Expérience 1:

Chromatographie sur Couche Mince

Résumé

Cette expérience introduit la technique de chromatographie sur couche mince. Cette technique est généralement
utilisée pour suivre la progression d’une réaction.

Chromatographie sur Couche Mince

La purification du produit final est l’étape la plus difficile et la plus longue d’une synthèse organique moderne. Il
existe de nombreuses méthodes pour y parvenir, mais la chromatographie est la plus rapide et la plus fiable. La
chromatographie est également une bonne façon d’effectuer le suivi d’une réaction. Elle peut être utilisée pour
déterminer si une réaction est terminée et pour vérifier la formation du bon produit.

Dans une chromatographie, les mélanges sont séparés selon leurs différences de solubilité entre deux phases. Une
des phases est maintenue stationnaire (phase solide), tandis que l’autre est mobile (phase liquide or gaz). Les dif-
férents produits d’un mélange auront différentes affinités avec la phase mobile ou stationnaire. La phase mobile
(solvant) migre le long de la phase stationnaire (solide) entrainant les composés d’un mélange à des vitesses
différentes en fonction de l’affinité. Les composés avec une plus grande affinité pour la phase stationnaire in-
teragiront plus avec celle-ci en comparaison avec les composés qui ont une plus grande affinité pour la phase
mobile. Ces derniers interagissent avec la phase mobile. Ainsi lorsque la phase mobile migre le long de la phase
stationnaire, les composes migreront a différentes vitesses ce qui résulte à la séparation des composés le long de
la phase stationnaire.

Manuel de laboratoire préparé par Catalyst Education, LLC pour l’Université d’Ottawa, Département de chimie et des sciences biomolécu-
laires CCM.1
Labo CCM
 Chromatographie sur Couche Mince

Figure CCM.1: Adsorption en surface

Chromatographie sur Couche Mince (CCM)

Dans cette expérience, vous effectuerez un type spécialisé de chromatographie par adsorption1 appelée chro-
matographie sur couche mince (CCM). Dans cette méthode, une mince couche de matériel adsorbant (phase
stationnaire) est fixée à une plaque (généralement en verre ou en aluminium) et la phase mobile passe sur la
plaque, au travers de la phase stationnaire. La CCM est utilisée pour effectuer le suivi d’une réaction, pour puri-
fier un échantillon et pour déterminer la pureté des échantillons.

Le choix du matériel adsorbant et de la phase mobile dépend des substances à séparer. Le matériel adsorbant
le plus couramment utilisé est gel de silice qui est un composé polaire. La phase mobile généralement utilisée
est un solvant, ou mélange de solvants, organique. Les composés les plus polaires sont attirés plus fortement
par la silice que par le solvant et se déplacent plus lentement le long de la plaque de CCM. Les composés moins
polaires sont moins attirés par la silice et se déplacent plus rapidement, entrainés par le solvant, le long de la
plaque de CCM. L’augmentation de la polarité d’un solvant augmente l’affinité d’un composé avec celui-ci, ce qui
accélère déplacement du composé le long de la plaque (mais ne le rend pas aussi rapide que celui d’un composé
non polaire). On peut optimiser les séparations en modifiant la polarité de la phase mobile. Pour cela, le solvant
peut être changé par un solvant plus polaire Tableau CCM.1. Cependant, la meilleure façon de varier la polarité
est de mélanger des solvants polaires et non polaires. En variant les quantités de chaque solvant, on peut obtenir
un mélange de polarité idéal. Exemple de mélanges communs : acétate d’éthyle/hexane, Éther diéthylique/éther
de pétrole, dichlorométhane/méthanol.

1 Adsorption: Accumulation d’un composé sur une surface

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 Chromatographie sur Couche Mince

Tableau CCM.1: Solvants couramment utilisés pour la chromatographie sur gel de

silice

Solvant Polarité

Éther de pétrole Polarité faible

Benzène

Hexanes

Dichlorométhane

Chloroforme

Éther diéthylque

Acétate d’éthyle

Acétone

Méthanol

Eau

Acide acétique Polarité élevée

Pour optimiser une séparation, il faut également tenir compte de la polarité des composés à purifier ou séparer.
Elle peut être estimée grâce aux groupes fonctionnels de la molécule. Généralement, la polarité d’un composé
augmente avec sa capacité à participer à des liaisons hydrogène. Tableau CCM.2 présente une liste des groupes
fonctionnels communs et de leur ordre d’élution approximatif.

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 Chromatographie sur Couche Mince

Tableau CCM.2: Mobilité approximative des groupes fonctionnels communs pour la

chromatographie

Groupe fonctionnel Mobilité

Hydrocarbures saturés Plus rapide

Alcènes

Aromatiques

Halogènes

Éthers

Aldéhydes et cétones

Alcools

Acides carboxyliques et amides Plus lent

Dans une expérience de CCM, on dépose l’échantillon à séparer sur la silice, sous forme de petite tache près du
bas de la plaque. On place la plaque dans un récipient d’élution contenant la phase mobile de façon à ce que le
bas de la plaque soit immergé dans le solvant qui constitue la phase mobile. La phase mobile migre le long de la
plaque par capillarité. La phase mobile transporte l’échantillon avec elle, ce qui cause la séparation des composés
selon leur affinité pour chaque phase. Lorsque cela se produit, une série de taches apparaît sur la plaque. Chaque
tache correspond à un composé différent du mélange.

Au cours de ce processus, il est important de ne pas laisser le solvant s’évaporer de la surface de la plaque. Il faut
donc placer un couvercle sur le récipient d’élution pour éviter l’évaporation de la phase mobile.

Figure CCM.2: Séparations sur une plaque de CCM

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 Chromatographie sur Couche Mince

Pour préparer une plaque de CCM, tracez doucement une ligne horizontale le long de
la plaque à l’aide d’un crayon à environ 1 cm du bas. Dessinez de petites marques sur
cette ligne aux endroits où les échantillons seront appliqués. Ces marques doivent être
situées à au moins 5 mm des extrémités de la plaque, et espacées d’au moins 3 mm les
unes des autres.

Les échantillons (dissous dans un petit volume de solvant volatil tel que le
dichlorométhane ) sont ensuite appliqués sur la plaque à l’aide d’un petit tube capil-
laire. On plonge le tube capillaire dans la solution d’échantillon, le tube se rempli par
capillarité (1 à 2 secondes). Une fois le tube rempli, on le met en contact avec la plaque à
l’endroit approprié sur la ligne. Le gel de silice attirera le liquide à l’extérieur du tube et
vous observerez la formation d’une petite tache sur la plaque. Vous n’avez pas besoin
d’appliquer une grande quantité d’échantillon; les plus petites taches d’échan- Figure CCM.3:
tillon produisent de meilleurs résultats. Avant de passer à l’étape suivante, vous Préparation d’une
devriez prévoir suffisamment de temps pour laisser le solvant s’évaporer de la plaque plaque de CCM

(environ 30 secondes). La tache disparaît au fur et à mesure que le solvant s’évapore.

La phase mobile (ou éluant) (appelé un système de solvant) doit être préparée quelques minutes avant de déposer
l’échantillon sur la plaque. Versez le solvant dans le récipient d’élution et fermez le couvercle. Seule une petite
quantité de solvant est nécessaire; il ne devrait pas occuper un volume de plus de 1 cm de profond dans le récipient
(idéalement 5 mm). Attendez une minute ou deux pour permettre l’évaporation d’un peu de solvant et ainsi
remplir le récipient de vapeur. La plaque peut ensuite être placée dans le récipient et éluée.

Lorsque vous placez la plaque dans le récipient d’élu-

tion (réservoir), la couche de silice devrait être dos à la
paroi du récipient, comme le montre la Figure CCM.4.
Il est important que le niveau du solvant se situe sous
la ligne qui indique la position de(s) tache(s) d’échan-
tillon sur la silice. Si le niveau du solvant est trop haut,
l’échantillon se dissoudra dans le liquide et gâchera la
plaque. Une fois la plaque dans le récipient, placez le
couvercle pour éviter l’évaporation du solvant. Laissez
le solvant migrer le long de la plaque (élution) jusqu’à
ce que le front de solvant ait presque atteint le haut de

Figure CCM.4: Élution d’une plaque de CCM la plaque (environ 5 mm du haut). Retirez la plaque
du récipient, tracez une ligne ou le solvant s’est arrêté et laissez le solvant s’évaporer (cela ne prend généralement

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 Chromatographie sur Couche Mince

que 30 secondes). Une fois la plaque sèche, on peut visualiser les taches.

La position des composés sur la plaque est déterminée par la visualisation et le développement. Généralement,
on visualise une plaque de CCM en la plaçant sous la lumière UV. Le gel de silice devient alors fluorescent et des
taches foncées apparaissent sur la plaque. Tracez légèrement les contours des taches à l’aide d’un crayon.

Après la visualisation, on peut développer la plaque à l’aide d’un réactif chimique ou d’un colorant (aussi appelé
un révélateur). Un seul type de colorant peut être appliqué sur chaque plaque. Étant donné que le développement
(coloration) modifie la composition chimique de chaque tache, il est important de visualiser la plaque à l’aide de
la lumière UV avant de la développer.

Plusieurs solutions de visualisation peuvent être utilisées. Pour visualiser un plaque de CCM, il faut la tremper
pendant 1-2 secondes, puis enlever l’excès de solution en appuyant la base de la plaque de CCM sur un essuie-tout
(ne pas essuyer la silice!). Pour certains révélateurs, il faut chauffer pour accélérer la réaction: on fait générale-
ment ceci en placant la plaque de CCM sur une plaque chauffante.

Le déplacement des composés le long d’une plaque de CCM est décrit par la valeur de R𝑓 .
Celle-ci est définie comme le déplacement d’un composé (d1 ) divisé par le déplacement
du front de solvant (d𝑠 ), comme le montre la Figure CCM.5. La valeur de R𝑓 mesure
la polarité de chaque composé (tache). Les molécules non polaires se déplacent plus
rapidement au travers du gel de silice et possèdent donc des valeurs de R𝑓 plus élevées.
Ces taches apparaissent près du haut de la plaque de CCM. Les molécules polaires se
déplacent lentement au travers du gel de silice et apparaissent dans le bas de la plaque
de CCM. Ces composés ont de faibles valeurs de R𝑓 .

Lorsqu’on utilise la CCM pour effectuer le suivi d’une réaction ou pour démontrer la
Figure CCM.5:
pureté d’un échantillon, on ajoute généralement un composé de référence sur la plaque.
Détermination des
Pour le suivi d’une réaction, ce composé de référence est souvent un des réactifs utilisés valeurs de R𝑓 en
𝑑1
𝑑𝑠
dans la réaction. Les plaques de CCM sont éluées à intervalles réguliers au cours de tant que
la réaction, qui est considérée comme étant terminée lorsque cette tache disparaît du mélange réactionnel. Le
système de solvant doit être choisi de façon à ce que la valeur de R𝑓 du composé de référence se situe approxima-
tivement entre 0,5 et 0,6. De cette façon, les composés du mélange peuvent être visualisés comme étant plus ou
moins polaires que le composé de référence.

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 Chromatographie sur Couche Mince

Trois bandes doivent être présentes sur une plaque CCM (NI PLUS NI MOINS).
Généralement, la première contient l’échantillon de référence et la troisième contient
l’échantillon à analyser. La tache du milieu (appelé point combiné) contient un mélange
de l’échantillon de référence et de l’échantillon à analyser. Ce mélange permet de dis-
tinguer des composés qui possèdent des valeurs de R𝑓 très semblables. Pour créer un
point combiné, il suffit d’appliquer une tache de référence, laissez le solvant s’évaporer
puis appliquez une tache de mélange réactionnel par dessus. Il est important d’appliquer
Figure CCM.6: l’échantillon dans la zone du point combiné en dernier.
Bandes de
référence, d’échan-
tillon et de point
combiné

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 Chromatographie sur Couche Mince

Une analyse adéquate par CCM nécessite des échantillons de référence afin d’être en mesure de comparer di-
rectement les valeurs de R𝑓 . Lorsque le déplacement des substances est très semblable, le point combiné permet
de comparer des taches rapprochées. Vous devez toujours inclure le point combiné. N’utilisez pas plus de trois
bandes sur une plaque de CCM. Dans votre rapport de laboratoire, dessinez vos plaques de CCM comme l’indique
la figure suivante. N’apportez pas vos plaques de CCM à la maison.

Figure CCM.7: Bandes de référence, d’échantillon et

de point combiné

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Partie expérimentale

Partie A : Détermination des composés d’une solution inconnue à l’aide de la CCM

1. Ajoutez environ 5 mL (pompes réglées pour distribuer 5 mL) d’un mélange 2:8 d’acétate d’éthyle (EtOAc) et
d’hexane dans votre récipient d’élution, puis placez le couvercle sur le récipient.

2. Préparez deux plaques de CCM en traçant doucement une ligne horizontale au crayon à environ 1 cm du bas
des plaques (assurez-vous de ne pas toucher à la silice avec vos doigts). Tracez trois marques équidistantes
sur cette ligne. Les bandes extérieures devraient être situées à au moins 5 mm des bords. Assurez-vous de
noter ce qui sera déposé dans chaque bande pour les identifier.

Figure CCM.8: Préparation de la

plaque CCM

3. Demandez à votre démonstrateur un échantillon inconnu. Notez le numéro d’identification de votre

inconnu dans votre rapport de laboratoire.

4. Dans un petit tube à essai, dissolvez quelques cristaux de votre échantillon dans 1 à 2 mL de dichlorométhane.
Assurez-vous bien étiqueter votre échantillon.

5. Sur chaque plaque préparée à l’étape 2, déposez une goutte de cette solution dans la bande d’échantillon et
dans la bande de point combiné. Pour appliquer une tache, plongez un capillaire dans la solution puis placez
l’extrémité du capillaire sur la plaque de CCM sur la marque appropriée. Vous verrez la solution s’étendre
sur la plaque en une petite tache (environ 2 mm de large). Attendez quelques secondes pour que le solvant
s’évapore. Appliquer de PETITES quantités sur la plaque. De petites taches produisent de meilleurs
résultats.

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 Chromatographie sur Couche Mince

Figure CCM.9

6. Mettez environ 1 mL de la solution de référence de benzophénone dans un autre tube à essai. Appliquez
cette solution d’échantillon sur UNE SEULE des plaques préparées à l’étape 2, dans la bande de référence et
dans la bande de point combiné. Assurez-vous d’appliquer la solution dans la bande de point combiné en
dernier. Utilisez un nouveau capillaire pour chaque échantillon.

Figure CCM.10

7. Mettez environ 1 mL de la solution de référence de biphényle dans un autre tube à essai. Appliquez cette
solution d’échantillon sur la DEUXIEME plaque préparée à l’étape 2, dans la bande de référence et la bande
de point combiné. Ainsi vous avez une plaque CCM pour chaque référence.

8. Placez soigneusement les plaques de CCM dans le récipient d’élution, en vous assurant que la ligne de crayon
se situe au-dessus du niveau du solvant. Assurez-vous que la couche de silice est dirigée vers le centre du
récipient. Placez le couvercle sur le récipient d’élution. Laissez le solvant éluer jusqu’à ce que le front de
solvant soit à environ 1 cm du haut de la plaque. (3 à 5 min.)

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9. Retirez les plaques du récipient et indiquez la ligne d’arrivée du solvant à l’aide d’un crayon. Après avoir
laissé le solvant s’évaporer de la plaque (30 secondes), visualisez votre plaque de CCM en la plaçant sous une
lampe UV. (NE JAMAIS REGARDER DIRECTEMENT UNE LAMPE UV). Encerclez délicatement les
taches visibles à l’aide d’un crayon. Si vous avez votre téléphone, nous pouvez aussi prendre une photo de
votre plaque de CCM pendant qu’elle est sous cette lampe. Mesurez la valeur de R𝑓 de chaque tache sur la
plaque (n’oubliez pas de mesurer le centre de chaque tache) et dessinez une réplique exacte de votre plaque
de CCM dans votre rapport de laboratoire. À l’aide des valeurs de R𝑓 , identifiez les composés présents dans
votre mélange.

Partie B : Effet du solvant sur la CCM.

1. Videz le solvant de votre récipient d’élution dans le contenant à déchets de solvants. Ajoutez environ 5 mL
d’acétate d’éthyle dans votre récipient d’élution, puis placez le couvercle sur le récipient.

2. Préparez deux nouvelles plaques de CCM, en utilisant le protocole décrit ci-dessus (partie A, étapes 2 à 7).

3. Éluez les plaques dans le récipient contenant de l’EtOAc comme éluant. Visualisez vos plaques de CCM à
l’aide de la lumière UV, puis marquez les taches à l’aide d’un crayon. Dessinez une réplique de vos plaques
de CCM dans votre rapport delaboratoire. Assurez-vous de noter la valeur de R𝑓 de chaque composé dans
la section discussion de votre rapport de laboratoire.

4. Videz le solvant de votre récipient d’élution dans le contenant à déchets de solvants. Ajoutez environ 5 mL
d’hexane à votre récipient d’élution, puis placez le couvercle sur le récipient.

5. Préparez deux nouvelles plaques de CCM, en utilisant le protocole décrit ci-dessus (partie A, étapes 2 à 7).

6. Éluez ces plaques dans le récipient contenant de l’hexane comme éluant. Visualisez vos plaques de CCM à
l’aide de la lumière UV, puis marquez les taches à l’aide d’un crayon. Dessinez une réplique de vos plaques
de CCM dans votre rapport de laboratoire et étiquetez-les. Assurez-vous de noter la valeur de R𝑓 de chaque
composé dans la section discussion de votre rapport de laboratoire.

7. Décrivez les effets de chaque système de solvant sur les valeurs de R𝑓 des composés, puis décrivez l’aspect
de votre plaque en tenant compte de la polarité du solvant utilisé.

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Partie C : Séparation et détermination d’une solution inconnue

1. Votre démonstrateur vous donnera 1 mL d’un mélange inconnu dans un bécher propre de 50 mL (vous devez
donner le bécher à votre démonstrateur).

2. En utilisant un mélange 9 :1 d’hexane et d’acétate d’éthyle, identifiez chaque composé de votre mélange en
utilisant comme références : o-bromonitrobenzène, m-bromonitrobenzène, and p-bromonitrobenzène.

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 Nom:
Feuille de Rapport:
TA: Date: Chromatographie sur Couche Mince

Questions

1. Pourquoi est-il important d’appliquer l’échantillon dans la zone du point combiné en dernier ?

2. Quel effet a l’augmentation de la polarité sur une CCM?

3. Un étudiant suit l’avancement d’une réaction par CCM. La réaction transforme le compose A en B. Le
compose A est utilisé comme référence. Dans le système de solvant utilisé les valeurs R𝑓 sont: R𝑓,𝐴 =
0.45; R𝑓,𝐵 = 0.68

a. Dessinez un schéma de la plaque CCM au début de la réaction.

b. Dessinez un schéma de la plaque CCM lorsque la réaction est à 50% (50% de A est converti en
B).

c. Dessinez un schéma de la plaque CCM à la fin de la réaction (Toutes les molécules de A ont
été converties en B).

d. Pourquoi est-il préférable d’utiliser A plutôt que B comme référence?

4. Un étudiant suit l’avancement d’une réaction par CCM impliquant les composes C et D. Dans le système
de solvant utilisé les valeurs R𝑓 sont: R𝑓,𝐶 = 0.43; R𝑓,𝐷 = 0.40.

a. Dessinez un schéma de la plaque CCM au début de la réaction.

b. Dessinez un schéma de la plaque CCM lorsque la réaction est à 50% (50% de C est converti en
D).

c. Dessinez un schéma de la plaque CCM à la fin de la réaction (Toutes les molécules de C ont
été converties en D).

d. Pourquoi est-il important d’utiliser un point combiné?

5. Pour chacun des groupes de composés suivant :

a. Dessinez la molécule

b. Classez-les par ordre croissant de polarité

c. Expliquer votre raisonnement pour la partie b.

i. Alcool benzylique, benzaldéhyde, acétate de benzyle.

ii. Aniline, N,N-diméthylaniline, naphtalène.

iii. Benzophénone, biphényle, acide benzoïque

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 Chromatographie sur Couche Mince Feuille de Rapport

Remarques à propos du rapport

Reportez-vous aux directives au début du manuel de laboratoire à propos de la préparation des rapports.
Veuillez noter que vous n’avez pas besoin de présenter un tableau des réactifs dans ce rapport.
Vous devez présenter des dessins précis de toutes vos plaques de CCM, comme indique dans les explication
ci-dessus. N’emportez pas vos plaques de CCM à la maison. Dans votre discussion, interprétez les résultats
de chaque plaque de CCM. Par exemple, expliquez de quelle façon vous avez identifié chaque tache et de
quelle façon les valeurs de R𝑓 sont liées aux polarités relatives des composés.

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