TP : Séparation des sucres dans un jus de fruit et un soda

Les glucides sont des composants essentiels de la matière organique, ce sont une source
d'énergie pour nos cellules. Ce TP a pour but de caractériser les glucides qui sont présents
dans un jus de fruit et un soda.
Pour ce faire, nous réaliserons une chromatographie sur couche mince (CCM).

Matériel :

• Cuve à chromatographie
• Plaques CCM gel de silice
• Eluant : (chloroforme /Méthanol / eau) = (6/4/1)
• Glucose, fructose, maltose et saccharose
• Jus de fruit (ici jus de raisin)
• Soda
• Capillaires
• Fioles jaugées
• Béchers
• Balance
• Etuve
• Eprouvette graduée
• Sèche-cheveux
• Révélateur (1 volume de KMnO4 à 2% et 1 volume de Na2CO3 à 4% préparé au dernier
moment)

Doc. 1 : Protocole CCM

Préparation de la plaque chromatographique

• Réactivation préalable par chauffage (95-100 °C, 20 à 30 minutes)

• Distance des dépôts vis à vis des bords ;
• Espacements identiques entre les dépôts ;
• Échantillon à analyser : pas sur les bords de la plaque
• Dépôts clairement identifiés.

A la fin de l’élution :

Après développement et révélation, l'exploitation doit se faire de manière très rigoureuse. Voici
les consignes à suivre :
• Marquer immédiatement le front de migration du solvant au crayon graphite
• Entourer chaque spot et délimiter le centre
• Indiquer : référence de la plaque, composition de l'éluant, durée de la
migration, composition du révélateur….(toutes informations utiles pouvant être
mentionnées).

1
 Doc. 2 : Exemple de renseignements indiqués sur la plaque CCM après migration et
révélation

Doc. 3 : exemple de tableau de présentation de résultats

➢ Protocole :

1- Préparation des échantillons des gammes étalon

Il faut préparer les solutions étalons à 20 g/L :

- une solution de glucose
- une solution de maltose
- une solution de saccharose
- une solution de fructose

Ces solutions sont préparées par dissolution de ces sucres dans de l’eau déminéralisée.
On utilisera des fioles jaugées de 50 ou 100 mL.

2- Réalisation de la CCM

Voici les différentes étapes à mettre en œuvre :

1) Préparation de la phase stationnaire : ré-activation de la plaque de silice à 100°C

pendant 20 minutes pour éliminer les molécules d'eau éventuellement adsorbées sur la
silice et dont la présence modifierait le type de chromatographie (un gel de silice
contenant de l'eau mettrait en œuvre un principe de partage et non d'adsorption)

2
2) Préparation de la phase mobile : verser la phase mobile dans la cuve. Cette étape
consiste à saturer l’atmosphère de la cuve avec les vapeurs du solvant à l'aide d'un
couvercle fermant la cuve de façon étanche.

3) Dépôt des échantillons : solutions témoins (ou étalons de lecture) et mélange(s) à

analyser sont déposés sous forme de microgouttelettes ; le dépôt doit être suffisamment
concentré pour être visible lors de la révélation mais les tâches (spots) doivent être de
petite taille. Pour cela, se servir des capillaires. Les dépôts peuvent être répétés afin que
les spots soient concentrés mais pas étalés (les spots doivent être éloignés les uns des
autres).

4) Développement de la plaque : autre terme désignant la migration du solvant sur la

plaque le long de la phase solide. Cette étape doit être stoppée avant que l'éluant ne
parvienne au niveau du bord supérieur de la plaque, en fin de migration il est nécessaire
de marquer immédiatement le front de migration de l'éluant.

5) Révélation : les solutés à séparer sont le plus souvent incolores, donc invisibles à l'œil
nu ; la révélation consiste donc à les faire apparaître à l'aide d'un réactif spécifique. Pour
cela, à l’aide d’une pince, baigner 10 secondes la plaque de silice dans une solution de
permanganate et de carbonate de sodium. Ensuite, placer la plaque sur du papier
absorbant (plusieurs épaisseurs, le permanganate est très tachant) et sécher jusqu’à
révélation des spots. Des tâches claires doivent apparaître.

6) Révélation : exploiter le chromatogramme comme cela est présenté en première partie

et conclure.

 Faire le compte rendu complet ‼