La chromatographie

Classification des chromatographies

Grandeurs chromatographiques
Volume de rtention
Rsolution
Quantification en chromatographie
Chromatographie en phase liquide
Adsorption
Partage
Exclusion strique
Echange dions
Chromatographie en phase gazeuse
Adsorption
Partage
Lappareillage en chromatographie

Principe de la chromatographie
Classification
Phase
mobile
Phase
stationnaire
type
liquide liquide LL
liquide solide LS
gaz liquide GL
gaz solide GS
phnomne Phase mobile
Phase
stationnaire
type
adsorption
liquide solide SL
adsorption
gaz solide GS
partage
liquide liquide LL
partage
gaz liquide GS
change
ions
Liquide
ionique
changeur
dions
Echange
ions
Exclusion
strique
Liquide gel
exclusion
Grandeurs chromatographiques
0,00
10,00
20,00
0 1 2 3 4 5 6 7
o
Vr
Vr
r o
q dv
V V
e
q
95 . 0
2
) (
*
2
2
2
2
2
=

}
+

o
o
o t o
2
2
2
2
2
) (
*
2 2
) (
*
o t o o
r o r
M
V V
e
q V V
e C C

=

=
N
V
r
= o
Profil des concentrations
Ecart type
N
V 4
V
r
95
= A

N
V 6
V
r
6 , 99
= A
Etalements
o
Vr
Vr
r o
q dv
V V
e
q
996 . 0
2
) (
*
2
3
3
2
2
=

}
+

o
o
o t o
P * V V V
s o r
+ =
Position du pic chromatographique
mobile phase la dans solut q
re stationnai phase la dans solut q
' k =

Grandeurs chromatographiques

Facteurs de capacit


Rsolution R: elle caractrise la qualit de la sparation
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
) ' k 1 ( * V V
o r
+ =
A B
rA rB
V V
V V
* 2 R
A + A

=
o
o
+
=
1
*
k 1
' k
* N *
4
1
R
B
B
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Bonne rsolution R>1 Mauvaise rsolution R<1
Grandeurs chromatographiques
Dtermination du nombre
de plateaux N

grandeur caractrisant le
fonctionnement de la colonne
chromatographique
Dpend des conditions de
fonctionnement
Dtermination exprimentale
0,00
10,00
20,00
0 1 2 3 4 5 6 7
C
M
C
M
/2
o
V
r
2
r
V
* 54 . 5 N |
.
|

\
|
o
=
o
Grandeurs chromatographiques
Hauteur du plateau
quivalent
dpend de la taille des
particules de phase
stationnaire
Dpend du remplissage de
la colonne
Dpend du dbit (d) de
phase mobile


d
h
d o
Cd
d
B
A h + + =
Equation de Vandemter
A: contribution de la diffusion du solut au travers de la
phase stationnaire
B/d: contribution dela diffusion du solut dans la phase
mobile
Cd: contribution de la rsistance au transfert de masse
entre les deux phases
Quantification en chromatographie
Mthode de la normalisation
Simple mettre en oeuvre, peu adapt aux mlanges
complexes
Mthode par talonnage direct
Ncessite dutiliser autant dtalon que de composs
recherchs
Ncessite de contrler rigoureusement le volume inject
Mthode par talonnage interne
Ncessite dutiliser autant dtalon que de composs
recherchs
Ncessit de rechercher un talon interne adapt la
composition du mlange analyser
Plus long mettre en uvre
Permet de saffranchir du volume inject
Proprits des phases stationnaires
On distingue
Le support: silice ou alumine
La phase elle-mme
Adsorbant
Solide pores calibrs
Liquide imprgnant les pores
Molcules greffes
Fonction organique
changeur dions
Proprits des supports utiliss en chromatographie
Grain de taille 5 10 m
Classification de la taille des pores:
d
p
> 50 nm macropore
2< d
p
< 50 nm msopore
D
p
< 2 nm micropore
Pour les applications en chromatographie
les diamtres des pores varient entre 10 et
20 nm
La surface spcifique S est majoritairement due la
surface des pores, elle augmente lorsque la taille des
pores diminue
Vp: cest le volume des pores: il augmente lorsque la
porosit croit
P: porosit P=100 *V
poreux
/V
matriau
Vo: cest le volume entre les grains ou volume mort, il
ne dpend que de la taille des grains
Chromatographie en phase
liquide
La chromatographie dadsorption
ads s o r
P V V V * + =
Solvant
Force luante
(silice)

Force luante
(alumine)

Hexane 0 0
Ether 0.22 0.28
Chloroforme 0.26 0.40
Chlorure
mthylne
0.32 0.42
Actonitrile 0.50 0.65
Mthanol 0.73 0.95
Eau >0.73 >0.95
Les phases mobiles utilises en chromatographie dadsorption
La chromatographie dadsorption
ads s o r
P V V V * + =
P
ads
dpend entre autre
de lnergie dadsorption de la molcule (cette
nergie est li la surface occupe par la
molcule sur le site dadsorption)
de la polarit de la molcule
de la nature de la phase mobile utilise (P
ads

croit si p
m
augmente)

Mode de travail en chromatographie dadsorption
P
o
l
a
r
i
t

SiO
2
, Al
2
O
3
|

d
i
r
e
c
t
e

|

i
n
v
e
r
s
e

ads s o r
P V V V * + =
P
ads
dpend de la surface occupe par la molcule et de sa
polarit (prsence dhtroatomes)
Chromatographie dadsorption
Effet de la taille des pores en chromatographie dadsorption
Une diminution de la taille
des pores augmente la
surface spcifique et par
consquent le Vr du
solut augmente

Une taille trop faible des
pores peut entraner des
phnomnes dexclusion
strique
d=4 nm, S= 900 m
2
.g
-1
d=6 nm, S= 400 m
2
.g
-1
d=10 nm, S= 200 m
2
.g
-1
-1,5
-0,5
0,5
1,5
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12
eluent strength c
o
ln(k
s
)
phenanthrene

biphenyl

naphtalene

benzene
Leffet de la polarit lie la force luante c
o
est donne par la
relation de Snyder

log k
S
= log V
a
+ b ( E
o
A
S
c
o
) + log (W
a
/ V
M
) + AE
S

log k
S
et par consquent Vr dcroissent lorsque la polarit de
la phase mobile croit
Effet de la polarit de la phase mobile en chromatographie
dadsorption
Effet de la polarit de la phase mobile
en chromatographie dadsorption
Une augmentation de polarit de
la phase mobile diminue Vr
Solvant phase
mobile

Force luante
(alumine)

Phase
stationnaire

Hexane 0 CH
3
Benzne 0.32
|
Chloroforme 0.40
Chlorure mthylne 0.42
Actonitrile 0.65 CN
Mthanol 0.95 NH
2
Eau >0.95
P

a
u
g
m
e
n
t
e

La chromatographie de partage
Les diffrents modes de travail
en chromatographie de partage
P
o
l
a
r
i
t

CH
3
CN
NH
2
|

d
i
r
e
c
t
e

|

d
i
r
e
c
t
e

|

d
i
r
e
c
t
e

|

i
n
v
e
r
s
e

|

i
n
v
e
r
s
e

|

i
n
v
e
r
s
e

P V V V
s o r
* + =
Mode direct: p
s
> p
m
Mode inverse: p
s
< p
m
Influence du mode direct ou indirect sur la sparation
Effet de la polarit de la phase mobile
en chromatographie de partage
Une augmentation de polarit de
la phase mobile diminue Vr
Une augmentation de polarit de
la phase mobile augmente Vr
En mode direct
En mode inverse
La chromatographie par exclusion strique
Vr
R
V
p
V
o
1 0 * s s + = k avec k V V V
p o r
Vo volume intersticiel
Vp volume poreux
k coefficient de diffusion du solut
k=1 diffusion totale
k=0 exclusion totale
La chromatographie par exclusion strique
Dtermination des masses molaires moyennes
Log M
Vr
R
V
p
V
o
Vr
La chromatographie par exclusion strique
Tailles compares des diamtres de pores en nm (d
p
) et du poids
molculaire des composs exclus
En comparaison la taille des pores des phases utilises en adsorption
se situe entre 4 et 10 nm soit au moins 10 fois plus faible; la
tendance rduire le d
p
des phases classiques conduit lapparition
de phnomne dexclusion pour les molcules de masse 500.
Log d
p
1 2 4 3 5
PM 1.5.10
3
10
4
10
5
10
6
10
7
10
2
0
Exclusion strique Adsorption
La chromatographie dchange dion
P V V V
s o r
* + =
Chromatographie dchange de cation
quilibre dchange


Chromatographie dchange danion
quilibre dchange

+ + + +
+ + H n M H n M
n n
npH H n K P + + =
+
log log log
npH n OH n K P + + = 14 * log log log

+ + OH n A OH n A
n n
La chromatographie dchange dion
0 7 14
pH
Log
P
0 7 14
pH
Log
P
change de cation
Si pH diminue, Vr diminue
change de danion
Si pH diminue, Vr croit
pH
1
> pH
2
pH
2
> pH
1
La chromatographie dchange dion
Elimination de la conductivit de
la phase mobile

La conductivit de la phase
mobile est leve, elle doit tre
limine pour avoir une
meilleure sensibilit dans la
dtection.

Cette limination se fait grace
lutilisation dune membrane
changeuse dions par dialyse
de Donnan
Chromatographie en phase
gazeuse
La chromatographie en phase gazeuse
On utilise comme phase mobile un gaz
inerte
Il existe deux types de CPG
La CPG par adsorption (trs peu utilise)
la phase stationnaire est un solide poreux
La phase stationnaire est souvent de lazote
La CPG de partage
la phase stationnaire est un liquide support par
un solide poreux
La phase mobile est souvent de lazote