Myoglobine-Hémoglobine

Introduction

Conditions structurales et moléculaires de liaison de l’oxygène aux protéines

Etudes de la myoglobine

Structure tridimensionnelle

Liaison à l’oxygène

Gène(s) de la myoglobine

Dosage de la myoglobine et son intérêt en pathologie clinique

Etude de l’hémoglobine

Caractéristiques structurales

Fonctions de l’hémoglobine en relation avec sa structure

Liaison à l’oxygène

Effet du 2,3-Bis Phospho Glycérate

Effet Bohr, transport du CO2 et capacité tampon

Pathologies et exploration

Drépanocytose

Thalassémies

Caractéristiques différentielles entre la myoglobine et l’hémoglobine

Conclusion
 Introduction

- Deux chromoprotéines assurent dans l’organisme l’approvisionnement des cellules en oxygène :

l’hémoglobine et la myoglobine
- L’hémoglobine, formée de 4 chaîne polypeptidiques, transport l’oxygène atmosphérique
jusqu’aux cellules.
- La myoglobine, formée d’une seule chaîne polypeptidique, est présente dans les cellules
musculaires pour y assurer le transport de l’oxygène en facilitant sa diffusion à partir du compartiment
sanguin et en le mettant en réserve pour les besoins des oxydations au cours d’un métabolisme intense.

I-Conditions structurales et moléculaires de liaison de l’oxygène aux protéines

L’oxygène moléculaire peut être fixé réversiblement aux protéines en faisant intervenir une structure non
protéique (groupement prosthétique) appelé hème.

1) structure de l’hème

Il comporte une molécule de protoporphyrine IX et un atome de fer.

La protoporphyrine fait partie de la famille des porphyrines.
Les porphyrines sont des composés contenant le noyau porphine.
Le noyau porphine est la réunion de 4 noyaux pyrroles liés par des ponts
méthylène (–CH=) .
Les protoporphyrines comportent 3 types de substituants : méthyle, vinyle et
propénoïque .

La porphine absorbe fortement une partie du spectre lumineux ce qui lui

confère sa coloration rouge (nombreuse doubles liaisons conjuguées)

 Liaison de la protoporphyrine IX au fer :

- L’atome de fer ferreux (2+) est fixé au centre de la molécule par l’intermédiaire de 4 liaisons
datives (de coordination) fournies par les 4 sommets azotés des pyrroles.
- Ces 4 liaisons sont coplanaires avec le tétra pyrrole, mais en absence d’oxygène l’atome du fer
sort du plan de 0.04 nm
- La fixation de l’O2 le fer entraine un glissement du fer vers le plan de l’anneau tétrapyrrolique :
ce mouvement a des conséquences cruciales sur la fonction de transport de l’oxygène par l’hémoglobine
- En outre, le fer contient aussi deux cases quantiques vides « lacunes », qui vont servir à 2 autres
liaisons de coordination perpendiculaire au plan tétrapyrrolique.

.
 Liaison de l’hème à la chaîne globinique :

La partie globinique : une structure compacte constituée de 8 hélices, désignée de A à H, connectées par
de courtes boucles.
Ces hélices sont disposées de façon à former une zone interne tapissée par de résidus hydrophobes :
loge de l’hème (poche à hème).

L’hème est maintenu par des contacts covalents et non covalents avec la globine :
- le fer établit par sa 5ème coordination une liaison avec l’atome de l’azote, imidazolique d’une
Histidine en position 8 dans l’hélice F (dite histidine proximal).
- d’autre part, l’hème est disposé de manière à ce que ses parties apolaires soient au contact des
résidus hydrophobes et ses 2 propionates établissent des liaisons salines avec deux groupements basiques
de lysine ou arginine.

2) Conditions moléculaires de la fixation de l’oxygène

a) Le fer doit être à l’état ferreux (2+) :

c’est à dire réduit , car s’il est oxydé en fer ferrique (3+) , la 6ème coordination qui normalement lie la
molécule d’oxygène , sera occupée par l’atome d’oxygène d’une molécule d’eau (H2O) et dont l’un des
protons se lie par liaison hydrogène à l’azote imidazolique d’une autre histidine occupant la position 7
dans l’hélice E (histidine distale) : cet état donnant le nom de metmyoglobine et methémoglobine :un
état désoxy stable où le fer ferrique hexacoordonné ne peut plus jouer le rôle de fixateur de l’oxygène.

b) rôle de l’environnement protéique :

* protection contre l’auto-oxydation de l’oxy-hème :

- L’hème seul ne peut fixer réversiblement l’oxygène car il s’auto-oxyde en hématine avec la
formation d’un complexe où un O2 établit un pont entre les atomes de fer de deux hèmes.
- -La présence de la globine qui entoure l’hème s’oppose stériquement au rapprochement face à
face de deux hèmes permet d’éviter cette auto-oxydation..

* diminution de la force de liaison entre l’hème et le CO :

- La liaison de la molécule O=O fait un angle de 120° avec le plan de l’hème favorable à la
fixation de l’O2.
- La liaison de la molécule de CO à l’hème isolé (en solution) diffère de sa liaison à l’hème logé
- en l’absence de la globine les atomes O, C, et Fe sont perpendiculaire à l’hème (aligné) et cet
alignement confère une affinité de l’hème pour le CO 25000 fois celle pour l’O2.

- Par contre, en présence de la globine, l’histidine distale crée un encombrement stérique qui
impose l’inclinaison de la liaison CO ce qui ramène l’affinité de l’hème pour le CO à 200 fois celle de
l’O2.
- Dans ces conditions le large excès de l’O2 sur CO favorise sa liaison

-NB : Il existe néanmoins une fraction physiologique de la Mb et Hb combinée avec CO, carboxyMb et
carboxyHb respectivement.
 Etude de la myoglobine

- C’est une hémoprotéine monomérique formée d’une seule chaîne globinique de 153 acides
aminés.
- Localisation : cytoplasme des cellules des muscles striés (muscles squelettique et
cardiomyocytes) où
- elle sert au transport local et la mise en réserve de l’O2.

1) structure tridimensionnelle :Voir structure de l’hème

2) Liaison à l’oxygène
Chaque molécule de myoglobine peut fixer réversiblement une molécule d’O2 pour donner une
oxymyoglobine ; cette liaison se traduit par une simple réaction d’équilibre :
 Mb + O2 => Mb-O2 K = Mb * O2 / Mb-O2
On définit la saturation partielle en O2 par la fraction des sites de liaison à l’O2 occupée :
 Y = Mb-O2 / Mb + Mb-O2 = O2 / K + O2

L’oxygène étant un gaz, ses concentrations peuvent être exprimées en pressions partielles (PO2), Y
devient : Y = (PO2) / K + (PO2)
Si on met Y = 0,5 on aura (PO2) = K et on la désigne par P50

La courbe qui donne la variation de la saturation partielle en

fonction de la pression d’oxygène est donc une hyperbole qui
traduit la haute affinité de la myoglobine pour l’oxygène.

Conséquences de cette forte affinité sur la fonction de stockage

et transport local de l’O2 par la myoglobine :

 D’une part elle ne libère suffisamment d’oxygène

qu’aux basses pressions (5 mm Hg) ; ces pressions ne sont
atteintes qu’au cours d’une forte activité au niveau musculaire.
 D’autre part, son affinité pour l’oxygène étant supérieure à celle de l’hémoglobine, elle agit
comme un aspirateur qui accélère la diffusion des molécules d’O2 des capillaires vers le cytoplasme des
cellules musculaires.

3) Génétique
Le gène responsable de la synthèse de la myoglobine se trouve sur les chromosomes 22 .

4) Dosage de la myoglobine et son intérêt en pathologie clinique

Voir cours des marqueurs cardiaques
 Etude de l’hémoglobine

1) caractéristiques structurales : voir structure de l’heme

C’est une hémoprotéine tétramérique possède 4 chaînes polypeptidiques constitutives identiques 2 a2 :
 2 chaines alpha (141 acides aminés)
 2 chaines non alpha (146 acides aminés) 

L’hémoglobine prédominante chez l’adulte est dite Hb A et composée de 2 chaînes α et deux chaînes β.
Mais un type mineur, appelé Hb A2 est présent chez l’adulte et composé de 2 chaines α et 2 chaines δ.
L’Hb du fœtus est différente, c’est l’Hb F (2 chaînes α et 2 chaînes γ).
NB : L’Hb A1 est un dérivé de l’Hb A résultant de la fixation non enzymatique de molécules
aldéhydiques sur certaines fonctions amines des chaines polypeptiques.
Il ne s’agit pas d’une variant génétique de l’Hb A.

a) Description de l’Hb A (α2β2)

Elle est formée par l’assemblage des chaines α et β :

- La chaine α de 141 acides aminés est formée 7 hélices (absence de l’hélice D) avec une Arginine
en position C-terminal 
Sa synthèse est sous le contrôle de gènes localisés sur le chromosome 16.
- La chaine β, de 146 acides aminés, est formée de 8 hélices avec une Histidine en C-terminal.
Sa synthèse est sous le contrôle de gènes localisés sur le chromosome 11.

b) Synthèse des chaines globiniques

Elle varie au cours de la vie avec la variation de l’expression des gènes :

- Durant la vie embryonnaire : La famille α exprime une chaine zéta (ζ) puis une chaine α, alors
que la famille β exprime une chaine epsilon (ε) puis une chaine gamma.
- Ainsi chez l’embryon on retrouve les 3 hémoglobines : Hb Gower 1 (ζ2 ε2) ; Hb Gower 2 (α2
ε2) ; Hb Portland (ζ2 γ2).
- Durant la période fœtale : C’est l’Hb F (α2 γ2) qui est le principal constituant (90% entre 8ème et
10ème semaine)

- Peu avant la naissance : Les chaines gamma sont remplacée progressivement par la chaine béta
qui en s’associant aux chaines alpha donnent l’hémoglobine adulte (α2 β2).

c) Gènes de globines
 Tous les gènes des globines (y compris la myoglobine) sont constitués de 3 exons et 2 introns.
- Le complexe alpha : comprend un gène zéta et deux gènes α (qui ne diffèrent qu’au niveau du
ème
2 intron : donc code la même chaine polypeptique).
- Le complexe béta :comprend un gène epsilon, gamma (G) et gamma (A) (qui ne diffèrent que
par leur résidu 136 : glycine ou alanine respectivement) et enfin les gènes béta et delta.

d) Structure quaternaire

- Quatre monomères s’assemblent pour former l’hétérotétramère de l’hémoglobine.

- Les sous-unités alpha et béta s’associent selon une symétrie tétraédrique en une molécule
sphéroïdes :
la sous-unité alpha 1 au contact de la sous-unité béta 2 et alpha 2 de béta 1.

Différences conformationnelle entre les formes oxy Hb et désoxy Hb :

- L’oxygénation provoque modifications importantes dans la structure quaternaire

- En fait l’oxygénation fait pivoter le dimère 11 de 15° par rapport au dimère 22 .
- La conformation de la forme Désoxy Hb est appelée état tendu (T), alors que celle de la forme
Oxy Hb est dite relâchée (R).
- NB : L’état (T) est stabilisé par des ponts salins qui doivent être rompue pour passer à l’état (R) ,
- ce changement dans la structure quaternaire est inductibles par des ligands (O2, CO, NO..) et il
s’accompagne d’un changement de l’affinité pour l’oxygène.

Etat (T) Désoxy-Hb Etat (R) Oxy-Hb

2) Fonctions de l’hémoglobine en relation avec sa structure

 1. Liaison à l’oxygène :

a) courbe de liaison à l’oxygène :

- C’est une courbe sigmoïdale : la quantité d’oxygène lié à l’Hb change significativement (pas
progressivement) en fonction de la PO2 dans le sang.
- Une différence de saturation entre pressions veineuses et pressions artérielle témoigne du rôle
oxyphorique (fixation puis libération de l’O2) de l’Hb.

- Une courbe sigmoïdale indique une interaction coopérative entre les sites de liaisons de la
protéine pour un ligand.
- C’est une régulation allostérique particulière où l’effecteur est le substrat et l’interaction est
dite homotropique.

- NB : La myoglobine conserve l’oxygène dans les conditions (pressions) où l’Hb le libère donc
ces deux protéines constitue un système sophistiqué qui distribue l’O2 des poumons aux muscle en
activité intense
 b) modélisation de l’interaction allostérique

b-1) Le modèle concerté (de Monod, Wyman, Changeux) MWC :

Fondé sur l’équilibre entre la forme (T) et la forme (R) où ces deux conformations coexistent même en
absence de ligand telle que la forme (T) est plus favorable et la conformation (R) a plus d’affinité .
Les molécules de ligand se fixent de préférence sur la forme (R) ce qui déplace l’équilibre vers l’état R.

b-2) Le modèle séquentiel :

Fondé sur la notion qu’une protéine est suffisamment flexible pour que la liaison d’un ligand au niveau
d’un site modifie directement la conformation et l’affinité d’un autre site de la protéine

2.Effet du 2,3 bisphosphoglycérate

- L’Hb purifié a une affinité nettement plus grande qu’elle en a dans le sang 
- La raison e : la présence dans le sang d’une substance, produite au cours de la voie de la
glycolyse intra érythrocytaire, capable de réduire l’affinité pour l’oxygène en stabilisant l’état (T) du
tétramère : c’est le 2,3 BPG.
- La liaison du 2,3 BPG à la désoxy Hb (mais pas à l’Oxy Hb) se fait
une poche présente uniquement dans la forme T : le BPG étant anionique il
entre en interaction avec 3 résidus chargés positivement de chaque chaine
béta : His 2 , Lys 82 ,et His 143 ,
- Lors de l’oxygénation la cavité se contracte et le BPG est expulsé

 Fonctions physiologiques du BPG :

- Dans le sang artériel la pO2 est élevé de sorte que le BPG ne peut se lier ,
- mais au niveau veineux la diminution de la PO2 permet la fixation de BPG qui diminue à son
tour l’affinité et accélère la libération de l’oxygène.
- Dans la cavité de la désoxy Hb F, dans la chaine gamma une serine remplace l’His 143 et donc il
ya deux charges positives de moins.
- De ce fait le BPG se lie moins fortement à l’Hb F qui par conséquent a plus d’affinité pour
l’oxygène que l’Hb A.
 3. Effet Bohr transport du dioxyde de carbone

a) Effet Bohr

L’affinité de l’hémoglobine pour l’oxygène diminue lorsque le PH s’abaisse en dessous de 7,4 ; de même
en présence d’une pression élevée du CO2 : ce phénomène est appelé effet Bohr.
Les ions H+ et le CO2 sont des effecteurs hétérotropiques dont le mécanisme d’action est le suivant :
 A PH acide (forte teneur en H+) la chaine latérale de l’His 146 se protone et établit un pont
salin avec l’Asp  94, ce qui stabilise la forme désoxy et la tendance à libérer l’oxygène augmente.
 Pour le CO2, il stabilise aussi la forme désoxy en réagissant avec les groupes N-terminaux pour
former des groupes carbamate chargés négativement qui forment ponts salins au niveau de l’interface des
dimères  :ce qui stabilise la forme (T)

b) transport du CO2

Le CO2 circule sous trois formes : 80% sous forme de HCO3- ; 10% lié à l’hémoglobine et 10% solubilisé
physiquement dans le plasma

 La forme bicarbonate :
1- Le CO2 sortant des cellules pénètre dans les érythrocytes (sans fixation à l’hémoglobine) là où il
est transformé en acide carbonique H2CO3 grâce à l’anhydrase carbonique érythrocytaire 
2- L’acide carbonique est spontanément dissocié en H+ et HCO3- qui quitte le globule rouge en
échange d’un ion chlorure (Cl-) pour préserver la neutralité (effet humberguer
3- Ces bicarbonates, en arrivant aux poumons suivent le chemin inverse : pénètrent le globule rouge
en échange d’un Cl-, où il est transformé en en CO2 sous l’action de la même enzyme (anhydrase
carbonique) et après avoir quitté le globule rouge, le CO2 est expulsé avec l’air expiré.
 la forme liée à l’hémoglobine :
Le CO2 se lie d’une façon covalente aux groupent N-terminaux des chaines protéiques pour former de la
carbamyl-Hb  avec formation de protons.
 la forme dissoute :
Est entrainée directement avec le plasma vers les poumons.

c) capacités tampon

- Des protons sont produits constamment au sein de l’érythrocyte (formation des bicarbonates,
liaison du CO2 à l’hémoglobine, au voisinage d’un tissu métaboliquement actif…),
- il faut en permanence capter les protons parl’hémoglobine qui, de par ses groupements
imidazoles des histidines, elle prend en charge l’excès de protons même issus d’autres voies métaboliques
(la membrane du GR étant perméable aux ions H+).
- Dans sa forme désoxy, l’Hb capte volontiers les H+ (au niveau des capillaires) qui seront libérés
lorsque la protéine est oxygénée (au niveau des poumons).
- Et en cas d’un déficit du milieu en H+, l’hémoglobine libérr des protons et le PH plasmatique
demeure ainsi constant ;
- Ainsi, l’hémoglobine est un tampon plasmatique très efficace.

3) pathologies et explorations :

Les hémoglobinopathies sont réparties en

 Des anomalies de structure où une Hb anormale est présente (comme Hb s)
 Des anomalies de synthèse qui sont regroupés dans le groupe hétérogène des thalassémies.

 Drépanocytose (anémie falciforme)

La drépanocytose est une maladie génétique autosomale récessive qui affecte l’hémoglobine, plus
précisément les chaînes -globines qui sont modifiées au niveau de leur sixième acide aminé.
La conséquence est la synthèse d’une hémoglobine anormale : l’hémoglobine S ou HbS.

 Les thalassémies
Les thalassémies sont définies par un déficit total ou partiel de synthèse de chaînes de l’hémoglobine.

a) Les β-thalassémies

La béta thalassémie est causée par des mutations d’un ou des deux gènes codant pour la globine béta.
b) Les -thalassémies

L’alpha thalassémie est dû à la délétion ou à la mutation d’une ou plusieurs des 4 copies du gène de
globine alpha. .