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I. 1. Principe :
Le principe repose sur l'quilibre de concentrations des composs prsents entre deux
phases en contact : la phase stationnaire et la phase mobile (gaz ou liquide) qui se
dplace. La sparation est base sur l'entranement diffrentiel des constituants du
mlange. Ces derniers parcourent la phase stationnaire avec des temps proportionnels
leurs proprits intrinsques (taille, structure, ...) ou leur affinit avec la phase
stationnaire (polarit, ...).
K : Coefficient de distribution
K = CS/CM CS : Concentration de lanalyte A dans la phase
stationnaire
CM : Concentration de lanalyte A dans la phase mobile
Phase stationnaire : - dans une colonne au travers de laquelle progresse la phase mobile par
gravit ou sous laction dune diffrence de pression chromatographie
sur colonne
- sur une surface plane chromatographie sur couche mince (CCM)
Phase mobile : phase qui se dplace sur ou travers la phase stationnaire, entranant
avec elle lanalyte. Le processus dentranement de cet analyte est
appel lution. La phase mobile peut tre un liquide ou un gaz.
I.2.1. Chromatographies en phase liquide (CPL)
- chromatographie de partage :
- La chromatographie gaz-liquide : la phase stationnaire est un liquide immobilis sur un
support solide par imprgnation ou par greffage.
- chromatographie dadsorption :
- La chromatographie gaz-solide : la phase stationnaire est un solide poreux, rserv
lanalyse de mlanges de gaz ou de liquides bas points dbullition.
Eventuellement, la phase mobile peut tre un fluide ltat supercritique (ex CO2 50C et
150 bars)
I.3. Choix de la technique :
Chromatogramme :
t0 : dbut de l'injection
Vm : volume mort de la colonne
tm : temps mort
Ve : volume d'lution ( de rtention, Vr )
d'un compos
tr : temps de rtention ( d'lution, te ) d'un
compos
Ve (volume d'lution) = d (dbit) x t (temps)
Ve' : volume d'lution rduit (Ve = Ve' + Vm)
tr' : temps de rtention rduit (tr = tr' + tm)
Wb : largeur du pic la base ()
Wh : largeur du pic mi-hauteur ()
dynamique et continu est considr comme une suite dtapes distinctes (quilibres
Une colonne sera dautant plus efficace que N est grand (L grand) et H est petit.
2 L
On peut montrer que : H = et =
L 4tR
L2
Donc H = et N = 16(tR/)2 ou N = 5,545 (tR/)2
16tR2
III.2. Facteur de sparation entre deux soluts
(facteur de slectivit)
k2 tR2
= =
k1 tR1
tR2 - tR1
R=2
1 + 2
B
H = A + + Cu
u
(cm)
(cm2/s)
(s)
B
uopt =
C
A : Coefficient de diffusion turbulente ou terme de remplissage
Chemins prfrentiels dus la granulomtrie de la phase stationnaire (taille et rpartition
des particules) changes imparfaits entre les phases perte defficacit.
A est donc li au diamtre des particules du support et lirrgularit du remplissage.
Le gaz doit tre exempt de traces dH2O et O2 : gaz purs et desschs (tamis molculaire).
-Colonnes capillaires (faibles dbits) : quantits trs faibles, difficiles mesurer : injecteur
avec ou sans division (split/splitless)
Injecteur split/splitless :
Mode split : le gaz vecteur pntre dans la chambre de vaporisation avec un dbit lev
(ex: 50 ml/mn), une vanne de fuite, rglable, permet dvacuer la plus grande partie du
gaz et de ne laisser entrer dans la colonne quune faible partie (1/20 1/500), ex: 1% de
50 ml/mn, soit un dbit dans la colonne de 0,5 ml/mn : seulement 1% de lchantillon
inject passe rellement sur la colonne.
linjecteur on column : possibilit dinjecter froid, en mode split, avec une seringue
classique.
IV.3. Colonne et four
Colonne (une ou deux) dans enceinte thermostate (40 400 C) avec possibilit de
programmation de temprature. Doit tre trs stable : T de1 C tR de 2 3%.
T (C)
pente (C/mn)
t
IV.3.1. Colonnes remplies ( garnissage) (les plus anciennes)
Tube en acier inox, verre, ou tflon de 1/8 ou 1/4 de pouce de (3,18 ou 6,35 mm) et 1 3 m
de long, rempli dun support poreux, inerte et stable, finement et uniformment divis,
pralablement recouvert dune couche mince de la phase stationnaire liquide. La phase
stationnaire est donc imprgne (taux de 3 25%) dans les pores (pb de lessivage). Grand
choix de phases stationnaires.
Colonnes tubulaires ouvertes : la phase stationnaire tapisse les parois internes, sous forme
dun film (paisseur 0,05 5 m) : WCOT (Wall Coated Open Tubular).
1res colonnes en acier, puis en silice fondue (trs pure) (FSOT : Fused Silica Open Tubular)
recouvert dune gaine extrieure en polyimide (thermiquement rsistant)
: Grande efficacit 200000 plateaux ( 1000 pour une colonne remplie). A noter que le
terme de remplissage A de leqt de Van Deemter est ici nul.
Colonnes remplies :
Grand choix de phases stationnaires, facile mettre en uvre car simple imprgnation
moins polaire)
Colonnes capillaires :
Choix beaucoup plus limit (phases pouvant conduire la formation dun film greff) :
Polysiloxanes :
R R R
R - Si - O - Si - O - Si - R
R R nR
R = Me : polydimthylsiloxane (OV1 ou SE30) apolaire.
Possibilit de substituer des groupes Me par R = Ph (5%, 50%,), C3H6CF3, C3H6CN :
polarit
- Dtecteur thermoionique :
Semblable au FID + cramique en silicate de Rb ou Cs lextrmit de la flamme :
formation dun plasma dans lequel se forme un nombre lev dions en prsence de
molcules phosphores ou azotes.
Slectif aux composs contenant P et N (applications : pesticides,)
CPL / CPG :
- + gnral : composs thermosensibles, trs polaires (ions), peu volatils
(macromolcules)
- efficacit moindre (L + faible)
- + dinteractions :
CPG CPL
Solut Solut
Elments relis entre eux par des tubes ( = 0,1 mm) en inox ou PEEK
V.1.3. Injecteurs
Vanne dinjection boucle (5L < V < 500L)
V.1.4. Colonnes
standard : Inox (5 cm < L < 30 cm, 4 mm < int.< 10 mm), efficacit 50 000 plateaux / m
Micro-colonnes (L 5 cm, int 1 mm, 100 000 plateaux / m) : rapidit, faibles volumes
de solvants
ure + formol
Si(OEt)4 H2O SiO2 pH = 2 , O2
H+
3-6m
Sol-gel
silice celle utilise en CPL prparative (sable Na2SiO3 Si(OH)4 SiO2)
Peu de composs fluorescent naturellement drivatisation : ex. FMOC pour les amines
COCl
d. Autres dtecteurs
Applications :
- deionisation deau (adoucisseurs)
- sparation
- dosage dions