Actée à grappes PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.

ESSAI
Eléments étrangers (2.8.2) : au maximum 5 pour cent de tiges Teneur : au minimum 1,0 pour cent d’hétérosides
de diamètre supérieur à 3 mm et au maximum 2 pour cent triterpéniques, exprimés en glycyrrhizate de monoammonium
d’autres éléments étrangers. (C42H65NO16 ; Mr 840) (drogue desséchée).

Perte à la dessiccation (2.2.32) : au maximum 12,0 pour cent,

déterminé à l’étuve à 105 °C pendant 2 h sur 0,500 g d’achillée
millefeuille pulvérisée (355) (2.9.12).
IDENTIFICATION

Cendres totales (2.4.16) : au maximum 10,0 pour cent.
Cendres insolubles dans l’acide chlorhydrique (2.8.1) : au
maximum 2,5 pour cent.
DOSAGE
Huile essentielle (2.8.12). Utilisez 20,0 g d’achillée
millefeuille fragmentée, un ballon à fond rond de 1000 mL et
500 mL d’un mélange de 1 volume d’eau R et de 9 volumes
d’éthylèneglycol R comme liquide d’entraînement. Ajoutez
0,50 mL de 1,2,4-triméthylbenzène R dans le tube gradué.
Distillez à un débit de 3-4 mL/min pendant 4 h.
Stoppez la réfrigération à la fin de la distillation et poursuivez
la distillation jusqu’à ce que les composants bleus entraînés
par la vapeur aient atteint la base du réfrigérant. Reprenez
immédiatement la réfrigération, pour éviter de chauffer
l’espace de séparation. Arrêtez la distillation après 10 min.
Proazulènes. En prenant soin de prélever le moins d’eau
possible, transférez dans un ballon jaugé de 50 mL le mélange
bleu d’huile essentielle et de 1,2,4-triméthylbenzène obtenu
lors du dosage de l’huile essentielle, à l’aide de petites quantités
de xylène R et en rinçant le tube gradué de l’appareil avec du
xylène R, puis complétez à 50,0 mL avec le même solvant.
Mesurez l’absorbance (2.2.25) à 608 nm en utilisant le xylène R
comme liquide de compensation.
Calculez la teneur pour cent en proazulènes, exprimés en
chamazulène, à l’aide de l’expression suivante :
A. Drogue entière. Le rhizome est brun foncé, dur, de
forme subcylindrique et légèrement noueux ; il mesure
1,5-2,5 cm de diamètre et 2-15 cm de longueur, et présente
de nombreuses ramifications très rapprochées, dressées
ou courbées, portant chacune à leur extrémité les restes
d’un bouton ou une cicatrice circulaire concave. La cassure
est cornée et la section transversale montre une mince
zone corticale entourant un anneau composé de nombreux
éléments cunéiformes clairs du tissu vasculaire, alternant
avec des rayons médullaires plus sombres, ainsi qu’une
importante moelle centrale. Le rhizome porte sur sa face
inférieure des racines dont beaucoup sont brisées, laissant
des cicatrices circulaires. Les racines sont brun foncé, d’un
diamètre de 1-3 mm, cassantes, de forme sensiblement
cylindrique ou quadrangulaire obtuse, et présentent des
rides longitudinales ; la cassure est courte ; la coupe
transversale fait apparaître une épaisse zone corticale
formant un cylindre brun foncé dont la région centrale est
composée de 3-6 faisceaux cunéiformes de tissu vasculaire
plus clairs, unis au centre et séparés par de larges rayons
médullaires non lignifiés.
Drogue fragmentée. Fragments irréguliers, plus ou moins
anguleux, de rhizome et fragments cylindriques de racines.
Les fragments de rhizome, durs, cornés, présentent en
général une surface brun foncé correspondant à la surface
externe et plusieurs surfaces brun clair fréquemment
striées correspondant à la coupe. Les fragments de
racine, brun foncé, plus ou moins cylindriques, sont ridés
longitudinalement. La coupe transversale de couleur plus
claire fait apparaître une zone cambiale bien distincte
séparant une épaisse zone corticale de la région centrale
composée de 3-6 faisceaux cunéiformes de tissu vasculaire
unis au centre et séparés par de larges rayons médullaires.

B. Examen microscopique (2.8.23). La poudre est brun

en prenant 23,8 comme valeur de l’absorbance spécifique du clair. Examinez au microscope en utilisant de la solution
chamazulène. d’hydrate de chloral R. La poudre présente les éléments
suivants (figure 2069.-1) : des fragments de l’épiderme
A = absorbance à 608 nm, du rhizome, à cellules polygonales brunes [A] ; de
m = masse de la prise d’essai, en grammes. nombreux fragments de parenchyme composé de cellules
arrondies, à parois légèrement et régulièrement épaissies,
laissant entre elles de petits méats triangulaires [H] ;
des amas de vaisseaux courts à ponctuations aréolées
serrées [C, J] parfois accompagnés de fibres à paroi
04/2014:2069 finement ponctuée [Ja] ; des fragments du parenchyme de
la moelle du rhizome à cellules ovoïdes à parois épaissies
et canaliculées [F] ; quelques fragments du liber contenant
de longues cellules scléreuses isolées [D] ; des fragments du
tissu de revêtement des racines (vue de face [E], section
longitudinale [B]), composé de cellules brunes recouvertes
ACTÉE À GRAPPES d’une cuticule brun foncé [Ba]. Examinez au microscope en
utilisant une solution de glycérol R à 50 pour cent V/V. La
Cimicifugae rhizoma poudre présente de nombreux grains d’amidon sphériques
ou polygonaux, simples, de 5-10 μm de diamètre, ou
composés de 2-3 (rarement jusqu’à 6) éléments ; certains
DÉFINITION
grains présentent un hile en fente [G].
Rhizome et racine séchés, entiers ou fragmentés, d’Actaea
racemosa L. (syn. Cimicifuga racemosa (L.) Nutt.).

1330 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)
PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0 Actée à grappes

Haut de la plaque

_______ _______ _______

Actéine : une bande Actéine : une bande Une bande brune

brune brune (actéine)
23-Epi-26- Une bande brune
désoxyactéine : une (23-épi-26-
bande brune désoxyactéine)

_______ _______ _______

Une bande violette Une bande violette

Une bande violette Une bande violette
Une bande brune Une bande brune

Solution à
Solution témoin (a) Solution témoin (b)
examiner

Figure 2069.-1. – Dessin pour l’identification B de l’actée à Substitution par Cimicifuga americana Michx., C. foetida L.,
grappes pulvérisée
C. Examinez les chromatogrammes obtenus dans l’essai de
Substitution par Cimicifuga americana Michx., C. foetida L.,
C. dahurica (Turcz.) Maxim. ou C. heracleifolia Kom.
Résultats B : utilisez les chromatogrammes fournis avec
l’Actaea racemosa ERV et le chromatogramme obtenu
avec la solution témoin (a) pour identifier les bandes
correspondant à A. racemosa.
Voir ci-après la séquence des bandes présentes dans les
chromatogrammes obtenus avec les solutions témoins (a)
et (b) et la solution à examiner. Par ailleurs, d’autres
bandes de faible intensité peuvent être présentes dans les
chromatogrammes obtenus avec la solution témoin (a) et la
solution à examiner.
ESSAI
Perte à la dessiccation (2.2.32) : au maximum 12 pour cent,
déterminé à l’étuve à 105 °C pendant 2 h sur 1,000 g d’actée à
grappes pulvérisée (355) (2.9.12).
Eléments étrangers (2.8.2) : au maximum 5 pour cent.
Cendres totales (2.4.16) : au maximum 10 pour cent.
Cendres insolubles dans l’acide chlorhydrique (2.8.1) : au
maximum 5 pour cent.
C. dahurica (Turcz.) Maxim. ou C. heracleifolia Kom.
Chromatographie sur couche mince (2.2.27).
Solution à examiner. A 0,50 g d’actée à grappes pulvérisée
(355) (2.9.12), ajoutez 10 mL d’éthanol à 50 pour cent V/V R.
Agitez soigneusement, puis traitez aux ultrasons pendant
10 min et centrifugez. Utilisez le surnageant.
Solution témoin (a). A 0,50 g d’Actaea racemosa ERV, ajoutez
10 mL d’éthanol à 50 pour cent V/V R. Agitez soigneusement,
puis traitez aux ultrasons pendant 10 min et centrifugez.
Utilisez le surnageant.
Solution témoin (b). Dissolvez 2 mg d’actéine R dans du
méthanol R et complétez à 10 mL avec le même solvant.
Plaque : plaque au gel de silice F254 pour CCM R (2-10 μm).
Phase mobile : acide formique anhydre R, formiate d’éthyle R,
toluène R (20:30:50 V/V/V).
Dépôt : 2 μL en bandes de 8 mm (voir tableau 2069.-1).
Développement : sur un parcours de 6 cm.
Séchage : à l’air.
Conformité du système : solution témoin (b) :
– le RF de la bande due à l’actéine se situe entre 0,35 et 0,40
(détection B).
Détection A : examinez en lumière ultraviolette à 254 nm.

Tableau 2069.-1.– Schéma des dépôts

Piste 1 2 3 4 5 6 7

Volume du 2 2 2 - 2 2 2
dépôt (μL)

Solution Solution Solution à Solution Solution Solution à

Solution Blanc
témoin (a) témoin (b) examiner témoin (a) témoin (b) examiner

Après développement, la plaque est découpée le long de la piste 4 (blanc). Les pistes 1-3 sont utilisées pour la détection de substitutions par C. americana,
C. foetida, C. dahurica ou C. heracleifolia (détection A), les pistes 5-7 pour l’identification C (détection B).

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 1331
Actée à grappes PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0

Résultats A : le chromatogramme obtenu avec la solution à combinez les solutions A et B et mélangez soigneusement ;
examiner ne présente pas, entre RF 0,2 et RF 0,35, de bandes traitez la plaque avec cette solution récemment préparée
d’atténuation de fluorescence plus intenses que celles du et chauffez à 120 °C pendant 5 min ; examinez en lumière
chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a). ultraviolette à 365 nm.
Détection B : traitez avec une solution d’acide sulfurique R Résultats B : absence de plus de 5 pour cent de C. foetida.
à 10 pour cent V/V dans du méthanol R ; chauffez à 100 °C Comparez le chromatogramme de C. foetida fourni avec
pendant 5 min. Laissez refroidir à température ambiante et l’Actaea racemosa ERV et les chromatogrammes obtenus avec
examinez à la lumière du jour. la solution à examiner et les solutions témoins (a), (b) et (c).
Falsification par Cimicifuga americana Michx., C. foetida L., Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ne
C. dahurica (Turcz.) Maxim. et/ou C. heracleifolia Kom. présente pas de bande(s) d’intense fluorescence entre RF 0,03
Chromatographie sur couche mince (2.2.27) selon les et RF 0,06 ni à la position de la bande du chromatogramme
indications de l’essai de Substitution par Cimicifuga americana obtenu avec la solution témoin (c) (en capitales ci-dessous
Michx., C. foetida L., C. dahurica (Turcz.) Maxim. ou dans le chromatogramme de C. foetida). La présence de l’une
C. heracleifolia Kom., avec les modifications suivantes. et/ou l’autre de ces bandes dans le chromatogramme obtenu
avec la solution à examiner indique une falsification à plus
Solution témoin (c). Dissolvez 2 mg de cimifugine R dans du de 5 pour cent par C. foetida.
méthanol R et complétez à 10 mL avec le même solvant.
Haut de la plaque
Dépôt : 2 μL des solutions témoins (b) et (c), 20 μL de la
solution à examiner et de la solution témoin (a), en bandes de _______ _______ _______ _______
8 mm (voir tableau 2069.-2).
Actéine : une Actéine : une Une faible
Conformité du système : solution témoin (b) : faible bande faible bande bande
blanchâtre blanchâtre blanchâtre
– le RF de la bande due à l’actéine se situe entre 0,35 et 0,40 (actéine)
(détections B et C). _______ _______ _______ _______

Détection A : examinez en lumière ultraviolette à 254 nm. Une bande Une bande
bleuâtre bleuâtre
Résultats A : absence de plus de 10 pour cent de C. americana.
Comparez le chromatogramme de C. americana fourni avec
Cimifugine : UNE BANDE
l’Actaea racemosa ERV et les chromatogrammes obtenus D’INTENSE
une bande
avec la solution à examiner et la solution témoin (a). Le d’intense FLUORESCENCE
chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ne fluorescence (CIMIFUGINE)
présente pas de bande d’atténuation de fluorescence à Une bande Une bande
RF 0,3 (en capitales ci-dessous dans le chromatogramme brunâtre brunâtre
de C. americana). La présence de cette bande dans le Une bande Une bande
chromatogramme obtenu avec la solution à examiner indique bleuâtre bleuâtre
une falsification à plus de 10 pour cent par C. americana. UNE BANDE DE
FLUORESCENCE
Haut de la plaque

Solution Solution Solution C. foetida

témoin (a) témoin (b) témoin (c) (5 pour cent)
_______ _______
Détection C : dissolvez 8 g de trichlorure d’antimoine R dans
Une faible bande Une faible bande
200 mL de chlorure de méthylène R ; traitez avec cette solution
2 faibles bandes 2 faibles bandes et chauffez à 120 °C pendant 10 min ; examinez en lumière
ultraviolette à 365 nm.
Une faible bande Une faible bande
Résultats C : absence de plus de 5 pour cent de C. heracleifolia
et/ou C. dahurica.
_______ _______UNE BANDE FONCÉE Comparez le chromatogramme de C. heracleifolia et de
Une faible bande Une faible bande C. dahurica fournis avec l’Actaea racemosa ERV et les
chromatogrammes obtenus avec la solution à examiner
Une bande foncée Une bande foncée et les solutions témoins (a) et (b). Le chromatogramme
Une bande foncée Une bande foncée obtenu avec la solution à examiner ne présente pas de bande
d’intense fluorescence juste au-dessus de la bande due à
Solution témoin (a) C. americana (10 pour cent) l’actéine (en capitales ci-dessous dans le chromatogramme
de C. heracleifolia ou C. dahurica). La présence de cette
Détection B : dissolvez 4,5 g d’acide borique R dans 150 mL bande dans le chromatogramme obtenu avec la solution à
d’éthanol anhydre R (solution A) ; dissolvez 5 g d’acide examiner indique une falsification à plus de 5 pour cent par
oxalique R dans 50 mL d’éthanol anhydre R (solution B) ; C. heracleifolia et/ou C. dahurica.

Tableau 2069.-2.– Schéma des dépôts

Piste 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Volume du 20 2 2 20 - 20 2 2 20
dépôt (μL)

Solution Solution Solution Solution à Solution Solution Solution Solution à

Solution Blanc
témoin (a) témoin (b) témoin (c) examiner témoin (a) témoin (b) témoin (c) examiner

Après développement et examen pour la détection de C. americana (détection A), la plaque est découpée le long de la piste 5 (blanc). Les pistes 1-4
sont utilisées pour la détection de falsifications par C. foetida (détection B), les pistes 6-9 pour la détection de falsifications par C. dahurica et/ou C.
heracleifolia (détection C).

1332 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)
PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0 Agar-agar

Haut de la plaque Identification des pics : utilisez le chromatogramme fourni

_______ _______ _______ avec l’extrait sec d’Actaea racemosa pour conformité du
système ERV et le chromatogramme obtenu avec la solution
UNE BANDE D’INTENSE témoin (e) pour identifier les pics à quantifier.
FLUORESCENCE
Conformité du système :
Actéine : une faible Actéine : une faible Une faible bande
– rapport signal/bruit : au minimum 4,0 pour le pic
bande brunâtre bande brunâtre brunâtre (actéine) dû au glycyrrhizate de monoammonium dans le
_______ _______ _______ chromatogramme obtenu avec la solution témoin (d) ;
– rapport pic/vallée : au minimum 3, avec Hp = hauteur
Une bande brunâtre Une bande brunâtre
au-dessus de la ligne de base du pic 4 et Hv = hauteur
Une bande bleuâtre Une bande bleuâtre au-dessus de la ligne de base du point le plus bas du tracé
entre ce pic et le pic 5 du chromatogramme obtenu avec
la solution témoin (e).
C. heracleifolia Tracez une courbe d’étalonnage en portant en abscisse le
(5 pour cent) et/ou logarithme décimal de la concentration (en milligrammes par
Solution témoin (a) Solution témoin (b)
C. dahurica (5 pour
cent) millilitre) des solutions témoins (a), (b), (c), et (d) (corrigée
en fonction de la teneur pour cent assignée en glycyrrhizate
DOSAGE de monoammonium de l’Actaea racemosa pour dosage SCR)
et en ordonnée le logarithme décimal de la surface de pic
Chromatographie liquide (2.2.29).
correspondante.
Solution à examiner. Dans un flacon de 200 mL à capuchon
vissé, introduisez 4,00 g d’actée à grappes pulvérisée (355) Calculez la teneur pour cent de chaque pic à l’aide de
l’expression suivante :
(2.9.12), puis ajoutez 50,0 mL d’un mélange à volumes égaux
de méthanol R et d’eau R. Traitez aux ultrasons pendant
45 min et agitez pendant 15 min. Filtrez sur une membrane
filtrante (diamètre nominal des pores 0,45 μm).
Solution témoin (a). Dissolvez à l’aide d’ultrasons 10,0 mg A = logarithme décimal de la concentration de chaque
d’Actaea racemosa pour dosage SCR (contenant du pic du chromatogramme obtenu avec la solution
glycyrrhizate de monoammonium) dans du méthanol R et à examiner, déterminé à partir de la courbe
complétez à 10,0 mL avec le même solvant. d’étalonnage,
Solution témoin (b). Prélevez 5,0 mL de solution témoin (a) et m = masse de la drogue végétale à examiner utilisée
complétez à 10,0 mL avec du méthanol R. pour préparer la solution à examiner, en grammes.
Solution témoin (c). Prélevez 2,0 mL de solution témoin (a) et
Calculez la teneur pour cent en hétérosides triterpéniques en
complétez à 10,0 mL avec du méthanol R.
effectuant la somme des teneurs pour cent correspondant aux
Solution témoin (d). Prélevez 1,0 mL de solution témoin (a) et pics 1 à 12.
complétez à 20,0 mL avec du méthanol R.
Solution témoin (e). Dissolvez 500 mg d’extrait sec d’Actaea 01/2009:0310
racemosa pour conformité du système ERV dans du méthanol R
et complétez à 10,0 mL avec le même solvant ; traitez aux
ultrasons et filtrez sur une membrane filtrante (diamètre
nominal des pores 0,45 μm).
Colonne : AGAR-AGAR
– dimensions : l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm,
– phase stationnaire : gel de silice octadécylsilylé pour Agar
chromatographie R (5 μm).
Phase mobile : DÉFINITION
– phase mobile A : solution d’acide formique anhydre R à Polyosides de diverses espèces de Rhodophyceae,
0,1 pour cent V/V dans de l’eau R, principalement du genre Gelidium. L’agar-agar est extrait par
traitement des algues à l’eau bouillante ; l’extrait est filtré à
– phase mobile B : solution d’acide formique anhydre R à
chaud, puis concentré et desséché.
0,1 pour cent V/V dans un mélange à volumes égaux
d’acétonitrile R et de méthanol R, CARACTÈRES
Intervalle Phase mobile A Phase mobile B Aspect : poudre, rubans chiffonnés d’une largeur de 2-5 mm,
(min) (pour cent V/V) (pour cent V/V) ou parfois flocons, incolores ou jaune pâle, translucides, plutôt
0 - 40 50 → 20 50 → 80 résistants et difficiles à rompre, devenant cassants au séchage.
40 - 41 20 → 5 80 → 95
Saveur mucilagineuse.
41 - 44 5 95 IDENTIFICATION
A. Examinez au microscope en utilisant de l’iode 0,005 M.
Débit : 1,0 mL/min. L’agar-agar sous forme de bandes ou de flocons se colore
Détection : détecteur évaporatif à diffusion de lumière ; les en partie en violet-brun. Vu sous grossissement (100 ×),
réglages suivants ont donné satisfaction ; si les paramètres de il présente les éléments suivants : de nombreux grains
réglage du détecteur sont différents, effectuez les ajustements minuscules, incolores, ovoïdes ou arrondis, sur un fond
nécessaires pour que le critère de conformité du système amorphe et parfois des spores brunes, arrondies ou
(rapport signal/bruit) soit satisfait : ovoïdes, à surface réticulée, mesurant jusqu’à 60 μm.
– gaz vecteur : azote R, Réduisez l’agar-agar en poudre, si nécessaire. La poudre
– débit : 0,8 mL/min, est blanc-jaune. Examinez au microscope en utilisant de
l’iode 0,005 M. La poudre présente des fragments anguleux
– température de l’évaporateur : 100 °C, sur lesquels se trouvent de nombreux grains, similaires
– température du nébuliseur : 60 °C. à ceux qui sont observés dans les rubans et flocons ; la
Injection : 10 μL. coloration de certains fragments vire au violet-brun.

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 1333