Plan

I. Introduction
II. Principe de séparation
III. Théorie de la chromatographie d’exclusion stérique
IV. NATURE DES PHASES
V. Applications
I.INTRODUCTION

o La chromatographie d’exclusion stérique CES, encore appelée

chromatographie de perméation de gel ou de filtration sur gel est une
technique puissante qui s’applique particulièrement aux espèces de masse
moléculaire élevée.
o Elle permet de séparer les molécules suivant leurs tailles.
o Elle utilise pour cela des phases stationnaires qui comportent des pores
dans lesquels les composés vont pouvoir diffuser, plus ou moins suivant leur
volume.

o Les séparations par exclusion stérique diffèrent des autres méthodes que
nous avons étudiées, en ce sens qu’elles n’impliquent aucune interaction de
nature physique ou chimique entre les analytes et la phase stationnaire, et
celle-ci est pratiquement indépendante de la nature du solvant.
o En fait, on tente dans la mesure du possible, d’éliminer ces interactions car
elles diminuent l’efficacité de la colonne
I.INTRODUCTION

Les méthodes par exclusion sont subdivisées en deux groupes:

·Filtration sur gel: ·Perméation sur gel:

üsolvant aqueux.
üSupports hydrophiles.
üÉchantillons solubles dans
l’eau.
üsolvants organiques non polaires.
üSupports hydrophobes.
üSubstances solubles dans les
solvants organiques moins
polaires.
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II. Principe de séparation
III. Théorie de la chromatographie d’exclusion stérique
IV. NATURE DES PHASES
V. Applications
II.PRINCIPE DE SEPARATION

§La chromatographie d’exclusion (exclusion/diffusion) est une méthode de

séparation de molécules basée sur la filtration de molécules de tailles
différentes au travers d’un gel poreux.

§Les grosses molécules (dont le diamètre est supérieur à celui des pores)
sont exclues et sont donc éluées les premières.

§Les petites et moyennes molécules sont éluées plus tardivement, car

incluses dans le gel, leur migration est freinée.

§Les solutés sont élués dans l'ordre inverse de leurs masses moléculaires.
II.PRINCIPE DE SEPARATION

Figure 1 : schéma simplifié du principe de la chromatographie d'exclusion stérique

II.PRINCIPE DE SEPARATION

Figure 2 : schéma simplifié du principe de la chromatographie d'exclusion stérique

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I. Introduction
II. Principe de séparation
III. Théorie de la chromatographie d’exclusion stérique
IV. . NATURE DES PHASES
V. Applications
III. THEORIE DE LA CES

1- rappel sur la constitution d’une colonne

Les particules se caractérisent par :

Øleur diamètre moyen(dp)
ØL’homogénéité de leur taille
Øleur surface spécifique(SSp)
III. THEORIE DE LA CES

1- rappel sur la constitution d’une colonne

Si la phase stationnaire est poreuse, Les

différents espaces lacunaire seront
occupés par Vm (volume mort).
III. THEORIE DE LA CES

2- EXPRESSION DES VOLUMES

Le volume total Vt d’une colonne remplie d’un polymère poreux ou de silicagel

est donné par:

Vg est le volume occupé par la matrice solide du gel.

Vp, le volume du solvant retenu dans les pores (Volume particulaire)
Vi , le volume libre extérieur représente aussi le volume théorique de solvant
requis pour transporter à travers la colonne les molécules trop grosses pour
pénétrer dans les pores. (Volume intergranulaire)
III. THEORIE DE LA CES

3- EXPRESSION DE DIFFUSION

ü Le pic correspondant aux molécules suffisamment petites pour pénétrer librement

dans les pores apparaîtra à un volume d'éluant égal à Ve= (Vp + Vi).

üLes molécules de dimension intermédiaire ont la possibilité d'occuper une fraction

donnée du solvant retenu dans les pores. Le volume d'élution V de ces molécules est
donné par:

Ou: K est la constante de diffusion

III. THEORIE DE LA CES

3- EXPRESSION DE DIFFUSION

L'équation s'applique à tous les solutés de la colonne

Pour les molécules trop grosses (Totalement exclus) pour entrer dans les pores:

Pour les molécules dont l'accès aux pores est libre (Petites molécules):

En établissant l'équation, on a admis qu'il n'y a aucune interaction, comme

l'adsorption par exemple, entre les molécules de soluté et la surface du gel. présence
d'adsorption, la quantité de soluté interstitiel augmente ; la valeur de K sera donc
supérieure à l'unité pour les petites molécules.

Si K>1…un autre phénomène se rajoute à la diffusion des molécules. Il

s’agit d’un phénomène de partition (interaction entre le soluté et la phase stationnaire)
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III. Théorie de la chromatographie d’exclusion stérique
IV. . NATURE DES PHASES
V. Applications
III. NATURE DES PHASES

Phases stationnaire:
On utilise deux types de support:
ØBilles de polymère.
ØParticules à base de silice (Ø de 5 à 10 μm)

Phase mobile:
ØDoit dissoudre l’échantillon.
ØGonfler le gel.
ØCompatible avec le système de détection.
III. NATURE DES PHASES

La nature des phases en présence dépend du type de CES:

Perméation de gel: (GPC : Gel Permeation Chromatography)
Phase stationnaire : Polymère styrène-divinylbenzène.
Phase mobile : solvant organique; le tétrahydrofuranne, le benzène, le
trichlorométhane ainsi que le trichlorobenzène (réservé aux polymères de synthèse
difficiles à solubiliser).

Filtration sur gel :

Phase stationnaire :
poly hydroxylées à base d’alcools polyvinyliques purs copolymérisés avec des
polyglycérométhacrylates , ou poly acétate de vinyle.
Ces phases portent le nom de gels car elles gonflent en présence des phases mobiles
aqueuses.
On fait également appel à des gels de silice poreuse dont la surface est hydrophile
(présence du groupement glycéropropyle).
IV. APPLICATION

L’avantage de cette méthode est sa grande spécificité et sa

rapidité car elle permet d’abréger maintes opérations
préliminaires de purification.

Les principales applications se trouvent dans le domaine de l’analyse des polymères

(naturels ou de synthèse).
Séparation des molécules de tailles différentes.
Ce procédé consiste à choisir un gel très réticulé qui ne retient que les petites
molécules = véritable tamisage.

Séparation des molécules de tailles voisines.

Constituants nombreux → utilisation de colonnes en série de porosités différentes.
Dans ce cas, c’est le phénomène chromatographique qui devient prépondérant et la
séparation repose sur les différences souvent faibles des constantes de diffusion.

Détermination de la distribution des masses moléculaires.

Les masses moléculaires peuvent être estimés en utilisant la relation linéaire entre le
volume d’élution et le logarithme de la masse moléculaire.