Université Larbi Ben M'hidi d'Oum Bouaghi

Master 1: Biotechnologie Végétal

MODULE : MÉTHODES ET TECHNIQUES

ANALYTIQUE

Tp:
Chromatographie des sucres sur
couche mince (ccm)

Réaliser par:

LAOUADI Marwa
SMAIL Noussaiba

Dr:Berbeche

2023/2024
Plan du travail :

Introduction

Le but de Tp

Materiels et Produits

Méthode de travail

Calcule

Conclusion
 Introduction:

La chromatographie est une méthode de séparation, elle se partage en

trois grands classes: chromatographie desurface(CCM),
chromatographie de liquide(HPLC),chromatographie de gaz(CPG).Dans
ce travail pratique, on
s’intéressé a la chromatographie de surface (CCM)

Le but

Séparation et identification des espèces

chimique dans un mélangehomogène.
Matériel :

-Plaques CCM.
- Becher.
- pipette pasteur.
-Eprouvettes graduées de 100ml et 25mL
-Sèche-cheveux.
-une cuillère spatule
-Une pissette d’eau distillée (30mL)
-4 tubes à assai vides en verre avec un
bouchon
-Une balance de précision au 100 ème près
-Cuve

Produits :

-Sucres témoins (glucose, lactose,

Fractose,
saccharos) de concentration de 20g/l .
-Révélateur (KMnO4 ).
-Eluant (chloroforme /Méthanol / eau) =
(15/10/2,5).
-Lait et jus d’orange.
 Méthode de travail :

1.Préparation des éluant :

1.les sucres témoins :

•En préparer dans un bisher 0,2 g Lactose dans
10ml l'eau distillée et couvrir avec le papier filme.
•0,2g Glucose dans 10ml l'eau distillée couvrire
avec le papier filme.
•0,2g Fractose dans 10ml l'eau distillée couvrir le
bisher avec le papier filme.
•0.2g Saccharose dans 10ml l'eau distillée et
couvrir le bisher avec le papier filme.

2. Dans un bisher en mélangeant le tous de

•6ml chlorophorme
•1ml l'eau
•4ml Methanol
 2. Préparation de la plaque CCM:

1.Sur la plaque CCM en trace le point de départ et le frond .

2.Versez quelques goutte de jus d'orange et de

lait dessus de la plaque CCM à l'aide du pipette
pasteur .
3.versez quelques gouttes de sucre témoins
(04sucres).
4.Introduire la plaque dans la cuve, On attend
qu'il sèche.
5.Introduire la plaque dans le mélange de
(chlorophorme+Méthanol+ l'eau ) , séchet la
plaque a l'aide d'un séchoir.

6.Placer une assiette dans le révélateur

pendant 02 secondes en la retournant
des deux côtés , séchage avec le séchoir.

Révélateur :
kMnO4------>2% dans Na2CO3 ------>4%
Volume0,2g/10ml+ Volume 0,4g/ml
On le met sous la hotte
 Calcule :

• La vitesse de déplacement ou le rapport frontale Rf:

Rf= D1/D2

D1: distance parcourue parle constituant

D2: distance parcourue par le front du solvant
Conclusion :

La technique du CCM est une technique

fiable et rapide, plus le composé est
polaire plus il sera adsorbé et moins vite
il se déplace

Les composants de l'échantillon ont des

vitesses variables selon leur solubilité,
les composants plus solubles migrent
lentement.