DS Biologie Moléculaire et génétique 2- L2 SDV

Durée 2 heures

Calculatrice non autorisée

NB : Les réponses aux questions sont la plupart du temps très courtes. Toutes les réponses doivent être justifiées.
Le barème est susceptible d’être modifié.

Partie TD (12,5 points)

Un chercheur s’intéresse à une maladie génétique peu connue à transmission
autosomique récessive. Cette maladie est due à une mutation dans le gène Z ; la mutation
provoque un épissage anormal d’où la formation d’une protéine anormale nommée Z mutée
(Zm). La protéine normale est nommée Z sauvage (Zwt). La région du gène Z contenant la
mutation est présentée figure 1.
La mutation (A>C) est située au niveau d’une séquence reconnue par l’enzyme de
restriction BamHI (G/GATCC) (le site BamHI est noté en gras dans la figure 1. Le nucléotide
A muté en C dans l’allèle muté est souligné).
1 AAGAAACTGA CACCAGTTGA ACAAGAGAAA TTGCTCATTT TTGCAGCGGG
51 GGAAGGATCC AAACAGCGAA AGGCGCGGGG CGTTCTGCTG AACTATCCTG
101 AGGCGACTTC TTATATCACC TGCTTTATTA TGGAAGGCGC ACGTGATGGG
151 AAGGGAGTAG CAGAGCTGAT GGAAGCCGGC CGCCATGTAT TACCGGAAAA

Figure 1 : séquence du gène Z sauvage (non muté)

Le site BamHI présent dans l’allèle sauvage est noté en gras. Le nucléotide A muté en C dans l’allèle muté est
souligné.

L’ADN génomique de 3 personnes est extrait à partir de lymphocytes contenus dans le

sang. Après avoir dilué la solution de l’individu n°1 au 1/2ème, il mesure à l’aide d’un
spectrophotomètre l’absorbance à 260 et 280nm. Les résultats sont les suivants :
DO 260nm 2
DO 280nm 1

Q1) Déterminez la concentration de l’ADN génomique de l’individu n°1 en µg/ml et

en µg/µl (1,5 points)
Q2) Que pensez-vous de la pureté de l’ADN génomique ? Justifiez rapidement (1
point)

La totalité de la région du gène Z précisée figure 1 est amplifiée par PCR à partir des
ADN génomiques des 3 individus.
Q3) Quels produits le chercheur doit-il mettre dans le tube pour effectuer la
réaction de PCR? (1,75 points)
Q4) Déterminez la séquence et l’orientation des amorces qu’il utilisera pour la PCR
(1,5 points)
Q5) A quelle température l’étape d’hybridation des amorces doit-elle être effectuée?
(1,5 points)
Q6) Quelle sera la taille du produit amplifié ? (0,5 point)
 Les produits d’amplification obtenus pour les 3 individus sont ensuite digérés par
BamHI, puis analysés par électrophorèse sur un gel d’agarose 2 % en présence de BET. Un
marqueur de poids moléculaire contenant des fragments de 50, 100, 150 et 200pb est déposé en
parallèle.
Q7) Quel type d’extrémité génère le site Bam HI ? Justifiez par un schéma (0,75 point)
Q8) Sachant que le génome humain est constitué d’environ 38% de GC, rédigez les
calculs permettant d’obtenir la distance théorique retrouvée entre deux sites de restriction
BamHI (il faut poser les calculs mais pas besoin de faire ces calculs) (1,5 points)

Après analyse du gel d’agarose, le chercheur conclut que l’individu 1 est homozygote
sain, l’individu 2 est hétérozygote et l’individu 3 est homozygote malade.
Q9) Quels sont les résultats attendus pour l’allèle sauvage ? pour l’allèle muté ? (1
point)
Q10) Schématisez le résultat du gel d’agarose qu’il observe (sans oublier le marqueur
de poids moléculaire) (1 point)
Q11) Quelle technique le chercheur peut-il utiliser pour confirmer ces résultats (0,5
point)

Partie Cours (7,5 points)

A) Définissez les termes suivants en 2-3 lignes maximum (1,5 points)
 Amorce
 Enzymes compatibles

B) Listez les enzymes impliqués dans (l’élongation) de la réplication de l’ADN chez

les procaryotes dans l’ordre chronologique d’intervention ainsi que leur fonction en 2 lignes
chacune (2,5 points)

C) Quelle est la particularité de la terminaison de la réplication dans les cellules

souches eucaryotes ? (1 point)

D) Décrivez la structure d’un promoteur bactérien et les étapes de l’initiation de la

transcription chez les procaryotes (2,5 points)