Polynucléaire neutrophile

Le chevalier blanc
1- Généralités
 Principal agent cellulaire anti-bactérien
 Immunité innée
 Anti-infectieux, non spécifique
 Aussi levures, mycoplasmes,…
 Déficit nombre ou fonction: infections graves
 Consommé par sa fonction
 Cicatrisation, élimination débris cellulaires
 Passage sanguin bref et anecdotique
 Destination: tissus
 Fonction
2- Morphologie
 A- Vivant, contraste de phase:
 Sphérique, noyau segmenté, très réfringent
(granulations)
 Adhésion: déplacement amoeboïde
 Polarité
 Uropode, corps cellulaire, lamellipodium

U CC L U CC L

dessus profil
 B- Frottis, coloré MGG
 Arrondie, régulière, 12-15 µm diamètre
 Noyau
 Segmenté (1 à 5, le plus souvent 3)
 Etranglements chromatiniens en taille de guêpe
 Chromatine condensée en petites mottes, violet-pourpre très foncé;
rétraction entre les mottes
 Cytoplasme
 Fond chromophobe ou légèrement acidophile (rosé)
 Granulations:
 Visibles en optique: granulations secondaires spécifiques
 Nombreuses, éparses

 Homogènes,

 Taille intermédiaire

 Marron
 C- Microscopie électronique
 Cellule à maturité
 Un seul noyau segmenté
 Hétérochromatine dense

 Granulations de deux type:

 Petites (0,2 µm), nombreuses,
Granulations secondaires, spécifiques des PNN

Myéloperoxydases négatives

 Plus volumineuses (0,5 µm), rares, denses

= Lysosomes (hydrolases acides)

Granulations primaires

Myéloperoxydases positives
3- Composition
Granulations
Contiennent, entre autres:

 Primaires  Secondaires
 MPO  Transcobalamine
 Lysozyme (1/3)  Lysozyme (2/3)
 Cathepsines  Lactoferrine
 Elastase  Collagénase
 Motifs membranaires
 Molécules d’adhésion (1)
 Système/famille des Sélectines / ligands des Sélectines
 Récepteur: sélectine leucocytaire = L-sélectine (CD 62L)
 Ligand: CD 34; endothéliums vasculaires
 Ligands: de la sélectine plaquettaire (P-sélectine, CD62P)
et de la sélectine endothéliale (E-sélectine, CD62E)

 Système/superfamille des Ig
 Récepteur ICAM-2, « intercellular adhesion molecule »
 Contre-récepteur: intégrine LFA-1 endothéliale
 Récepteurs du fragment Fc des immunoglobulines
 Récepteur PECAM-1, « platelet endothelium adhesion molecule »
 Contre-récepteur: lui-même; endothélium, plaquettes
 Molécules d’adhésion (2)
 Famille des intégrines
 « Intégration » de signaux extérieurs:
 Liens avec cytosquelette; activation cellulaire
 Hétérodimères, chaînes (lient le Ca++), chaînes (cystéines)
 Fonction principale: liaisons cellules-cellules et cellules-matrice extra cellulaire
 2 formes moléculaires: native et activée
 Liaison ligand SSI activation cellulaire et modification structure tertiaire par Ca++

 PNN: principalement deux 2 (CD18) intégrines majeures

 Mac-1, macrophage antigen-1:
M2 (CD11b-CD18)
 LFA-1, lymphocyte-associated funtion antigen-1:
   (CD11a-CD18)
L 2
 Contre-récepteurs: membres superfamille des Ig;
 les ICAM, intercellular adhesion molecule

endothéliales et épithéliales

 PNN: intégrines; les VLA very late antigen

 Ligands principaux: constituants matrice extracellulaire
 Collagène, etc…
 Récepteurs aux cytokines / facteurs de croissance
 Récepteur G-CSF et GM-CSF, …
 Récepteur TNF, IL6, …

 Récepteurs chimiotactiques
 Récepteurs aux chimiokines: (cytokines chimiotactiques)
 CXCR1 et CXCR2: récepteurs de l’ IL8 épithéliale
 Récepteur fractions du complément: au C5a

 Superfamille des molécules liées à la membrane par un lien GPI

 Pont membranaire glycéro-phospho-inositol
 Fixation de fractions inhibitrices du complément sérique
 DAF, « Decay accelerating factor » (CD55)
 MIRL, « Membrane inhibitor of reactive lysis » (CD59)
 Ag HLA de classe I

 Ag de groupes sanguins leucocytaires spécifiques

 Les divers systèmes HNA, « human neutrophil alloantigens »

 Autres
 Ligand du LPS bactérien: CD 14
 Hémostase
 Récepteur « endothélial » de la protéine C (EPCR)
 Récepteur de l’activateur du plasminogène de type urokinase ( R-uPA)
Cytochimie
 Myéloperoxydase +
 Granulations primaires (grains bruns)
 Noir soudan +
 Composés lipidiques
 Positivité parallèle à celle de la MPO (grains noirs)
MPO

 Estérases +
 Divers substrats
 Naphtol ASD chloracétate estérase (grains rouges)

Noir Soudan
4- Compartiments
A- Secteurs
Secteur médullaire Compartiment de prolifération / maturation
(3 à 4 fois (5 à 7 jours) / (5 à 7 jours)
le secteur vasculaire)
Compartiment de réserve (4 jours)
2,3 109 PNN / kg

Secteur vasculaire Secteur marginé

(T ½ 6 à 8 h.) (parois veinules
Renouvellement: post-capillaires) Secteur circulant
1,6 109 PNN / kg / j X

Secteur tissulaire
(1 à 3 jours) Compartiment tissulaire
B- Précurseurs
 Myéloblaste
 Rare
 10-12 µm de diamètre
 Gros noyau, prépondérant
 Légèrement irrégulier
 chromatine fine
 discrètement condensée
 1 ou 2 nucléoles
 Cytoplasme très basophile
 Rares granulations azurophiles
 Myélogramme N°:
 < 3%
 Promyélocyte
 Grande cellule, 15-20 µm
 Rapport N/C diminue
 Noyau
 Excentré
 Chromatine plus condensée
 Nucléole moins visible
 Archoplasme clair juxta-nucléaire
 Golgi dans la concavité du noyau
 Cytoplasme moins basophile
 Granulations primaires azurophiles
 Nombreuses
 Myélogramme N°
 < 5%
 Myélocyte
 Maturation du cytoplasme
 Perd sa basophilie
 Granulations primaires azurophiles diminuent
 Apparition des granulations secondaires spécifiques
 Brûnes, neutrophiles
 Noyau
 Chromatine se condense
 Se creuse
 Myélogramme N°
 5 à 20%
 Métamyélocyte
 Noyau en fer à cheval
 Chromatine condensée
 Cytoplasme
 Acidophile
 Granulations:
 Toutes secondaires
 Myélogramme N°:
 5 à 20%
C- Des vaisseaux aux tissus
 Endothélium des veinules post-capillaires:
 1- Capture lâche des PNN par l’endothélium
 « Comme au bout d’une longe » (« Tethering »), quelques milli-sec
 Passif, pas d’activation cellulaire; PNN ~ sphérique
 Axe moléculaire: Sélectines / Ligands des Sélectines (cf.)
 Versant endothélial: majoration des sites par PAF, IL8, TNF, IL1,IFN ,…

Couples
Sélectines
Ligands

PSGL-1 / P-Selec
(1) L-Selec / ligands

Médiateurs majorant les sites endothéliaux de liaison

C- Des vaisseaux aux tissus
 Endothélium des veinules post-capillaires:
 1- Capture lâche des PNN par l’endothélium
 « Comme au bout d’une longe » (« Tethering »), quelques milli-sec
 Passif, pas d’activation cellulaire; PNN ~ sphérique
 Axe moléculaire: Sélectines / Ligands des Sélectines
 Versant endothélial: majoration des sites par PAF, IL8, TNF, IL1,IFN ,…
 2- Roulement des PNN sur l’endothélium (« Rolling »)
 Adhésion primaire réversible ne demandant pas d’activation cellulaire
 Axe moléculaire: Sélectines / Ligands des Sélectines
Couples
Sélectines
Ligands

PSGL-1 / P-Selec
(1) (2) L-Selec / ligands

Médiateurs majorant les sites endothéliaux de liaison

 3- Adhésion ferme; arrêt des PNN
 Activation cellulaire
 Rôle des cytokine, chimiokines,…
 Couples sélectines-ligands: transduction;
 Induction de seconds messagers intra-cellualires

 Conséquence: activation et réarrangement des Intégrines (Ca++)

 Liaisons 2 Intégrines (PNN) – Ligands des intégrines (ICAM: CEV)
 Si durée de contact PNN / CEV > 25 msec.

Mac-1
2 LFA-1
ICAM

(3)
 4- PNN: changement de forme et migration;
 Configuration bipolaire d’une cellule motile
 Tapis roulant…

 5- Transmigration endothéliale des PNN

 « Diapédèse »
 Sans lésion endothéliale, sans altération de l’étanchéité
vasculaire, complète en 1 à 2 minutes
 Dissociation des complexes de VE-Cadherin inter-endothéliaux
 Nombreuses interactions moléculaires…
 Surtout LFA-1 dépendante
 PNN extravasculaire
 Migration jusqu’à la membrane basale
et les cellules de l’adventice
jusqu’à trouver un passage
d’accès au conjonctif
environnant.
 Adhésion + protéases/récepteurs protéases
 Rôle de VLA-2, absente du PNN circulant,
induite après extravasation
 Coopérations cellulaires facilitantes
 Les plaquettes activées jouent un rôle pivot
dans le recrutement et l’accumulation des PNN
en cas de lésion vasculaire
 Liaison PSGL-1 des PNN / P-Sélectine des plaquettes
 Activation PNN
 Réarrangement Mac-1 des PNN
 Liaison Mac-1 / fibrinogène-plaquettes

 Liaison Mac-1 / ligand CEV

 Réarrangement LFA-1 des PNN

 Liaison LFA-1 / ICAM des CEV
5- Fonctions
Fonction antibactérienne
 PNN: constitution orientée
 Membrane cytoplasmique:
 Médiateur avec le milieu environnant
 Récepteurs; transduction du signal
 Activité migratoire (molécules adhésion + fluidité)
 Protéines contractiles sous-membranaires
 Déplacement et orientation
 Glycogène et enzymes:
 Production instantanée d’énergie et de radicaux actifs de
l’oxygène, nécessaires à l’activité tueuse
 Lysosomes primaires et secondaires (hydrolases acides)
 Facteurs nécessaires à l’activité tueuse,
à la dégradation des éléments ingérés.
PNN
Phagocytose
 4 temps:
 Migration
 Endocytose
 Bactéricidie
 Digestion
A- Migration des PNNs

 Modalités:
 Chimiotactisme:
 Détection d’un gradient de concentration
de facteur « chimiotactique »
(jeu des récepteurs).
 Mouvement accéléré et orienté
vers le point de plus forte concentration
(densité d’occupation des récepteurs
membranaires, liés cytosquelette
contractile)
 Chimiotactisme:
 Deux types de substances favorisantes:
 Chimiotaxines: action directe
 C5a, fraction du fibrinogènes (FPB), leucotriènes (LTB4), …

 Chimiotaxinogènes: action après modifications

 Complexes Ag-Ac, endotoxines, bactéries,
activateurs du complément sérique,
lysosomes, IL8
 IL8 est la principale cytokine produite par le PNN…
B- Endocytose
 Définition:
 Propriété de faire pénétrer dans la cellule
des particules entièrement englobées
dans la membrane cytoplasmique:
 Solides (phagocytose) ou liquides (pinocytose)

 Plusieurs phases:
 Reconnaissance d’une particule comme « phagocytable »
 Adhésion
 Ingestion
 Dégranulation
 Phagocytose: reconnaissance et adhésion
 Particules étrangères, ou cellules du self altérées
 Fixation particule à la membrane
 Non spécifique (interactions hydrophiles, hydrophobes)
 Spécifiques:
 Revêtement de la particule par des « opsonines »
 Ig, C3b et C3bi, lysosyme

 Récepteurs de surface PNN

pour fragment Fc Ig, pour C3b (CR1) et

C3bi (CR3)
 Modèle de la « fermeture éclair »
 Bactérie
IgG
C3b
C3bi

CR1
CR3 FcR

PHAGOSOME

VACUOLE
DE DIGESTION
GRANULATION
PRIMAIRE
(lysosome)
Fusion

PHAGOLYSOSOME
 Phagocytose: ingestion
 Invagination de la membrane en regard particule fixée
 Formation d’une poche dont les lèvres se soudent:
 le phagosome
 Paroi interne = face externe mb cytoplasmique et particules
adhérentes
 Phagocytose: dégranulation
 Les lysosomes périphériques (granulations primaires)
adhèrent au phagosome et y déversent leur contenu
 Le phagolysosome
 Morphologiquement: dégranulation du PNN
 Phagocytose: explosion métabolique
 Dès l’adhésion de la particule
 Système des cytochromes
 Glycolyse
 Anaérobie (énergie pour internalisation)
 Puis aérobie
 Ouverture de la voie des hexoses monophosphates,

métabolisation de l’oxygène: explosion oxydative

 Majoration synthèse lipides membranaires
C- Bactéricidie
 Rôle capital du métabolisme de l’oxygène
Intra Phago O2° - : ion superoxyde
Cellulaire lysosome
NADPH O2
NADPH
oxydase
NADP+ + H+ O2° - « HOCl,
Superoxyde acide hypochlorique,
Dismutase est le médiateur
le plus probables
MPO
de la mort bactérienne
O2 dépendante
Cl- dans le phagolysosome »
HOCl
 Voies indépendantes de l’oxygène
 Acidité du phagolysosome (pH 3 à 6,5)
 Lactates
 Facteurs déversés par lysosomes
 Lysozyme des granulations primaires et secondaires
 Activité réduite
 Lactoferrine des granulations secondaires
 Capte fer nécessaire croissance bactérienne
 Protéines cationiques des granulations primaires
 Action sur lipides bactéries ~ ammoniums quaternaires
D- Digestion
 Action conjuguée:
 Acidité
 enzymes hydrolytiques
déversées par les lysosomes primaires

 Le plus souvent:
 Dégradation non conduite à son terme
 Relais pris par les macrophages
 Mort rapide du PNN
 Pyocyte; pus; élimination par macrophages
Le plan B du PNN…
 But: immobiliser les agents infectieux
circulants pour préserver les tissus
 Le PNN se sacrifie pour éradiquer le pathogène
 Mort PNN différente de la nécrose et de l’apoptose
 Expulsent une partie de leur ADN
associé aux histones (nucléosomes)
et aux enzymes granulaire
 produisent de véritables filets
 « NET», « Neutrophil Extracellular Trap »
 Activent la coagulation au contact
 La « NETose »
 NETs fibrineux

Bacilles Gram négatifs

NETs fibrineux
PNN phagocytants

Aspiration bronchique
pneumopathie bactérienne
 Elastase PNN

Myéloperoxydase
PNN en NETose
Nucléosome

Génération de thrombine
Coagulation
6- Méthodes d’étude
Démographie

 Numération sanguine
 Naissance: 7 à 14 G/L
 Puis diminue
 Taux adultes atteints chez enfant entre 4 et 8 ans
 Adulte: 1,5 à 7 G/L
 Majoration par:
 Anxiété, activité physique, repas
 Après-midi > matin
 Période ovulatoire
 Grossesse (> 15 à 20 G/L)
 Accouchement: majoration qui disparaît en 4 à 5 jours.
 Tests de mobilisation (pseudoneutropénies)
 Excès de margination intravasculaire
 Adrénaline, effort physique
 Positif si multiplication du taux de base par 2
 Entre 10 min et 3 heures
 Excès de margination intra-médullaire
 Plus rare
 Test à l’hydrocortisone ou l’endotoxine
Etudes à visée fonctionnelle
 Marquages immunologiques
 Recherche d’un déficit en molécule d’adhésion
 Cytométrie de flux
 Etude la la migration
 Spontanée, ou chimiotactisme
 Chambre de Boyden, agarose
 Mesure de la phagocytose
 Quantification de particules( late, zymozan) ingérées par PNN
 Cytométrie de flux
 Production de radicaux actifs de l’oxygène
 Etude de la réduction du nitrobleu de tétrazolium
 NTB: jaune; > formazan: bleu, insoluble
 Mesure de la chémiluminescence
produite par PNN stimulés
 Formation de singulets d’oxygène; retour à
l’état de base: émission photons.