Compte rendu

Matière : physiologie végétale

La PHOTOSYNTHÈSE PAR DES

CHLOROPLASTES ISOLÉS

 Intro :
Bonjour et bienvenue à cette présentation sur la photosynthèse chez les plantes vertes. La photosynthèse est
un processus vital pour les plantes qui leur permet de convertir la lumière du soleil en énergie utilisable pour
leur croissance et leur développement. Cependant, ce processus complexe implique plusieurs réactions
biochimiques, notamment le transport des photoélectrons, l'évolution de l'oxygène, la photophosphorylation
et les réactions de synthèse.
L'objectif des biochimistes depuis de nombreuses années est de réaliser la photosynthèse complète avec des
chloroplastes isolés. Cette réalisation permettrait de mieux comprendre les mécanismes de transformation
enzymatique et du contrôle métabolique dans les réactions de synthèse de la photosynthèse.
En effet, en isolant les réactions photosynthétiques des réactions du cytoplasme et en éliminant la barrière de
la paroi cellulaire, les chercheurs pourraient étudier plus facilement l'assimilation de divers métabolites et
produits chimiques ajoutés.
Cette présentation se concentrera sur les différentes réactions biochimiques impliquées dans la
photosynthèse, en mettant l'accent sur les réactions de synthèse et leur importance dans la production de
composés organiques essentiels à la croissance et au développement des plantes. Nous examinerons
également les méthodes utilisées pour isoler les chloroplastes et les réactions photosynthétiques, ainsi que les
avantages et les limitations de ces approches.
En somme, cette présentation fournira un aperçu complet de la photosynthèse chez les plantes vertes, en
mettant l'accent sur les réactions de synthèse et la manière dont elles peuvent être étudiées à l'aide de
chloroplastes isolés.

 Principe :
Dans cet article, il est question des tentatives antérieures pour étudier la photosynthèse en utilisant des
chloroplastes isolés. Les travaux de Hill et Scarisbrick, réalisés il y a de nombreuses années, ont montré que
les chloroplastes isolés et les particules de chloroplaste pouvaient transporter les photoélectrons vers des
accepteurs d'électrons naturels et artificiels, et pour la photophosphorylation. Cependant, les taux de fixation
du CO2 au cours de la photosynthèse par des chloroplastes isolés ont été décevants malgré des taux très
élevés pour le transport des photoélectrons vers des accepteurs d'électrons. Des tentatives ont été faites pour
stimuler la fixation du CO2 en ajoutant des intermédiaires du cycle de réduction du carbone à des
chloroplastes brisés, ou à des chloroplastes entiers. Walker a constaté que l'ajout de ribose-5-phosphate à des
chloroplastes isolés stimulait la fixation du CO2, tandis que Heber et Tyszkiewicz ont obtenu des taux de
fixation élevés en ajoutant une solution concentrée d'enzymes solubles du cycle de réduction du carbone aux
chloroplastes isolés. Des efforts ont été faits pour obtenir une préparation de chloroplastes bien définie et
homogène, avec des membranes intactes, capable de taux élevés de photosynthèse complète sans l'ajout de
cofacteurs (autres que les ions inorganiques) ou d'enzymes, dans le but d'étudier le contrôle métabolique et
les mécanismes enzymatiques de la photosynthèse.

 Matériel et méthodes :
Ce passage décrit les matériaux et méthodes utilisés dans une expérience visant à mesurer la fixation du CO2
dans les feuilles de Spinacia oleracea. Les graines de Spinacia oleracea L. (var. Viroflay) ont été obtenues
auprès de Ferry Morse Seed Co. et plantées dans du vermiculite dans des conteneurs extérieurs. Les plantes
ont été arrosées quotidiennement avec une solution de Hoagland, et à l'âge de 4 à 5 semaines, des feuilles
pesant environ 1,2 à 1,5 g ont été récoltées et utilisées immédiatement pour les expériences.
Pour mesurer la fixation de CO2 dans les feuilles intactes, une feuille fraîchement cueillie a été placée dans un
récipient transparent hermétique avec sa tige dans un récipient contenant une solution de Hoagland. La
chambre à feuilles était reliée par des tubes d'entrée et de sortie à un appareil à état stable. L'appareil
contenait un système fermé de tubes et une pompe pour faire circuler le gaz à travers la chambre à feuilles,
puis à travers une chambre d'ionisation qui surveillait le niveau de C'4 lorsque ce traceur était présent sous
forme de C'402. Après que la feuille eut photosynthétisé pendant 10 minutes avec de l'air, le système de
manipulation de gaz a été fermé et connecté à un réservoir contenant de l'air et du C'402. Le système
contenait alors 200 micromoles de dioxyde de carbone, avec une activité spécifique de 29,0 /Ac/umole. La
tension totale en CO2 était de 0,08 %c, soit environ deux fois celle de l'air.
La feuille a été incubée dans une chambre hermétique et humide où l'air a été remplacé par de l'air contenant
0,08% de CO2. Nous avons ajouté 200 micromoles de CO2 spécifique avec une activité de 29,0 /Ac/,
micromole. Après 10 minutes de photosynthèse, nous avons rapidement plongé la feuille dans de l'azote
liquide et l'avons broyée en poudre gelée. Nous avons déterminé la teneur en chlorophylle de la feuille, qui
était de 1,21 mg, puis avons mélangé la poudre gelée restante avec du méthanol à 80%. Nous avons acidifié
un échantillon de ce matériau et avons séché l'activité radioactive sur un papier filtre. Le taux d'assimilation
photosynthétique de C'402 en composés acides stables a été calculé à partir du comptage résultant, de la
sensibilité connue du compteur, de l'activité spécifique connue de C'402 et de la teneur en chlorophylle
déterminée précédemment.
Le même jour, nous avons mesuré les taux de fixation de CO2 par des chloroplastes isolés. Les chloroplastes
ont été préparés à partir des feuilles utilisées pour mesurer le taux d'assimilation de la feuille entière. Nous
avons pré-illuminé une suspension de 0,50 ml de ces chloroplastes contenant 0,085

 Résultats et discussions :
Le passage décrit les résultats et les discussions d'une expérience sur la photosynthèse dans des chloroplastes
isolés d'épinards. Les feuilles d'épinards intacts, fraîchement récoltées et en bonne santé ont été trouvées avec
un taux de fixation de CO2 de 245 µmoles CO2/mg de Chl/h, tandis que les chloroplastes préparés à partir
des mêmes feuilles avaient un taux de 155 µmoles CO2/mg de Chl/h. Les chloroplastes étaient capables
d'assimiler le CO2 à un taux qui était 63 % du taux de photosynthèse in vivo. Le taux de fixation diminuait
avec le temps et était maximal avec une concentration de bicarbonate d'environ 3 mAI. La saturation du taux
de fixation de CO2 avec l'intensité lumineuse a également été étudiée. L'apparence des chloroplastes et leur
activité biochimique ont été examinées, et il a été constaté qu'une grande proportion des chloroplastes avaient
une membrane intacte et étaient de classe I. Les électromicrographies ont montré la configuration typique des
thylakoïdes empilés et non gonflés des chloroplastes in vivo. La radioautographie a montré les produits de la
fixation de CO2 dans les feuilles d'épinards entières et a révélé de petits pools d'intermédiaires du cycle de
réduction du carbone et des quantités élevées de radiocarbone dans les intermédiaires du cycle et l'acide
glycolique dans les chloroplastes isolés. Le marquage des produits secondaires de faible poids moléculaire
était faible, mais il y avait une synthèse significative de macromolécules. Dans l'ensemble, l'étude a révélé que
les chloroplastes isolés étaient plus similaires à la photosynthèse in vivo que l'enzyme isolée et purifiée qui
catalyse la réaction de carboxylation primaire de la photosynthèse.

 Conclusion :
Les résultats de cette étude montrent que les chloroplastes isolés sont capables d'assimiler le dioxyde de
carbone à un taux qui est environ 63% du taux de photosynthèse in vivo. Le taux de photosynthèse diminue
avec le temps et est maximal avec une concentration de bicarbonate d'environ 3 mAI. Les chloroplastes
biochimiquement actifs utilisés dans ces expériences ressemblent davantage à la photosynthèse in vivo que
l'enzyme isolée et purifiée qui catalyse la réaction de carboxylation primaire de la photosynthèse. Les
micrographies électroniques montrent que les chloroplastes utilisés dans ces expériences conservent une
membrane intacte et n'ont pas perdu de protéines solubles. Les résultats montrent également que les
intermédiaires du cycle de réduction du carbone sont rapidement transportés des chloroplastes isolés dans le
milieu de suspension, tandis que les hexoses monophosphates et le ribulose-1,5-diphosphate sont
principalement retenus dans les chloroplastes. Enfin, il y a une quantité significative de synthèse de
macromolécules à partir du dioxyde de carbone assimilé par les chloroplastes isolés.
Ce résumé fut réaliser par : - Elia Fadel
- Mahmoud Issa

MERCI POUR VOTRE ATTENTION 