TP Gènes ET Génomes: done by( ABDALLAH CHARIF) and( ELIA FADEL)

Afin de construire le caryotype d’une plante il nous suffit d’utiliser une partie qui
se divise de manière active (on appelle cette partie : le méristème racinaire) qui
est actif durant la croissance des racine d’une plante
On commence par  :
-La Germination des graines :
Cette étape consiste à sacrifier les graines pour augmenter leur dormance
tégumentaire
Ensuite elles seront posées dans des boîtes pour les laisser germer pour une
durée de quelques jours

Ensuite on passe au  :

-Prélèvement :
Comme son nom l’indique, cette étape nous permettra de prélever le méristème
racinaire d’une graine ayant accéder le stade de germination

Méristème racinaire
 «  Passons aux différentes étapes de ce procédé  »
Première étape  : prétraitement
Durant cette étape, la pointe d’une racine va être couper et tremper dans la
colchicine
(Agent mitoclasique qui bloque la division mitotique en métaphase) et permet
d’obtenir un grand nombre de plaques métaphasiques

Deuxième étape  :  Fixation

L’acide acétique (à 90%) est utilisé pour détruire toute cellule encore en vie et
bloquer la division cellulaire et préserver la structure des chromosomes de l’effet
de la colchicine utilisée précédemment dans le prétraitement

Étape 2 :
méristème racinaire

Dans de l’acide acétique

Troisième étape  : Stockage
Le matériel végétal sera préservé dans une solution d’éthanol (70 %) au
congélateur, pour une longue durée de temps jusqu’à qu’il soit utiliser

Étape 3 :
méristème racinaire

Dans une solution d’éthanol

Quatrième étape  : Rinçage
Trois rinçages à l’eau seront effectués de manière successive afin de supprimer
Les traces d’autres substances dans la solution pour une durée d’environ 5
minutes.

Etape 4 : premier rinçage a l’eau deuxième rinçage a l’eau

troisième rinçage a l’eau

Cinquième étape  : Hydrolyse
L’importance de cette étape est de libérer les molécules aldéhydiques des
molécules d’ADN afin de rendre
Le méristème plus mou et de favoriser la coloration et l’écrasement de ces
molécules.
{Elle se fait dans une solution d’acide chlorhydrique a 60°C pour une durée de 10
à 12 minutes}
 Étape 5 : méristème racinaire
Dans une solution
Sixième étapes  : Macération et coloration
Les méristèmes racinaires seront placés dans un récipient contenant un certain
volume d’eau afin d’être macérer
Puis seront colorer par de l’origine lactopropionique pendant 10 minutes au bain-
marie à 60°C

Septième étape  : Ecrasement et observation microscopique

Les zones hydrolysées des méristèmes, isolées et colorées seront placées sur une
lame dans une goutte
D’origine lactopropionique, puis écrasées entre lame et lamelle pour assurer la
dissociation et aboutir à un bon étalement des chromosomes
Les cellules de la pointe racinaire sont observées et repérées au microscope
photonique a l’objectif.
Les cellules qui ont les chromosomes bien étalés et colores seront observées,
photographiées par un microscope ZEISS doté d’une camera
Schéma résumant le protocole expérimental de la réalisation du caryotype
d’une plante

Germination des graines

Pour obtenir les
meristemes racinaires

**
ou prelevement du

meristeme racinaire

d’une plantule
Prelevement du meristeme
Racinaire d’une graine
en germination

meristeme
racinaire preleve
 meristeme racianire

+colchicine

Etapes de pretraitement
Ajout de fixateur :
Acide acetique(90%)

meristeme +acide
acetique

Etape de stockage :Ajout d’ethanol (70%)

etape de rincage : trois rincages

successifs
 pour 5 mins

Etape d’hydrolyse : Ajout d’HCL

Meristeme +HCL

Ajout du colorant : Maceration + coloration

 ecrasement + observation
microscopique du meristeme

Chromosome S L Total length Arm ratio Long

pairs (μm) (μm) ±SD (μm) r RL
I 6.5 7.3 13.8 7.3/6.5=1.12 100×
II 6.3 6.9 13.2 6.9/6.3=1.095 100×
III 6.0 7.0 13 7/6=1.166 100×
IV 6.0 6.4 12.4 6.4/6=1.066 100×
V 5.7 6.5 12.2 6.5/5.7=1.14 100×
VI 5.8 6.2 12 6.2/5.8=1.068 100×
VII 5.8 6.1 11.9 6.1/5.8=1.051 100×
VIII 5.4 5.9 11.3 5.9/5.4=1.092 100×
IX 4.7 6.1 10.8 6.1/4.7=1.297 100×
X 3.9 6.2 10.1 6.2/3.9=1.589 100×
XI 3.6 5.8 9.4 5.8/3.6=1.611 100×
 Somme longueur total des 130.1
chromosomes

L’echelle :la longueur 7.3µm correspond a 3 inch(sur power point)

1 2 3 4 5 6
7 8 9 10 11