EXPOSE DE

MACROMOLECUL
ES BIOLOGIQUES

Thème 6
Structure et fonctions des acides
nucléiques
1
 Membres du groupe
KY Mohamed Adam Lawankiléa.
NARE Talwendsida Lorraine
OUATTARA Awa M.
SAWADOGO Fabienne
ZIDA Tiembo Farida Milène
ZOULABOU Wilfried
ZOURE Job Arthur
2
 PLAN
INTRODUCTION
I. Définitions
II. Compositions des nucléotides
III. Classifications
IV. Structures
V. Propriétés des physico-chimiques
VI. Fonctions
VI. Méthodes d’analyses
CONCLUSION
3
INTRODUCTION
4
 INTRODUCTION (1/2)

Les acides nucléiques sont des biomolécules complexes de

grande taille présente dans les cellules. A l’état naturel, ils
sont généralement présent sous forme d’ADN et d’ARN, qui
constituent les éléments essentiels de la génétique régulant
la transmission et l’expression de l’information génétique au
sein des organismes vivants. Ils sont localisés dans les
cellules de presque tous les organismes.
5
INTRODUCTION (2/2)

6
DEFINITIONS

7
 I. Définitions (1/3)

 Les acides nucléiques sont des macromolécules biologiques

essentielles formés d’une succession de nucléotides intervenant
dans le stockage et la transmission de l’information génétique
chez les organismes vivants.
 Les nucléotides, unité de base des acides nucléiques sont
constitués de bases azotées, d’oses et d’acides phosphoriques.
 Les nucléosides quant a eux sont constitués de bases azotées et
d’oses.
8
I. Définitions (2/3)

9
 I. Définitions (3/3)

Il existe deux types d’acides nucléiques :

Acide DésoxyriboNucléique (ADN)
Acide RiboNucléique (ARN).
L’ADN est le support de l’information génétique, cette
information est traduite et transcrite par l’ARN.

10
COMPOSITION

11
 II. Composition (1/8)
Les acides nucléiques sont formés d’un enchainement de nucléotides
reliés par des liaisons phosphodiesters. Chaque nucléotide est
constitué de :

12
 II. Composition (2/8)
1. Bases azotés

Ce sont des hétérocycles à noyaux aromatiques il en existe deux

types :

 Les purines possédant deux noyaux aromatiques à 4C ce sont

l’Adénine et la Guanine
 Les pyrimidines possédant un seul noyau aromatique à 6C ce sont
la Cytosine, la Thymine et l’Uracile
13
 II. Composition (3/8)
1. Bases azotés

14
 II. Composition (4/8)
2. Oses

Ce sont des pentoses retrouvés chez les acides nucléiques

sont :
Le ribose est l’ose retrouvé dans l’ARN ou il est cyclisé sous
sa forme β-D-ribose

15
 II. Composition (5/8)
2. Oses

16
 II. Composition (6/8)
2. Oses

Le désoxyribose est l’ose retrouvé dans l’ADN, il est obtenu

par la réduction de la fonction alcool secondaire du carbone
2 du ribose, ce qui lui confère une plus grande stabilité.

17
 II. Composition (7/8)
2. Oses

18
 II. Composition (8/8)
3. Acides phosphoriques
Le phosphate (H3PO4) est relié à l’hydroxyle en C5 de l’ose

19
CLASSIFICATIO
N
20
 III. Classification (1/3)

Il existe deux familles :

 Acide désoxyribonucléique
Localisé dans le noyau (ADN chromosomique), dans la matrice des
mitochondries (ADN mitochondrial) et le stroma des chloroplastes
(ADN chloroplasmique) chez les eucaryotes.
Chez les procaryotes tel que les bactéries, on retrouve l’ADN dans une
région précise dans le cytoplasme appelée nucléide ou est localisé
l’ADN chromosique circulaire. 21
 III. Classification (2/3)

Les plasmides sont de petites molécules d’ADN circulaires

présent chez les bactéries qui peuvent contenir des gènes
supplémentaires conférant des avantages adaptatifs.
 Acide ribonucléique
Localisé dans le noyau et le cytoplasme.
Il existe trois groupes importants :

22
 III. Classification (3/3)

 ARNm support transitoire de l’information génétique

 ARNr et ARNt impliqué dans la synthèse des protéines
 D’ autres types d’ ARN : ARNsn ; ARNmi ; ARNi…

23
STRUCTURE

24
 IV. Structure (1/11)
1. Structure de l’ADN

L’ADN est formé de deux longs brins de polynucléotides reliés

ensemble sous forme d’une double hélice. L’ADN ressemblerait à une
échelle avec les « montants » formés par les molécules de carbone et
de phosphate tandis que « les barreaux de l’échelle » sont formés de
bases azotées (A, C, G, T). Chaque brin est un polymère de
nucléosides monophosphates reliés par une liaison 3'- 5'
phosphodiester.
25
 IV. Structure (2/11)
1. Structure de l’ADN

Les deux brins sont :

 Antiparallèles dont un brin est dans le sens 3' ➔ 5' et l'autre dans le
sens opposé 5' ➔ 3’

26
 IV. Structure (3/11)
1. Structure de l’ADN

27
 IV. Structure (4/11)
1. Structure de l’ADN
Complémentaires : les bases A et T se faisant face sont liées par deux
liaisons hydrogènes, alors que les bases G et C sont liées par trois
liaisons hydrogènes.

28
 IV. Structure (5/11)
1. Structure de l’ADN

29
 IV. Structure (6/11)
1. Structure de l’ADN
Les données de Chargaff et les résultats des travaux de Rosalind
Franklin et Maurice Wilkins de distraction aux rayons X de cristaux de
molécules d’ADN analysés en 1953 par Watson et Crick ont permis de
déterminer les caractéristiques de la molécule d’ADN :

Les pourcentages de bases A et T et des bases C et G sont égaux dans

toutes les espèces (A=T et G=C) alors que le rapport A+T/G+C varie
selon les espèces. Ce rapport est appelé coefficient de Chargaff.
30
 IV. Structure (7/11)
1. Structure de l’ADN

31
 IV. Structure (8/11)
1. Structure de l’ADN
 Hélicoïdale
Il existe différents types de conformation de la molécule d’ADN en
fonction de l’orientation de la double hélice : ADN-A, ADN-B, ADN-C,
ADN-D, ADN-E et ADN-Z. Les plus fréquents sont : ADN-A, ADN-B et
ADN-Z.
La molécule d’ADN s’enroule sur des protéines (histones) et forment
un chromosome et l’ensemble des chromosomes forment la
chromatine. 32
 IV. Structure (9/11)
1. Structure de l’ADN

33
 IV. Structure (10/11)
2. Structure de l’ARN
L’ARN, contrairement à l’ADN est constitué d’un seul brin orienté dans
le sens 5' ➔ 3’ (monocaténaire). Les brins d’ARN peuvent s’apparier
selon les règles de complémentarité des bases (A complémentaire à
U et G complémentaire à C) pour donner une structure
intramoléculaire. Les appariements entre paires de base
complémentaires se font par des liaisons hydrogènes, sous forme de
structures en tige-boucle aux extrémités de l'ARN et de structures en
épingle à cheveux à l'intérieur de l'ARN. 34
 IV. Structure (11/11)
2. Structure de l’ARN
Il existe différents types d’ARN :
Types d’ARN Quantité Fonctions

ARN ribosomique 82% Participe à la synthèse des protéines

ARN de transfert 16% Transporteurs d’acides aminés pour la synthèse des protéines

ARN messager 2% Servent de modèles pour diriger la synthèse des protéines

ARN nucléaires courts <1% Participent à l’épissage/excision de l’ARNm et autres activités

enzymatiques

ARN cytoplasmiques courts <1% Participent au transport sélectif des protéines

35
Micro ARN et ARN interférant <1% Participent à la régulation de la synthèse des protéines.
PROPRIETES
PHYSICO-
CHIMIQUE
36
V. Propriétés physico-chimiques (1/6)
1. Solubilité et viscosité

Les groupements phosphates ionisés confèrent aux acides

nucléiques une charge négative. Cela les rend solubles
dans l’eau sous forme de sels de sodium constituant ainsi
des solutions aqueuses avec une viscosité élevée. Dans
l’éthanol en présence de sels et de sodiums, les acides
nucléiques peuvent se précipiter.
37
V. Propriétés physico-chimiques (2/6)
2. Absorption de la lumière UV

Les bases purines et pyrimidines qui entrent dans la

composition des acides nucléiques absorbent dans les UV
avec un maximum à 260nm. Cette propriété permet de doser
la concentration des acides nucléiques.

38
 V. Propriétés physico-chimiques (3/6)
3.Dénaturation et renaturation de l’ADN

La dénaturation thermique correspond au fait que les deux brins de

l'hélice se dissocient par des moyens physiques (température et pH
extrêmes) ou par des moyens chimiques (utilisation de l’urée). On
définit la température de fusion (ou Tm : Temperature of Melting)
comme la température à laquelle la molécule d'ADN est à moitié
désappariée. Elle dépend de la longueur de la molécule d'ADN et de sa
séquence (composition en AT vs GC).
39
V. Propriétés physico-chimiques (4/6)
3.Dénaturation et renaturation de l’ADN

La Tm de l'ADN humain est de 86 °C et la dénaturation

complète est obtenue à 95 °C. La renaturation peut se faire
par un refroidissement lent (>85C) et rapide (80 à 85ºC). La
renaturation thermique est à la base du principe de
l’hybridation moléculaire.

40
V. Propriétés physico-chimiques (5/6)
4. Hydrolyse
 Hydrolyse chimique

Hydrolyse ADN ARN

chimique
Alcaline (NaOH) Pas de réaction Nucléoside
monophosphate
Acide (pH 1 à Pentose+ Bases Pas de réaction
chaud) azotés+ Acide
phosphorique
41
 V. Propriétés physico-chimiques (6/6)
4. Hydrolyse
 Hydrolyse enzymatique
Les enzymes qui hydrolysent les acides nucléiques sont des
nucléases qui coupent les liaisons phosphodiesters uniquement
sur les acides nucléiques linéaires. Ce sont :
 Les exonucléases : elles coupent l'extrémité des chaînes
d'acides nucléiques sans spécificité de base
 Les endonucléases : encore appelées enzymes de restriction,
elles coupent les liaisons internes avec une spécificité de
séquences (palindrome de 4 à 8 bases). 42
FONCTIONS

43
 VI. Fonctions (1/3)

Les principales fonctions des acides nucléiques sont :

 Le stockage de l'information génétique : l'ADN est la molécule

qui stocke l'information génétique dans les cellules. Il contient
les instructions nécessaires à la synthèse des protéines et à
la régulation des processus cellulaires. L'information
génétique est organisée sous forme de gènes, qui sont des
segments spécifiques d'ADN. 44
 VI. Fonctions (2/3)
 La transmission de l'information génétique : l'ADN est transmis de
génération en génération lors de la reproduction cellulaire (mitose) et
de la reproduction sexuée (méiose). Cela assure la stabilité génétique
au fil des générations.
 La synthèse des protéines : l'ARN messager (ARNm) est une copie
transitoire de segments spécifiques de l'ADN. Il transporte l'information
génétique des gènes du noyau cellulaire vers les ribosomes, où la
synthèse des protéines a lieu. L'ARN ribosomique (ARNr) et l'ARN de
transfert (ARNt) sont également impliqués dans la synthèse des
protéines en tant que composants des ribosomes et transporteurs
d'acides aminés, respectivement.
45
 VI. Fonctions (3/3)

 La régulation génétique : certains types d'ARN (comme l'ARN

interférent) participent à la régulation de l'expression génique en
inhibant ou en modulant l'activité des gènes.
 La Transmission d'informations cellulaires : l'ARN est également
impliqué dans la transmission de signaux cellulaires, notamment
dans la régulation de divers processus métaboliques et la réponse
aux stimuli externes.

46
METHODE
D’ANALYSE

47
 VII. Méthodes d’analyse (1/14)
1. PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)
 Extraction
L’extraction est une technique utilisé pour isoler les acides nucléiques
des cellules ou des tissus. Elle se fait à travers quatre étapes qui sont :

 La lyse des cellules par des moyens physiques ou chimiques

 Elimination des protéines (protéinase K) et des lipides (détergent)
 Elimination des autres acides nucléiques (DNase ou RNase en
fonction de l’acide nucléique qu’on veut étudier)
 Concentration par précipitation à l’alcool 48
 VII. Méthodes d’analyse (2/14)
1. PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)
 Amplification
C’est une technique utilisée pour obtenir de nombreuses copies
d’une séquence d’ADN par une amplification enzymatique in
vitro. Le milieu réactionnel contient :
 La Taq polymérase qui est une enzyme utilisée lors de la
PCR, capable de résister forte variation de température.
 Des amorces qui sont utilisées, ce sont de petits brins d’ADN
capables de s’associer de façon spécifiques
(complémentarité des bases) sur les brins d’ADN. 49
 VII. Méthodes d’analyse (3/14)
1. PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)
• Des nucléotides qui sont utilisé pour la synthèse du brin d’ADN
complémentaire

Une PCR se décompose en trois étapes :

 La dénaturation : les deux brins d'ADN sont séparés par chauffage

(95 °C),

 L’hybridation : en abaissant la température (50-70 °C), des

amorces constituées de cours fragments d'ADN viennent
s'hybrider sur les brins d’ADN, 50
 VII. Méthodes d’analyse (4/14)
1. PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)

 L’élongation : une enzyme polymérase, la Taq polymérase,

complète la synthèse du brin d'ADN à partir de l'amorce grâce aux
oligonucléotides présents dans le milieu de réaction.

La RT-PCR ? , la Nested PCR, la PCR classique et la PCR en gradient

de température.

51
 VII. Méthodes d’analyse (5/14)
1. PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)

52
 VII. Méthodes d’analyse (6/14)
2. Hybridation moléculaire

L’hybridation est l’association de brins complémentaires

d’acides nucléiques par des liaisons hydrogènes. Le brin dont
au moins une partie de la séquence est connu, est une sonde
et le brin à caractériser constitue la cible. Les différents types
d’hybridation sont : celle en milieu liquide (phase homogène),
celle en milieu solide (phase hétérogène) et celle in situ.
53
 VII. Méthodes d’analyse (7/14)
3. Séquençage d'ADN

Cette technique est utilisée pour déterminer l'ordre d’enchainements des

nucléotides dans une séquence d'ADN. Elle se fait suivant deux
méthodes :

 Méthode chimique de Maxam et Gilbert : c’est une technique qui est

pratiquement abandonné de nos jours. L’ADN est isolé et dénaturé
par chauffage et ses brins sont séparés sur gel. Le séquençage porte
sur un des brins qui est fragmenté par clivage chimique.
54
 VII. Méthodes d’analyse (8/14)
3. Séquençage d'ADN
Le brin d’ADN est marqué radioactivement et reparti en quatre
fractions chacune étant soumise à un réactif qui coupe la chaine au
niveau d’un nucléotide porteur d’une base spécifique.

55
 VII. Méthodes d’analyse (9/14)
3. Séquençage d'ADN
 Méthode enzymatique de Sanger : l’ADN est isolé et dénaturé par
chauffage. L’ADN monobrin est repartie en quatre fraction, dans
chaque fraction il est répliqué mais sa réplication est bloqué par
l’adjonction de didésoxynucléotides qui se fixe au brin répliqué sur
des nucléotides spécifiques bloquant ainsi l’élongation de la
chaine.

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 VII. Méthodes d’analyse (10/14)
4. Génotypage
Le génotypage est la discipline qui vise à déterminer l'identité d'une
variation génétique, à une position spécifique sur tout ou partie du
génome, pour un individu ou un groupe d'individus donné appartenant
à une espèce animale, végétale, fongique...
Il est effectué de manière standardisée et automatisée par des robots
(robots de pipetage, robot extracteur d'ADN...), thermocycleurs,
séquenceurs capillaires
57
 VII. Méthodes d’analyse (11/14)
4. Génotypage

58
 VII. Méthodes d’analyse (12/15)
4. Génotypage

59
 VII. Méthodes d’analyse (13/14)
5. Southern Blot (Northern Blot pour l'ARN)

Détection d'une séquence spécifique d'ADN ou d'ARN. Les fragments

d'ADN ou d'ARN sont séparés par électrophorèse, transférés sur une
membrane, puis hybridés avec une sonde spécifique marquée. La
détection se fait souvent par autoradiographie ou par fluorescence.

60
 VII. Méthodes d’analyse (14/14)
6. Microarrays (puces à ADN)

Objectif : Étudier simultanément l'expression de milliers de gènes.

Principe : Les ARNm extraits de l'échantillon sont hybridés sur une

puce à ADN, permettant la mesure simultanée de l'expression
génique. La fluorescence ou d'autres méthodes sont utilisées pour
détecter l'hybridation.

61
CONCLUSION
62
 CONCLUSION
Les acides nucleiques constituent une classe importante de
macromolecules biologiques qui remplissent divers rôles cellulaires
necessaire au maintient de la vie. De ces études, des prix Nobel ont
été remportée, renforcant ainsi nos connaissances sur le sujet. La
compréhension de c’est différants mécanismes et variations est
possible de nos jours grace a des nombreuses techniques telles que
la PCR, le génotypage… basées elles mêmes sur une parfaite
connaissance des agencements de leurs structures et propriétés.
63
64