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D’EXCLUSION STERIQUE
Chromatographie sur colonne
Phase stationnaire
constituée de
grains poreux
Fritté
Dépôt de l’échantillon
A la surface de la phase
stationnaire
Elution
2 techniques pour faire circuler l’éluant à travers la
phase stationnaire et entraîner les molécules de
l’échantillon
P
Eluan
t
La phase
stationnaire
est aussi
appelé GEL
GRAIN POREUX DE
PHASE STATIONNAIRE
PETITES ET MOYENNES MOLECULES PEUVENT PENETRER
DANS LES PORES.
Grosses molécules
(diamètre supérieur à
celui des pores)
exclues donc éluées
les premières.
Petites et moyennes
molécules éluées
plus tardivement
puisque incluses
dans le gel.
Temps de séjour d’une molécule X dans la colonne
• Dépend de son coefficient de diffusion à travers les
pores.
Kd = [X]sta/[X]mob
• Si 0 < Kd < 1,
→ Les molécules sont séparées par la phase stationnaire.
Plus elles sont petites, plus Kd est élevé donc leur temps de séjour
est important.
• Ve = Vm + Kd.Vs
• Le gel de dextrane
(Séphadex) : polyhoside
polymérisé
• Le gel de polyacrylamide
(Biogel)
• Utilisation : séparation de
molécules solubles dans les
éluants polaires
(polysaccharide,
protéines…).
2.1.2 Les gels hydrophobes
• Exemples :
Séphadex G50 ⇒ PM séparés 500 → 10000.
Séphadex G75 ⇒ PM séparés 3000 → 70000.
Les gels très réticulés ne présentent pas de masse
inférieure :
Séphadex G10 ⇒ PM séparés → 700.
2.2 LA PHASE MOBILE
Impératifs :