Bioréacteurs

GEE 2eme année

Pr. CHEBLI Bouchra

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

Bioréacteurs (B. CHEBLI)
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
Figure : Scale-up bioprocess development set-up for microbial product
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
from 500 ml; shake flask, 1 L, 9 L, 15 L, and 70 L to 300 L stirred bioreactors.
La fermentation constitue le processus biotechnologique le plus ancien
qui permet de transformer une substance organique (carbohydrates,
hydrocarbures…) sous l’influence d’un ferment (enzymes, cellules)

En général, dans un processus de fermentation on cultive de grandes

quantités de microorganismes dans un environnement rigoureusement
contrôlé et à partir de souches sélectionnées ou dont on a modifié les
gènes par les techniques de manipulation génétiques

OBJECTIFS

Obtention de fortes Obtention de sous-

concentrations cellulaires produits de réaction
(Levures de boulangerie, (Alcool, Antibiotiques,
ferments lactiques…) Acides aminés…)
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
La cellule

a- Les Micro-organismes
• Les bactéries : Production de substances à haute valeur
ajoutée (AA, Vitamines…) polysacchrides (Xanthane :
Xanthomonas compestris, Dextrane : Leuconostoc
mesenteroïdes) Starter, environnement…
• Les Levures : Alcool, P.O.U., Lipides…
• Actinomycètes et Champignons : Enzymes, Acides
organiques, Antibiotiques…
• Les Algues : P.O.U., Enzymes (SuperOxide Dismutase),
Colorants, Lipides (phospholipides, A. arachidonique
précurseur des prostaglandines), -carotène…

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b- Les cellules végétales
• La biotechnologie végétale s’intéresse essentiellement à
l’AUGMENTATION, d’une part, DE LA RESISTANCE DES PLANTES
pour obtenir une production supérieure et de la VALEUR NUTRITIVE
d’autre part.

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c- La cellule animale
Production de vaccin (poliomyélite) , Interférons…
• Anticorps monoclonaux.

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Avantages des principaux procédés microbiologiques

•Les procédés microbiologiques sont en COMPETITION avec les

procédés chimiques.

•Le choix de la synthèse chimique ou de la biosynthèse pour la

production d’une substance à usage industriel est essentiellement
dicté par des considérations de nature ECONOMIQUE.

•Le coût de la MATIERE PREMIERE est très important.

•Dans la SYNTHESE CHIMIQUE, le PETROLE ou ses DERIVES

constituent la matière première.

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L’efficacité du processus doit être prise en
considération:

•Proportion du substrat convertie en produit final (YFX/S ou

YFP/S)

•Durée de la synthèse (Productivité « r »)

•Coût de récupération du produit à partir du milieu de

fermentation ou des réactifs de synthèse artificielle.

•Il convient aussi de tenir compte du coût d’élimination des

résidus ou des déchets du processus de fabrication.

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Les micro-organismes qui synthétisent des produits ou qui
effectuent des réactions utiles pour l’homme sont au nombre de
quelques centaines d’espèces sur plus de cent mille connues dans la
nature.

Ces espèces microbiennes sont réparties dans quatre groupes :

1°/ Les Bactéries,

2°/ Les Actinomycètes (bactéries filamenteuses vivant dans
le sol)
3°/ Les Levures,
4°/ Les Moisissures.

En plus du fait qu’ils sont capables d’utiliser de la MATIERE PREMIERE

extrêmement large, ces micro-organismes possèdent des caractéristiques qui
les rendent ECONOMIQUEMENT RENTABLE pour des applications
industrielles.

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L’avantage des méthodes biologique c’est qu’elles se
déroulent dans des conditions généralement douces de
TEMPERATURE, de PRESSION et d’ACIDITE ce qui
représente une économie d’énergie et de suppression de
neutralisation et de recyclage.

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Applications
1°/ Production d’enzymes en exploitant leurs activités catalytiques
Exemples : Electrodes à enzymes pour les dosages, Protéases (Détergents)
pour faciliter la dégradation de matières organiques

2°/ Utilisation de cellules entières (souvent immobilisées).

Dans ce cas ces outils sont surtout utilisés dans le domaine de
BIOCONVERSIONS.

Les bioconversions consistent dans la transformation par

des cellules microbiennes d’un métabolite en un composé de
structure voisine.

Les micro-organismes peuvent ainsi catalyser seulement quelques étapes d’un

processus de synthèse complexe et essentiellement chimique

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A côté de ces deux possibilités, on doit ajouter et insister sur l’utilisation
des CELLULES LIBRES cultivées en réacteurs

En effet, l’utilisation des cellules libres est basée sur une caractéristique
biologique fondamentale qui est la CROISSANCE CELLULAIRE qui lui
confère une énorme potentialité car elle en fait une réaction
AUTOCATALITIQUE (càd le taux de croissance est proportionnel à la
concentration cellulaire présente initialement) schématisée ainsi :

SUBSTRATS MICRO-ORGANISMES + PRODUITS

Dans la réaction schématisée ci-dessus apparaissent les trois raisons fondamentales justifiant
l’utilisation industrielle de la FERMENTATION

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A- ELIMINATION DE MATIERES POLLUANTES

a- Processus AEROBIE

Matières polluantes + OXYGENE BOUE ACTIVEES + CO2

b- Processus ANAEROBIE

Matières polluantes METHANOGENES + CO2 + CH4

Xéno Biotiques : Substances fabriquées par l’Homme et dont la nature n’a jamais
été en contact EXEMPLES : le DTT ½ vie est de 40 ans, les ORGANOCHLORES.
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 B- PRODUCTION DE MICRO-ORGANISMES (BIOMASSE)

Contrairement au cas précédent, c’est uniquement LA CROISSANCE

CELLULAIRE qu’il faut favoriser.

Matière Première + OXYGENE Micro-organismes + CO2 + H2O

Les micro-organismes produits servent généralement comme :

• FERMENTS (Starters) : Bactéries lactiques (Yaourt, Charcuteries, Fromage,
Choucroute…)

•PRODUCTION DE PROTEINE : P.O.U. Certains micro-organismes sont riches en

protéines (40 à 60%) ex : Methylophilus methylotrophus (Puteen)

PRODUCTION DE PRODUITS THERAPEUTIQUES OU PHARMACEUTIQUES (Génie

Génétique) : Hépatite B (Levures), Hormones de Croissance (E. coli)…

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 C- PRODUCTION DE METABOLITES

Les micro-organismes sont capables de fournir une grande variété de produits,

considérés par la législation comme NATURELS.

Ces métabolites peuvent appartenir à deux catégories :

A- Métabolites Primaires : ce sont des métabolites synthétisés au cours

de la croissance rapide (TROPHOPHASE) Ex : Acides aminés naturels,
Acide nucléiques, Vitamines…

B- Métabolites Secondaires : ce sont des métabolites synthétisés

pendant la phase de croissance très lente (IDIOPHASE) et qui ne sont
pas nécessaires à la croissance.
Ex : Antibiotiques, Généralement ce sont des molécules très complexes

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Bioréacteurs (B. CHEBLI)
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Biofilm

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Bien que le terme fermentation soit un abus de langage, car il concerne la
respiration anaérobie selon Pasteur, il est, par extension, utilisé par le monde
industriel pour désigner l’opération unitaire qui va permettre de réaliser les
cultures cellulaires et d’effectuer les réactions de bioconversion, qu’elles soient
aérobies ou anaérobies.

La fermentation est une étape d’un procédé industriel ; elle s’insère

dans un ensemble d’opérations unitaires qui aboutiront à la valorisation
de la biomasse et/ou de ses composantes et/ou à la valorisation des
produits de bioconversion

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Nous abordons ici la croissance cellulaire selon les types de micro-
organismes :

— croissance par division (par exemple, les bactéries) ;

— croissance par bourgeonnement (par exemple, les levures) ;
— croissance mycellienne (par exemple, les champignons).

Plusieurs modèles ont été décrits pour caractériser ces types de croissance.
Ainsi la réalisation de fermentations industrielles nécessite-t-elle des
étapes successives d’accroissement de la masse cellulaire afin de limiter la
durée de la phase de latence citée dans le modèle de Monod.

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 Calcul des réacteurs microbiologiques

Langage utilisé et définition

Bioreactor
• An apparatus (usually jacketed cylindrical SS vessel) for growing organisms such as
bacteria, viruses, or yeast that are used in the production of pharmaceuticals, antibodies,
or vaccines, or for the bioconversion of organic wastes
• Under optimum conditions of gas (air, oxygen, nitrogen, and carbon dioxide) flow rates,
temperature, pH, dissolved oxygen level, and agitation speed, the microorganisms or
cells will reproduce at a rapid rate

— Batch : terme anglo-saxon qui correspond à une opération dans un réacteur, ici la
fermentation.

— Batch alimenté ou semi-continu : opération qui consiste en l’ajout de matières solides ou

liquides dans le réacteur au cours de la fermentation. Ces ajouts sont ponctuels,
intermittents ou continus jusqu’au remplissage du volume utile du réacteur.

— Culture continue : technique par laquelle il est possible d’entretenir une population
cellulaire constante dans un réacteur continu en procédant à une alimentation continue en
milieu nutritif et au soutirage d’un volume équivalent d’un milieu épuisé contenant des
cellules et de jus de fermentation lorsque le moût est débarrassé des cellules.
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— Culture pure : population microbienne obtenue à partir d’un clone et génétiquement
homogène.

— Culture mixte : population microbienne hétérogène issue de plusieurs clones génétiquement

différents.

— Inoculum : tout ou partie d’une culture qui est utilisée pour ensemencer un milieu.

— Milieu de culture : mélange de composés chimiques minéraux et organiques, d’origine

naturelle ou synthétique, solubles ou insolubles, dispersés ou solubilisés dans un solvant (le
plus fréquemment l’eau), nécessaires à la croissance cellulaire, à la satisfaction
des besoins énergétiques et de bioconversion. Le pH est ajusté et régulé ou non au cours de
la fermentation. La teneur en matières sèches des milieux de culture est très variable selon
les procédés. Par analogie à la fermentation alcoolique, on parle de moût de fermentation
lorsque le milieu contient les microorganismes.

— Substrat : élément constitutif du milieu de culture assimilable par les cellules. À l’usage on
s’intéresse particulièrement aux sources de carbone et d’azote. Il a pour symbole S, et pour
unités g/L ou kg/m3. S représente le substrat présent initial S initial - S final
= S consommé.

— Volume utile : volume du réacteur occupé par le milieu de culture, dans les conditions de
fermentation, en tenant compte de l’agitation et de l’aération.

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 Terminology
— Clone-souche : population microbienne issue d’une seule cellule et génétiquement
homogène.
— Contaminant : individu et/ou population microbienne et/ou mycoplasmes non désirés
dans les cultures.
• Biofuel
– Solid, liquid or gaseous fuel derived from organic (relatively recently dead biological
matter) material and is distinguished from fossil fuels, which are derived from long dead
biological material.
They can be produced from any (biological) carbon source, with the most common source
being photosynthetic plants.

• Biodiesel (Fatty acid alkyl ester)

– Biofuel produced from vegetable oils (corn, cotton, rapeseed, soybean, palm, mustard),
restaurant waste oils, animal fats or algae
– A non-petroleum-based diesel fuel consisting of long chain alkyl (methyl, propyl or ethyl)
esters, made by transesterification of vegetable oil or animal fat (tallow), which can be
used (alone, or blended with conventional petrodiesel) in unmodified dieselengine vehicles
(resulting in better emissions in the form of
decreased particulates, CO, and hydrocarbons)
– 100 lbs of oil + 10 lbs of methanol –> 100 lbs of biodiesel + 10 lbs of glycerol

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• Bioethanol
– An alcohol made by fermenting sugars from biological materials (starch crops -
corn) or cellulosic biomass (trees, grasses)
– Can be used as vehicle fuel in its pure form or as a gasoline additive to
increase octane & improve vehicle emissions (CO2)

• E10
– Fuel that contains 10% ethanol, mixed with 90% gasoline

• E85
– A mixture of 85% ethanol and 15% gasoline. This will not work in most cars.

• B20
– A blend of 20% biodiesel and 80% petroleum diesel

• Biomass
– Biological material (C, H, O, N, alkali, alkaline earth, heavy
metals) derived from living, or recently living organisms (plant or
animal based)

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Yeast
• Unicellular fungus (more than 1000 species identified)
– Commonly used to leaven bread and ferment alcoholic beverages
– Most yeasts belong to the division Ascomycota
– A few yeasts (eg., Candida albicans) can cause infection in humans
– Saccharomyces cerevisiae (most commonly used yeast), was domesticated for
wine, bread, and beer production 2000+ yrs ago

• Yeast physiology can be either aerobic or facultatively anaerobic

(fermentative)
– There is no known anaerobic yeast

• In absence of O2, fermentative yeasts produce energy by converting sugars

into carbon dioxide and ethanol (alcohol)

• In brewing, ethanol is the desired product, while in baking, carbon dioxide

raises the bread and the ethanol evaporates

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Fermentation

• Conversion of carbohydrate (eg. sugar) into acid or alcohol by yeast or

bacteria

• It is used in brewing and wine making for the conversion of sugars to alcohol
(ethanol – CH3CH2OH)
– This process, followed by distillation, can be used to obtain pure ethanol
(bioethanol) for use as a transport biofuel

• It can also be viewed as the energy-yielding anaerobic metabolic breakdown

(respiration) of a nutrient molecule such as glucose, without net oxidation
(eg., in muscle cells)

• Fermentation typically refers to the fermentation of sugar to alcohol using

yeast, but other fermentation processes include making of yogurt, souring of
milk, rising of dough

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Types de bioréacteurs

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Introduction et rappels

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 Réacteurs agités mécaniquement
L’agitation doit assurer un bon transfert de matière et un bon
transfert de chaleur tout en préservant l’intégrité des cellules.

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Agitation mécanique :
agitateur rotatif

Couplé ou non à l’apport d’air comprimé.

L’agitateur rotatif améliore le transfert en oxygène en

faisant circuler et en divisant ("cassant") les bulles de
gaz introduites dans le bioréacteur.

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

Agitation mécanique et force de cisaillement

turbine à hélice
pales Débit axial marine
Débit radial
droites ou
incurvées Traumatisme + Traumatisme –
Cisaillement + Cisaillement – Pour les
Pour les
cellules
bactéries Efficacité transfert O2 + Efficacité transfert O2 -
Bioréacteurs (B. CHEBLI) fragiles
Fermenteurs airlift

Agitation pneumatique : Distribution

circulation d’air ou air lift d’air
comprimé

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

Agitation pneumatique et force de cisaillement

circulation d'air ou air-lift

- moins "traumatisante" pour

cellules très fragiles
- adaptée pour les processus
aérobies
- le gaz d'oxygénation à lui seul :
• crée la turbulence
• maintien des cellules en
suspension homogène
• assure le transfert de matière
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
Les mesures courantes effectuées sont les suivantes :
— vitesse d’agitation ;
— aération (c’est-à-dire volume d’air injecté dans le
réacteur par unité de temps) ;
— température ;
— pH ;
— pression ;
— détection de mousse ;
— oxygène dissous ;
— gaz carbonique dissous ;
— O2 dans la phase gazeuse en sortie du fermenteur ;
— CO2 dans la phase gazeuse en sortie du fermenteur ;
— masse.

Des mesures plus spécifiques peuvent être rencontrées :

— turbidimétrie ;
— boucle de filtration avec analyse en ligne-glucose-acides
organiques HPLC (High Pressure Liquid Chromatography,
chromatographie liquide haute pression) ;
— méthane hydrogène (méthanisation).
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Stérilisation Stérilité

L’utilisateur devra mettre en place des procédures de

stérilisation du fermenteur, des tuyauteries annexes
(sondes, filtres, etc.) et des fluides entrants (air, milieu de
culture, etc.), puis valider les conditions de stérilisation de
façon à calculer le risque de contamination.

La stérilisation peut s’effectuer par batch ou en continu, en

utilisant des échangeurs de chaleur avec maintien de la
température et du temps de séjour avant refroidissement.

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 Les méthodes les plus utilisées sont les stérilisations thermiques et
par filtration ; les stérilisations par agent chimique sont peu utilisées.

La stérilisation par filtration est plus adaptée pour l’air ou le gaz de
fermentation et les solutions de composés thermolabiles tels que
vitamines et enzymes ou les liquides peu chargés comme l’eau du milieu
de culture. Cette filtration ne permet pas d’éliminer les particules
virales et les bactériophages, qui peuvent être préjudiciables aux
cultures cellulaires et microbiennes.

Il est d’usage d’utiliser des filtres dont les pores sont calibrés à 0,2
mm pour assurer une stérilité microbienne des fluides.

 Les équipements actuels sont constitués de bougies en inox poreux ou

de cartouches filtrantes en polymère contenues dans un carter qui
permet de réaliser une stérilisation à la vapeur et un démontage aisé
pour en assurer le décolmatage et la régénération.

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 Principes de stérilisation
Les procédés de destruction des populations microbiennes ou virales
suivent dans la plupart des cas une loi cinétique de premier ordre qui tient
compte des paramètres suivants :

No : nombre de cellules initiales par millilitre ;

Nt : nombre de cellules tuées au temps t ;
Ns : nombre de cellules survivantes au temps t.

Le taux de mortalité est défini par :

K est la constante spécifique de mortalité par minute.

Si on intègre cette relation entre N à t = 0 et Ns au temps t, on
obtient :

: est le taux d’inactivation est le taux de survie

K augmente considérablement avec la température et peut être déterminé pour une

culture pure Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 EXPRESSION DE LA CROISSANCE AVEC
TERME DE DECES

r  µ. X  k . X
x d

D’après la loi d’ARRHENIUS

R=8.32J/mole°K Cte des

µ  A exp( Ea ) gaz parfait
RT T: température absolue
k  A' exp( E ' a )
d
Ea et E’a Energies
RT d’activation des réactions

Pour la croissance Ea est de l’ordre de 10 à 20 kcal/mole, E’a est de

l’ordre de 60 à 70 kcal/mole.
µ
La valeur de E’a est plus élevée que Ea
car la vitesse de décès est plus sensible
T°C
au paramètre température que celle(B.de
Bioréacteurs la
CHEBLI)
croissance.
Homogénéisation des constituants

Quelle que soit la fermentation envisagée (aérobie, anaérobie),

l’homogénéisation des constituants est indispensable pour plusieurs Raisons:

 Les micro-organismes évoluent dans un substrat composé de nombreux

éléments (source de carbone, oligo-éléments, oxygène…)
Lors de la fermentation, pour une croissance et une production optimales, quel
que soit l’endroit, il ne faut être à aucun moment en défaut d’un élément. Cela
impose une concentration de chaque constituant identique dans toute la
biomasse.

Les bioréactions génèrent des sous-produits (CO2, éthanol…) et de l’énergie

thermique et modifient le pH de la solution.
Ces trois manifestations doivent être « régulées » afin d’éviter toute
concentration abusive, ce qui exige une homogénéisation parfaite et constante
du milieu.

 Si une stérilisation en place est effectuée, l’homogénéisation du milieu est

également prépondérante, pour éviter toute zone morte et pour réduire le
temps global de la stérilisation (chauffage-stérilisation-refroidissement) par
accroissement du transfert thermique.
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Demande en oxygène et transfert gazeux
(transfert de matière)

Capacité de transfert
La quantité d’oxygène OTR (en mol/L· h) transférée est donnée par la relation:

OTR=KLA(C*-CL)
avec KLA (h-1) coefficient de transfert de masse, C* et CL (mol/L) concentrations en
oxygène respectivement à saturation et dans la phase liquide.

La capacité de transfert des réacteurs va dépendre de plusieurs variables :

— la puissance d’agitation ;
— l’efficacité du système d’agitation (dispersion) ;
— la solubilité du gaz qui dépend :
• de la pression ;
• du débit gazeux ;
• de la composition du gaz ;
• de la température ;
• de la composition du milieu liquide.
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Demande en oxygène

Elle mesure les besoins en consommation d’oxygène de la culture :

OUR (oxygen uptake rate) et s’exprime en mmol/L · h ou en mol/m3 · h.

Le suivi de la teneur en oxygène dissous des milieux de culture

permet de déterminer si la demande est satisfaite ou non.

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 Transfert thermique

Les gradients de température étant relativement faibles et la surface d’échange limitée

pour un volume donné, on cherchera à obtenir un coefficient de transfert thermique le
plus grand possible, défini par la relation donnant la quantité de chaleur échangée.

Q=h S ∆T

avec Q (W/h) quantité de chaleur échangée,

h (W/h · m2 · K) coefficient de transfert thermique global,
S (m2) surface d’échange,
∆T (K) moyenne logarithmique des températures produit/fluide caloporteur,

Bilan thermique général

Il est donné par la relation suivante et s’exprime en W/h :

Qa + Qp + Qm = Q = Qe

avec : Qa énergie apportée par l’air injecté,

Qp énergie apportée par la chaleur de réaction,
Qm énergie apportée par la dissipation de l’énergie due à l’agitation,
Qe énergie extraite par l’eau de refroidissement.
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 SOURCE DE CARBONE

La cellule contient 50% de carbone

 LES MELASSES  LE METHANOL

 L’AMIDON  L’ETHNOL
 LE LACTOSERUM  LES HYDROCARBURES
 LE SACCHAROSE  LES LIQUEURS SULFITIQUES
 LE GLUCOSE  LES ACIDES ORGANIQUES

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 Techniques de culture :

- Culture en discontinu = culture en batch

- Culture en semi-continu= batch alimenté
- Culture en continu = culture en milieu renouvelé

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 Calcul d’un réacteur discontinu (BATCH)
Introduction et rappels

L’utilisation industrielle des

microorganismes nécessite:

 Isolement, Purification et
amélioration génétique.

 Optimisation du procédé
en définissant une stratégie
de conduite de fermentation

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

Tout processus faisant intervenir un microorganisme
est caractérisé par la mise en œuvre de trois types
de réactions:

SUBSTRAT

BIOMASSE METABOLITES MAINTENANCE

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

Dans un BATCH le volume réactionnel (2/3 VT) est
considéré constant car tous les éléments
nutritifs sont apportés au début de la culture à
l’exception de l’AZOTE et de l’OXYGENE.

L’équation de la croissance sera la suivante:

d ( XV )
 µXV  dX
 µX
dt dt
Pas de limitation:
croissance maximale
 dX
 µ max X
dt
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
  Culture en batch-alimenté (Fed-Batch)

Il s’agit d’un fermenteur alimenté par des ajouts

successifs de milieu ou de substrat.

Cette technique peut être pratiquée de diverses façons.

Démarrage dans un pied de cuve (V0). Quand la concentration en

substrat correspond à la vitesse maximale de croissance (loi de
MONOD), alimentation en continu tel que l’apport en substrat
est équivalent à sa consommation par les microorganismes

 µ est donc maintenu constant (µ=f(S))

Bioréacteurs (B. CHEBLI)
Utilités de la technique du Batch-Alimenté

1°/ Inhibition par le substrat

2°/ Obtention d’une forte concentration

cellulaire
3°/ Effet Crabtree

4°/ Diminution de la viscosité

5°/ Mutants auxotrophes

Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Mode d’application du batch-alimenté

Le but essentiel de l’application de la technique

du Batch-Alimenté est le contrôle de la
concentration du substrat.

Pour établir l’opération, il faut obligatoirement

posséder deux connaissances :

Le type de substrat Le mode d’application

Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 IDENTIFICATION

Physiologie Biochimie
microbienne

Devenir du substrat Enzymes

(voie de dégradation)

Parfois un travail basé sur le HASARD et l’ERREUR

est inévitable pour trouver le SUBSTRAT EFFICACE

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 MODE D’APPLICATION

Sans contrôle par Avec contrôle par

Feed-Back Bioréacteurs (B. CHEBLI) Feed-Back
Soit un réacteur parfaitement agité et où la
croissance est limitée par un seul substrat (S), que
l’alimentation, sans contrôle par feed-back,
s’effectue sans soutirage et qu’elle est appliquée
après la phase de latence au cours d’une croissance
active.

Dans le cas où le substrat limitant est une source

d’énergie, il faut tenir compte de la maintenance

En prenant S comme substrat limitant nous pouvons

écrire:

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

  Pour la consommation de ce substrat

d ( SV ) 1 d ( XV )
 FSc   m( XV )
dt YFX / S dt

Variation de S Alimentation Biomasse Maintenance

Croissance
exponentielle

d ( XV )
µ  f (S )
 µ ( XV )
dt
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 F représente le débit volumique de l’alimentation

dV = F Fa Fb Fam Féva
+ + + -

dt
Variation Alimentation Acide Base Anti- Evaporation
du volume mousse

Régulation pH

EVAPORATION

Température, Agitation et Aération dV Substrat limitant VOLATILE

F
dt
Au delà de 3 à 4 jours de culture, l’évaporation doit être prise
enBioréacteurs
considération.
(B. CHEBLI)
 CULTURE CONTINUE

Dans une culture continue, l’étape la plus importante est le maintien de

l’ETAT STATIONNAIRE.

X Alimentation
Etat Stationnaire

Etat transitoire

Temps

Toutes les cellules sont physiologiquement identiques: culture UTILE

pour l’étude de l’EFFET de certains constituants du milieu sur le
comportement métabolique.
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Un fonctionnement en continu est très
intéressant pour :

Assurer une production

Etudier la réponse des continue de biomasse ou
microorganismes (physiologie) de métabolites dans des
à leur environnement conditions optimales.

L’état stationnaire est régie par des modèles

cinétiques

D’INHIBITION PAR
De MONOD LE SUBSTRAT
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 Bilan biomasse d’une culture continue
mono-étagée avec alimentation stérile
La croissance est réalisée dans un réacteur
homogène parfaitement agité: CSTR (Continuous
Stirred Tank Reactor°)

Injection du milieu F
frais: S0, N0,
Oligo…

X
S P
F
N
Air X, S, N, P
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 BILAN BIOMASSE

Accumulation = Entrée - Sortie + Production - (Mortalité)

dX
V  FX 0  FX  VµX
dt
Alimentation stérile  X0 = 0

F
Vµ  F  0  µ   D
Etat stationnaire:dX/dt = 0 V
Débit d’accumulation est nul Bioréacteurs (B. CHEBLI)
 La relation Dµ est très important

Car elle montre la possibilité d’IMPOSER une vitesse

spécifique de croissance en fixant UN TAUX DE
DILUTION.

1
 Ts Ts est le temps de séjour
D
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
On peut exprimer X et rx en fonction de D

X  YFX / S ( S 0  S )

Ks D
X  YFX / S ( S 0  ) Eq 2
µ max  D

Ks D
rx  D YFX / S ( S 0  ) Eq 3
µ max  D
Bioréacteurs (B. CHEBLI)
X S
rx µ max S 0
D* 
Ks  S 0

S 0  Ks

D*  µ max
Dopt D* D

Bioréacteurs (B. CHEBLI)

 1°/ D › µmax: LAVAGE = WASHOUT

2°/ D  µmax : TURBIDOSTAT

Excés de nutriments, sélection de mutants (produits toxiques)
pouvant s’adapter à des conditions extrêmes. Il est très difficile
de maintenir le fermenteur à la productivité maximale sans
risquer un lessivage.

3°/ D < µmax : CHEMOSTAT Culture stable

Par rapport au turbidostat, le chémostat fonctionne sous
limitation en substrat. On travaille souvent, par sécurité, à 90
ou 95% de Dopt. La nature du substrat limitant est très
importante.
Bioréacteurs (B. CHEBLI)