecorr en eau de rivire naturelle Un dispositif original dexposition dchantillons mtalliques et de mesure de leur potentiel dabandon, spcialement conu et usin pour cette tude, a permis de caractriser in situ le comportement lectrochimique des aciers inoxydables immergs dans la Seine. Il a t dmontr que les aciers inoxydables voient leur potentiel de corrosion libre augmenter au contact de leau de rivire naturelle, aprs un certain temps de latence. Cette lvation de Ecorr est systmatique, quelle que soit la nuance de lalliage, quel que soit le lieu dexposition et quelle que soit la saison. Lvolution du comportement anodique na pas dinfluence notable sur le potentiel dabandon, cest lvolution des processus cathodiques qui entrane la hausse de Ecorr. Sur les deux sites slectionns, une nouvelle rduction apparat durant limmersion. Dans les deux cas, cette rduction se produit des potentiels plus levs que la valeur initiale du potentiel de corrosion libre, ce qui provoque son augmentation. Cependant, lespce oxydante synthtise nest pas la mme sur les deux sites. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Sur le site de Choisy-le-Roi, du peroxyde dhydrogne se forme dans llectrolyte proximit de la surface sous linfluence du biofilm. La rduction du H2O2 implique la hausse de Ecorr. Le mcanisme reliant lvolution de Ecorr la production de H2O2 dans le biofilm est reconnu et frquemment mis en vidence en eau de mer naturelle. Ce travail montre que ce mcanisme peut aussi expliquer certains phnomnes de biocorrosion en eau de rivire naturelle. Sur le site de Flins, du manganse oxyd est dpos (en faible quantit) sur la surface des chantillons. Sa rduction des valeurs de potentiel leves entrane laugmentation de Ecorr. Le mcanisme reliant lvolution de Ecorr la biominralisation doxydes de manganse a dj t identifi dans de nombreuses exprimentations pratiques en eau de rivire naturelle. Il sapplique dans le cas du site de Flins. Cette tude dmontre la pluralit des mcanismes aboutissant une mme augmentation de Ecorr, cest--dire une mme augmentation de la probabilit damorage de la corrosion par piqres. La littrature oppose souvent le mcanisme li la synthse de H2O2 et le mcanisme de biodposition des oxydes de manganse. Les rsultats exprimentaux montrent que ces deux mcanismes peuvent se produire dans un mme cours deau, en deux points dexposition diffrents. Ces mcanismes ne sont pas antagonistes mais complmentaires. Ils reposent tous les deux sur la formation dun compos oxydant dans le biofilm proximit de la surface. Lautre dnominateur commun est le rle jou par les enzymes extracellulaires secrtes par les microorganismes dans leur milieu extrieur. En effet, la concentration en peroxyde dhydrogne dans le biofilm dpend de la prsence et de la teneur des oxydases (telle que la glucose-oxydase) catalysant sa formation et des enzymes catalysant sa dcomposition (catalase, peroxydase). De la mme faon, la prcipitation et la quantit de matire des oxydes de manganse dposs la surface dpendent (au moins pour partie) de la teneur en certaines enzymes catalysant loxydation de Mn(II) (laccases, manganse-peroxydase). Dans les deux cas, les enzymes impliques sont directement lorigine de laugmentation de Ecorr. Ces deux mcanismes ne sont pas exclusifs et pourraient se drouler de manire simultane. Le peroxyde dhydrogne pourrait mme introduire un couplage comptitif entre les deux processus : la catalyse de loxydation de Mn(II) en Mn(III) par la Mn-peroxydase ne se fait effectivement quen prsence de H2O2 (quation (31)). La concentration en peroxyde

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Discussion gnrale dhydrogne est donc aussi affecte par loxydation du Mn(II) en Mn(III) : les deux processus interagissent. Les deux mcanismes enzymatiques peuvent tre trouvs la fois en eau de rivire naturelle (dmontr dans cette tude) et en eau de mer naturelle. En effet, le processus de biominralisation des oxydes de manganse par les microorganismes mangano-oxydants semble aussi sappliquer certains cas daugmentation de Ecorr en eau de mer naturelle. Plusieurs travaux exprimentaux ont mis en vidence la prsence de bactries manganooxydantes et de dpts doxydes de manganse la surface dchantillons en acier inoxydable immergs en eau de mer naturelle et ayant un potentiel de corrosion libre lev [263, 264]. Aucun des deux mcanismes nest spcifique un type deau naturelle. Pour conclure, dans tous les milieux aqueux naturels, les modifications du comportement lectrochimique des aciers inoxydables gnres par le biofilm pourraient provenir essentiellement de son activit enzymatique.
Temps de latence avant augmentation de Ecorr Il peut tre remarqu que la courbe Ecorr(t) en eau de rivire naturelle a la mme allure quune courbe de croissance microbienne. Le temps de latence avant augmentation dpend dans les deux cas de la temprature du milieu. Aprs la phase de latence, la grandeur considre (potentiel ou concentration microbienne) augmente exponentiellement, jusqu atteindre une phase de saturation o elle prend une valeur constante. Wei et al [13] ont montr quen eau de mer naturelle les volutions de Ecorr et de la concentration en bactries sessiles sont lies. Les deux paramtres augmentent fortement durant les premires 24 heures, puis laugmentation ralentit jusqu stabilisation. Selon lauteur, la hausse du potentiel dabandon est importante lors de la phase dadhsion pionnire de la premire strate de microorganismes mais samenuise lorsque les microorganismes du biofilm entrent dans leur phase de reproduction. Dans cette tude, le temps de latence est nul, ce qui est relativement frquent lors dexpositions en eau de mer naturelle (cf. figure 1). En eau de rivire naturelle, les points communs de la courbe Ecorr(t) et dune courbe de croissance microbienne semblent indiquer que le potentiel dabandon et la concentration en microorganismes sessiles (ou le taux de recouvrement de la surface) pourraient tre directement lis. Htrognit et diversit du biofilm Ce travail a montr que les biofilms se dveloppant sur support en acier inoxydable en eau de rivire naturelle sont discontinus et trs htrognes. Cette htrognit est un lment moteur du dveloppement dune corrosion du matriau sous-jacent, par exemple par la formation de cellules de concentration (doxygne, dions mtalliques). Ces biofilms sont constitus de macromolcules et de nombreux genres biologiques : bactries, levures, algues et micro-algues, champignons, protozoaires Leur biodiversit parat constituer un sujet dtude intressant. Trs souvent, les travaux de recherche en biocorrosion se focalisent uniquement sur le rle jou par les bactries et leur mtabolisme. En ralit, la Corrosion Induite par les Microorganismes rsulte de la contamination de la surface par un consortium microbien complexe.

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Discussion gnrale
Pertinence du modle dadhsion utilis en eau de rivire artificielle A partir de prlvements du milieu naturel, des isolements de souches sauvages sessiles ont permis de travailler en laboratoire avec un consortium microbien prsentant, bien qu un degr de complexit moindre que les biofilms deau naturelle, une certaine biodiversit (2 espces bactriennes, 1 espce de levure). Ltude de la biocontamination de supports en acier inoxydable par ce consortium a mis en valeur limportance de la premire tape de formation dun biofilm, la phase du transport de matire.

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Durant cette tape, le devenir de chaque microorganisme est davantage fonction de ses dimensions caractristiques que de ses caractristiques physico-chimiques de surface. Les microorganismes de plus petite taille sont facilement transports jusqu la surface du matriau, o des interactions physico-chimiques se mettent en place, provoquant ladhsion de la cellule. Les microorganismes de plus grande taille subissent un effet de gne strique et mettent plus de temps pour parvenir la paroi mtallique. Le biofilm est ainsi form de diffrentes strates correspondant des tailles de microorganismes diffrentes. Par ailleurs, il a t constat en eau de rivire naturelle que le pourcentage de molybdne de lacier inoxydable pourrait avoir une influence positive sur sa biocontamination. Cet effet molybdne a t retrouv avec un isolat bactrien : la souche 1 adhre en plus grande quantit la surface dun acier inoxydable lorsque sa teneur en molybdne est plus leve. Le modle dadhsion utilis semble reproduire assez fidlement la biocontamination des aciers inoxydables en eau de rivire naturelle.
Evolution de la couche passive au contact de leau de rivire naturelle Les nuances dacier inoxydable 304L et 254SMO ont en eau de rivire naturelle des compositions chimiques de film passif trs diffrentes (site de Choisy-le-Roi). La couche doxydes recouvrant lacier 304L est constitue majoritairement de chrome, alors que llment prdominant de la couche doxydes de lacier 254SMO est le fer (comme lors dune immersion eau de mer naturelle). Cette diffrence pourrait tre a priori attribue la diffrence de composition des deux matrices mtalliques. Les caractrisations de films passifs forms dans les diffrentes solutions du modle de production enzymatique de H2O2 ( oxydases/catalase-peroxydase ) ont montr qu pH acide, la couche doxydes est enrichie en chrome, alors que linfluence du peroxyde dhydrogne seul se traduit par un accroissement de la teneur en fer. La prsence de H2O2 dans les biofilms se dveloppant sur le site de Choisy-le-Roi a t dmontre. Daprs des mesures rapides effectues laide dune micro-lectrode de pH (non dtailles dans ce document), il semblerait que ces biofilms prsentent aussi une certaine acidit. Or les proprits physico-chimiques dun biofilm sont trs htrognes et varient fortement dans les trois directions de lespace. Des gradients de [H2O2] et de pH internes au biofilm peuvent engendrer des htrognits de la composition chimique du film passif dans le plan de la surface. Ainsi, la diffrence notable de composition des films passifs des nuances 304L et 254SMO pourrait en ralit provenir dune distribution spatiale de composition et non dun effet li aux lments dalliage. Sur un mme chantillon, la composition chimique du film passif pourrait varier fortement dans le plan de la surface. Ceci est en concordance avec les rsultats de polarisation anodique ralise en eau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi (site de prlvement des coupons analyss en XPS), qui sont identiques pour les deux nuances.

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Discussion gnrale

Difficult reproduire laugmentation de Ecorr en laboratoire Les rsultats exprimentaux du chapitre 5 ont montr que limmersion dchantillons dacier inoxydable dans un milieu contenant plusieurs isolats microbiens provenant de la flore sessile se dveloppant en eau de rivire naturelle ne gnre pas daccroissement significatif du potentiel de corrosion libre. Ceci illustre la difficult de transposer en laboratoire les phnomnes lorigine de llvation de Ecorr dans les eaux naturelles. Ainsi, lorsquun coupon dacier inoxydable est immerg en laboratoire dans un bcher contenant un prlvement deau de rivire naturelle, son potentiel dabandon naugmente gnralement pas au cours du temps. Le renouvellement rgulier de leau dans le bcher (flux de matire), ainsi que loxygnation continue du milieu, pourraient peut-tre rapprocher les conditions de laboratoire des conditions sur site naturel.

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Conclusions et Perspectives

Conclusions et perspectives

Laugmentation du potentiel de corrosion libre Ecorr des aciers inoxydables immergs en eau de mer naturelle est un fait avr. Cette lvation est provoque par la colonisation de la surface par un ensemble de macromolcules et de microorganismes formant le biofilm. Elle reprsente une augmentation de la probabilit damorage de la corrosion par piqres. Lexplication la plus couramment propose est lie laction de certaines enzymes secrtes dans le biofilm. En particulier, certaines oxydases pourraient catalyser la raction de production de peroxyde dhydrogne tout en acidifiant le milieu. La combinaison dun milieu oxydant (H2O2) et acide aurait pour consquence laugmentation du potentiel dabandon. Lvolution du potentiel de corrosion libre est en revanche plus controverse lorsque limmersion se fait dans des eaux naturelles plus faible teneur en ions chlorures (rivires, lacs, lagunes). Lobjectif de ce travail a t de prciser cette volution en eau de rivire naturelle, puis dtudier les diffrents mcanismes conduisant aux variations du potentiel. Un dispositif exprimental original a permis de mesurer en continu le potentiel de corrosion libre dchantillons mtalliques immergs dans leau de la Seine en diffrents lieux dexposition. Il a t dmontr que le potentiel augmente au cours du temps aprs un certain temps de latence, quelle que soit la saison, quel que soit le site dimmersion, quelle que soit la nuance dacier inoxydable considre. Laugmentation de Ecorr est systmatique en eau de rivire naturelle. La temprature est un facteur acclrateur du phnomne : le temps de latence diminue lorsque la temprature de leau augmente. Lclairement semble aussi jouer un rle sur lvolution du potentiel, ce qui serait d aux variations du mtabolisme des microorganismes photosynthtiques et/ou bioluminescents en fonction de lintensit lumineuse reue. Le comportement anodique volue faiblement au contact de leau de rivire naturelle, ce qui est vraisemblablement d lvolution de la composition chimique du film passif. Les variations des teneurs relatives en chrome et en fer au sein de la couche doxydes semblent diffrer dune nuance lautre (enrichissement relatif en chrome pour lacier 304L, enrichissement relatif en fer pour lacier 254SMO), toutefois ceci pourrait tre d une htrognit spatiale de la composition dans le plan de la surface. Si les volutions de la couche passive sont diffrentes dune nuance lautre, les volutions de Ecorr sont identiques. Laugmentation du potentiel nest pas lie aux lgres variations du comportement anodique. Les processus cathodiques sont fortement modifis au cours de limmersion. Sur les deux sites dexposition tests, une nouvelle rduction se produisant des potentiels plus levs que la valeur initiale de Ecorr apparat. La rduction dun nouvel oxydant entrane llvation du potentiel de corrosion libre. Cependant, le compos oxydant synthtis durant lexposition nest pas le mme sur les deux sites : il sagit dans un cas de peroxyde dhydrogne (Choisyle-Roi) et dans lautre de manganse oxyd (Flins). Laugmentation du potentiel dabandon est donc due sur un site la rduction de peroxyde dhydrogne synthtis dans le biofilm, et sur lautre site la biodposition doxydes de manganse la surface des matriaux. Deux mcanismes diffrents peuvent se produire dans un mme cours deau, en deux points dimmersion distincts, et gnrer une mme lvation de Ecorr.

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Conclusions et Perspectives Les phnomnes de bioadhsion ont t tudis laide de trois souches microbiennes sauvages (deux bacilles bactriens, une levure) isoles partir de prlvements de flore sessile deau de rivire naturelle. La biocontamination est dans un premier temps contrle par une tape de transport de matire, qui rgule la colonisation en fonction de la taille des microorganismes : les cellules de petite taille (bactries par exemple) migrent plus rapidement vers la surface que les cellules de grande taille (levures par exemple). Aprs ltape de transport de matire, ladhsion est contrle par des interactions physico-chimiques (lectrostatiques, Lifshitz-Van der Waals, acide/base de Lewis). Ladhsion des diffrents isolats est conforme aux caractrisations physico-chimiques de la surface des cellules et des supports en acier inoxydable. La contamination des surfaces par un consortium microbien regroupant les trois isolats ne gnre pas daugmentation du potentiel de corrosion libre. Lobtention dun biofilm lectrochimiquement actif en laboratoire nest pas chose facile. Un modle enzymatique de production de peroxyde dhydrogne, dvelopp pour simuler en eau de mer artificielle linfluence exerce par le biofilm sur le comportement lectrochimique des aciers inoxydables immergs en eau de mer naturelle, a t transpos au cas des eaux faible teneur en Cl-. Lobtention dun milieu oxydant (H2O2) et acide (acide gluconique) par ajout de lenzyme glucose-oxydase (GOD) et de son substrat (D-glucose) dans une eau de rivire artificielle permet de simuler parfaitement les processus cathodiques observs en eau de rivire naturelle sur le site de Choisy-le-Roi, o laugmentation de Ecorr a t relie la rduction du peroxyde dhydrogne prsent dans le biofilm. Laugmentation du potentiel de corrosion libre est aussi simule convenablement, lexception dun phnomne de chutes brutales de potentiel, observ lors des essais effectus avec la nuance la moins rsistante la corrosion (304L) dans la solution de GOD. Ces fortes instabilits de Ecorr, pouvant abaisser considrablement sa valeur moyenne finale 48 heures, pourraient provenir dun effet de lenzyme et/ou de H2O2 sur la conductivit du film passif. La prsence de ces deux composs en solution entrane en effet une diminution importante de la rsistance de la couche doxydes. La variation de la chute ohmique dans le film passif pourrait expliquer les instabilits du potentiel de corrosion libre. Si le modle enzymatique oxydases/catalaseperoxydase de production de peroxyde dhydrogne peut reproduire dans certaines conditions la composition chimique du film passif, il ne reproduit en revanche pas les proprits de semi-conductivit. Ce travail a permis de dgager trois grandes voies possibles dinnovation pour les recherches futures sur le phnomne de biocorrosion en milieu aqueux non strile. Lobservation de la surface dchantillons dacier inoxydable immergs dans la Seine a mis en vidence une biodiversit importante des biofilms. En particulier, les biofilms forms en eau de rivire naturelle contiennent une grande quantit de diatomes. Ce type de microorganismes utilise des enzymes pour assurer son mtabolisme, parmi lesquelles certaines oxydases catalysant la production de peroxyde dhydrogne. Les algues et microalgues pourraient ainsi avoir une influence non ngligeable sur le comportement lectrochimique des aciers inoxydables. Les tudes de biocorrosion ne doivent pas se limiter au rle jou par les bactries mais au contraire slargir linfluence des autres microorganismes. Les diffrents types de microorganismes contenus dans le biofilm produisent gnralement une forte quantit de polymres extracellulaires, amplifiant lhtrognit du milieu et pouvant conduire des acclrations de vitesse de corrosion. Il serait intressant dtudier leffet dautres enzymes mais aussi dautres mtabolites tels que les biosurfactants, qui, par leur forte adsorption, modifient les changes entre mtal et environnement.

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Conclusions et Perspectives La production enzymatique de peroxyde dhydrogne et ses consquences sur les matriaux ont t tudies en eau de mer et en eau de rivire, en revanche, la production enzymatique (catalyse par certaines laccases et la manganse-peroxydase) des oxydes de manganse et son influence sur la tenue la corrosion des aciers inoxydables nont, la connaissance de lauteur de ce manuscrit, jamais t tudies. Enfin, le rle de lclairement dans lvolution du potentiel de corrosion libre reste un sujet dinvestigation. Lutilisation de microorganismes photosynthtiques et/ou bioluminescents en laboratoire pourrait permettre daller plus loin dans la comprhension de linfluence quexerce lclairement de la surface sur le potentiel de corrosion libre.

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Conclusions et Perspectives

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Annexes

9 Annexes

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Annexes

Annexe n1 : la corrosion aqueuse La dfinition de la corrosion dans les normes franaise et europenne de Corrosion des mtaux et alliages (NF EN ISO 8044, avril 2000) est : interaction physico-chimique entre un mtal et son milieu environnant entranant des modifications dans les proprits du mtal et souvent une dgradation fonctionnelle du mtal lui-mme, de son environnement ou du systme technique constitu par les deux facteurs . La corrosion aqueuse concerne la dissolution des mtaux dans un lectrolyte par voie lectrochimique. Elle est rgie par deux principes : la thermodynamique qui permet de dfinir des potentiels lectrochimiques et la cintique des ractions lectrochimiques lie la loi de Faraday, qui permet de relier la vitesse de corrosion (nombre dlectrons librs par le dpart des cations mtalliques en solution) lintensit du courant. 1 Stabilit thermodynamique du fer en milieu aqueux

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Le diagramme potentiel-pH (ou diagramme de Pourbaix) simplifi du fer est donn en figure 1. Seuls deux oxydes solides ont t pris en compte pour la construction de ce diagramme. Il sagit de lhmatite Fe2O3 et de la magntite Fe3O4. La zone en bleu est le domaine dimmunit, o le fer est ltat mtallique (non oxyd). La zone en rouge est la zone de corrosion, o lespce prdominante est un cation mtallique dissous. La zone en orange est le domaine de passivit, o le fer est principalement sous forme dun oxyde solide. Certains oxydes forms lors de la corrosion dun mtal peuvent avoir un rle protecteur vis--vis du mtal sous-jacent. Le mtal est alors dit passivable, car le film doxydes (appel couche passive) qui le recouvre le rend passif vis--vis de la corrosion. Cette proprit est particulirement connue dans le cas des aciers inoxydables.
Diagrammme potentiel-pH du chrome
0.00 1.50 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00

pH

E (V)
1.00

2 Cr2 O 7 (aq)

2 CrO 4 (aq)

b
0.50

Cr
0.00 -0.50

3+

a Cr 2+
-1.00

Cr (OH)3 (s) Cr (OH)2 (s) Cr (s)

-1.50

a- Fer

b- Chrome

Figure 1 : diagrammes potentiel-pH simplifis du fer et du chrome (25C, concentration des espces dissoutes 10-6 mol/L) [204, 269]

Les aciers inoxydables ont une forte teneur en chrome. La couche doxydes qui se dveloppe sur un tel matriau contient gnralement des oxy-hydroxydes de fer et des oxy-hydroxydes de chrome. Un diagramme E-pH simplifi du chrome est donn en figure 1. Les diagrammes de Pourbaix sont tracs partir de calculs thermodynamiques. Ils indiquent les espces prsentes lquilibre thermodynamique, mais ne fournissent aucune indication 288

sur les vitesses des ractions. Une raction peut tre possible thermodynamiquement tout en tant trs lente, ce qui peut la rendre ngligeable. Ltude cintique de la corrosion est donc indispensable. 2 La corrosion aqueuse

La corrosion dun mtal met en jeu deux ractions lectrochimiques diffrentes. A lanode se droule loxydation du mtal (1). Pour quune raction doxydation des atomes mtalliques puisse avoir lieu, il faut quil y ait une rduction (2) sur la surface dun oxydant prsent dans llectrolyte, afin que les lectrons gnrs soient consomms. Les deux demi-quations lectroniques correspondantes peuvent scrire : M M n+ + n e (1) z+ Ox + z e Red (2) M dsigne un atome mtallique, Mn+ lion correspondant, Oxz+ une espce oxydante disponible dans llectrolyte, et Red sa forme rduite. Le site o a lieu la rduction (2) dune espce oxydante prsente en solution est appel cathode. Les ractions anodique doxydation et cathodique de rduction ont un potentiel dquilibre lectrochimique Ea et Ec. Les lectrons gnrs lanode par loxydation des atomes mtalliques migrent au sein du mtal en direction de la cathode, o ils sont consomms par la rduction. Le courant gnr lanode Ia (en ampres) doit donc tre gal au courant consomm la cathode Ic. En rapportant laire du mtal en contact avec llectrolyte, la densit de courant anodique ja (en ampre.m-2) doit tre gale la densit de courant cathodique jc. Par consquent, la corrosion ncessite quil existe une valeur de potentiel pouvant tre prise par la surface du matriau et laquelle les deux demi-quations lectroniques soient possibles et gales en terme de nombre dlectrons changs. Lors de limmersion dun mtal, il y aura corrosion seulement si Ec>Ea (figure 2). j (A/cm2) j (A/cm2)

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Ec Ea E (V)

Ea Ec E (V)

Ea>Ec : corrosion impossible

Figure 2 : la corrosion nest possible en immersion que si Ec>Ea.

Ec>Ea : ja = -jc = jcorr

La valeur de potentiel o le courant anodique Ia est gal en valeur absolue au courant cathodique Ic est appele potentiel de corrosion libre Ecorr, ou potentiel dabandon, ou potentiel mixte, ou potentiel de circuit ouvert. La valeur absolue gale des courants anodique et cathodique est appele courant de corrosion Icorr (jcorr pour la densit de courant de corrosion). La courbe intensit-potentiel exprimentale est laddition des courants anodique et cathodique algbriques (figure 3).

289

densit de courant j (A/m2)

ja M Mn+ + n e-

jcorr -jcorr Red Oxz+ + z ejc

Ecorr

courbe relle

E (V)
ja = |jc| = jcorr

Figure 3 : dfinition du potentiel de corrosion libre Ecorr et de la densit de courant de corrosion jcorr

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2.1

Cintique de la corrosion aqueuse

La thermodynamique permet de savoir si la corrosion est possible ou non. En revanche, elle ne donne pas dinformations sur la vitesse de dissolution du mtal. La vitesse dune raction lectrochimique dpend de la facilit du transfert dlectrons linterface matriau/lectrolyte, ainsi que de lapport en espce oxydante au niveau de cette interface. Le processus de corrosion est contrl par ltape cintiquement limitante, cest--dire la raction la plus lente. La corrosion peut ainsi tre soit contrle par le transfert de charge, soit par le transport de matire. 2.1.1 Contrle par le transfert de charge La concentration [Oxz+] linterface est suppose constante. La consommation de lespce oxydante la cathode nengendre pas de variation significative de la concentration interfaciale. Lagitation du milieu, affectant uniquement la diffusion de Oxz+ dans la solution, na alors pas dinfluence sur la cintique globale de la raction. La courbe intensit-potentiel a lallure de la figure 3. Le courant global est alors exprim par la relation de Butler-Volmer (3), valable lorsque la diffusion nest pas limitante :
I = I corr (exp( 2,3 ( E E corr ) 2,3 ( E corr E ) ) exp( )) ba bc (3)

ba et bc sont appels coefficients de Tafel anodique et cathodique. Ils sont calculs partir de la mesure exprimentale de la pente de log(I) = f(E) aux fortes polarisations anodique et cathodique. A partir de cette quation, il est possible de calculer le courant de corrosion par la mthode dite de Tafel. La mthode des droites de Tafel est base sur lextrapolation de la courbe intensit-potentiel. A des valeurs de potentiel suffisamment loignes du potentiel de

290

corrosion libre Ecorr, la courbe I-E est superpose aux courbes thoriques anodique (potentiels suprieurs Ecorr) et cathodique (potentiels infrieurs Ecorr). Daprs lquation de Butler-Volmer, en coordonnes semi-logarithmiques, lasymptote la courbe aux potentiels trs anodiques et lasymptote la courbe aux potentiels trs cathodiques se coupent en le point de coordonnes (Ecorr ; log Icorr). Le trac de ces asymptotes, appeles droites de Tafel, permet de dterminer le courant de corrosion Icorr (figure 4).
log I (A/cm2) droite de Tafel cathodique -1/(2,3.c)

droite de Tafel anodique 1/(2,3.a)

log Icorr

Courbes exprimentales

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Ecorr

E (V)

Figure 4 : dtermination du courant de corrosion Icorr par la mthode des droites de Tafel

Les potentiels imposs au mtal doivent tre importants afin dtre suffisamment loign de Ecorr. De tels potentiels peuvent modifier ltat de surface du matriau et donc affecter la valeur du courant de corrosion. De plus, il faut avoir des conditions simples pour ne pas avoir plusieurs ractions en mme temps. Ce sont les limites de la mthode des droites de Tafel.

2.1.2 Contrle par le transport de matire

La limitation par la diffusion de lespce oxydante en solution est trouve frquemment en milieu ar. En conditions arobies, lespce oxydante rduite la cathode est gnralement le dioxygne dissous. La consommation de O2 peut tre tellement rapide que lapport de matire par diffusion depuis le cur de llectrolyte ne compense pas totalement la perte de quantit de matire. La concentration en O2 linterface diminue. Le courant est alors limit par la diffusion. Un plateau de courant, souvent appel palier de diffusion, apparat sur la courbe intensit-potentiel (figure 5). La valeur du courant de corrosion est en gnral dtermine par la valeur du courant sur le palier de diffusion. Elle est proportionnelle la concentration en oxygne dissous : nF .[O2 ].D(O2 ) I corr = I diffusion = (4)

n est le nombre dlectrons mis en jeu dans la demi-quation lectronique de dissolution du mtal (1). F est la constante de Faraday, gale 96465 C, la charge dune mole dlectrons. D(O2) est le coefficient de diffusion de O2. est lpaisseur de la couche de diffusion.

291

densit de courant j (A/m2) ja M Mn+ + n ejcorr Ecorr -jcorr Red Oxz+ + z eE (V)

Figure 5 : courbe intensit-potentiel dune lectrode dans le cas dun contrle cintique par le transport de matire de lespce oxydante en solution (O2 en milieu ar)

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2.2

Les diffrentes formes de corrosion

2.2.1 Corrosion gnralise ou uniforme

La corrosion uniforme est loxydation simultane et la mme vitesse des atomes constitutifs de la surface du matriau. Les ions forms passent en solution et peuvent ensuite ventuellement prcipiter pour donner des produits de corrosion. Lpaisseur de lchantillon diminue de faon homogne sur toute la surface. Les sites o ont lieu les oxydations des atomes mtalliques sont appels anodes. Les sites o ont lieu les rductions des espces oxydantes prsentes dans llectrolyte sont appels cathode. Lorsque ces deux types de sites sont trs proches les uns des autres et rpartis alatoirement au cours du temps sur la surface mtallique, alors celle-ci se dissout globalement la mme vitesse. La corrosion est dite gnralise. Dans ces conditions, la vitesse de corrosion Vcorr (gnralement exprime en unit de masse de mtal dissoute par unit de temps, ou en unit de longueur - correspondant lpaisseur dissoute - par unit de temps) peut tre estime par gravimtrie (perte de masse de lchantillon) ou par la mthode des droites de Tafel, en utilisant la loi de Faraday, qui relie la vitesse de corrosion au courant de corrosion :
Vcorr = I corr . t.M n.F.

(5)

o M est la masse molaire de lacier, la masse volumique du mtal et n le nombre dlectrons produits dans la demi-quation lectronique anodique de dissolution du mtal (1).

2.2.2 Corrosion localise

A linverse de la corrosion gnralise, lemplacement des sites anodiques et cathodiques ne varie pas au cours du temps. Si laire des sites anodiques, o a lieu la dissolution du mtal, est beaucoup plus faible que laire des sites cathodiques, la densit de courant de dissolution peut atteindre des valeurs trs leves, et le mtal se dgrade localement trs grande vitesse. Les

292

matriaux passifs, tels que les aciers inoxydables, sont gnralement dgrads par corrosion localise. Plusieurs formes de corrosion localise peuvent tre observes ; elles rsultent la plupart du temps dune htrognit, comme par exemple : La corrosion par aration diffrentielle, due un gradient de concentration en oxygne dissous ; La corrosion intergranulaire, sattaquant aux joints de grains (zones dsordonnes sparant des grains dorientations cristallographies diffrentes) ; Les corrosions sous contrainte, par rosion et par cavitation sont dues des contraintes mcaniques locales. Seules les corrosions par piqres et par effet de crevasse, observables au cours de ce travail, seront dcrites plus particulirement. 2.2.2.1 Corrosion par piqres La corrosion par piqres est capable daltrer les mtaux passifs. Elle se produit principalement dans les milieux contenant des ions chlorures Cl- (plus gnralement des ions halognures), espces de petite taille et trs mobiles en raison de leur forte lectrongativit. Une rupture locale du film passif apparat au niveau dhtrognits de surface du matriau (par exemple sur les inclusions non-mtalliques, type MnS, dans les aciers inoxydables) [74, 270]. Si cette rupture nest pas rpare , une petite cavit appele piqre se forme et peut se propager trs en profondeur (figure 6). En fonction du matriau et du milieu considrs, les piqres peuvent prendre diffrentes morphologies, avoir diffrentes dimensions (de quelques m quelques mm) La formation de piqres se fait en deux tapes : la premire, dite de nuclation ou damorage, correspond la rupture du film passif ; la deuxime, dite de propagation, consiste en la croissance des piqres, dans quelque direction que ce soit. Trois grands types de mcanismes ont t dvelopps pour rendre compte du phnomne de nuclation des piqres : [81, 189] Mcanisme de pntration : avant la nuclation, les anions agressifs (type Cl-) pntrent dans la couche passive, diffusent travers les oxydes surfaciques et parviennent jusquau mtal, dont ils provoquent la dissolution. Le franchissement de linterface lectrolyte/film passif par les anions se fait sous linfluence dun champ lectrique. La nuclation des piqres napparat que lorsque les anions ont pntr jusquau mtal. Ce mcanisme se fait sans rupture physique du film passif [161, 272, 273]. Toutefois, les techniques danalyse de surface ont montr que les ions Cl- ne sont prsents dans le film passif que dans la couche externe, ce qui semble infirmer le mcanisme de pntration des anions agressifs [189]. Mcanisme de rupture mcanique du film passif : le film en contact avec un lectrolyte agressif subit des contraintes mcaniques et se dforme (par formation de porosits, entre autres) jusqu tre localement dtruit. Les anions agressifs de llectrolyte sont alors en contact direct avec le mtal lintrieur de la cavit [274276]. Mcanisme dadsorption : les anions agressifs sadsorbent la surface du film passif et forment des complexes avec les cations mtalliques, ce qui a pour consquence daugmenter la dissolution de la couche doxydes. Lpaisseur du film passif diminue localement jusqu disparatre totalement. Les anions sont alors en contact direct avec le mtal. Dans ce modle, l agressivit dun anion dpend de sa capacit

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complexer les cations mtalliques [269, 277-279]. Cependant, pour de nombreux matriaux, la nuclation des piqres se fait au niveau de linterface mtal/couche doxydes, sans dissolution du film passif au-dessus des piqres, ce qui tend contredire le mcanisme damincissement du film [189]. A lintrieur de la piqre, qui est une zone confine, lhydrolyse des produits de corrosion conduit une acidification du milieu et une augmentation de la concentration en Cl-. Ces conditions favorisent la dissolution du mtal. Le reste de la surface constitue la cathode. Le ratio surface cathodique/surface anodique est trs lev, par consquent la densit de courant anodique peut atteindre des valeurs trs fortes, entranant une dissolution rapide du mtal.

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Figure 6 : principe de la corrosion par piqres [143]

Les premires piqres apparaissent lorsque le potentiel du mtal dpasse une valeur critique appele potentiel de piqre Epiq (ou potentiel dapparition de piqres, ou potentiel de germination de piqres, ou par traduction littrale de langlais potentiel de piqration ). La figure 7 reprsente un balayage en potentiel aller-retour depuis une valeur de Ecorr dans le domaine passif jusqu des valeurs assez leves. Le potentiel de piqre Epiq et le potentiel de repassivation Erep (ou potentiel de protection Epr) sont mesurs exprimentalement grce au trac de cette courbe. Le potentiel de repassivation est le potentiel en-dessous duquel aucune piqre ne peut se dvelopper. Trois priodes peuvent tre distingues au cours du balayage potentiodynamique : Lorsque le potentiel est infrieur Erep, le mtal est dans le domaine passif, le courant de dissolution est trs faible. Lorsque le potentiel devient suprieur Erep, le courant augmente relativement doucement et prsente des instabilits, qui correspondent la formation et la repassivation de piqres dites mtastables. Lorsque le potentiel est suprieur Epiq, le courant augmente brutalement, des piqres stables se dveloppent la surface du matriau. Lorsque le sens du balayage est invers, les piqres se repassivent. Le courant au retour est plus lev qu laller en raison de la repassivation plus difficile des piqres. Cet hystrsis est caractristique de la corrosion par piqres. Le potentiel de repassivation Erep est mesur lors du retour du balayage en potentiel. En fonction de la cintique de la raction cathodique, le mtal se trouvera soit dans le domaine passif, soit dans le domaine de transpassivit o le mtal sera sujet la corrosion par piqres (figure 7).

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Figure 7 : balayage potentiodynamique sur un mtal passif en milieu chlorur [143]

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Epiq diminue lorsque la concentration en chlorures et/ou la temprature augmente. La corrosion par piqres est une forme de corrosion particulirement pernicieuse, car une perforation peut tre trs profonde et trs dangereuse pour la structure mtallique sans pour autant prsenter lors dune simple observation une surface dgrade trs importante. 2.2.2.2 Corrosion caverneuse ou corrosion par effet de crevasse Cette forme de corrosion se dveloppe dans les zones confines o la migration des espces de lintrieur vers lextrieur et de lextrieur vers lintrieur est trs limite. Le faible flux convectif ne permet pas de renouveler les espces contenues dans llectrolyte prsent dans la cavit. La zone confine peut dans un premier temps prsenter des sites cathodiques : O2 est alors rduit dans la cavit. Une fois que tout loxygne a t consomm, la surface du mtal dans la cavit devient totalement anodique, alors que le restant de la surface mtallique, qui a un bon accs loxygne dissous, devient la cathode. Le comportement devient typique dune cellule daration diffrentielle. Les cations produits par loxydation du mtal saccumulent dans la cavit et sont hydrolyss selon lquation (6), ce qui a pour consquent dabaisser considrablement le pH lintrieur de la zone confine.
M n + + n H 2 O M (OH ) n + n H +

(6)

La neutralit lectrique de llectrolyte compris dans la cavit est assure par migration des anions Cl- dans la zone confine. Dans cette zone, il y a appauvrissement en O2, diminution du pH et augmentation de la concentration en chlorures. Toutes les conditions sont runies pour dstabiliser le film passif et engendrer la corrosion du mtal sous-jacent (figure 8).

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Figure 8 : principe de la corrosion par effet de crevasse [143]

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Ainsi, la corrosion caverneuse se produit selon un mcanisme trois tapes : incubation : H3O+, Mn+ et Cl- saccumulent dans la caverne, tandis que O2 y est consomm. rupture de la passivit dans la caverne, en raison du pH trs acide. propagation rapide de lattaque.

296

Annexe n2 : les aciers inoxydables

Description des aciers inoxydables

Les aciers inoxydables sont des alliages base de fer et de chrome, contenant au moins 12 % de chrome. De nombreux autres lments peuvent tre prsents dans lalliage, tels que le carbone, le nickel, lazote, le molybdne, le cuivre, le silicium Ces lments dalliage sont soit en insertion dans le rseau cristallin (C,N), soit en substitution (lments mtalliques). Entre la temprature ambiante et sa temprature de fusion, le fer prsente trois varits cristallines (voir diagramme dquilibre Fe-C, figure 1-a) : De la temprature ambiante 906C : ferrite ou fer , de structure cristalline cubique centre ; De 906C 1400C : austnite ou fer , de structure cristalline cubique faces centres ; De 1400C 1538C : fer , de structure cristalline cubique centre. Les lments dalliage peuvent favoriser la phase , ils sont alors dits alphagnes, ou la phase , ils sont alors dits gammagnes. En particulier, la teneur en chrome modifie le domaine dexistence de la phase et est par consquent dterminante pour la structure de lacier inoxydable (voir diagramme de phases du systme Fe-Cr, figure 1-b). A faible teneur en chrome (< 11 %), selon le traitement thermique subi, lacier peut se trouver soit dans la boucle et tre austnitique, soit tre dans le domaine de stabilit de la phase et tre ferritique. A une teneur en chrome comprise entre 11 et 13 %, les phases et coexistent. Enfin, pour des teneurs en chrome suprieures 13 %, lacier inoxydable ne peut tre que ferritique. En fonction de leur structure cristalline, les aciers inoxydables sont classifis en quatre grandes catgories : Les aciers ferritiques contiennent du fer ou et ont une structure cubique centre. Leur composition est toute temprature lextrieur de la boucle . Lorsque la teneur en chrome est particulirement importante, lacier est qualifi de superferritique. Les aciers ferritiques offrent une trs bonne rsistance la corrosion sous contrainte. Les aciers austnitiques contiennent du fer et ont une structure cubique faces centres. La structure austnitique est obtenue grce au nickel, qui est un lment gammagne. Ils sont de loin les plus nombreux, en raison de leur rsistance la corrosion leve et de leurs bonnes caractristiques mcaniques, et sont facilement soudables. Les aciers austno-ferritiques (ou duplex) sont faits dagrgats de grains ferritiques et de grains austnitiques. Ils ont des proprits intermdiaires entre les ferritiques et les austnitiques. Leur aptitude la passivation est remarquable, en raison de leur teneur en chrome et en molybdne leve. Ils sont gnralement trs rsistants la corrosion intergranulaire. Les aciers martensitiques sont le rsultat dune trempe dune phase austnitique . Ils ne sont donc pas visibles dans le diagramme dquilibre Fe-C, qui nindiquent que les phases lquilibre, obtenues des vitesses de refroidissement faibles. Ils ont une structure ttragonale et des proprits de duret et de rsistance mcanique leves. Ils sont en revanche assez sensibles la corrosion sous contrainte et la fragilisation par lhydrogne. Le molybdne est un lment dalliage primordial pour augmenter la rsistance la corrosion en eau de mer naturelle.

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a- Diagramme dquilibre Fe-C mtastable

b- Diagramme de phases du systme Fe-Cr

b- Fe-Cr [204, 280]

Figure 1 : diagrammes de phases des systmes a- Fe-C

Utilisation des aciers inoxydables

Ces matriaux ont t dvelopps industriellement partir de 1920. Ils sont utiliss dans quasiment tous les domaines, depuis le biomdical jusqu lindustrie automobile en passant par le BTP, lindustrie agro-alimentaire Les principaux secteurs dutilisation, ainsi que les types daciers inoxydables employs, sont rsums dans le tableau 1, qui na pas bien entendu pour vocation dtre exhaustif. Application Industrie chimique Industrie alimentaire Btiment Production dnergie Protection de lenvironnement Industrie du transport Biomdical Nuances daciers inoxydables Aciers austnitiques et duplex Aciers austnitiques et martensitiques pour les outils coupants Aciers ferritiques lintrieur dune construction, aciers austnitiques lextrieur Aciers ferritiques (production de vapeur, pompes,), martensitiques (armatures, ressorts, lments de turbines), austnitiques (cuves, gainages, tubes) Aciers austnitiques (chemines industrielles et rejets toxiques) Aciers ferritiques (pices intrieures, tubulures dchappement), austnitiques (conteneurs) et martensitiques (structures de transport bandes) Aciers austnitiques

Tableau 1 : domaines dutilisation des aciers inoxydables [281]

298

Annexe n3 : les semi-conducteurs

Dans un solide, les atomes sont organiss en un rseau tridimensionnel, caractris par une distance inter atomique qui correspond lquilibre du solide cristallin [282]. Cette distance inter atomique tant trs faible (de lordre de quelques ), les lectrons dun atome interagissent avec ceux des atomes voisins, chaque lectron donnant ainsi naissance autant de niveaux dnergie distincts que datomes voisins. Compte tenu du trs grand nombre datomes ncessaires pour crer un cristal, la sparation entre deux niveaux dnergie successifs devient extrmement faible, les niveaux dnergie deviennent des bandes dnergie. Les niveaux nergtiques accessibles aux lectrons dun atome tant discrets, le modle de bandes dcrit le solide cristallin comme une alternance dintervalles dnergie remplis de niveaux nergtiques (bandes permises) spars par des intervalles dnergie vides de tout niveau lectronique (bandes interdites).Au zro absolu, les lectrons remplissent les bandes permises partir des nergies les plus basses. tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Dans un conducteur mtallique, la dernire bande permise occupe ne l'est que partiellement, de sorte que les lectrons peuvent facilement se dplacer dans les niveaux vides plus levs et circuler dans le solide. Dans un semi-conducteur ou un isolant, la dernire bande permise occupe est pleine. Elle est appel bande de valence BV, son niveau nergtique le plus lev est appel Ev. La bande permise d'nergie immdiatement suprieure est appele bande de conduction BC, son niveau nergtique le plus bas est appel Ec. Pour qu'il y ait conduction lectrique, il faut qu'un lectron de la bande de valence puisse venir occuper un tat vide dans la bande de conduction, c'est--dire absorber une nergie thermique ou lumineuse au moins gale la largeur de bande interdite (appele gap), Eg=Ec-Ev. Plus la valeur de Eg sera leve, plus la probabilit qu'un lectron occupe un tat nergtique dans la bande de conduction sera faible et plus la conductivit lectronique sera faible. Lorsque Eg est trs infrieur lnergie thermique kBT (kB : constante de Boltzmann), ou lorsquil y a recouvrement de la BV et de la BC, le matriau est considr comme conducteur lectrique. Lorsque Eg > 6 eV, lnergie thermique kT est trop faible temprature ambiante pour gnrer suffisamment de porteurs de charge ; le matriau est un isolant lectrique. Les matriaux ayant un gap intermdiaire ne sont pas conducteurs au zro absolu, mais lorsque la temprature augmente le nombre de porteurs de charges devient suffisant pour assurer la conduction lectrique. Ces matriaux sont dits semi-conducteurs. Le schma de la figure 1 reprsente les bandes de valence et de conduction pour les trois types de matriaux. La classification du matriau est fonction de la valeur de Eg, et peut tre diffrente selon les domaines de recherche. La valeur de 6 eV mentionne ci-dessus est la valeur classique considre en photolectrochimie, mais elle peut diffrer dans dautres domaines dapplication des semi-conducteurs.

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Energie des lectrons

Eg > 6 eV Eg > 6 eV

Conducteur (mtal) tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Isolant

Semi-conducteur

Figure 1 : schma des bandes lectroniques pour les trois types de matriaux (BV en gris et BC en blanc)

Lorsque le semi-conducteur est un cristal parfait, il est dit semi-conducteur intrinsque. Pour chaque lectron de valence passant dans la bande de conduction, il se cre un trou dlectron dans la bande de valence. Les concentrations n en lectrons et p en trous dlectrons sont alors gales. Le potentiel lectrochimique des lectrons dans le matriau appel niveau de Fermi, dnergie Ef se trouve au milieu de la bande interdite. La conductivit lectronique dun semiconducteur intrinsque est alors trs faible. La conductivit dun semi-conducteur peut tre augmente, de manire dlibre ou non, de deux faons : soit par introduction dlments de valence diffrente (dopage), soit par cration dun cart la stoechiomtrie. Le matriau est alors appel semi-conducteur extrinsque. Dans les deux cas, un semi-conducteur peut tre soit de type n, dans ce cas les porteurs de charge majoritaires sont les lectrons chargs ngativement, soit de type p, auquel cas les porteurs de charge majoritaires sont les lacunes de la BV ( trous ) charges positivement. Un semi-conducteur de type n se caractrise par la prsence dtats lectroniques donneurs dans la bande interdite, dnergie Ed proche de lnergie Ec. Un semi-conducteur de type p se caractrise par la prsence dtats lectroniques accepteurs dans la bande interdite dnergie Ea proche de Ev. La courbure des bandes de conduction ou de valence est modifie par la prsence de dopants au sein du matriau. Le potentiel de bandes plates Ufb est dfini comme la tension appliquer pour redresser la BC ou la BV.

300

Annexe n4 : Bactries et levures

Les bactries

Les bactries sont des organismes vivants unicellulaires procaryotes, caractriss par labsence dun noyau et dorganites cellulaires (mitochondries, chloroplastes). Leur taille caractristique est le micromtre, la plupart dentre elles ayant des dimensions comprises entre 0,5 et 5 m. Leur matriel gntique est constitu dun unique chromosome circulaire dune longueur denviron 1 mm et de petites molcules dADN circulaires appeles plasmides. Les bactries sont entoures dune paroi externe, spare de leur membrane cytoplasmique par un espace appel espace priplasmique. Les bactries peuvent vivre dans pratiquement toutes les niches environnementales de la biosphre. Elles sont capables dutiliser une trs large gamme de sources de carbone et dnergie. Leur approvisionnement en carbone et en nergie permet de sparer les bactries en deux groupes : Les autotrophes ont la capacit de crotre uniquement partir de matire minrale, leur source de carbone tant le CO2. Leur source dnergie peut tre la lumire solaire (photosynthse) ou loxydation de composs minraux (chimiosynthse). Les htrotrophes utilisent la matire organique comme source de carbone. La source dnergie peut tre l aussi soit de nature photosynthtique, soit de nature chimiosynthtique. Le rapport dune espce bactrienne loxygne permet de sparer les bactries en quatre groupes : Les bactries arobies strictes ont besoin doxygne pour vivre et se dvelopper. Les bactries aro-anarobies facultatives peuvent se passer doxygne mme si la prsence de O2 est favorable leur dveloppement. Les bactries micro-arophiles se dveloppent dans des milieux ayant une teneur en dioxygne dissous trs faible. Les bactries anarobies strictes ne survivent pas en prsence de O2. Certaines bactries possdent des structures extracellulaires comme les flagelles ou les pili (appels aussi cils ou fimbriae). Les flagelles sont des structures protiniques qui se dveloppent partir de la membrane cytoplasmique et qui permettent aux bactries de se mouvoir. Les bactries htrotrophes peuvent utiliser leurs flagelles pour se diriger vers des zones riches en substances organiques (nutriments) grce au phnomne appel chimiotactisme. Les pili sont des structures protiques utiles pour l'adhsion des bactries aux interfaces et aux surfaces. Ce type de structure peut tre impliqu dans les processus de bioadhsion. Certaines bactries produisent une couche externe dense et rigide, qui apparat comme une gaine autour de la bactrie. Elles sont dites engaines. Certaines souches bactriennes impliques dans le phnomne de corrosion microbienne possdent cette proprit. La morphologie des bactries est assez varie. La figure 1 dcrit les diffrentes formes existantes.

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Figure 1 : diversit des formes au sein des bactries

Les levures

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Les levures sont des champignons microscopiques unicellulaires capables de fermenter des matires organiques. Ce sont des microorganismes eucaryotes, qui se multiplient soit par bourgeonnement, soit par scissiparit.

Isolats microbiens prlevs sur support mtallique en eau de rivire naturelle La souche note 1 est un bacille bactrien appel Brevundimonas diminuta, Gram-, catalase -, oxydase +. Ce bacille a t rcemment reclass dans le genre Pseudomonas et porte aussi la dnomination Pseudomonas diminuta. Cette bactrie de petite taille est utilise dans lindustrie pour tester lefficacit des filtres antibactriens (diamtre de pore 0,2 m) permettant de striliser une solution par filtration [283]. La souche note 2 est un bacille bactrien appel Photobacterium logei, Gram-, catalase-, oxydase +, mobilit +. Ce bacille a t rcemment reclass dans le genre Vibrio et porte aussi la dnomination Vibrio logei. Cette bactrie bioluminescente est capable de coloniser les organismes lumineux (certains calmars par exemple) et de dvelopper une symbiose avec son hte eucaryote [284]. Elle peut jouer un rle dans la communication : elle permet alors dattirer les proies et de repousser certains prdateurs [285]. Elle est souvent trouve dans les eaux naturelles, en particulier en eau de mer [286, 287]. La luminescence de cette bactrie est influence par la temprature de culture ; elle est en particulier rduite lorsque la temprature est suprieure 20C [288]. La souche note 3 est une levure appele Sporidiobolus johnsonii. Le genre Sporidiobolus fait partie de la classe des Basiodiomyctes. Les colonies sur milieu solide sont colores (de roses rouges) par la prsence de pigments carotnodes. Cette levure est arobie stricte et neffectue pas de fermentation. Elle est parfois utilise pour sa synthse de lactones [289].

302

Annexe n5 : les enzymes Une enzyme est une protine ayant une fonction de catalyseur : elle est capable dacclrer la vitesse dune raction chimique et se retrouve inchange la fin de la raction. Elle abaisse lnergie dactivation de la raction. Les enzymes sont des catalyseurs haute spcificit, cest--dire quune enzyme donne ne peut catalyser quune seule raction chimique bien prcise. Une enzyme est une protine, sa structure tridimensionnelle est primordiale pour la fonction quelle remplit. Certaines zones de lenzyme ont des caractristiques chimiques spcifiques et sont capables de se lier un des ractifs de la raction chimique catalyse. Ces zones sont les sites actifs. Le (ou les) ractif(s) qui se fixe(nt) sur un site actif est le substrat de lenzyme.
Substrat Produit
enzyme

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La spcificit dune enzyme pour son substrat est parfois appele systme de reconnaissance cl-serrure . Le site actif et le substrat ont des affinits morphologiques et physicochimiques telles que seule une molcule de substrat pourra sadsorber sur le site actif lui correspondant. Prenons le cas dune raction chimique au cours de laquelle une molcule note A se lie une molcule note B pour former la molcule A-B : A+B A-B, catalyse par lenzyme E. Lenzyme E comporte 2 sites actifs, lun avec une forte affinit pour le substrat A et lautre avec une forte affinit pour le substrat B. Dans un premier temps, les deux molcules A et B sadsorbent sur leur site actif respectif. Ensuite, les deux molcules ragissent ensemble alors quelles sont complexes avec lenzyme : une liaison chimique se cre et forme le produit AB. Enfin, la molcule A-B nouvellement forme se dsorbe de lenzyme. Lenzyme est alors renouvele, la molcule est son tat initial, elle peut recommencer toute lopration de catalyse avec deux autres molcules A et B. Le site actif de certaines enzymes (appeles apoenzymes) ne peut tre fonctionnel que si une molcule bien particulire (appele cofacteur) vient sy fixer. Le cofacteur peut tre un ion mtallique (cuivre, zinc, manganse, fer) ou une petite molcule organique (le cofacteur est alors appel coenzyme), comme par exemple certaines vitamines. Une enzyme est dite dnature lorsque elle est tellement dforme que son site actif ne prsente plus de complmentarit avec le substrat. La modification du site actif la rend inactive, lenzyme ne peut plus remplir sa fonction de catalyseur. La dnaturation peut tre provoque par une lvation de temprature, des variations de pH, une lvation de la force ionique de llectrolyte, certains solvants organiques Les enzymes jouent un rle capital lintrieur des cellules en catalysant les ractions du mtabolisme cellulaire. Elles peuvent aussi tre exportes en dehors de la cellule et se retrouver dans le milieu environnant. Cest le cas des enzymes exocellulaires trouves au sein des biofilms dvelopps en eaux naturelles. Lactivit dune enzyme est gnralement exprime en unit internationale (elle peut aussi tre exprime en katal kat). Une unit denzyme est la quantit denzyme qui catalyse la transformation de 1 mol de substrat par minute.

303

Annexe n6 : microscopie lectronique balayage et micro-analyse X

Principe de la MEB

La Microscopie Electronique Balayage consiste balayer la surface dun chantillon par un faisceau concentr dlectrons ayant gnralement une nergie comprise entre 1 et 40 keV. En raison des interactions lectrons-matire, la surface rmet des particules dont la dtection et lanalyse permettent de caractriser la topographie et la composition chimique de la surface de lchantillon. Lorsque le faisceau dlectrons frappe la surface, les lectrons incidents (aussi appels lectrons primaires) peuvent avoir plusieurs comportements : Llectron primaire peut cder une partie de son nergie un lectron de valence de latome ayant une faible nergie de liaison. Cet lectron est alors ject, et latome sionise. Ces lectrons mis par la surface sont appels lectrons secondaires, ils ont une nergie faible (en gnral proche de 50 eV). Le libre parcours moyen dun lectron dans un solide a pour ordre de grandeur le nm. Les lectrons secondaires sont par consquent mis dans les couches superficielles de la surface, gnralement dans les 10 premiers nanomtres. Le nombre dlectrons mis varie en fonction du relief de la surface, ce qui implique quune cartographie de ces lectrons permet de connatre la topographie de lchantillon. Certains lectrons primaires subissent des chocs lastiques ou quasi-lastiques avec des atomes du solide. Ils ne perdent quune trs faible quantit dnergie et sont rmis dans une direction proche de la direction incidente. Ces lectrons sont appels lectrons rtrodiffuss. Leur nergie est beaucoup plus leve (proche de lnergie des lectrons primaires, donc pouvant atteindre plusieurs dizaines de keV) que lnergie des lectrons secondaires, ce qui permet de sparer les deux types dlectrons. De plus, la forte nergie des lectrons rtrodiffuss leur permet de provenir de couches plus profondes que les lectrons secondaires (environ des 100-200 nm superficiels). Par ailleurs, le nombre dlectrons rtrodiffuss par les atomes lourds (nombre atomique Z lev) est plus important que le nombre dlectrons rtrodiffuss par les atomes lgers (nombre atomique Z faible). Les lectrons primaires peuvent exciter les atomes du solide et provoquer ljection dlectrons de cur. Latome est alors dans un tat excit. Un lectron dune couche suprieure subit une transition lectronique pour venir combler la lacune cre par ljection de llectron de cur. Cette transition lectronique correspond une perte dnergie, qui peut se faire soit par mission dun photon dans le domaine des X (utilis dans la technique danalyse EDS), soit par mission dun lectron (appel lectron Auger). Ce phnomne est expliqu plus en dtail dans la description de la Spectroscopie de Photolectrons (XPS) en annexe n7. Les lectrons secondaires et les lectrons rtrodiffuss sont collects par des dtecteurs dlectrons. Limage en lectrons est alors forme sur lcran de visualisation. Ces images permettent dobserver laspect, la topographie et ventuellement le contraste de phase (rtrodiffuss) de la surface de lchantillon.

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Principe de lanalyse EDS (Energy Dispersive Spectroscopy)

Les photons mis lors de la dsexcitation des atomes par transition lectronique ont une nergie gale la diffrence dnergie entre la couche priphrique do provient llectron comblant la lacune et la couche de cur o se trouve la lacune. Cette nergie de transition lectronique est caractristique de latome metteur. Il peut y avoir plusieurs transitions lectroniques possibles, donc un type datome peut mettre plusieurs types de photons. Les diffrentes transitions sont dsignes par la notation de Siegbahn (tableau 1). Niveau de basse nergie 1s0 2p3/2 2p1/2 3d5/2 tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007 Niveau de haute nergie 2p3/2 2p1/2 3p3/2 3d5/2 3d3/2 5p3/2 Nom de la raie K1 K2 K1 L1 L1 M 1

Tableau 1 : notation de Siegbahn des diffrentes transitions lectroniques

Les photons X mis sont dtects par des cristaux semi-conducteurs, qui transforment le signal en paire lectrons-trous, la suite de quoi le signal est converti en tension. Lanalyse du signal permet de compter le nombre de photons mis par chaque type de transmission lectronique. La reprsentation du nombre de photons en fonction de leur nergie (appele spectre EDS) permet de caractriser la composition chimique lmentaire de la surface de lchantillon.

305

Annexe n7 : spectroscopie de photo-lectrons (XPS)

Principe de la spectroscopie de photo-lectrons

La technique de spectromtrie de photolectrons (en anglais, XPS : X-Ray Photoelectron Spectroscopy) est base sur lutilisation de leffet photolectrique. Elle consiste irradier sous vide un chantillon par un faisceau de photons incident, dans le domaine des rayons X. Les photons pntrent lintrieur du solide, puis interagissent avec les atomes de lchantillon. Une des interactions photons-matire est leffet photolectrique, cest--dire lionisation des atomes par jection dlectrons. Les lectrons mis sont tris en fonction de leur nergie cintique par un dtecteur/analyseur. La mesure de leur nergie cintique permet de calculer leur nergie de liaison. En effet, la conservation de lnergie permet dcrire lquation (4) :

h = E C + E liaison (n, l) E liaison = h E C

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(4)

o h est lnergie du faisceau de photons incident, EC lnergie cintique de llectron mis et Eliaison (n, l) lnergie de liaison de llectron mis, dpendant de lorbitale atomique do il provient et donc des deux premiers nombres quantiques n et l. Eliaison peut aussi tre dfinie comme lnergie dionisation de latome. Cette valeur dnergie est caractristique de latome metteur et de lorbitale atomique de llectron. Sa dtermination permet didentifier les lments et de connatre (entre autres) leur degr doxydation.

Epaisseur analyse

La probabilit dinteraction entre les lectrons et les atomes est suprieure la probabilit dinteraction entre les photons et la matire. Les libres parcours moyens respectifs ont pour ordre de grandeur le nm (lectrons) et le m (photons). Les photons pntrent de quelques m lintrieur du solide, gnrant des photolectrons dans cette paisseur. Seuls les lectrons mis dans les premiers nanomtres quittent la surface sans perdre dnergie : ils sont lorigine des pics observs sur un spectre XPS. En revanche, les lectrons photognrs plus en profondeur perdent de lnergie cintique par choc inlastique lors de leur migration vers la surface ; ils forment le bruit de fond. Il a t montr que 63% du signal photolectrique provient du premier et que 95% du signal provient dune paisseur denviron 3.sin, o est le libre parcours moyen des lectrons (qui dpend de lnergie cintique du photolectron et est gnralement infrieur 5 nm) et leur angle djection par rapport au plan de la surface. Lpaisseur analyse est donc denviron 15 nm au maximum. La technique XPS est donc parfaitement adapte la caractrisation de fines couches doxydes, tels les films passifs des aciers inoxydables. De plus, la mthode dite de langle rsolu , en diminuant langle entre le plan de la surface et le dtecteur jusqu une valeur connue infrieure 90, permet de diminuer lpaisseur analyse et de caractriser lextrme surface de la couche doxydes.

306

Spectre XPS

Un spectre XPS reprsente le nombre de photolectrons mis (en coups par seconde) en fonction de leur nergie de liaison (en eV). Les diffrents pics obtenus sont caractriss par : Leur nergie : cette valeur permet didentifier latome metteur et de remonter son tat doxydation. Elle permet didentifier les espces chimiques et de procder dans certains cas une sparation entre les oxydes et les hydroxydes de mme valence. Leur largeur mi-hauteur : elle dpend de la largeur naturelle de la raie excitatrice, de la rsolution du spectromtre et de ltat chimique de llment considr. Leur intensit : cette valeur dpend du flux de photons X, de facteurs exprimentaux, mais aussi du facteur de sensibilit et de la concentration de llment tudi. Elle permet de faire une quantification de manire relative (afin dliminer les paramtres exprimentaux) des diffrents lments prsents. La premire tape dune analyse XPS est dacqurir le spectre gnral de la surface, de 0 1300 eV, avec un pas en nergie assez important (1 eV) et une rsolution nergtique faible. Ce spectre permet de connatre les diffrents lments prsents. Ensuite, le spectre est acquis autour du pic le plus intense pour chaque lment, avec un pas en nergie plus faible (0,1 eV) et dans des conditions dacquisition favorisant la rsolution au dtriment de lintensit. Il faut ensuite procder au traitement de chaque pic individuel relatif un lment : soustraction de la ligne de base, recomposition du spectre et/ou calcul de laire du pic. La plupart des pics photolectriques sont symtriques, toutefois, dans le cas des mtaux purs, ils peuvent tre trs asymtriques, car lorsque les photolectrons migrent vers la surface, ils peuvent donner une partie de leur nergie aux lectrons de la bande de valence qui passent dans la bande de conduction. Diffrents types de pics satellites se superposent aux pics photolectriques proprement dits. En particulier, des lectrons Auger peuvent tre mis et former des pics sur un spectre XPS. En effet, aprs lmission dun lectron par effet photolectrique, une couche infrieure se retrouve avec une lacune lectronique. Une transition lectronique peut avoir lieu entre une couche suprieure et cette couche incomplte : un lectron dune couche suprieure occupe alors lorbitale interne vacante. Un lectron de la couche suprieure concerne est ensuite mis pour dissiper lexcs dnergie engendr par la transition lectronique (figure 1). Ce deuxime lectron est un lectron Auger.

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2p 2s h 1s
a- Photolectron XPS

Electron Auger Photolectron XPS

2p 2s

1s
b- Electron Auger

Figure 1 : principe de lmission dun photolectron et dun lectron Auger

Les lectrons Auger forment des groupements de pics complexes. Les 4 principales sries Auger sont KLL, LMM, MNN et NOO, la premire lettre dsignant la couche prsentant la 307

lacune initiale et les deux dernires lettres la couche prsentant la lacune finale. Lnergie dun pic Auger dpend uniquement de lorbitale de dpart et de lorbitale darrive de la transition lectronique. Les pics Auger peuvent tre spars des pics photolectriques en modifiant lnergie h des photons incidents : lnergie cintique des photolectrons variera alors que les pics Auger resteront inchangs. Dautres types de pics parasites peuvent tre mentionns : pics satellites X, correspondant dautres raies de la source X, pics shake-up , dus une perte dnergie par transition lectronique des photolectrons avant leur mission

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Annexe n8 : photolectrochimie

Linterface semi-conducteur/lectrolyte lobscurit

Lors de la mise en contact dun semi-conducteur (SC) avec un lectrolyte, un transfert de charge sopre et aboutit lgalisation des niveaux de Fermi des deux phases. Cette mise lquilibre se traduit gnralement par une modification des profils nergtiques dans chaque phase et par un appauvrissement ou un enrichissement de la concentration en porteurs majoritaires dans le semi-conducteur au voisinage de sa surface, dans la zone de charge despace. Cette dernire peut stendre sur une profondeur W, de lordre de quelques nanomtres quelques centaines de nanomtres. La charge lectrique contenue dans cette rgion, la charge despace, note Qsc est gale mais de signe oppos la charge dveloppe dans llectrolyte au voisinage de la surface et localise essentiellement dans la couche de Helmholtz (quelques angstrms dpaisseur). Le sens du transfert de charges entre le semi-conducteur et l'lectrolyte dpend de la position relative des niveaux de Fermi des deux phases, EF (SC) et EF,el (lectrolyte), avant leur mise en contact. Si les niveaux de Fermi sont identiques, il n'y a pas de transfert de charges, pas d'excs de charge dans la rgion de charge d'espace, donc pas de gradient de potentiel dans le semi-conducteur, ce dernier est dit en situation de bande plate; le potentiel de l'lectrode semiconductrice, par rapport une rfrence de potentiel dans l'lectrolyte, est alors appel potentiel de bande plate, not Ufb. Dans le cas contraire, des porteurs majoritaires sont transfrs du semi-conducteur vers l'lectrolyte si EF > EF,el (et inversement), crant un appauvrissement (inversement un enrichissement) en porteurs majoritaires dans la zone de charge d'espace, et, en consquence, un gradient de potentiel dans cette rgion se traduisant par la courbure des bandes du semiconducteur. Les situations dappauvrissement, denrichissement et de bande plate peuvent peuvent par consquent tre obtenues par lapplication dun potentiel adquat llectrode semiconductrice. La situation intressante en photolectrochimie est le cas o le semi-conducteur est en situation d'appauvrissement en porteurs majoritaires. En effet, en situation denrichissement, le courant dobscurit est quasiment gal au courant stationnaire, et la faible contribution du photocourant est difficile dtecter. En revanche, en situation dappauvrissement, le courant dobscurit est faible et il est alors plus simple exprimentalement de dissocier les deux composantes du courant stationnaire : le courant dobscurit et le photocourant. La figure 1 prsente les diffrentes situations possibles pour des semi-conducteurs de type n et p.

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Bandes plates V = Ufb Qsc = 0

Appauvrissement V > Ufb Qsc > 0

Enrichissement V < Ufb Qsc < 0

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Bandes plates V = Ufb Qsc = 0

Enrichissement V < Ufb Qsc < 0

Appauvrissement V > Ufb Qsc > 0

Figure 1 : interface semi-conducteur/lectrolyte lobscurit pour un semi-conducteur de type n et p (daprs [223])

2

Linterface semi-conducteur/lectrolyte sous lumire Description qualitative

Lorsquun semi-conducteur est clair par des photons dnergie suprieure au gap (h > Eg), il y a passage dlectrons de la bande de valence vers la bande de conduction. Ces lectrons laissent ainsi des trous dans la bande de valence. On peut alors parler de cration de paires lectron-trou : h e-BC + h+BV La tendance naturelle sera la disparition de cette paire par un processus de recombinaison. Toutefois, sous laction du champ lectrique cr par le gradient de potentiel dans la zone de charge despace, les lectrons et les trous photognrs se dplaceront en sens inverse dans la bande de conduction et la bande de valence. Cette sparation sera dautant plus rapide et la dure avant la recombinaison dautant plus grande que le gradient de potentiel dans la zone de charge despace sera important. Considrons le cas dun circuit ferm o llectrode semi-conductrice est contrle en potentiel par rapport une rfrence dans llectrolyte. En prsence dun couple redox convenable au sein de llectrolyte, il est possible de polariser llectrode de manire la placer en situation dappauvrissement. Le champ lectrique rgnant au sein de la zone de charge despace permet alors de sparer les paires lectron-trou photognres. Les porteurs majoritaires sont drains vers le sein de llectrode (et donc vers le circuit extrieur), alors que les porteurs minoritaires migrent vers la surface de llectrode o ils pourront tre transfrs llectrolyte via des niveaux rdox accessibles. Les porteurs majoritaires gnrent un photocourant, not Iph, anodique pour un semi-conducteur type n ou cathodique pour un semiconducteur type p. La figure 2 prsente un rsum de ces deux situations.

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a- SC type n, interface lquilibre sous obscurit

b- SC type n, interface sous illumination, V>Ufb, Iph > 0

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c- SC type p, interface lquilibre sous obscurit d- SC type p, interface sous illumination, V<Ufb, Iph < 0 Figure 2 : reprsentation schmatique de la gnration dun photocourant pour des interfaces lectrolyte/SC type n et p (daprs [223])

En principe, le photocourant apparat ds que V > Ufb (respectivement V < Ufb) pour un semiconducteur de type n (respectivement pour un semi-conducteur de type p). Mais, en pratique, le photocourant ne devient mesurable qu un potentiel plus anodique (respectivement cathodique) pour un semi-conducteur de type n (respectivement pour un semi-conducteur de type p). Expression du photocourant

L'expression analytique du photocourant pour une interface semi-conducteur/lectrolyte idale, c'est--dire en ne tenant pas compte d'ventuels phnomnes de recombinaison (dans la rgion de charge d'espace ou en surface) et de glissements de bandes, peut tre linarise lorsque la profondeur de pntration 1 est grande devant WSC et L. Elle scrit alors [290, 291] :
I ph = e.J o . .WSC = e.J o . . 2 o . V Uf b Ne

o e est la charge lmentaire de llectron, Jo le flux de photons incidents, le coefficient dabsorption de la lumire pour la longueur donde , L la longueur de diffusion des porteurs

311

lectroniques minoritaires, WSC =

2 o . V U fb , la profondeur de la rgion de charge Ne

despace, et N la concentration en porteurs majoritaires. Influence du potentiel appliqu

Si on trace des photocaractristiques en potentiel Iph(V), en lumire monochromatique, est 2 ( ) constant, et la courbe I 2 ph = f V est une droite dont lextrapolation I ph =0 fournit la valeur
de Ufb. Cependant, compte tenu des hypothses faites pour obtenir lquation, la linarit de ( ) nest que trs rarement observe exprimentalement, et la valeur du potentiel I2 ph V dapparition du photocourant est gnralement prise comme valeur de Ufb.

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Influence de lnergie du faisceau monochromatique incident

Le coefficient dabsorption dun matriau cristallin varie avec lnergie du photon incident selon lquation 3 :

h o n = 0,5 dans le cas de transitions directes permises de la bande de valence la bande de conduction, n = 2 dans le cas de transitions indirectes permises de la bande de valence la bande de conduction. Si on trace des photocaractristiques en nergie Iph=f(h), un potentiel fix, V, on peut tirer de lquation :

(h E ) = A.
g

(I
( )
1 n

ph

. h

1 n

= cons tan te. h E g

. h

Il est alors possible, si le graphe extrapolation I ph . h

(I

ph

1 n

= f ( h) obtenu est linaire dobtenir par

=0 la valeur de Eg, et de dterminer la nature de la transition

observe, directe ou indirecte, caractristique du matriau.

312

Annexe n9 : les diffrents milieux de culture utiliss

Dans cette annexe sont indiqus les protocoles de prparation des diffrents milieux de culture utiliss, tels quils sont prpars au laboratoire Corrodys de Cherbourg. Ces milieux ont t utiliss la fois pour lisolement de souches microbiennes arobies partir du milieu eau de rivire naturelle du site de Poses-Amfreville et pour le dnombrement des souches microbiennes prsentes dans les diffrents types de prlvement du milieu naturel. Flore bactrienne totale (arobie et anarobie) : milieu glos PCA (Plate Count Agar) Ajouter 22,5 g du milieu dshydrat (composition indique dans le tableau 1) dans 1 L deau distille. Passer lautoclave (15 minutes 121C). Le pH du milieu est de 7 0,2 25C. Peptone de casine 5 Extrait de levure 2,5 D-(+)-glucose 1 Agar-agar 14

Masse (g/L) tel-00141130, version 1 - 11 Apr 2007

Tableau 1 : composition du milieu PCA dshydrat

Le milieu not PCA-NaCl est obtenu par ajout de 0,3 g/L de NaCl dans le milieu PCA. Bactries Sulfato-Rductrices (BSR) : milieu de Starkey [219] La composition du milieu de Starkey est donne dans le tableau 2. La composition de la solution doligo-lments entrant dans la formulation du milieu de Starkey est indique dans le tableau 3. Produit/Solution Chlorure dammonium anhydre Sulfate de magnsium, heptahydrat Sulfate de sodium anhydre Solution aqueuse 60 % de lactate de sodium Solution doligo-lments Monohydrognophosphate de potassium Acide ascorbique Extrait de levures Eau distille Produit/Solution Acide chlorhydrique Magnsie calcine Carbonate de calcium Citrate de fer III Sulfate de zinc heptohydrat Sulfate de manganse monohydrat Sulfate de cuivre pentahydrat Sulfate de cobalt heptahydrat Acide borique Masse/Volume 1g 2g 4g 4,5 g 1 mL 0,5 g 0,1 g 1g 1L

Tableau 2 : composition du milieu de Starkey pour le dnombrement des BSR

Masse/Volume 53,5 mL 10,75 g 1g 6g 1,44 g 1,12 g 0,25 g 0,9 g 0,06 g

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Molybdate de sodium dihydrat Chlorure de nickel hexahydrat Slnite de sodium pentahydrat Eau distille

0,06 g 0,1 g 0,06 g 500 mL

Tableau 3 : composition de la solution doligo-lments entrant dans la formulation du milieu de Starkey

Bactries Thiosulfato-Rductrices (BTR) : milieu de Magot [220] La composition du milieu de Magot est donne dans le tableau 4. La composition de la solution doligo-lments entrant dans la formulation du milieu de Magot est indique dans le tableau 5. Produit/Solution Eau distille Extrait de levure Na2S2O3, 5 H2O KCl NH4Cl KH2PO4 CaCl2, 2 H2O SL12 (solution doligo-lments) NaCl MgCl2 Actate de sodium Produit/Solution Eau distille EDTA FeSO4, 7H2O CaCl2, 6H2O MnCl2, 2H2O ZnCl2 NiCl2, 6H2O Na2MoO4, 2H2O H3BO3 CuCl2 Masse/Volume 946 mL 1g 3,6 g 0,3 g 0,3 g 0,2 g 0,15 g 1 mL 9g 2g 1,64 g Masse/Volume 1L 3g 1,1 g 190 mg 50 mg 42 mg 24 mg 18 mg 300 mg 2 mg

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Tableau 4 : composition du milieu de Magot pour le dnombrement des BTR

Tableau 5 : composition de la solution doligo-lments SL12 entrant dans la formulation du milieu de Magot

Sont ajouts aprs autoclavage 2,5 g de NaHCO3, 1 g de cystine et 4 mL de la solution de vitamines V7 (tableau 6). NaHCO3 : Si ces ions taient prsents dans le milieu lors de lautoclavage, ils feraient prcipiter le milieu, ils sont donc prpars sparment. 2,5 g de NaHCO3 sont introduits dans 30 mL deau distille (proportions dans lesquelles il ny a pas de prcipits aprs autoclavage). La prparation est faite sous atmosphre N2/CO2. La solution est finalement strilise par autoclavage (121C, 1 bar, 20 min).

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Cystine : 1 g de cystine est introduit dans 20 mL deau distille auparavant bouillie et refroidie sous atmosphre N2/CO2. La solution est ensuite strilise par filtration 0,2 m. Solution de vitamines V7 : ne pouvant tre autoclave, cette solution doit tre strilise par filtration 0,2 m avant dtre ajoute au milieu. La solution de vitamines doit tre conserve 4C pour viter sa dnaturation. La composition de cette solution est indique dans le tableau. Produit/Solution Eau distille Biotine p-AminoBenzoate Thiamine Pantothnate Pyridoxamine Vitamine B12 Nicotinate Masse/Volume 1000 ml 2,0 mg 10 mg 10 mg 5 mg 50 mg 20 mg 20 mg

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Tableau 6 : composition de la solution de vitamines V7

Entrobactries : milieu de Mc Conkey Mettre en suspension 50g du milieu dshydrat (composition indique dans le tableau 7) dans 1 L deau distille. Porter bullition lentement, en agitant jusqu dissolution complte. Rpartir en tubes ou en flacons. Passer lautoclave (15 min 121C). Le pH final est de 7,1 0,2 25)C. Produit/Solution Peptone pancratique de glatine Tryptone Peptone pepsique de viande Lactose Sels biliaires Chlorure de sodium Rouge neutre Cristal violet Agar-agar bactriologique Masse/Volume 17 g/L 1,5 g/L 1,5 g/L 10 g/L 1,5 g/L 5 g/L 0,03 g/L 0,001 g/L 13,5 g/L

Tableau 7 : composition du milieu de Mc Conkey dshydrat pour le dnombrement des entrobactries

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RESUME
Si laugmentation du potentiel de corrosion libre des aciers inoxydables est avre en eau de mer naturelle, laspect systmatique de ce phnomne na pas encore t dmontr en eau de rivire naturelle. Cette volution du comportement lectrochimique est due la colonisation de la surface par des microorganismes induisant des modifications des processus cathodiques. Deux mcanismes enzymatiques diffrents sont proposs dans la littrature, lun dvelopp en eau de mer et fond sur la production enzymatique de peroxyde dhydrogne et dacidit au sein du biofilm, et lautre dvelopp en eau de rivire et bas sur la dposition doxydes de manganse la surface du matriau. Lobjectif de ce travail a t de confirmer le caractre systmatique de laugmentation du potentiel de corrosion libre et de mettre en vidence le (ou les) mcanisme(s) lorigine de cette volution, ainsi que de dterminer linfluence de ladhsion du biofilm. Pour cela, des mesures lectrochimiques, ainsi que des observations et des analyses de surface, ont t ralises la fois in situ au cours dexpriences dans la Seine laide dun dispositif original dimmersion, et en laboratoire lors dexpriences dadhsion sur acier inoxydable laide de souches microbiennes sauvages provenant de prlvements de flore sessile dans la Seine. Les rsultats exprimentaux prouvent que les deux mcanismes voqus dans la littrature peuvent avoir lieu dans un mme cours deau et mener des volutions du comportement lectrochimique comparables. Le modle de production de peroxyde dhydrogne par la glucose-oxydase, gnrant un milieu oxydant et acide, a t adapt au cas de leau de rivire artificielle. Il permet de reproduire les variations du potentiel de corrosion libre et des ractions cathodiques mais peut diffrer de leau de rivire naturelle du point de vue de la composition chimique et de la structure lectronique du film passif. Enfin, ltude des phnomnes de bioadhsion a montr la difficult dobtenir en laboratoire un biofilm lectrochimiquement actif. Mots-cls : aciers inoxydables, corrosion microbienne, eau de rivire, enzymes, peroxyde dhydrogne, bioadhsion

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Abstract
While it is true that the Open Circuit Potential (OCP) of stainless steels increases in natural seawater, the systematic aspect of this phenomenon has not yet been demonstrated in natural freshwater. This evolution of the electrochemical behaviour is due to the colonization of the surface by microorganisms leading to modifications of the cathodic processes. Two different enzymatic mechanisms are offered in literature : one developed in seawater and based on the enzymatic production of hydrogen peroxide and acidity within the biofilm, and the other one developed in river water and based on the deposition of manganese oxides at the surface of the material. The aim of this work was to confirm the systematic character of the increase of the OCP and to highlight the mechanism(s) responsible for this evolution, as well as to determine the influence of the adhesion of the biofilm. To achieve this, electrochemical measurements and analysis/observations of the surface were realized, both in situ, during experiments in the Seine river using an original technique of immersion, and in laboratory during adhesion experiments of wild microbial strains, coming from samples of sessile of the natural freshwater, on stainless steels. The results of the experiments show that the two mechanisms mentioned in the literature can happen in the same water and can lead to parallel evolutions of the electrochemical behaviour. The model of production of hydrogene peroxide by glucose oxidase, creating an oxidizing and acid environment, has been adapted to the case of artificial freshwater. It enables to recreate the variations of the OCP and of the cathodic reactions but can differ from natural freshwater as to the chemical composition and electronic structure of the passive film. Finally,the study of the bioadhesive phenomenons has shown how difficult it is to obtain an electrochemically- active biofilm in laboratory. Key words : stainless steels, microbially-induced corrosion, freshwater, enzymes, hydrogen peroxide, bioadhesion