I.

INTRODUCTION :
la biotechnologie est une science du renouveau , elle utilise différentes conception pour un avenir
meilleur dans plusieurs discipline . Dans notre cas présent aujourd’hui , elle utilise des micro-
organismes pour la fabrication de biomasse et les productions industrielles (agro-alimentaire et
boisson ), développement et production de médicament ,produits chimique et plastique d’origine
biologique par une unité technologique appelle : bioréacteur ou fermenteur

Ce qui nous pousse à réfléchir sur les questions suivantes

qu’entend –on par bioréacteur ?

En quoi consiste la notion de cet appareil biotechnologique ou encore quel est sont importances
dans l’évolution du monde actuel ?

Dans quels bute il est utilisée

DEFINITION D’UN BIOREACTEUR :

En termes simples , un bioréacteur est un récipient dans lequel se produits des procédés
biologiques.il sont équipés soit dune commande manuelle simple ,soit d’une commande
entièrement automatique par automate .

Autrement dis,

Un bioréacteur est une unité technologique dans lequel la multiplication des micro-organismes est
favorisée à des fins industrielles pour la production de biomasse ou d’un métabolite ou
bioconversion d’une molécule d’intérêt.

• les bioréacteurs qui utilisent les microorganismes sont appelés fermenteur

• les bioréacteurs pour la culture des cellules animales ou végétales appelés cytoculteurs.

• Les bioréacteurs sont des dispositifs de culture de micro-organismes formés d'un récipient
renfermant un milieu liquide contenant les éléments nutritifs nécessaire à la croissance de la
biomasse microbienne.

Les bioréacteurs permettent la fabrication de nombreux produits : bière , yaourt , additifs

alimentaires, vaccin, antibiotiques ،anticorps, vitamine, acide aminé.
II. DEVELOPPEMENT :
STRUCTURE D’UN BIOREACTEUR EN GENERALE :

Un fermenteur, encore appelé "bioréacteur" ou propagateur est une enceinte généralement en

Verre ou en inox dans laquelle on procède à la culture de micro-organismes ou de cellules.

Le but de ces cultures peut être:

- de produire en quantité tels micro-organismes ou telle souche cellulaire (on parle de

"Biomasse"), par exemple production de levures.

- de produire et récupérer en quantité un métabolite que ces micro-organismes ou ces cellules

Contiennent ou relèguent dans le milieu, par exemple production d'acides organiques,

D’hormones (à partir de micro-organismes modifiés génétiquement) etc.

La fonction principale d'un bioréacteur est d'assurer un environnement contrôlé qui permet

Une croissance et une production optimale des microorganismes ou des cellules en quantités
importantes.

Il est compose de :

• l’enceinte de culture, cuve ou réacteur, son volume quelques litre jusqu’à a plusieurs mètre cubes

• un système de contrôle-commande permettant d’enregistrer et piloter tous les paramètres de

fonctionnement : il est en effet essentiel de maintenir dans le réacteur des conditions de culture
optimale, spécifiques pour les cellules ou les microorganismes considérés exemple : la température ,
le ph , le taux d’oxygène dissous , le potentiel redox ,la nature et les débits de gaz à entrée et ou
sortie

• un bouchon pour ne pas laisser passer l’air du milieu intérieur et extérieur

• une seringue avec cathéter pour l’injection une solution

• un système d’agitation comportant une ou plusieurs turbines Selon leur taille et assurant le
mélange du fluide et les transferts de chaleur et les matières au sein de la cuve.

• capteurs pour la mesure de la température et ph, la concentration en oxygène

• système d’aération : pour assurer l’oxygénation du milieu de culture

III. TECHNIQUES DE CULTURES EN BIOREACTEUR :

III-1 CULTURE EN DISCONTINUE(CULTURE EN BATCH =CULTURE EN MILIEU NON RENOUVELE)

-DEFINITION ET DESCRIPTION
 1-Entrée d’air muni d’un filtre

2-enveloppe de refroidissement

3-Entrée d’eau de refroidissement

4-moteur pour agitation

5-manometre (pour la vérification de la pression inter)

6-sortie de l’eau de refroidissement

7-poles pour agitation

8-Tuyau de vidange

La culture en batch est une culture discontinue : après avoir rempli le fermenteur de culture
et l’avoir stérilisé, on introduit l’inoculum et on laisse se dérouler la fermentation. Durant
tout le temps de la culture on n’introduit pas de milieu de culture (système clos).Tout au
plus un réel neutralisation (en quantité faible ) ou encore un produit anti mousse . la
concentration en biomasse augmente selon la courbe de croissance microbienne. Dans le
même temps le substrat est consommé par le microorganisme et le produit recherché
apparait. La concentration (P) augmente. En fin de culture on vide le fermenteur et on
extrait le produit désiré

-Caractéristiques du milieu de culture :

- IL doit apporter au minimum une source d’énergie ,de carbone , d’azote et d’ions minéraux

- IL est souvent riche en glucose ,en pectines ,en phosphates ,en sulfates ,en magnésium ,en
vitamines et en oligoélément .

-Condition d’une bonne culture batch en bioreacteur :-

-nécessite une bonne agitation de la culture

-une régulation de la température par refroidissement car les réactions métaboliques lors
de la croissance sont généralement exothermique

-une régulation du ph car les réactions métabolique microbiennes peuvent acidifier ou

alcaliniser le milieu

-une régulation de la pression partielle en O2 par insufflation d’air stérile

III-2 CULTURE EN SEMI-CONTINU (culture en Fed-batch)

DEFINITION :
 Culture dite discontinue alimentée, le Fed-Batch est caractérisé par un volume variable. La
fermentation se fait dans un premier temps sous forme d’un batch normal dans un volume
réduit (pied de cuve). Du milieu frais est ensuite ajouté pour maintenir les cellules dans l’état
souhaité (phase exponentielle, phase stationnaire). Cette stratégie est très utile pour les cas
de répression de croissance ou de production du au substrat (ou toxicité de ce dernier). Le
Fed peut être démarré à plusieurs moments, en fonction du type de production envisagée
(biomasse ou produit du métabolisme secondaire). Si le but est de maintenir les cellules
dans leur phase exponentielle, on attend généralement que le substrat devienne limitant
avant d’en introduire du frais.

-Le prince de cette culture est base sur :

-le processus initial est similaire à la culture par lots, tous les substrats sont ajoutés au début
de la fermentation

-le bouillon de culture n’est généralement récolté qu’a la fin de la période d’exploitation, soit
entièrement soit partiellement

-dans la culture Fed-batch, un substrat est ajouté par incréments au fur et a mesure que la
fermentation progresse. Ces substrats sont ajoutés en petites concentrations lors de la
phase de production.

-en cours d’exploitation, il y a un ou plusieurs flux d’alimentation mais pas d’effluent pour
contrôler le processus d’alimentation ,de nombreux paramètres indirects liés au
métabolisme d’un substrat sont mesurés car il n’est pas possible de mesurer la
concentration du substrat directement et continu.
III-3CULTURE CONTINU OU CULTURE EN MILIEU RENOUVELE

Culture du microorganisme en vase non clos de façon à maintenir en permanence en phase

exponentielle grâce à :

- une addition régulière de milieu neuf stérile pour réapprovisionner en nutriments et

maintenir le pH

- un soutirage d’une quantité équivalente de milieu de culture permettant ainsi l’élimination

régulière des déchets.

On distingue deux principales matériels de culture :

-TURBIDOSTAT

-CHEMOSTAT ou BACTOGENE

III-3.1 TURBIDOSTAT :

1- réservoir de milieu stérile

2-Valve de contrôle du flux de milieu neuf

3-Sortie de milieu de culture

4-Cellule photoélectrique reliée a la vanne d’entre de milieu neuf

5-source lumineuse

Cuve de Fermentation

PRINCE DE FONCTIONNEMENT DU TURBIDOSTAT

• Un turbidostat est un dispositif de culture en continu. La concentration du milieu de

culture est maintenue constante par un contrôle turbidimétrie.

• Si le trouble tend à trop augmenter il y a une augmentation d’apport de milieu neuf qui
dilue et ramène le trouble à sa valeur initiale.

• Si le trouble tend à trop diminuer il y a diminution d’apport de milieu neuf jusqu’à ce que
la croissance ait permis de retrouver la valeur initiale

III-3.2 CHEMOSTAT ou BACTOGENE :

 Dans une culture continue en chemostat ,le bioréacteur est alimenté en continu en milieu
neuf et le milieu usagé ,y compris la biomasse est soutiré au même débit . le procédé de
culture en chémostat a pour objectif de maintenir tous les paramètres a un niveau constant,
y compris le taux de croissance et d’épuisement de la culture .

-MOTOR=moteur

-Air in = entrée d’air

-from pump medium reservoir =pompe de reservoir moyenne

-Air out =sortie d’air

-pump to effuent reservoir =pompe au reservoir d’efluent

PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT DU CHEMOSTAT :

• Introduction de milieu neuf stérile dans la chambre de culture à la même vitesse que le
milieu contenant les micro-organismes est éliminé (c’est le volume de milieu frais qui chasse
par trop plein le volume de culture microbienne).

• Conséquences :

– stabilité de concentration en substances nutritives militantes

– microorganismes soumis à une bonne aération, à une vigoureuse agitation et ayant

toujours à leur

Disposition les éléments nutritifs dont ils ont besoin.

IV LES PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT DE CHAQUE

TECHNIQUE DE CULTURE :
1-La culture en Batch :

Principe : Culture en milieu clos dans une cuve stérilisée (taille variable) , remplie d’un
milieu adéquat (stérile) et ensemencée avec les microorganismes appropriés à la production .
Elle permet la croissance du microorganisme jusqu’à épuisement des substances nutritives .

- Après avoir placé tous les constituants de la culture dans le fermenteurs , le système
est fermé .
- Pendant le temps de la réaction » » » pas d’ajout de nutriments , ni de sortie de produit
2. La culture en milieu renouvelé :
- Principe: Culture des microorganismes en vase non clos (ouvert) de façon à maintenir
en permanence une phase exponentielle grâce à :
- - Une addition régulière de milieu neuf stérile pour réapprovisionner en nutriments
et maintenir le pH .
- - Un soutirage d’une quantité équivalente de milieu de culture permettant ainsi
l'élimination régulière des déchets .
- - Le produit et soutiré tout long de la production » » » ajout et soutirage se fait au
même débit .

3-La culture en fed-batch :

- Il s’agit d’une culture discontinue sans soutirage , alimentée en continu par un milieu
nutritif .

- Elle se distingue de la culture en Turbidostat /Chemostat par le fait que le volume du

fermenteur varie continuellement .

- La culture en fed‐batch est très utilisée dans l’industrie lorsque l’on veut optimiser
l’apport d’un nutriment susceptible d’avoir un effet retardateur sur la croissance .

- La réaction débute avec un petite volume » » » le milieu de culture est rajouté au fur à
mesure jusqu’à une certain limite .

Exemple de production dans un bioréacteur :

- Dans le cas de culture en fed-batch :

- Le Glucose è Dès que les besoins primordiaux des cellules sont remplis et si il ya
toujours du glucose = elles vont quand même continuer à faire fonctionner leur
métabolisme et produire du lactate à partir du glucose en excès .
- Le lactate est toxique pour la cellule .

V-les conditions pour un bon fonctionnement du

bioreacteur :
1-La performance de tout bioréacteur dépend de nombreuse fonction, on distingue :

- les concentrations en biomasse

-l’apport de nutriments

-les conditions stériles

- Les retraits du produit

- les agitations efficaces

-l’inhibition du produit

L’évacuation de la chaleur

-l’aération et le métabolisme
 2-les conditions pour une bonne culture de cellule animale :

A : la stérilisation de bioréacteur :

Est particulièrement important pour les cultures de Cellules souches et cellules animales
de bien évaluer le maintien de la stérilité dans bioréacteur

B: agitation douce et efficace :

a) Douce : pour minimiser les forces de cisaillement

b) Efficace : pour obtenir un bon transfert de matière et de gaz

C : faible volume de milieu :

Pour l’ optimisation de culture de cellule animale et cellule souche il est préférable de

choisir un système de volume aussi faible parce que le milieu de croissance et de
production sont particulièrement onéreux

D : changement de volume rapide et peu onéreux

E: Ergonomie : Malgré la présence de sas dans la zone stérile l’humain reste la source de
contamination principale

F : weekends libres :

La fonction INTERGRATOR de MASSFLOW permet de connaître les quantités de gaz

ajoutées au cours de temps durant le weekend .

G : aération efficace : l’oxygène est une paramètre parfois difficile à contrôler et il

dépend de la viscosité et la composition de milieu

H : la source de carbone : est une source primordiale

I :Temperature

VI- LES AVANTAGE ET INCONVENIENT :

VI-1 AVANTAGE ET INCONVENINT DE LA CULTURE DISCONTINUE :

AVANTAGE INCONVENIENT
-PAS DE PERTE DE MICROORGANISME
DURANT LA CULTURE
-POSSIBILITE DE RECUEILLE DES
PRODUITS SYNTHETISES A TOUT MOMENT
Y COMPRIS LA PHASE DE DECLIN
-PEU DE RISQUE DE CONTAMINATION DE
LA CULTURE
VI-2 AVANTAGE ET INCONVENIENT DE LA CULTURE CONTINUE :
AVANTAGE
Cultures de longue durées ( production
d'anticorps 3-4 mois ) , peu de temps
morts
-Les coûts opérationnels et de main
d'oeuvre sont faibles ( car il faut seulement -De grandes réserves de milieu sont
prendre environ 1 échantillon par jour et
un peu d'étapes de nettoyage et de
stérilisation )
-Il est possible de maintenir la culture à un
taux de croissance constant mais
également d'avoir un rendement , une
productivité et un facteur de conversion
constants
-A productivité équivalente , le volume est
plus faible que pour les procédés baths
-Possibilité d'avoir une productivité très
élevée
-Le milieu est changé continuellement,
éliminant le risque d'accumulation de
composés toxiques pour la cellule
-EXISTENCE D’UNE PHASE DE LATENCE
IMPROPRE A LA PRODUCTION
-PAS DE MAINTIEN DE LA PHASE
EXPONENTIELLE :DONC BIOMASSE ET
PRODUIT RECUEILLIS EN MASSE
-DIFFICULTE DE STERILISER DE GRANDS
VOLUMES DE MILIEU
-PREPARATION LONGUE
INCONVENIENT
-Équipement très cher, car il faut une
installation fiable de haute qualité ( pas
seulement le réacteur mais toute
l'infrastructure )
nécessaires et ce dernier a besoin d'être
continuellement stérilisés. De plus le
produit doit être isolé et purifié en continu
-Risque de contamination important ( à
cause de la longue durée du procédé )
-Des mutations peuvent apparaître ( risque
d'avoir des non producteurs ) à cause de la
longue durée de fermentation
-Instabilité des plasmides -La conversion
totale du substrat nécessite souvent
l'utilisation d'un système " multi - stage «,
l'immobilisation des cellules ou encore
leur recyclage ( particulièrement utile pour
cellules animales car la densité maximale
est relativement faible )
-Le produit obtenu n'est pas très
concentré , ce qui implique des étapes
supplémentaires lors de la purification
 -La validation d'un tel système est très
compliquée .

VI-3 AVANTAGE ET INCONVENIENT D’UNE CULTURE EN FED-BATCH :

AVANTAGE
-Coûts opérationnels inférieurs à ceux du
batch mais supérieurs à ceux d’une
culture continue
• Il est possible de combiner 2 ou plus de
réacteurs pour obtenir une culture plus ou
moins continue
• Taux de croissance et de production plus stratégie de feeding.
élevée qu’en batch, 1 Fed-batch est plus
ou moins égal à 2 batch
• Moins de risque d’inhibition due au
substrat, de toxicité d’un produit accumulé
ou de stress osmotique
INCONVENIENT
-Coûts d’installation supérieurs à ceux
d’un batch
• Grande quantité de milieu nécessaire ce
qui implique sa stérilisation en continu
• La souche utilisée doit être totalement
caractérisée pour pouvoir développer une
• Des capteurs sophistiqués et un
ordinateur sont nécessaires pour contrôler
le feed et maximiser la productivité

• Il est possible de séparer les phases de

croissance et de production, des
précurseurs peuvent être ajoutés

• Moins de risque de limitations due à

l’oxygène (taux de croissance = OUR
maintenenu en dessous de l’OTR)
 VII –CONCLUSION :
Ainsi pour clôturer notre travaille ,nous nous devons de préciser que la Biotechnologie
microbienne est une science du renouveau dans la mesure ou elle pratique différentes
procèdes a des fins bénéfiques pour notre nation ,ces dans cette mesure que l’étude d’un
bioréacteur a sons siens reste inévitable et surtout la contribution a faire évoluer le procéder
des petits bioréacteurs en grands bioréacteurs sont très recherchés dans la mesure ou elle est
responsable en partie des production en industrie agro-alimentaire a des fin de fermentation ;
dans le développement et la production de médicament et dans la production chimique et
plastiques d’origine biologique ainsi elle contribue a la réduction de la pollution .