UNIVERSITE MOHAMMED V

FACULTE DE MEDECINE DENTAIRE

RABAT

Pr Jamal Eddine KHANFRI

1ère ANNEE MEDECINE DENTAIRE

2020/2021
 La biologie cellulaire

La cellule procaryote
Bactéries

La cellule eucaryote

Virus

1
 Quelques unités de mesure

Longueur

2
 Instruments d’étude de la cellule
Techniques de préparation pour microscopie
▪ Microscopie optique
1. Fixation : éthanol, acide picrique…
2. Déshydratation
3. Inclusion : paraffine…
4. Microtomie : coupe de 1µm à 10µm d’épaisseur
5. Etalement sur lame de verre
6. Coloration
7. Observation

▪ MET :
Echantillon de petite taille (1 mm3)
1. Fixation : glutaraldéhyde, tétroxyde d’osmium
2. Déshydratation
3. Inclusion : résine dans gélule
4. Ultramicrotomie: coupe fines, environ 30 nm d’épaisseur;
5. Recueil sur grilles métalliques
6. « Coloration » : métaux lourds : citrate de Pb, acétate d’uranyle
7. Observation

Préparation de l’échantillon pour l’observation au

microscope

3
 Techniques de préparation
pour microscopie optique

7- Observation (au Microscope Optique)

4
Comparatif: MO, MET, MEB

M.O

5
 Ultramicrotomie
gélules
Inclusion des tissus dans
des gélules de résine

grille

grille

M.E.T

Microtome

6
 La membrane plasmique :
structure, composition chimique,
organisation moléculaire

La membrane plasmique
II MET

MET. Représentation schématique

7, 5 nm

MET
Membrane plasmique
:
Revêtement
cellulaire

cytosol

7
Platine Carbone

Ombrage

8
 Réplique

MP MP

MET. Répliques de MP

Particules dispersées Particules agrégées

9
Molécules d’eau. Liaisons hydrogène

Molécules hydrophile, hydrophobe, amphiphile

Molécules hydrophile, hydrophobe, amphiphile

10
Les glucides

11
Glycosaminoglycanes( GAG)

Protéoglycanes ou Mucoprotéines

Protéine

12
 Lipides: acides gras

Lipides:
glycérol,
glycérides

13
 Acide phosphorique. Phosphoryle

Formule Abréviation

Acide
phosphorique

Phosphoryle
( extrêmité de chaîne)

Phosphoryle
( milieu de chaîne)

Phosphate. Glycérophosphate

14
 Phospholipide membranaire
Phosphatidylcholine

choline Groupement
polaire
phosphate (hydrophile)

glycérol

Région
2 ac. gras apolaire
(hydrophobe)

Modèle symbole
Formule
compact

Le cholestérol

groupement
polaire
hydrophile

noyau stéroïde
plan et rigide

Queue apolaire
hydrophobe

15
 Les acides aminés
Les 20 acides aminés entrant dans la constitution
des protéines

Liaison peptidique

Pont disulfure

16
 Structure des protéines

Structure primaire : séquence d’acides aminés

Acide aminé
Phe
Leu

CYS
. H
. l
. – HN – C –CO – .
. l
. CH2 Résidu
. l phénylalanine

Structure secondaire
Hélice α

Structure Rotation à Ponts

secondair droite hydrogène
e

17
 Structure secondaire
Feuillet β

Structure tertiaire Structure quaternaire

Globine Hémoglobine
(Tétramère)

18
Hélice α

Domaine
Feuillet β

Sous-unité (monomère) Dimère

Secondaire Tertiaire Quaternaire

Modèles de structure tertiaire

Modèle compact d’une protéine

19
 Les bases

Nucléosides, nucléotides

Acides nucléiques

Structure primaire de l’ADN:

la liaison phosphodiester
ATP AMPc

Structure secondaire de l’ADN:

appariements entre bases

20
 Les principaux phospholipides membranaires

Phosphatidyl- Phosphatidyl- Phosphatidyl- Sphingomyéline

éthanolamine sérine choline

Les glycolipides

Galactocérébroside GM1 ganglioside NANA

21
 Méthodes de séparation des particules et des protéines

I. Fractionnement subcellulaire par centrifugation

- La centrifugation différentielle ou zonale
Les particules peuvent être séparées selon leur forme et leur taille par centrifugation et
ultracentrifugation

- La centrifugation isopycnique
Les fractions obtenues par centrifugation zonale ne sont pas suffisamment pures. Elles peuvent être
soumises à une centrifugation isopycnique qui consiste en une centrifugation à l’équilibre en gradient de
densité. Les fractions seront ainsi séparées en une série de bandes, indépendamment de leur forme et de
leur taille mais selon leur densité de flottaison, dans un gradient de densité contenant une forte
concentration de saccharose.

22
Préparation de fractions de MP de GR

II. Chromatographie
• Principe
Elle permet de séparer de petites molécules (oses , acides aminés, nucléotides), ainsi que des
macromolécules au sein d’une phase mobile qui circule sur un support solide ou matrice
Deux grands types de chromatographie :
- Chromatographie de partage
- Chromatographie sur colonne

Chromatographie de partage

Sur papier ou sur couche mince

La séparation des molécules est fonction de leur solubilité relative dans un mélange de solvants (par
exemple eau et alcool).
Les molécules les plus solubles dans la phase mobile migrent le plus loin, alors que les molécules les
plus solubles dans la phase aqueuse migrent le moins loin

23
 Chromatographie sur colonne
Principe

Le mélange de protéines entraîné par le solvant (phase mobile) passe à travers une colonne contenant
une matrice poreuse (phase stationnaire). Les composants de l’échantillon se déplacent à des vitesses
différentes selon leur interaction avec la matrice.
La matrice peut être de différents types :
- chromatographie par échange d’ions
- chromatographie par gel filtration

Chromatographie par échange d’ions

. Permet la séparation de molécules selon leur charge électrique

. La matrice (phase stationnaire) est constituée de billes de cellulose auxquelles sont liées des
groupements chargés + ou –
Le solvant constitue la phase mobile

24
 Chromatographie par gel filtration

• Les molécules sont séparées selon leur taille

• La matrice est faite de microbilles poreuses et réticulées
• Les grosses molécules ne pénètrent pas dans les billes et sont non retardées
• Les petites molécules traversent les billes et sont retardées

III. Electrophorèse des protéines

Les protéines sont de grosses molécules qui peuvent être chargées électriquement. Elles migrent vers
"plus" si elles sont chargées négativement, vers "moins" si elles sont chargées positivement.
La méthode la plus performante est l’électrophorèse des protéines en présence de sodium dodécylsulfate
(SDS). Le SDS est un détergent anionique.
En présence de fraction MP, le SDS en excès forme des micelles aussi bien avec les lipides qu’avec les
protéines.

25
Le SDS, (ajouté à l’action d’une température élevée qui dénature les protéines et à l’action du
mercaptoéthanol qui réduit les ponts disulfures éventuels) permet le dépliement des protéines et leur
assure la même densité de charge. Ainsi les protéines vont migrer selon leur poids moléculaire (PM)

Le SDS est
un détergent anionique

Dans le cas de la MP, on obtient un tracé électrophorétique sur lequel apparaissent plusieurs bandes
après coloration correspondant à des protéines de différents PM.
NB: plus la bande est colorée, plus il y a de protéines.
Electrophorèse SDS-page

26
 Les lipides membranaires sont
des molécules amphiphiles

monocouche bicouche

liposome
micelle

27
 Liposomes
MET

MET. Cryodécapage

Liposomes:
lipides +
Liposomes :
protéines
lipides seuls
intégrées

28
 Protéine bitopique type II

Protéine polytopique type I

29
Protéine bitopique
Exemple : Glycophorine

Protéine polytopique

30
31
Différents modes d’ancrage des protéines périphériques dans la MP

32
33
Corrélations entre les images de MET de coupes minces et
de répliques d’une part, et l’architecture moléculaire de la MP
d’autre part

34
 Mobilité des lipides
Phospholipide marqué par un groupe nitroxyde

Différents mouvements
1. Rotation 2. Diffusion latérale

3. Flexion 4. Bascule ou flip-flop

exceptionnel

Fluidité de la membrane

Acides gras insaturés Acides gras saturés

35
 Mobilité des protéines

Production d’ anticorps et leur marquage par des molécules

fluorescentes
Fluorescéine
Cel. souris
+

Prot. memb. Souris d’une

souche différente

+
Cel. humaine
Rhodamine
Production d’ anticorps et leur marquage par des
molécules fluorescentes

36
Hybridation somatique et
marquage par anticorps
fluorescents

37
 Transport membranaire
Membrane artificielle lipidique

Concentrations (en mM) des principaux ions dans

les milieux intracellulaire et extracellulaire d’une
cellules de mammifère typique

[Na+] 5-15 [Na+] 145

[K+] 139 [K+] 5 H2O
H2O
[Mg2+] 0,5 [Mg2+] 1-2
[Ca2+] 10-4 [Ca2+] 1-2
[H+] 8x 10-5 (10-7,1M ou pH 7,1) [H+] 4x 10-5 (10-7,4M ou pH 7,4)
[Cl- ] 5-15 [Cl- ] 110
[HCO3-] 12 [HCO3-] 29
Protéines
(-)

38
Les transports passifs

39
Les canaux ioniques

40
◘ Les canaux ioniques potentiel-dépendants
(voir cours de physiologie en 2ème année)

41
 Transport facilité
Modèle moléculaire du transport du glucose par le
globule rouge humain

42
 Les Transports actifs
* Transport actif par une ATPase

Pompe à Na+-K+
Modèle schématique du fonctionnement de l’ATPase Na+-K+

Les Co- transports

* Symport et Antiport

Milieu extracel.
Na+ Cl-
Glucose

HCO3-

Symport Antiport Cytosol

43
Symport glucose- Na+

44
 L’endocytose

Vésicules non recouvertes

Vésicules recouvertes

Puits et vésicules recouvertes de clathrine

MET et MEB

La clathrine
Des fraction de clathrine observées au MET après coloration
négative? triskélion

45
 L’importation du cholestérol
Particule de LDL ( lipoprotéine de faible densité)

Récepteur de LDL

46
 Les différentes étapes

Récepteur de LDL

Endocytose

Vésicule recouverte Dissociation de la clathrine et des autres protéines

Remarque : Mutation Hypercholestérolémie

47
Récepteur anormal LaAbsence d’endocytose
phagocytose

La phagocytose

Comparaison des transports de macromolécules

48
 L’inhibition de contact

Cellules normales

Cellules cancéreuses

Fibroblastes en culture
MO en contraste de phase MEB

Cellules
Cellules normales
normales

Cellules Cellules
tumorales tumorales

49
 La membrane plasmique
• Différentiations
• Molécules d’adhérence
• Jonctions cellulaires

Un épithélium
Pôle apical
(MP apicale)

Face
latérale
(MP
latérale)

Pôle basal
(MP basale)

Les différenciations de la MP apicale

MET. Schémas

Microvillosités
simples Plateau strié

Bordure en
brosse 50
Stéréocils
 Les microvillosités simples
MET Faible grossissement

La microvillosité simple

MET. Schéma et micrographies

Hépatocyte

MET. Lymphocyte

51
 Le plateau strié

MO. Représentations schématiques d’entérocytes

Le plateau strié

..MO.représentation schématique:
entérocytes ( cellules à plateau strié)
et cellule caliciforme

Epithélium intestinal au MO.

Faible et fort grossissements

52
53
 Microvillosités

Plateau strié d’entérocyte au MET ou Microvillosités

54
 Microvillosité de l’entérocyte
Représentation schématique et composition moléculaire
Coiffe:
myosine V…
Filament
d’actine Bras latéral:
myosine I,
calmoduline…
Liens interfilaments:
villine, fimbrine…

MP Réseau terminal:
spectrine
Filaments
intermédiaires:
cytokératine

55
 Autres différenciations de la MP apicale

Les stéréocils
Représentation schématique et
MO du canal de l’épididyme

Les stéréocils
Représentation schématique et MEB

56
 Les cils stéréoscopiques
Représentation schématique et mode de fonctionnement

Représentation schématique et mode de fonctionnement

K+

MEB. Cils stéréoscopiques

57
Les molécules d’adhérence
Mise en évidence sur des cultures
cellulaires d’embryon de poulet

Les molécules d’adhérence

Types d’interaction

58
 N-CAMS

CAM Ca++ dépendantes et SAM

59
 Les cadhérines

Interaction homophilique de cadhérines

Espace
MP intermembranaire MP

γβ
X α

FA Caténines

60
 Les sélectines

Diapédèse
Interaction leucocyte – cellule endothéliale au niveau d’un capillaire sanguin

61
 Les intégrines

Le contact focal
Inteartions entre différentes molécules

Le contact focal
Assemblage

62
La juxtaposition simple de deux cellules voisines

63
Les interdigitations
MET

. ...
....
Espace
Les interdigitations intercellulaire
....
....
Schéma 200 – 250 nm
ultrastructural ....
et moléculaire

....
....

Cellule 1

Cellule 2
. ...
....

....
....

MP MP
....

O,5 μm

....
....

64
 Les jonctions cellulaires Représentation
schématique en 3 D

Zonula occludens
Zonula adhaerens

Desmosome

Hémidesmosome

Lame basale

65
Le complexe de jonction

MET.
Entérocyte

Jonction serrée
(zonula occludens)
Jonction diffuse
(zonula adhaerens)
Desmosome
(macula adhaerens)

Le complexe de jonction
Représentation schématique au MET

66
 La jonction serrée
MET. Schémas et image d’une réplique

Représentation schématique avec quelques constituants moléculaires

67
 Fonctions de la jonction serrée
Fermeture de l’espace intercellulaire
Maintien de la polarité cellulaire
Exemple du transport du glucose par l’entérocyte

Fonctions de la jonction serrée

Maintien de la polarité cellulaire: transport
du glucose par l’entérocye

68
 Complexe de jonction

MET

La jonction diffuse
Représentation schématique avec quelques constituants
moléculaires
Espace Caténine β (plakoglobine)
intercellulaire ou γ
Cadhérine MP MP Caténine α
E

FA

Plaque
cytoplasmique

69
 Le desmosome
MET. Cellules de l’épiderme Représentation
Représentationschématique
schématique en
en 33 D
D

Représentation schématique avec

Desmosome quelques constituants moléculaires
Cadhérines Espace
(desmocolline intercellulaire
MP MP Desmoplakine,
desmogléine)
Plakoglobine

FI
(kératine)

Plaque
desmosomale Caténines

70
La jonction de type gap ou jonction communicante

Formations
hexagonales

71
 Les invaginations

L’hémidesmosome

Hémidesmosome

72
Le cytosquelette

Répartition des MT, des FA et des FI

73
 Les microtubules

MET. Schémas de MT en coupe longitudinale et en coupe transversale (coloration

négative)

Un MT constitué de 13 protofilaments

74
 La méthode de coloration négative

Les microtubules

MET . Coloration négative

et représentations
schématiques et dessin

75
 Polymérisation des MT

Dynamique des MT

Nucléation Elongation Plateau

0
% tubuline libre

100
Temps (37°)

76
 Mode d’ action de la colchicine

Tubuline αβ

Molécule de
colchicine

Les MAPs
MET.coloration négative et schéma

Kinésine Dynéine Dynéine Kinésine _

Dynéine
Modèle de dynéine MET. Cryodécapage

77
MT et Maps: transport de vésicules

78
 Les filaments d’actine

Coloration négative et schéma

Dynamique des filaments d’actine

Les molécules d’actine

s’incorporent dans le FA Plus
ou le quittent à la façon
d’un tapis roulant

Moins

79
Les protéines associées à l’actine

80
 Filaments d’actine et protéines associées

MET. Molécules d’ alpha

actinine purifiées Schémas. Faisceau contractile
et faisceau serré

alpha actinine Fimbrine

Modèle de mise en place d’ un contact focal

Au cours de son déplacement sur le support,la cellule

détruit et constitue alternativement les contacts focaux

81
Le réseau d’actine. Rôle de la fimbrine

82
 Les filaments d’actine
Fluidification du cortex cellulaire.Rôle de la gelsoline

83
Des bactéries utilisent les FA pour passer directement d’une cellule à l’autre pour
pouvoir échapper aux mécanismes de défense exemple de Listeria monocytogenes

84
Les filaments intermédiaires

Monomère en MET

85
Classes des filaments intermédiaires

86
 Le centriole et ses dérivés

Le centrosome
Polynucléaire .Schéma et MET

Diplosome = une paire de centrioles

Représentation schématique et relation avec les MT

87
 Le centriole
MET

coupes transversales et longitudinale

MET coloration négative et représentation schématique

Coloration négative Triplet montrant les sous
d’un doublet unités communes

88
 Le centriole
Représentation schématique en coupe
transversale.
Sructure en roue de charrette du côté distal

MTOC: centre organisateur des microtubules

Diplosome

MT Matériel / matrice
péricentriolaire

89
 Le cycle cellulaire

MET. Duplication du diplosome

90
Duplication des centrioles

91
 Formation des corpuscules basaux

Satellite

Représentation schématique au MO

MO. La trachée : épithélium cilié

92
Flux membranaires entre RE et AG

Les MT en relation
avec le MTOC,
guident les
vésicules sur de
longues distances

Centrosome et transport de vésicules

93
 Le cil vibratile

Cils
Corpuscules
basaux
Racine

ciliaire

Membrane
basale

MET. Coloration négative

(9 doublets périphériques + 1 paire centrale)

94
Le cil dans ses parties moyenne et basale

Triplet A, B,et C
Lien protéique

MET. Schéma Coupe transversale dans la partie

moyenne

95
 Le cil vibratile

Le mouvement ciliaire

Le mouvement du flagelle d’un

spermatozoïde

96
Mécanisme moléculaire du mouvement ciliaire

Cas d’absence de CB Cas du cil

et de ponts de entier
nexine

Mécanisme moléculaire du mouvement ciliaire

Rôle de la dynéine

MT A

97