d oss i e r

b io nettoyag e
industrie pharmaceutique

Nettoyage : éviter les

contaminations microbiologiques
Si les textes réglementaires de l’industrie pharmaceutique encadrent le
nettoyage et ses modalités de manière très complète, la validation de celui-ci
est nettement moins bien définie, quoique demandée pour les équipements de
fabrication, de répartition et l’environnement. Choix du détergent, mesure de
son efficacité, normes références… le point sur un sujet sensible.

L
e nettoyage est présent partout,
autant dans notre quotidien
personnel que professionnel.
Mais qu’entend-on réellement par
ce terme ? Quand le Larousse le
définit comme une « méthode pour
rendre un lieu net, propre », les
textes plus réglementaires en font
un établissement de la preuve, en
conformité avec les principes des
Bonnes pratiques de la fabrica-
tion pharmaceutique (BPF), que la
mise en œuvre ou l’utilisation de
tout processus, procédure, maté-
riel, matière première, article de
conditionnement ou produit, acti-
vité ou système permet réellement
d’atteindre le résultat escompté.
© Sanofi
Définition réglementaire
Plusieurs textes réglementaires,
guides, revues traitant du nettoyage
en industrie pharmaceutique et de la • FDA : Guide to inspection of vali- • ICH Q3B : Impurities in new drug
validation des procédés de nettoyage dation of cleaning process 1993 ; product ;
existent comme : • FDA : CDRH Guidance for steri- • ICH Q3C : Impurities, residual
• les BPF françaises et Lignes direc- lants & disinfectants, 1/3/00 ; solvents ;
trices particulières LDP 13 ; • ICH Q7A : GMP for active phar- • PICS/S : PI006 Recommanda-
• GMP Europe/Eudralex part I/part maceutical ingredients chap. 12/7 ; tions on validation master plan.
II et annex 15 ; • ICH Q : Impurities in new drug Une autre définition des BPF note
• FDA : CGMP 21 CFR part 211 ; substances ; que le nettoyage est réalisé en vue

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Lors d’une validation,
l’idéal est de la réaliser de façon
dite prospective.
d’éviter les contaminations, micro-
biologiques, les contaminations
croisées, le dépôt de poussières
ou de saletés et, de façon géné-
rale, toute atteinte à la qualité des
produits. Finalement, nettoyage et
désinfection doivent rester deux
actions extrêmement liées en salles
propres. « On ne désinfecte que ce
qui est propre. »
Cependant, l’ensemble des textes
cités ci-dessus indique que les pro-
cédures de nettoyage doivent être
validées et évoque la traçabilité de
ces nettoyages mais donne peu de
pistes pour la réalisation de ces der-
niers. De plus, l’ensemble des forma-
tions dispensées à ce jour abordent
essentiellement l’aspect contamina-
tions croisées et très peu celui des
contaminations microbiologiques.
Or ces dernières existent et il est
important de les prévenir.
Pour cela, les textes réglementaires
donnent les grandes lignes direc-
trices comme :
• le matériel de nettoyage ne doit
pas être une source de contamina-
tion chimique ni microbiologique ;
• le matériel de fabrication doit
être nettoyé selon des procédures
écrites et détaillées et rangé dans
un endroit propre et sec ;
• les équipements importants ou
essentiels doivent être accompa-
gnés d’un « cahier de route » men-
tionnant, entre autres, les opéra-
tions de nettoyage ;
• en général, seules les procédures
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Le meilleur de
l’hygiène et
de l’efficacité
de nettoyage applicables aux sur-
faces de l’équipement en contact
avec les produits doivent être
validées…
Mais aucun n’indique précisé-
ment l’objectif ni, surtout, quelle
méthode permet de l’atteindre.
Elles nous indiquent en revanche
que quels que soient l’objectif et la
méthode choisie, il faut la valider.
Nous pouvons vous aider
validation à optimiser votre sécurité alimentaire.
Lors d’une validation, l’idéal est de
la réaliser de façon dite prospective, Vikan vous propose:
c’est-à-dire avant la mise en service
(et non de façon concomitante ou • Des outils de nettoyage professionnels
rétrospective). Toutefois la plupart adaptés à tous les milieux alimentaires
du temps, les équipements de pro-
duction étaient présents avant les • Des conseils d’utilisation des outils et
textes cités au préalable et donc d’application du code couleur
avant les notions de validation
telles qu’il est entendu aujourd’hui. • Du matériel innovant au design hygiénique
Il faut donc se mettre à niveau tout
en continuant la production. Tout • Des réunions de travail en vue du
d’abord, que souhaitons-nous vali- développement de nouveaux outils
der ? Nous aborderons ici deux
points : les équipements de fabri- • Des outils certifiés répondant aux dernières
cation des produits et les équipe- mises à jour des normes alimentaires
ments de répartition et leur envi-
ronnement (soit les salles propres). Rendez-vous sur Vikan.fr
Vikan - Tel: 01 46 94 68 80
• Les équipements de fabrication
des produits
La première étape d’une valida-
tion du nettoyage des équipements
consiste à faire un bilan du pro-
duit fabriqué : est-il salissant ? vis-
queux ? coloré ? concentré ? n n n
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 h
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Bione ttoyag e
n n n actif ? soluble dans l’eau ?
h
cercle de sinner
Est-il fabriqué à partir de matières
h
premières chimiques, biologiques
h
ou les deux ? Une analyse du pro-
cédé et de son utilisation est essen-
Action mécanique tielle avant l’établissement de toute
h
Action chimique
Action thermique Temps d’action méthode.
Cette analyse permet d’orienter son
choix vers l’agent de nettoyage le
plus adapté ainsi que sur le choix
des autres paramètres – en effet le
h
Schéma fondateur de la
théorie du nettoyage, le
cercle suppose que la
réduction de l’un des quatre
paramètres qui le composent
nettoyage est un ensemble de méca-
nismes physiques et chimiques
(cercle de Sinner).
• Quel agent de nettoyage ?
h
implique l’accroissement Si on utilise de l’eau, sa qualité
d’un autre. doit être définie, justifiée et cor-
respondre au besoin du produit
(eau PPI, osmosée…). Si l’eau n’est
pas suffisante pour un nettoyage
efficace, les produits chimiques
simples (acide, soude) constituent
la deuxième voie. Enfin, si celle-
ci n’est pas non plus suffisante, le
choix se dirige vers le troisième
axe : un produit chimique com-
posé appelé détergent.
Ces derniers sont à éviter autant
que possible au vu des inconvé-
nients qu’ils peuvent entraîner
(recherche de traces, conditions
de stockage, coût…). S’ils consti-
tuent la seule solution, rappelons
qu’ils peuvent présenter des com-
positions variables selon l’usage
auquel ils se destinent. Ainsi un
détergent alcalin (potasse…) est
privilégié lorsqu’il s’agit de reti-
rer des résidus organiques là où
un détergent acide (acide phos-
phorique…) est préféré pour les
résidus minéraux (réaction de Par-
ker). Alcalin ou acide, le pH a un
effet capital dans la conduite du
procédé de nettoyage. Il n’est en
revanche pas envisageable, pour
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des raisons évidentes de sécurité
des personnes, de demander à qui-
conque de nettoyer manuellement
du matériel avec un détergent dont
le pH serait très basique ou très
acide. Dans ce dernier cas, le déter-
gent mis en œuvre sera neutre.
• Quelle méthode ?
Une fois l’agent choisi, il faut défi-
nir les conditions dans lesquelles
l’utiliser. Nous revenons donc au
cercle de Sinner.
Pour un résultat optimal, l’agent
ne suffit pas. Il doit être couplé à
une action mécanique, un temps de
contact et une température d’utili-
sation. Si l’un de ces quatre aspects
ne peut pas être mis en œuvre, il
faut augmenter d’autant plus un ou
plusieurs des autres paramètres.
La combinaison de ces paramètres
est propre à chaque procédé et il
n’existe aucune formule magique.
L’essentiel est de savoir comment
vérifier son efficacité.
• Quelle spécification et comment
la mesurer ?
Les indicateurs biologiques sont
exclus : à cette étape c’est une
détergence et non une désinfection
qui doit être validée. Or, quelle spé-
cification souhaite-t-on atteindre ?
Selon la matière première et sur-
tout le produit, les spécifications
peuvent varier. Prenons pour
exemple un composant du produit
fini apportant une haute charge
microbiologique. Lors de la valida-
tion du nettoyage, notre spécifica-
tion peut donc être que la matière
première apporte une biocharge
plus importante que l’équipement.
Dans le cas contraire, la validation
est considérée non conforme. Plus
importante d’accord, mais de quel
ordre ? Deux fois plus ? Cinq fois
plus ? Est-ce réellement signifi-
catif ? D’après l’annexe 15.36 des
BPF, les teneurs limites en conta-
mination microbienne doivent
être logiquement fixées en fonc-
tion des matériaux et des produits
utilisés. Les validations traitées
à ce jour considèrent de manière
générale dans ces conditions que
la biocharge apportée par l’équi-
pement n’est plus acceptable au-
delà d’un log. L’important d’après
la même référence des BPF est de
pouvoir le vérifier. Comment donc
la mesurer ?
Une réponse simple revient à
connaître tout d’abord la biocharge
apportée par la matière première
via sa mesure dans un contenant
stérile, puis mesurer la biocharge
dans les équipements et compa-
rer les deux.
Il est également possible de récu-
pérer les premières eaux de rin-
çage et de mesurer leur biocharge.
Les écouvillonnages peuvent égale-
ment être utilisés. Toutefois, il est
difficile de mener une évaluation
quantitative sur les endroits défi-
nis comme les plus critiques d’un
équipement – soit sur une surface
déterminée (équivalente à 25 cm²
ou autre). Il ne peut alors s’agir
que d’une évaluation qualitative.
• Quelle péremption ?
Terminé ? Non, il reste une étape
importante citée dans les textes :
la validité du nettoyage, soit sa
péremption entre la fin de ce
dernier et son utilisation. De la
même façon que la spécification,
cette péremption doit être défi-
nie selon les besoins de produc-
tion de chacun : production quo-
tidienne ? hebdomadaire ? n n n
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n n n mensuelle voire annuelle ?
Quelle qu’elle soit, elle doit être
vérifiée et de façon documentée.
Pour ce faire, le meilleur moyen
est de souiller l’équipement avec
la matière première la plus char-
gée microbiologiquement par-
lant, réaliser le nettoyage au
terme de cette fabrication puis
attendre le temps nécessaire
entre deux productions et réa-
liser un nouveau lot après ce
temps défini. Après la mesure de
la biocharge de la seconde pro-
duction, il est également impor-

© Dortec
tant d’aller au terme du procédé
et de vérifier si la biocharge est
Il est important de cartographier l’ensemble des surfaces présentes dans les salles propres et de déterminer
suffisamment basse pour ne pas
lesquelles sont les plus critiques.
engendrer, au terme de la produc-
tion, une contamination micro- Les équipements de répartition leurs produits. Quatre normes font
biologique massive présentant et leur environnement références à la méthode de dilu-
un risque pour la qualité du pro- Une fois fabriqué dans l’équipe- tion-neutralisation, qui consiste
duit comme une substance active ment propre et tracé comme tel, à mettre en contact une suspen-
par exemple. il faut répartir le produit, de façon sion bactérienne et un désinfec-
aseptique dans certains cas. Pour tant pendant une durée fixée. L’ac-
• Revalidation cela, les équipements sont géné- tivité du désinfectant est ensuite
La validation « initiale » est ter- ralement situés dans des salles neutralisée avant de dénombrer les
minée mais il reste encore à véri- propres, avec des centrales de trai- germes restant. Si la neutralisation
fier que celle-ci ne se détériore tement d’air assurant la qualité par- n’est pas réalisable, le dénombre-
pas au cours du temps de façon à ticulaire nécessaire au procédé. ment est réalisé par filtration sur
s’assurer que de telles procédures Mais au terme d’une production, membrane.
sont efficaces lors de leur utilisa- il est là aussi nécessaire de net- • NF EN 1040 avril 2006
tion en condition de routine. Il est toyer les équipements et locaux. « Antiseptiques et désinfectants
conseillé en industrie de réaliser­ En effet, la désinfection des zones chimiques – Essai quantitatif de
a minima une revalidation annuelle à atmosphère contrôlée est particu- suspension pour l’évaluation de
avec, si le produit apporte une lièrement importante, comme l’in- l’activité bactéricide de base des
­biocharge importante, la mesure dique l’annexe 1 des BPF (point antiseptiques et des désinfectants
périodique de cette dernière pour 37). Ces nettoyages (détergence et chimiques – Méthode d’essai et
analyser et surveiller sa tendance désinfection) sont principalement prescriptions (phase 1) » ;
au cours du temps. réalisés par le personnel de pro- • NF EN 1276 mars 2010
Dans ces cas précis, la désinfec- duction à l’aide de sprays pour « Antiseptiques et désinfectants
tion suivant le nettoyage (soit la les équipements et de solutions à – chimiques – Essai quantita-
réduction de la charge microbio- diluer pour les locaux. tif de suspension pour l’évalua-
logique) est généralement incluse, Les fournisseurs de produits tion de l’activité bactéricide des
une fois le produit fabriqué, sous désinfectants revendiquent des antiseptiques et des désinfec-
la forme d’une stérilisation précé- normes relatives à l’activité bac- tants chimiques utilisés dans le
dant la répartition. téricide, fongicide et sporicide de domaine de l’agro-alimentaire,

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 dans l’industrie, dans les domaines
domestiques et en collectivité –
Méthode d’essai et prescriptions
(phase 2, étape 1) » ;
• NF EN 1275 avril 2006
« Antiseptiques et désinfectants
chimiques – Essai quantitatif de
suspension pour l’évaluation de
l’activité fongicide ou levuricide
de base des antiseptiques et des
désinfectants chimiques – Méthode
d’essai et prescriptions (phase 1) » ;
• NF EN 1650 octobre 2008
« Antiseptiques et désinfectants
chimiques – Essai quantitatif de
suspension pour l’évaluation de
l’activité fongicide ou levuricide
des antiseptiques et des désinfec-
tants chimiques utilisés dans le
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domaine de l’agro-alimentaire,
dans l’industrie, dans les domaines
domestiques et en collectivité –
Méthode d’essai et prescriptions
(phase 2, étape 1) ».
La méthode de dilution-neutrali-
sation permet de démontrer l’effi-
cacité d’un produit désinfectant
mais elle n’est pas représenta-
tive de la méthode d’utilisation
de ce produit sur le terrain. La
méthode de nettoyage/désinfec-
tion dépend des types de surfaces
concernés et des supports de net-
toyage utilisés. Ces normes ne
répondent donc pas directement
à notre besoin, d’où la nécessité
de cette validation.
• Quelle surface valider ?
Les germes ne se développent pas
de façon homogène selon les sur-
faces. Ils ne se développent par
exemple pas aussi bien sur du
La directive
cuivre (connu pour ses proprié-
Biocide est
tés « antibactériennes ») que sur téléchargeable
de l’Inox ou du polycarbonate. Il sur
est donc important de cartogra- www.services-
phier l’ensemble des surfaces pré- proprete.fr
sentes dans les salles propres et
de déterminer lesquelles sont les
plus critiques. La criticité peut être
déterminée sur la base d’une ana-
lyse de risque procédé préalable-
ment réalisée.
À noter qu’un même matériau
peut se décliner sous divers types
comme l’Inox (303, 440, n n n
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Dans le cadre de la validation de l’efficacité des désinfectants,
la meilleure méthode consiste à se fonder, si possible, sur les
résultats des contrôles microbiologiques de routine de la salle
elle-même ou d’une salle équivalente.
© Novartis
nnn 316L.) ou le plastique (Tivar,
Delrin, acrylique). Lorsque le cas
se présente, le matériau le plus
proche du produit peut être consi-
déré comme le plus critique. D’ail-
leurs, d’après les Bonnes pratiques
de fabrication (2009) : « En géné-
ral, seules les procédures de net-
toyage applicables aux surfaces de
l’équipement en contact avec les
produits doivent être validées. »
Mais rappelons que nous parlons
ici du nettoyage réalisé à l’aide
d’un détergent et/ou d’un désin-
fectant dans les salles propres. Il
est donc possible de ne pas sélec-
tionner la matière constituant le
matériel en contact direct avec le
produit. En effet, ce matériel est
généralement préalablement net-
toyé et autoclavé en dehors de la
salle propre. Il est donc retiré de
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l’équipement de production au
terme de la répartition.
Une fois définie, si la validation est
prospective, il faut penser à récu-
pérer des échantillons de chaque
surface choisie. Si la validation
est rétrospective, il est évident
qu’il n’est pas envisageable d’in-
troduire les germes en concentra-
tions importantes dans les salles
propres. Il est alors préférable
dans ces conditions de contac-
ter les fabricants pour obtenir des
échantillons.
•Q
 uels produits utiliser pour
quelles spécifications sur quels
germes ?
Beaucoup de détergents/désinfec-
tants sont proposés dans le com-
merce. Il est difficile de savoir à
l’avance quel produit est le plus
adapté sans connaître les spécifi-
cations de réduction microbienne
souhaitées.
D’autres normes que celles citées
ci-avant font référence à la méthode
des porte-germes et au test sur des
surfaces non poreuses :
• NF T 72-190 août 1988
« Désinfectants de contact utilisés
à l’état liquide, miscibles à l’eau –
Méthode des porte-germes – Déter-
mination de l’activité bactéricide,
fongicide et sporicide » ;
• NF EN 13697 novembre 2001
« Antiseptiques et désinfectants
chimiques – Essai quantitatif de
surface non poreuse pour l’éva-
luation de l’activité bactéricide
et/ou fongicide des désinfectants
chimiques utilisés dans le domaine
de l’agro-alimentaire, dans l’in-
dustrie, dans les domaines domes-
tiques et en collectivité – Méthode
d’essai sans action mécanique et
prescriptions (phase 2/étape 2) ».
Les méthodes analytiques figu-
rant dans ces normes sont plus
proches de la réalité que celles pré-
cédemment citées : les germes sont
déposés sur des surfaces qui sont
ensuite désinfectées sans action
mécanique. Leurs spécifications
pour l’activité bactéricide et fon-
gicide sont :
• pour la NF T 72-190 août 1988 :
réduction de 105 bactéries, réduc-
tion de 104 champignons n n n
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Les BPF soulignent qu’il convient, lors de l’emploi de
désinfectants, d’en utiliser plusieurs et de différents types.
© Arrayit
Nettoyage et n n n et réduction de 103 spores
désinfection doivent bactériennes ;
rester deux actions • pour la NF EN 13697 novembre
extrêmement liées en 2001 : réduction de 104 bactéries,
salles propres. réduction de 103 champignons.
Pour définir le désinfectant, il est
possible de se fonder sur ces spécifi-
cations. Toutefois, ces normes s’ap-
pliquent à des souches « usine »,
plus communément appelés ATCC.
Dans le cadre de la validation de
l’efficacité des désinfectants, la
meilleure méthode consiste à se
fonder, si possible, sur les résultats
des contrôles microbiologiques de
routine de la salle elle-même ou
d’une salle équivalente et d’utiliser
en complément des souches ATCC,
comme cité plus haut. Les spécifi-
cations seront alors liées au niveau
de contamination microbienne et
à la classe des zones.
• Quelle méthode choisir ?
La méthode de nettoyage et/ou
de désinfection est propre à l’en-
treprise. Il est possible de réali-
ser une simple pulvérisation, une
pulvérisation puis un essuyage à
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l’aide d’un tissu non tissé jetable
ou de pulvériser le détergent/
désinfectant sur le non-tissé et de
l’appliquer.
Une fois appliqué, il faut laisser
agir le produit. Le temps d’action
dépend de la surface, du mode
d’application et du principe actif
du désinfectant. Il peut varier
de cinq à plusieurs dizaines de
minutes, l’idéal étant d’attendre
le séchage complet du désinfec-
tant. Il est fréquent de constater
après de multiples validations que
même après 30 minutes, certains
désinfectants sur des surfaces spé-
cifiques n’atteignent pas le résul-
tat escompté.
• Comment le valider ?
Une fois les besoins définis, la
méthode et les produits choisis,
il faut passer à la validation.
Plusieurs méthodes sont dispo-
nibles pour vérifier l’efficacité
du désinfectant : la boîte contact,
l’écouvillon sec ou humide. Peu
importe la méthode, l’essentiel est
de connaître son taux de récupéra-
tion et cela sur chaque surface choi-
sie au préalable. Pour cela, dépo-
ser une quantité connue de germes
sur la surface (via la numération
de votre suspension), puis vérifier
la quantité récupérée.
Ensuite, reproduire la méthode
choisie sur les différents types de
surfaces prédéfinies. Tester plu-
sieurs temps d’attente, plusieurs
fois (généralement trois) pour vali-
der la reproductibilité du test. Au
terme du temps d’action, utilisez
la méthode de récupération préa-
lablement validée et en déduire le
taux d’abattement.
Tous ces points doivent être tracés
dans un document de validation
qualité. Pour finir, rappelons que
les BPF soulignent qu’il convient,
lors de l’emploi de désinfectants,
d’en utiliser plusieurs et de dif-
férents types (cf. annexe 1.37).
En effet, cela permet d’éviter le
développement de résistances
contre le(s) principe(s) actif(s) du
désinfectant.
• Alternatives aux principes actifs
Des méthodes alternatives existent
comme le nettoyage/désinfection à
la vapeur. Si le résultat est impres-
sionnant, il ne faut pas oublier que
l’humidité est un facteur essentiel
au développement des germes. Or,
comme rappelé en début de l’ar-
ticle, quelle que soit la méthode
choisie, elle ne doit pas appor-
ter plus de contaminants qu’elle
ne peut en éliminer. L’analyse de
risque du process répondra sur la
pertinence de cette méthode dans
la zone. Comme l’indique l’an-
nexe 1 des BPF sur la désinfection,
« la fumigation de la zone d’at-
mosphère contrôlée peut s’avé-
rer utile pour diminuer la conta-
mination microbienne dans les
endroits inaccessibles ». Pour finir,
une surveillance microbiologique
régulière est nécessaire en vue
de détecter tout développement
de souches résistantes ou toute
dérive potentielle. n
Olivia Michel, BioMérieux
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