Vous êtes sur la page 1sur 90

INITIATION A LA

BIOLOGIE MOLÉCULAIRE

Chapitre 1

LES ACIDES NUCLÉIQUES

Pr Ag. Hugues AHIBOH


Ecole Préparatoire des Sciences de la Santé
Université Nangui Abrogoua - Abidjan 2
PLAN (1)

INTRODUCTION

I- STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE


1. Les bases
2. Les pentoses
3. Nucléosides et nucléotides
4. La chaîne polynucléotidique

II- L’ACIDE DESOXYRIBONUCLEIQUE (ADN, DNA)


5. Constituants (structure primaire)
6. Caractéristiques structurales (structure secondaire)
7. Structure tertiaire

3
PLAN (2)

III- L’ACIDE RIBONUCLEIQUE (ARN, RNA)


1. Constituants et caractéristiques
2. ARN ribosomique
3. ARN de transfert
4. ARN messager

IV- GENES ET GENOME

CONCLUSION

4
INTRODUCTION (1)

1869 Friedrich Miescher isole du noyau de cellules un acide riche en


phosphore = nucléine (plus tard retrouvés dans le cytoplasme)
1882 Albrecht Kossel → 1927 Phoebus Levene montrent :
nucléine = acides nucléiques

ACIDES NUCLÉIQUES = longues molécules de sous-unités


répétitives
= Polymères de nucléotides
= POLYNUCLÉOTIDES

NUCLÉOTIDE = BASE azotée + PENTOSE + PHOSPHATE(S)


INTRODUCTION (2)

Deux types d’acides nucléiques (AN):


- Acide désoxyribonucléique (ADN, DNA en anglais)
- Acides ribonucléiques (ARN, RNA en anglais)

Intérêts des AN :
• Propriétés biologiques tiennent à leur structure moléculaire
• Base des activités biologiques : programme et éléments
d’exécution des biosynthèses
• Support de l’hérédité : Transmission aux descendants des
caractéristiques biologiques
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

BASES des AN = hétérocycles aromatiques

On distingue :

– Bases pyrimidiques

– Bases puriques (purines)

7
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases pyrimidiques (1)

• Cytosine (C) présente dans ADN et ARN


• Thymine (T) présente uniquement dans ADN
• Uracile (U) présente uniquement dans ARN
“Dans l’ARN, l’uracile remplace la thymine’’ 8
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases pyrimidiques (2)


Equilibre tautomérique entre les formes céto/énol (lactame/lactime)

Forme lactame Forme lactime

Ex : Uracile
Au pH physiologique la forme lactame est favorisée par rapport à la forme
lactime 9
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases pyrimidiques (3)


Bases pyrimidiques modifiées

Formées secondairement après leur inclusion dans les acides


nucléiques : modifications épigénétiques protectrices des AN

5-méthylcytosine pseudouracile dihydrouracile


10
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases puriques (1)

Adénine (A) et Guanine (G) présentes dans ADN et ARN


11
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases puriques (2)


Equilibre tautomérique entre les formes imine/amine :

Ex : Adénine
Au pH physiologique la forme amine est favorisée par rapport à la forme imine

12
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Bases puriques (3)


Bases puriques modifiées
Formées secondairement après leur inclusion dans les acides nucléiques :
modifications épigénétiques protectrices des AN (Enzymes : méthylase de
modification, déaminase)

N6-méthyladénine N7-méthylguanine hypoxanthine


(dans ADN) (dans ARN de transfert)
13
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Epigénétisme
• Phénomène environnementaux qui affectent la structure des acides
nucléiques et in fine qui modulent l'expression du patrimoine
génétique.
• Méthylation, acétylation d’AN peuvent inhiber ou exacerber
l'expression génétique d'un brin d'ADN.
• Acquisition de nouveaux caractères transmissibles à la
descendance.
Exemples:
Différenciation cellulaire. Différences entre jumeaux homozygotes. Chez
tortues, différenciation du sexe en fonction de température des œufs.
Différentiation des abeilles en ouvrières ou reine selon alimentation.
14
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES BASES AZOTÉES

Dérivé des bases puriques


Le dérivé de dégradation des bases puriques = acide urique

Cristaux Tophi = dépôt


d’acide urique d’acide urique

Acide urique Articulation


enflammée

Augmentation de l’acide urique = Hyperuricémie  la goutte


15
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES PENTOSES (1)

Ce sont 2 aldopentoses :
- énantiomère de la série D
- sous la forme hémiacétal cyclique (furanose)
- anomère en conformation β

Ce sont :
- Le βD-ribofuranose (en abrégé ribose) présent dans l’ARN
- Le 2’-désoxy- βD-ribofuranose (en abrégé désoxyribose)
présent dans l’ADN

16
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LES PENTOSES (2)

5’

4’ 1’

2’
3’

Nomenclature : numérotation en ‘ (prime)


17
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NUCLÉOSIDE = BASE + PENTOSE (ribose ou désoxyribose)

9
1

1’ 1’

Base et pentose sont reliés par une liaison N-glycosidique entre :


- soit le N9 de la base purique et le C1’ du pentose
- soit le N1 de la base pyrimidique et le C1’ du pentose 18
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

CONFORMATION VARIABLES DES NUCLÉOSIDES


Pivotement autours des axes C1’-N9 ou C1’-N1  différentes
conformations

anti syn anti syn


Désoxyadénosine Désoxycytidine
(Deoxyadenosine) (deoxycytidine)
19
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NUCLÉOTIDE = BASE + PENTOSE + PHOSPHATE(S)


Nucléotide = Ester phosphate de nucléoside (un groupement
phosphate estérifié au C5’ du pentose)

20
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NUCLÉOTIDE = BASE + PENTOSE + PHOSPHATE(S)

la phosphorylation peut concerner un ou plusieurs hydroxyles de


l'ose.
L’ester-phosphate peut être engagé soit :
– avec d'autres molécules d'acide phosphorique (ADP, ATP)
– avec un autre acide (adénosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate)
– avec un autre hydroxyle par une deuxième liaison ester
dans les nucléotides cycliques (AMP cyclique ou AMPc)

21
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NUCLÉOTIDE = BASE + PENTOSE + PHOSPHATE(S)

22
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NOMENCLATURE ET DENOMINATION

Les nucléotides sont des acides adénylique, guanylique, thymidylique et


cytidylique 23
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES

NUCLEOTIDES D’INTERET BIOLOGIQUE (1)

• Les nucléosides 5'-phosphates sont les unités de bases de


polymères tels que l'ADN et l'ARN.
• L’adénosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate est impliqué
dans des réactions de sulfatation des glycanes (chondroïtine
sulfate, dermatane sulfate, kératane sulfate, …) et des lipides.

24
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
NUCLEOSIDES ET NUCLEOTIDES
NUCLEOTIDES D’INTERET BIOLOGIQUE (2)
• L'ATP avec ses deux liaisons anhydride d'acide sont une
source d'énergie utilisable :
- par des réactions enzymatiques (impossibles sans
couplage)
- pour le transport transmembranaire actif
- pour la contraction musculaire
• Les nucléosides 5' triphosphates sont aussi des donneurs
de phosphates : ATP  ADP + Pi
• L'AMPc identifié comme un second messager en assurant
le relais intracellulaire d'un signal extracellulaire. 25
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (1)

• Un polynucléotide est un polymère constitué d'au


moins 13 monomères de nucléotides liés
par covalence en formant une chaîne.
• Dans la chaine polynucléotidique, un nucléotide est
relié :
- Au précédent nucléotide par une liaison ester entre le
groupement phosphoryle en 5’ de son pentose et le
groupement hydroxyle en 3’ du pentose de l’autre
- au suivant par une liaison ester entre le groupement
hydroxyle en 3’ de son pentose et le groupement
phosphoryle en 5’ du pentose de l’autre. 26
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (2)

• Deux nucléotides voisins sont reliés par une liaison


phosphodiester (groupement phosphate
diestérifié)

• La chaine polynucléotidique a une extrémité 5’-P et


une extrémité 3’-OH. Par convention on écrit et lit
dans le sens 5’  3’, (sens des processus métaboliques :
transcription, traduction).

• Au pH physiologique, la chaine est un polyanion.


27
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (2)

liaison phosphodiester
28
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (3)

29
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (4)

30
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (4)

31
STRUCTURE DE LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE
LA CHAINE POLYNUCLEOTIDIQUE (5)

La taille des AN exprimée en 3 unités :


― la longueur
― la masse moléculaire en Dalton (Da)
― le nombre de nucléotides ou de bases, (noté pb
=paire de bases pour les molécules double brin).
Taille ADN varie de 5.103 à 106 pb
Taille ARN, le nombre de nucléotides varie selon type d’ARN :
- ARN ribosomaux : de 100 à 5000 b
- ARN de transfert : de 75 à 90 b
- ARN messagers : fonction du gène transcrit

32
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CONSTITUANTS (structure primaire)

L'ADN est contenu dans le noyau et une petite partie dans la


matrice des mitochondries ainsi que dans les chloroplastes.

• L’ADN est un polynucléotide.


• Le pentose de l’ADN est le désoxyribose.
• Les bases puriques de l’ADN sont l’adénine et la guanine.
• Les bases pyrimidiques de l’ADN sont la cytosine et la
thymine. 33
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CONSTITUANTS (structure primaire)

Résidus moléculaires variant dans l’ADN = Bases


Nature, Nombre et Ordre d’agencement (position) des bases
dans le sens 5’  3’ = SÉQUENCE (=INFORMATION)
Séquençage = détermination de la séquence

34
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Structure secondaire = Conformation spécifique dans l’espace d’une


partie de la molécule ou des brins d’acides nucléiques

L’ADN est un polynucléotide à 2 chaines (= acide nucléique


bicaténaire). Les 2 chaines sont :
- Complémentaires
- Antiparallèles
- Hélicoïdales
35
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont COMPLÉMENTAIRES :


Appariement spécifique des bases par des liaisons hydrogènes (Pairing of bases):
Purine avec Pyrimidine, Pyrimidine avec Purine

Conséquences :
• Force d’Appariement GC > Force d’Appariement AT
• [A] = [T] et [G] = [C] Règles de Chargaff
• [A] + [G] = [T] + [C]
• [A] + [T] ≠ [G] + [C]
• [G] + [C] varie selon les espèces
36
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont ANTIPARALLÈLES

P = Phosphate

C = Base (cytosine)

Appariement des 2 brins dans


des sens opposés: polarité
inverse (5’3’; 3’5’) 37
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (1)


Une double hélice est formée de deux chaînes antiparallèles
d'ADN qui s'enroulent soit à droite (sens des aiguilles d'une
montre) soit à gauche.

Paire de base appariée (pb)

Squelette ose-phosphate 38
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (2)


La double hélice est caractérisée par :
- son axe principal,
- le sens d'enroulement,
- le pas.
La stabilité de la double hélice d'ADN est liée aux :
• liaisons hydrogène entre les bases de chacun des brins
• interactions hydrophobes et électrostatiques des
bases successives empilées dans la structure de
l'hélice

39
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (3)

Plusieurs conformations possibles de la double hélice d’ADN en


fonction :
- du sens d’enroulement des brins autour de l’axe virtuel
- du pas d’enroulement
- nombre de paires de base (pb) par tour d’hélice
- angle de rotation du plan des paires de bases

40
41
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (4)


5’

3’

Grand sillon
Pas d’hélice

Petit sillon

5’

3’
42
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (4)

Vue dans l’axe virtuel

Angle de
rotation du
plan de 2 pb
successives
43
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Structure tertiaire de l’ADN, modèle en double hélice

Découverte en 1953

Prix Nobel de Médecine Physiologie, 1962


44
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)
Conformations de l’ADN (5)
ADN -B ADN -A ADN -Z

Modèle le plus
stable dans les Condition in vitro : teneur
conditions en eau faible Présente dans
Conditions de
physiologiques (cristallisation), régions courtes de
formation
(Watson, Crick et changement réversible de l'ADN -B
Wilkins, Franklin conformation de B à A.
1953)
Conformation des Anti : C et T
nucléosides Anti Anti Syn : A et G
Sens enroulement droite droite gauche
Pas d’hélice (nm) 3,4 2,8 4,5
Angle de rotation 36° 33° - 30°
des plans de 2 pb
Nombre pb / tour 10 11 12
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Les 2 chaines sont HÉLICOÏDALES (6)

Conformations multiples de l’ADN

45
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire)

Particularités structurale du Z-DNA

Alternance de séquence pyrimidine – purine favorise la


conformation (ex : CGCGCG)
Alternance syn - anti  Squelette ose-phosphate en zig-zag

Intérêt du Z-DNA

• Fonctions biologiques encore imprécises!


• Rôle régulateur (liaison spécifique des Z-DNA binding proteins)
• Information non codante
46
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (1)

Concerne les cellules eucaryotes


Structure tertiaire = Conformation spécifique dans l’espace de la
molécule entière.

Ensemble de l’ADN d’une cellule = GENOME = Gènes


+ espaces entre les gènes (intergénique)

Le défi = comment molécules d’ADN sont agencées


dans noyau cellulaire :
2 x 1 mètre ≈ 2 x 23 chromosomes dans Ø = 10 μm?
47
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (2)

• Molécules longues  Fragiles (cassure facile hors de la


cellule)
• Rangement méthodique de la molécule permettant
son déroulement aisé pour les processus
métaboliques.
• Métaphase de la mitose: Organisation intra-cell en
CHROMOSOMES (Stade de rangement ultime).
• Comment passe-t-on de la double hélice ADN aux
chromosomes?
48
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (3)

1er degré d’organisation tertiaire


ADN molécule acide (chargée Θ à pH physiologique) = polyanion
HISTONES = protéines octamériques très basiques (= cations à
pH physiologique) grace aux acides aminés His, Lys, Arg
Association ADN-Histones grâce à liaison ionique.

49
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (4)

1er degré d’organisation tertiaire


ADN s’enroule 2 fois autours de l’HISTONE (≈146 pb).

Histone octamérique = (2 x H2A) + (2 x H2B) + ( 2 x H4) + (2 x H3)


50
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (5)
1er degré d’organisation tertiaire
Protéine Histone H1 joint les 2 extrémités de l’ADN enroulé
Un segment d’ADN relie deux nucléosomes successifs = ADN linker

NUCLÉOSOME = Histone octamérique + 2 tours ADN + ADN linker +


Histone H1 51
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (6)
2ème degré d’organisation tertiaire (= superstructure)

L’ADN s’organisent en une hélice comprenant 6 nucléosomes


= Fibre de chromatine

Euchromatine Hétérochromatine
52
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (7)
2ème degré d’organisation tertiaire

Les fibres de chromatine s’organisent


en boucles de chromatine
(= solénoïde de chromatine).

53
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (8)
2ème degré d’organisation tertiaire

Aspect microscopique d’un noyau cellulaire


54
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure tertiaire) (9)
3ème degré d’organisation tertiaire
CHROMOSOME = Niveau d’organisation
ultime de l’ADN.

Différentes parties :
- télomères: origine des réplications
- chromatide(s) :
- centromère : centre du chromosome
d’ADN non codant à séquence répétitive
- kinétophore : cplxe protéique +
centromère : point de départ du fuseau
mitotique 55
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

ABSORBANCE EN ULTRA-VIOLET (UV)


Les bases azotées possèdent des hétérocycles plusieurs fois
conjugués L’ADN absorbent intensément la lumière UV.

Intérêt : quantification de l’ADN avec la lumière à λ=260 nm.


L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Agents d’intercalation (1)


• Type chimique : Molécules hétérocycliques, aromatiques,
structure plane, hydrophobes
• Exemples : Bromure d’éthidium (BET), Acridine orange,
Actinomycine D
• Mécanisme : intercalement entre 2 étages de nucléotides
• Conséquences :
distorsion de la double hélice  déroulement partielle
(↘ densité moléculaire)
• Intérêt : marqueur fluorescent spécifique de l’ADN.
57
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Agents d’intercalation (2)

58
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Agents d’intercalation (2)


Application : Séparation de molécule d’ADN en fonction de la taille
par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE)

BET

Sous lumière blanche Sous ultraviolet (UV)


Illumination du BET 59
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (1)

DENATURATION = Désappariement des paires de bases 


Séparation des deux brins d’ADN

• pH extrêmes (pH > 10 ou pH < 2,3)


• ↗ Force ionique  DENATURATION

• ↗ Température (T°)

Si agent de dénaturation = T°  dénaturation = FUSION (melting)


60
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (2)


Température de dénaturation = TEMPÉRATURE DE FUSION = Tm
Tm est fonction de la teneur relative de G + C dans l’ADN

Relation entre la Tm et la teneur relative en


G+C pour différentes forces ioniques 61
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (3)

EFFET HYPOCHROME
Les bases empilées dans l’ADN absorbent moins
intensément la lumière UV que les bases non empilées.

Intérêt : suivi de la fusion de l’ADN par mesure de


l’absorption de la lumière à 260 nm.
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (4)


EFFET HYPOCHROME
Simple
brin

Température
Doubl de fusion Tm
ebrin

Longueur d’onde (nm)


ADN monocaténaire absorbe plus les UV que ADN bicaténaire
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (5)

Variation du Tm en fonction de la teneur relative en G+C


G+C est fonction des espèces cellulaires
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (6)

RENATURATION : Lorsque l’on abaisse la température


progressivement en dessous de Tm les brins
complémentaires d’ADN se réassocient pour former
une double hélice = HYBRIDATION (reannealing)
L’ACIDE DESOXYRIBONUCLÉIQUE (ADN, DNA)
PROPRIÉTÉS PHYSICO-CHIMIQUES

Dénaturation, renaturation de l’ADN (7)


L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure primaire)

• L’ARN est un polynucléotide.


• Le pentose de l’ARN est le ribose.
• Les bases puriques de l’ARN sont l’adénine et la guanine.
• Les bases pyrimidiques de l’ARN sont la cytosine et l’uracile.

Résidus moléculaires variant dans l’ARN = Bases


Nature et Ordre d’agencement des bases dans le sens 5’  3’ = SÉQUENCE
= Information
L’ARN est retrouvé dans différents compartiments cellulaires selon
sa fonction biologique (noyau, cytoplasme, ribosome). 67
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire) (1)

L’ARN, polynucléotide à 1 chaine (acide nucléique monocaténaire).


Les règles d’appariements des bases sont :
- Adénine – Uracile (2 liaisons hydrogènes)
- Guanine – Cytosine (3 liaisons hydrogènes)

 Appariement intramoléculaire de bases complémentaires


Þ structure en épingle à cheveux
Þ Structure plus stable que l’ADN monocaténaire

68
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire) (2)

Schéma d’ARN monocaténaire en épingle à


cheveux
69
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES (structure secondaire) (3)

Les principaux ARN :

- ARN messager (ARNm)


- ARN de transfert (ARNt)
- ARN ribosomique (ARNr)

Autres ARN :
ARNhn heterogeneous nuclear
ARNsn small nuclear
ARNsi small interfering
70
ARN micro
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN messager (ARNm) (1)

• Ils portent l’information génétique de l’ADN nucléaire aux


ribosomes, lieux de synthèse des protéines.
• Le message est codé par triplets de nucléotides = CODONS
• Les ARNm ont une structure primaire, mais rarement une
structure secondaire ou tertiaire.
• Modification post-transcriptionnelle de l’ARNm (maturation) :
- une COIFFE 7-méthyl guanosine à l’extrémité 5’ (cap)
- une QUEUE polyadénylique à l’extrémité 3’ (queue poly A)
71
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN messager (ARNm) (2)

72
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN transfert (ARNt) (1)

• Ils transfèrent les acides aminés du cytosol aux ribosomes, lieux


de synthèse des protéines.
• Structure primaire < 100 nucléotides
• Structure secondaire trilobée (feuille de trèfle) riche en bases
atypiques (bases modifiées).

73
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN transfert (ARNt) (2)

Structure secondaire Structure tertiaire 74


L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN transfert (ARNt) (3)

Bases atypiques de l’ARNt :


– dihydrouracile (boucle D),
– hypoxanthine (boucle anticodon),
– pseudouracile (boucle TC),
– bases méthylée ou diméthylée, …

75
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN transfert (ARNt) (4)


Nucléosides atypiques de l’ARNt

76
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN transfert (ARNt) (5)

Sites essentiels :
• Extm 3’ terminée par CCA : accepteur de
l’acide aminé

• Triplet anticodon spécifique du triplet


codon dans l’ARNm

77
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN ribosomique (ARNr) (1)

• Constituant majeur des ribosomes (65%) associés à des


protéines ribosomales. Lieux de synthèse des protéines.
• Structure secondaire complexe de tiges et de boucles (4
domaines). Structure très conservée entre les espèces
malgré grande variabilité de la structure primaire
• Structure tertiaire en pelote (peu d’informations)

78
L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN ribosomique (ARNr) (2)

Structure secondaire d’un ARNr 79


L’ACIDE RIBONUCLÉIQUE (ARN, RNA)
CARACTÉRISTIQUES STRUCTURALES

ARN ribosomique (ARNr) (2)

Structure tertiaire et quaternaire d’un ARNr 80


STABILITE DES ACIDES NUCLEIQUES

L’ADN est le plus stable des acides nucléiques du fait :


• de sa richesse en liaisons hydrogène entre les bases de
chacun des brins
• de sa structure bicaténaire en hélice
• l’absence de groupement –OH en C2’ sur le pentose

Formation de pont phosphodiester intramoléculaire en milieu basique


81
GÈNES ET GÉNOME HUMAIN (1)
GÉNOME
Ensemble du matériel génétique humain codé dans
l’ADN . Il contient :
- toutes les séquences d’ADN transcrites en ARNm, et
traduites en protéines
- toutes les séquences d’ADN non transcrites, ou
transcrites en ARN, mais non traduites en protéine.
GÈNE
Région continue de l’ADN contenant l’information
nécessaire à la synthèse d’une molécule d’ARN, y
compris les séquences régulatrices (promotrices) non
codantes qui concernent ce gène (30 % du génome).
82
GÈNES ET GÉNOME HUMAIN (2)

Les 70 % de séquences d’ADN restant = ADN INTERGÉNIQUE


Les gènes sont constitués d’introns et d’exons.
INTRONS = des 30 % de gènes, 90 % de séquences non
codantes, dispersées dans les gènes et éliminées au
moment de la transcription (EXCISION - EPISSAGE
alternatif).
Rôle des introns : http://www.lemonde.fr/sciences/article/2012/09/06/des-
chercheurs-mettent-a-jour-des-fonctions-inconnues-de-l-adn-non-
codant_1756051_1650684.html

EXONS = séquence d’ADN transcrit en ARN et dont l’ARN


après l’excision-épissage des introns est retrouvé dans le
cytoplasme. 83
GÈNES ET GÉNOME HUMAIN (3)

84
GÈNES ET GÉNOME HUMAIN (4)

85
GÈNES ET GÉNOME HUMAIN (1)

GÉNOTYPE
Le génotype d'un individu (animal, végétal, bactérien ou
autre) est la somme des gènes qu'il possède.

PHÉNOTYPE
Le phénotype est la somme des caractères
morphologiques, physiologiques, cellulaires ou
comportementaux qui sont identifiables via les protéines
synthétisées.

Deux individus peuvent avoir le même génotype, mais pas forcément le


même phénotype (et inversement).
86
FLUX DE L’INFORMATION GÉNÉTIQUE

Réplication
Noyau cellulaire

ADN
Transcription Transcription inverse

ARN

Traduction
Cytoplasme
Protéines
87
UNE PROCEDURE D’ETUDE DES ACIDES NUCLEIQUES

1. Amplification de la séquence d’intérêt : PCR


2. Quantification des amplicons (produits de la PCR) par mesure de
l’absorbance à 260 nm au photomètre
3. et 4. Identification : Séparation des amplicons par électrophorèse
(PAGE) puis révélation avec intercalant (BET).

Amplification Quantification Séparation Révélation


1 2 3 4
CONCLUSION
Acides nucléiques (AN)
= support de l’information génétique
Molécules polynucléotidiques retrouvées dans différents
compartiments cellulaires (noyau, cytoplasme, mitochondries,
ribosomes).
L’ADN est la forme de stockage et de préservation (de
l’intégrité) du support de l’hérédité.
L’ARN est la forme de transfert des informations
génétiques aux processus de biosynthèse.
C’est à partir de ces deux AN que vont se faire la
réplication du matériel nucléaire, sa transcription et sa
traduction en protéines. 89
“La tête perdue, ne périt que la
personne;
les couilles perdues périraient toute
nature humaine”
90
François Rabelais

Vous aimerez peut-être aussi