REPUBLIQUE DE COTE D’IVOIRE Ministère de l’Enseignement Supérieur

Union-Discipline-Travail et de la Recherche Scientifique

Exposé
 RAPPORT DE TP METHODES
ANALYTIQUES

ANALYSE D’UN ECHANTILLON

PAR CHROMATOGRAPHIE SUR
COUCHE MINCE (CCM)

ETUDIANTS

AKOTO-YAO THIBAULT
Enseignant
DEGNI N’GUESSAN
Dr NIAMKE FLORENCE
FALLET JEAN CHRISTIAN

KONATE AROUNA

Année Scolaire : 2018 - 2019

I.BUT

Le but de cette manipulation est d’analyser un échantillon liquide afin de séparer les
différentes molécules qui le composent en fonction de leurs rapports frontaux.

II.PRINCIPE

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Le mélange est fixé sur un support appelé phase stationnaire (gel de silice déposé en couche
mince sur une plaque d’aluminium). Il est entrainé par un solvant ou un mélange de solvant
approprié (phase mobile ou éluant) qui migre par capillarité sur la plaque. Les constituants du
mélange se séparent par migration différentielle : chacun d’eux est d’autant plus entrainé par
l’éluant qu’il est plus solide dans celui-ci et moins absorbé sur la phase stationnaire. Après
migration, les composés doivent être séparés soit par :

- Pulvérisation d’un réactif caractéristique

- Pulvérisation de vapeur d’iode
- Observation à lampe U.V

III. MATERIEL ET PRODUITS

3.1/ Matériel

La chromatographie sur couche mince est une méthode d’analyse qui se déroule en plusieurs
étapes. Pour la réaliser dans notre cas nous avons utilisé le matériel suivant :

 Une cuve chromatographique

 Une plaque chromatographique (Adsorbant + Support)
 1 Règle
 1Crayon à papier
 2 capillaires
 Lampe UV
 L’étuve
 1 pince

3.2/ Produits

Pour la réalisation de notre analyse, nous avons utilisé les produits suivants :

 Echantillon liquide de couleur rougeâtre

 L’éluant : 0,75 ml + 7,5 mL de méthanol + 42,5 ml de dichlorométhane
 Eau distillée
 Révélateurs : vanilline sulfurique
 Standard : acide gallique

IV. MODE OPERATOIRE

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 4.1/ Préparation de la plaque

La plaque est constituée de support en aluminium et d’adsorbant (Le gel silice).

Elle a pour dimension : Longueur 7cm, Largeur 4cm.
Sur la plaque, la ligne de dépôt est tracée à 2cm du bord inférieur.

4.2/Préparation de l’éluant

L’éluant utilisé est un mélange de solvant constitué d’eau, de méthanol et de dichlorométhane.

Dans un bécher lavé et rincé est introduit 0,75 ml d’eau, à ce volume sont ajoutés
respectivement 7,5ml de méthanol et 42,5 ml de dichlorométhane. Le tout est laissé reposer et
couvert pendant quelques minutes afin d’obtenir un mélange homogène.

4.3/Préparation de la cuve

La cuve est préalablement lavée, rincée puis

l’intérieur garnie de l’éluant. Ensuite, une
quantité d’éluant est introduite dans la cuve, le
niveau de l’éluant est ajusté de sorte qu’il soit
en dessous de la ligne de base lorsque la plaque
y est introduite. La cuve est fermée afin
d’éviter l’évaporation de l’éluant.
Cuve chromatographique
4.4/Dépôt de l’échantillon

À l’aide d’un capillaire une certaine quantité de l’échantillon et de l’acide gallique est
prélevée et déposée sur la ligne de dépôt en deux points différents situés à 1 cm des
extrémités chacun.
Le diamètre de la tache doit être d’environ 03mm.
La plaque est laissée séchée pendant quelques minutes avant son introduction dans la cuve.

Plaque Chromatographique après

4 dépôt de l’échantillon
 4.5/Développement du chromatogramme

La plaque est placée dans la cuve en

position verticale et refermer pour
permettre l’élution.

Développement du chromatogramme
Après quelques minutes la plaque est retirée de la cuve et le front de l’éluant est tracé avec le
crayon à papier.

Plaque chromatographique après tracé du front de l’éluant

Les constituants de l’échantillon n’étant pas visible à l’œil nu, une révélation s’impose afin
d’identifier les différents composés.

4.6/ Révélation

Pour mettre en évidence les composés séparés, nous avons utilisé deux types de révélations :

 Révélation sous lampe ultra-violette

A l’aide d’une pince, la plaque est prise et

introduite dans une chambre noire (l’abri de
toute lumière) contenant la lampe UV. Cette
lampe est réglée respectivement à 254nm
puis 365nm.

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 Lampe Ultra-Violette (254 et 365nm)

 Révélation avec la vanilline sulfurique

La solution de vanilline sulfurique est préparée en introduisant 0,01 g de vanilline en
poudre dans un volume de 50 ml d’acide sulfurique. La plaque chromatographique est
plongée dans cette solution de vanilline pendant un temps bref. La plaque est laissée
sécher pendant 2 minutes et est ensuite mise dans une étuve à 110 °C pendant 5
minutes.

Solution de vanilline sulfurique

V. Résultats

5.1/ Lecture

Après révélation, les différentes révélations ont permis d’obtenir les résultats suivants :

 La révélation sous la
lampe UV à 254nm a
révélé une tache
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  La révélation sous lampe UV à
365nm n’a relevé aucune tache

 La révélation à la vanilline sulfurique + l’étuve n’a aussi révélé aucune tache.

La plaque trempée dans la solution de

vanilline sulfurique La plaque à la sortie de l’étuve

VI. Interprétation

Il n’y a eu pas d’observation de tache car, la solution de vanilline sulfurique étant très
concentrée, on aurait dû procéder à une pulvérisation au lieu de tremper la plaque dans la
solution de vanilline.

Conclusion

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 Au terme de notre travail, il en ressort que l’analyse de notre échantillon n’a pas
aboutie à la séparation des constituants à cause d’une mauvaise manipulation. Retenons que la
chromatographie sur couche mince est une technique peu couteuse et simple à réaliser.