Métabolisme

minéral et osseux

Pr Christian Poüs
Biochimie-Hormonologie ABC
PTH, Calcium, Phosphates
Parathormone (PTH)
Ca++
Pré-pro-PTH
N C Exocytose

(-)
24AA

Pro-PTH
N C
(-)
6AA

N
PTH mature
C
PTH

1-28 actif 34-84 fragment C

Golgi : pro-PTH
-> PTH

Transcription du RE : pré-pro-PTH
gène
-> pro-PTH
Parathormone : contrôle

80
PTH intacte(ng/l)

60

40

20

1,10 1,20 1,30

Ca ionisé (mmol/l)

Aussi inhibée par : • 1,25 diOH D3

• hypophosphatémie
• carence Mg

Variations circadiennes
 Parathormone :dosage
Principe de dosage de la PTH intacte

1/2 vie de la PTH1-84 : 2 à 4 min

Sécrétion de PTH +
dégradation hépatique

Concentrations circulantes des

fragments >> concentration
circulante de 1-84

Aggravé par l’insuffisance rénale

Cas d’accumulation de 7-84 (inhibiteur
naturel) dans l’IRC

Tests de 2è génération : PTH intacte (1-84)

sans faire la distinction avec la 7-84
Toujours interpréter en fonction
Tests de 3è génération : PTH intacte (1-84) de la calcémie concomitante et du
sans interférence avec la 7-84 statut vitaminique D
 Calcium (circulant)

40% 50% 10%

Ca++
-
- anion
-
Protéines
Ca++ Ca++

- - Ca++
Bicarbonate

-
Ca++
Phosphate
Citrate
Ca++
Lactate

Calcium libre

Calcium ultrafiltrable

Calcium total
Homéostasie

Ca extracellulaire (>99%) Ca intracellulaire

Circulant :2.10-3 M Cytoplasmique :10-6 - 10-7 M

Métabolisme osseux (réservoir) Mitochondries
Hémostase Réticulum endo/sarcoplasmique
Potentiel membranaire Pompes membranaires
Excitabilité neuro-musculaire
Fonctions cellulaires régulatrices :
Exocytose
Protéine-kinases
 Dosage du Ca total
Référence = SAA
En pratique :complexométrie & colorimétrie
2 méthodes répandues et automatisables
Arsenazo III
•Affinité Ca >>Mg à pH légèrement
acide
•Travail à pH 6 (tampon imidazole)
•Liaison influencée par la concentration
en tampon et par le Na
•Citrate interfère en chimie sèche
o-crésolphtaléine
•Dissociation du Ca des protéines en
milieu acide
•Alcalinisation pour le développement de
la coloration
•Interférence du Mg réduite par la 8-
hydroxyquinoléine (dosage Mg) à pH 12
•KCN élimine interférence métaux lourds
•Complexe monovalent prédominant à
bas [Ca] mais de coeff d’extinction
différent => calibration non linéaire
recommandée
•Réaction sensible aux variations de T°
Calcium ionisé : électrode spécifique + ref externe
Échantillon : sang
total (biais positif
Electrode Ag/AgCl prop. à
l’hématocrite)

Sol. de CaCl2 / AgCl /NaCl / KCl

Membrane sélective « liquide »

Transporteur neutre ETH1001 dissous dans un agent plastifiant et du PVC

Echangeurs de cations organophosphorés Ex : bis(di-n-octophényl)phosphate
Influence de l’héparine
Spécimen Héparine (U/ml) Ca libre (mmol/l)
Sérum 0 1,25
Plasma 29 1,21
Plasma 100 0,94
Sang total 19 1,26
Sang total 100 0,97

Influence du pH

1,4
Ca libre Prélèvement
anaérobie ++
Ca libre (mM)

4°C
1,2

Ca lié aux
protéines
1,0

pH

7,2 7,4 7,6

Interférences

In vivo In vitro

•Garrot - occlusion veineuse •Anticoagulants

•Exercice, changement de posture •Altérations de pH

•Hyperventilation •Hémolyse, ictère, lipémie

•Protéines (corrections à éviter)

Citrate, EDTA, oxalate à proscrire

Modifications quantitatives et/ou
qualitatives du profil protéique Dilution avec anticoagulant liquide

Héparine Concentrations interférentes d’héparine

pH  Héparinate de Li saturée en calcium

Acides gras libres

Bilirubine
Température
 Phosphates

Toutes méthodes basées sur la formation de phospho-

molybdate d’ammonium

Photométrie UV ou
Réduction en bleu de molybdène

Erreurs fréquentes 1,40

•Hémolyse (excès)
•Centrifugation tardive (excès)
•Variations circadiennes ++

0,95

8h 14h 20h 02h

Vitamine D
7-dehydrocholestérol

25(OH)D3

Prévitamine D3
Phosphates

1-Hydroxylase

Vitamine D3 1,25 di(OH)D3

 Dosage :
Liaison aux protéines => extraction
obligatoire. Élimine les substances interférentes et les
lipides

HPLC, détection UV : séparation 1,25 et 25

Radiocompétition à base de DBP

Immunoanalyse : attention aux spécificités Ac
(surtout vis à vis de l’ergocalciférol :VitD2 origine végétale)

Calcidiol = stock en VitD

Calcitriol étroitement régulé ;[c] 1000 fois <
Pas de variation en parallèle
sauf si carence profonde
Parathormone et Vit. D: PTH continue vs
effets biologiques discontinue

1
Ca PTH

parathyroïde 2 2
Réabsorption Ca
Réabsoprtion P
3
Ca Ca circulant
1,25 di(OH) D3

Ca

Ca

Ca
intestin rein

2
Résorption Osseuse
Parathormone et Vit. D:
effets biologiques

Ca PTH

parathyroïde
4
Réabsorption Ca
Réabsoprtion P

Ca Ca circulant
1,25 di(OH) D3

Absorption Ca, P
∑ CaBP Ca

4
Ca

Ca
intestin rein

4
Résorption Osseuse
PTHrP

Découverte en 1987 : mécanismes d’hypercalcémies malignes

Carcinomes ovaire, sein, rein, vessie
Carcinomes squameux tête, cou œsophage…
localisations osseuses : myélome, lymphome,hémopathies malignes, sein

Gène ≠ de celui de la PTH

Forte homologie dans la région N-terminale active

Immunodosages : même stratégie que Effet biologique

celui de la PTH superposable à celui
de la PTH:
Détection chez 50 à 80% de sujets sains
Hyper Ca et hypo PO4
Pathologies (I) : Hypercalcémies
3 Mécanismes possibles :
Résorption osseuse accrue
Absorption intestinale accrue
Elimination rénale défaillante
Hyperparathyroïdie primitive (aggravée par l’hypercalcémie)
Sporadique
Associée à un syndrome néoplasique endocrinien multiple
Familiale
Après transplantation rénale

Formes variantes d’hyperparathyroïdie

Hypercalcémie, hypocalciurie familiale bénigne (mutation inactivatrice récepteur Ca)
Traitement au lithium (diminue le freinage des parathyroïdes par le Ca)
Insuffisance rénale chronique

Hypercalcémie associée à des néoplasies

Causée par la PTHrP
Causée par un excès de 1,25 di(OH)D3 (lymphomes)
Sécrétion ectopique de PTH (rare)
Ostéolyse locale (myélome, leucémie, lymphome)

Sarcoïdose, autres granulomatoses

Intoxications médicamenteuses
Endocrinopathies thyrotoxicose, insuffisance surrénale
Pathologies (II) : Hypocalcémies
Hypoparathyroïdie
Chirurgicale
Idiopathique
Familiale
Autres…

Pseudohypoparathyroïdie (résistance périphérique à la PTH)

Maladies familiales :
type 1B hypoCa, hyperP, hyperParathyroïdie secondaire
type 1A idem plus ostéodystrophie (autosomique dominant)

Hypoalbuminémie : Ca ionisé normal

Hyperphosphatémies liées à rhabdomyolyse ou lyse tumorale
Pancréatite aiguë (séquestration calcique par les acides gras)
Pathologies (III) : Pathologies osseuses
Ostéoporose
= Perte de masse osseuse
Très commune, forte mobidité et mortalité
Causes multiples:
Primitive (vieillissement, idiopathique du sujet jeune)
Immobilisation
Médicamenteuse (corticoïdes, alcool, héparine, anticonvulsivants)
Hématologique (myélome, mastocytose)
Endocrinienne (hypogonadisme, hypercoticisme, hyperthyroïdie, hyperParath., diabète)
Gastrointestinale (malabsorption, cirrhose)
Associée à des maladies du tissu conjonctif (Ehler-Danlos, Marfan, Menkes..)

Ostéomalacie
= Défaut de minéralisation osseuse
Causes :
Anomalies de la vitamine D (carence, malabsorption, défaut métabolique, résistance)
Déficit en phosphates (fuites rénales : Fanconi, acidose tubulaire rénale…, malabsorption)
Déficit en phosphatase alcaline héréditaire
Insuffisance rénale chronique
Toxique (fluor, aluminium…)
Maladie de Paget (Osteitis deformans)
= maladie localisée avec accélération du remodelage osseux
Lyse locale accélérée (mono ou poly-ostéique) suivie d’ostéoformation anarchique
Cause inconnue, familiale dans 20-30% des cas

Elévation de tous les marqueurs osseux

M.O.V.I.R. = Maladie Osseuse & Vasculaire de l’I.R.

= Ostéodystrophie rénale
= Anomalies osseuses universelles liées à une insuffisance rénale chronique
Ostéite, fibrose, ostéomalacie, amylose, aplasie osseuse
1

IRC PTH Clairance du P hypo Ca

secondaire

hypo 1,25 di(OH)D3 1

Malabsorption Ca