Cours sur la

signalisation
Objectifs

- Compléter vos connaissances sur la signalisation cellulaire

- Comprendre des exemples concrets qui explique la matière vue en
classe
- Connaître le rôle de certaines molécules impliquées dans la
signalisation

Chapter

A. Communication intercellulaire

Communication intercellulaire
Pour que les cellules puissent se parler entre elles et communiquer, il existe
différentes façons. Elles peuvent communiquer via des molécules liées à la matrice
extracellulaire ou à la membrane plasmique d'une autre cellule. On peut parler ici
d'une action juxtacrine. Parmi cette famille nous retrouvons les molécules
d'adhésion. Lorsqu'elles ont été découvertes, les scientifiques pensaient qu'elles
servaient de colle, mais il a été observé qu'elles pouvaient générer un signal
intracellulaire. Ces molécules sont très importantes pour les contacts cellule-cellule
comme pour les leucocytes (globules blancs), les plaquettes, les cellules
endothéliales, etc. Les ligands qui interagissent avec ces "récepteurs" sont
généralement insolubles et sont fréquemment des molécules d'adhésion elles-
mêmes. Le nom des molécules d'adhésion reflète leur fonction par ex. les ICAM-1
pour inter-cellular adhesion molecule-1, leur localisation ELAM-1 pour endothelium
leukocyte adhesion molecule-1, leur besoin de calcium ex : Ca2+ dependent

3
adherence, cadherines, leur localisation dans le temps durant l'activation des
cellules T par exemple les very late antigen-4, VLA-4 ou leur intégration dans la
matrice extracellulaire dans le cytosquelette intracellulaire (les intégrines).

Molécules d'adhésion

Voici un exemple de molécule

d'adhésion : Les sélectines, sont des
molécules d'adhésion qui sont à la
surface des leucocytes, des plaquettes
et des cellules endothéliales. Elles sont
utiles pour favoriser une adhésion de
faible affinité pour les neutrophiles et
Image 1 L-sélectine les lymphocytes. La partie N-terminale
contient un domaine lectine qui permet
la liaison avec des résidus
carbohydrates (CTLD pour carbohydrate-type lectin domain) comme le galactose
présent sur la surface cellulaire des glycoprotéines et glycolipides. Il y a aussi un
site de liaison intracellulaire pour la calmoduline (CaM) qui semble joue un rôle
pour rendre la sélectine résistante à une attaque protéolytique. Lors de la
stimulation cellulaire, la CaM se dissocie pour favoriser un changement allostérique
dans le site de clivage pour favoriser son excrétion.

Image 2 Molécules sécrétées

Les cellules peuvent également
recevoir un message de molécules
sécrétées par une cellule qui vont agir
sur une cellule pour en modifier ses
propriétés particulières (électriques, métaboliques, contractiles ou sécrétoires).

4
 On parle d'une action autocrine
lorsqu'une cellule synthétise des
facteurs pour agir sur ses propres
récepteurs. Par exemple, les
plaquettes sanguines, lors de leur
activation, peuvent libérer de l'ADP qui
activera des récepteurs sur ces
dernières.

Lorsque la cellule sécrète un médiateur

qui agit sur une cellule qui est proche
(localement) on parle de
communication paracrine. Les
terminaisons nerveuses en sont un bon
exemple.

Lorsqu'un médiateur est synthétisé,

exporté via exocytose dans un milieu
extracellulaire (sang, lymphe) et agit
sur le tissu cible à distance on parle de
communication endocrine. Les
hormones en sont un bon exemple.

pour voir plus d'informations sur le sujet, je vous suggère le vidéo suivant (en
anglais seulement):
1
https://www.youtube.com/watch?v=5MoIg5lWLXA

B. Défaillance cardiaque

Défaillance cardiaque
La défaillance cardiaque est une condition pathologique qui survient lorsque le
coeur ne peut plus satisfaire la demande en sang de l'organisme. La cause peut
être multiple, mais on l'observe régulièrement après un infarctus du myocarde
(crise cardiaque). Lorsqu'une partie du coeur ne peut plus contracter, il y a
éventuellement adaptation du coeur qui à long terme peut mener à la défaillance
cardiaque.

1 https://www.youtube.com/watch?v=5MoIg5lWLXA

5
 Dans le panneau de gauche, nous
voyons un coeur normal alors que
dans le panneau de droite le coeur est
en défaillance. À remarquer la paroi du
ventricule gauche qui est amincie dans
le panneau de droite. Comme une
Image 3 Défaillance cardiaque partie du muscle cardiaque est petite,
la force de contraction est diminuée et
donc la quantité de sang propulsée
dans le corps est diminuée.
Dans la défaillance cardiaque, nous observons régulièrement une augmentation des
catécholamines circulantes. Les catécholamines sont des agonistes pour les
récepteurs β-adrénergiques. Ainsi cette augmentation soutenue de catécholamines
peut engendrer une diminution de la réponse β-adrénergique. Effectivement, nous
voyons dans le coeur défaillant une diminution du nombre de récepteurs β 1-
adrénergiques alors que le nombre de récepteurs β 2-adrénergiques reste similaire.
Le ratio des récepteurs β1/β2-adrénergiques passe de 70 :30 dans un coeur normal
à approximativement 50 :50 dans le coeur défaillant. Ainsi les récepteurs β1-
adrénergiques subissent une régulation négative (diminution du nombre de
récepteurs) dans le coeur défaillant. En plus de la régulation négative, les
récepteurs β1- et β2-adrénergiques sont découplés. Ce découplage les empêche
d'activer la protéine Gs et donc d'induire la stimulation de l'adénylate cyclase et la
production d'AMPc. Cette diminution d'AMPc induit une diminution de l'activité de la
PKA, protéine qui phosphoryle le canal ryanodine, canal qui est impliqué dans la
libération de calcium intracellulaire. Comme il y a moins de libération de calcium
intracellulaire, la contraction du coeur est diminuée et le coeur est encore moins
efficace à pomper le sang dans le corps.
Le système adrénergique cardiaque est impliqué dans la fréquence de contraction
(effet chronotrope) et inotrope (force de contraction). Ainsi une diminution de
l'activité du système adrénergique cardiaque affecte la fréquence et la force.

Complément : Phosphorylation et déphosphorylation

La phosphorylation du récepteur peut se produire par l'ajout d'un phosphate sur
l'un des trois acides aminés suivants : la sérine, la thréonine ou la tyrosine. Ce
n'est pas toutes les sérines, thréonines ou tyrosines qui sont phosphorylées, mais
seulement celles qui se retrouvent dans des endroits accessibles. L'ajout de
phosphate se fait via une enzyme que l'on appelle les kinases alors que le retrait
du phosphate se fait via des phosphatases.

6
 Phosphorylation et déphosphorylation

Attention : La phosphorylation d'un récepteur n'égale pas toujours

désensibilisation
Par exemple, il est possible que l'activation d'un récepteur couplé aux protéines G
puisse induire une cascade de signalisation qui induit la phosphorylation d'un
récepteur à activité tyrosine kinase (RTK), favorisant ainsi une signalisation induite
par le RTK.

7
 Transactivation

C. Cytokines

Cytokines
Les cytokines sont des substances solubles qui sont synthétisées par les cellules du
système immunitaire, mais également par d'autres types de cellules. Ils agissent
généralement à distance sur d'autres cellules pour en réguler l'activité et la
fonction. Leurs actions se produisent par l'intermédiaire de récepteurs spécifiques.
Leurs poids moléculaires varient de 8 à 50kDa et leur demi-vie est courte. La
grande famille des cytokines comprend entre autres les interférons, les
interleukines (IL), les chimiokines et les facteurs de croissance. Elles sont
impliquées dans l'inflammation, une variété de réponses immunitaires et dans la
cicatrisation des plaies.

8
 Cytokines
Il y a plus de 100 cytokines qui sont séparées en famille selon les composantes
réceptorielles et les voies de signalisation communes. Plusieurs pathologies sont
caractérisées par un réseau de cytokines qui est très complexe, résultats en des
effets bénéfiques ou négatifs sur la pathologie. Comme il y a une certaine
redondance, l'élimination d'une cytokine, par un anticorps par exemple, n'entraîne
pas nécessairement une résolution de la pathologie.
Les cytokines pro-inflammatoires
Les cytokines pro-inflammatoires sont produites par plusieurs types cellulaires en
réponse à une interaction avec des agents pathogènes ou par des dommages
tissulaires. Ces cytokines sont très importantes parce qu'elles sont responsables de
l'activation de la réponse immunitaire en induisant une augmentation de l'activité
des cellules immunitaires, principalement en altérant l'expression de molécules
importantes pour la présentation des antigènes. En général les cytokines pro-
inflammatoires possèdent des fonctions pléiotropiques dans l'immunité. Ils
orchestrent les processus inflammatoires localement et systémiques dans les cas
sévères.
Cytokines pro-inflammatoires Poids kDa

IL-1α, IL-1β 17.5

IL-2 15-20

IL-6 21-28

IL-8 8-10

IL-12 35-40

9
 Cytokines pro-inflammatoires Poids kDa

IL-18 24

TNF 17

Définition : Pléiotropique
Qui entraîne des caractères multiples et apparemment indépendants les uns des
autres

Exemples de récepteurs pour les cytokines pro-inflammatoires

IL-1 peut activer son récepteur (IL-1R) pour induire une réponse cellulaire
caractéristique de l'inflammation : l'activation de NF-kB. NF-kB est une protéine de
la superfamille des facteurs de transcription impliquée dans la réponse immunitaire
et au stress cellulaire.

Récepteur IL-1

10
Récepteur du TNFα
Il y a 2 récepteurs membranaires pour
le TNFα (TNFR-1 et TNFR-2) et des
récepteurs solubles (ou circulants). Les
récepteurs solubles serviraient à
diminuer l'activité du TNFα et le
captant et l'empêchant de se lier aux
récepteurs membranaires. La liaison
du TNF avec son récepteur résulte en
la trimérisation du récepteur et le
recrutement de TRADD, qui recrute
FADD, TNFR-associated factor 2 et la
protéine RIP. Image 4 Récepteur TNFa
L'activation de l'apoptose par TNF-R1
requiert la formation de deux complexes distincts. Le complexe (I), membranaire,
est responsable de l'activation de la voie de survie induite par NF-κB. Le complexe
(II), proapoptotique, se forme dans un second temps, après modification du
complexe (I) et dissociation de ces composants du récepteur du TNF, permettant le
recrutement de la protéine adaptatrice FADD et des caspases activatrices (-8 et –
10). Ce complexe cytosolique est capable d'activer l'apoptose lorsque la voie NF-κB
est inactive. Dans le cas contraire, la molécule anti-apoptotique, FLIP, réglée
positivement par le complexe (I), bloque l'activation de l'apoptose.
Les cytokines régulatrices
L'interleukine-10 (IL-10) et le "transforming growth factor-beta" (TGF-β) sont les
cytokines régulatrices les plus étudiées. L'IL-10 inhibe la production de cytokines
pro-inflammatoires. En se liant à son récepteur, IL-10 déclenche une série de
cascades de signalisation médiée par la voie JAK/STAT, particulièrement STAT3. De
plus, IL-10 peut inhiber l'apoptose en activant la cascade PI3K/Akt et augmente
l'expression les facteurs antiapoptotiques Bcl-xl et Bcl-2 en atténuant la caspase-3.
Le TGF-β joue différents rôle dans le développement, la différenciation cellulaire, la
cicatrisation et la régulation immune. Le TGF-β induit une signalisation
intracellulaire à partir d'un récepteur hétérodimérique composé du récepteur TGF-1
et du récepteur TGF-II qui sont des récepteurs sérine-thréonine kinases. Ces
récepteurs induisent la phosphorylation des protéines SMAD (facteurs de
transcription).

11
 IL-10

TGF-b

Il existe plusieurs autres cytokines, mais pour le cours nous nous limiterons à
celles-ci.

Pour plus d'informations sur les cytokines (en anglais seulement)

12
 2
https://www.youtube.com/watch?v=9wdZLvNKyQY

D. Voies de signalisation

Dans les prochains paragraphes, nous vous présenterons 3 molécules

importantes dans la signalisation et qui peuvent être
activées/produites par des récepteurs.
NF-kB
NF-kB est un homo-ou hétérodimère formé à partir de 5 sous-unités : P50 ; P42 ;
P65 ; RelB ou c-Rel. L'hétérodimère de NF-kB qui est constitué des sous-unités
p50 :p65 est celui qui est le plus étudié. NF-kB est en partie régulé dans le
cytoplasme par un complexe protéique (IKK) composé des protéines IKKα, IKKβ et
de la protéine NEMO (IKKg). Lorsqu'un ligand extracellulaire se fixe à un récepteur
membranaire qui est impliqué dans la voie de NF-kB, il y a activation du complexe
IKK (les IKK sont des IkB-kinases). Ce complexe activé phosphoryle alors IKB (le
"séquestreur" de NF-kB) qui sera envoyé vers le protéasome pour subir une
dégradation alors que NF-kB est transloqué au noyau. NF-kB est reconnu pour être
l'un des multiples régulateurs de plusieurs gènes codant pour des protéines
impliquées dans l'inflammation.

Voie de signalisation NF-kB

Pour plus d'informations (en anglais seulement)
3
https://www.youtube.com/watch?v=8HWVhdSRvng

GMPc
Tout comme l'adénylate cyclase/AMPc/PKA, la guanylate cyclase/GMPc/PKG existe.

2 https://www.youtube.com/watch?v=9wdZLvNKyQY
3 https://www.youtube.com/watch?v=8HWVhdSRvng

13
La guanylate cyclase existe en deux formes soit une forme particulaire (située dans
la membrane) et soluble (localisée dans le cytoplasme). La guanylate cyclase
hydrolyse le GTP en GMPc. Ce dernier peut réguler les protéines kinases GMPc
dépendantes et peut aussi servir au contrôle de l'ouverture de certains canaux
cationiques. Ce système est particulièrement important pour la vision.
Effet de la lumière :
Lorsqu'il y a des photons, les photorécepteurs les détectent et transforment
l'énergie lumineuse en potentiel de membrane. Pour ce faire, les photons lumineux
activent le récepteur de la rhodopsine (7 domaines transmembranaires) qui active
la protéine Gt. La protéine Gt active à son tour une phosphodiestérase qui
diminue les niveaux de GMPc et qui réduit la conductance au sodium. Cette
diminution de la conductance diminue le courant d'obscurité responsable du
potentiel de membrane élevé. Il faut dire que le potentiel membranaire du segment
externe des bâtonnets est d'environ -30mV dans l'obscurité ce qui est nettement
plus haut que le potentiel de repos dans des neurones (-65mV).

Vision
Le GMPc est un second messager important des cellules musculaires lisses dans la
modulation du tonus vasculaire. Certaines hormones circulantes, comme
l'acétylcholine, peuvent provoquer une vasodilatation indirecte via les cellules
endothéliales en provoquant la libération de NO (monoxyde d'azote).
L'acétylcholine favorise une augmentation de calcium intracellulaire qui se lie à la
calmoduline pour activer la NO synthase (augmentation de la production de NO). Le
NO formé peut diffuser vers les cellules musculaires lisses et provoque une
vasodilatation par la production de GMPc formé par l'activation de la guanylate
cyclase. Le GMPc formé entraîne une activation de la PKG qui va entraîner une
phosphorylation du phospholamban. Le phospholamban phosphorylé favorise le
recaptage du Ca2+ par les SERCAs et donc la relaxation. La PKG phosphoryle aussi
la phosphatase, la rendant active, favorisant la déphosphorylation de la chaîne
légère de myosine et induisant une relaxation.
Pour plus d'informations sur la vasodilatation et le NO (en anglais seulement)
4
https://www.youtube.com/watch?v=8ZbzSLFuLdY

4 https://www.youtube.com/watch?v=8ZbzSLFuLdY

14
 Dans sa forme déphosphorylée, le
phospholamban est un inhibiteur de la
SERCA mais lorsqu'il est phosphorylé,
il se dissocie de la SERCA, activant
ainsi cette pompe à calcium.

Image 5 Phospholamban

Complément : Phosphodiestérase
Les phosphodiestérases sont des enzymes qui catalysent la transformation du AMPc
ou GMPc en AMP ou GMP en hydrolysant la liaison phosphate présente en 3'. On a
dénombré jusqu'à maintenant 11 phosphodiestérases différentes. Fait intéressant,
la caféine et la théophylline sont des inhibiteurs de phosphodiestérases de même
que le Viagra...

Phosphodiestérase

15
E. Acide arachidonique

L'acide arachidonique
L'acide arachidonique est un acide gras de 20 carbones comprenant 4 doubles liens.
Cet acide gras fait partie de la famille des acides gras oméga-6. Il est un
constituant des membranes cellulaires. Il peut être synthétisé par la plupart des
mammifères et il n'est donc pas considéré comme un acide gras essentiel. L'acide
arachidonique peut être libéré des phospholipides membranaires sous l'action de la
phospholipase A2 ou d'une molécule de diglycéride par la diacylglycérol lipase.
L'acide arachidonique est une molécule importante, car elle est le précurseur des
eicosanoïdes (thromboxanes, prostaglandines, leucotriènes). Plusieurs de ces
composés sont vasoactifs et agissent sur de courtes distances (paracrine,
autocrine).

Acide arachidonique
L'acide arachidonique peut, sous l'action de la cyclo-oxygénase (COX), être
transformé en prostaglandines ou en thromboxane. Il existe 2 isoformes de cyclo-
oxygénase (COX-1 et COX-2) fonctionnelles chez l'homme. La COX-1 est
constitutive (présente dans la plupart des tissus) et est impliquée dans
l'homéostasie tissulaire (reins, estomac, plaquettes) alors que la COX-2 est
inductible dans les cellules inflammatoires et est responsable de la protection de
médiateurs prostanoïdes de l'inflammation (douleur, inflammation, fièvre).
La Cox-1 est impliquée dans la vasodilatation des artérioles afférentes dans le rein
et dans l'excrétion de l'eau et du sodium via les prostaglandines E2 et I qu'elle peut
produire. La prostaglandine I est aussi connue sous le nom de prostacycline. La
PGE2 protège l'estomac en augmentant la sécrétion du mucus, les bicarbonates et
le débit sanguin.

16
 La transformation de l'acide arachidonique en thromboxane A 2 (TxA2) a des effets
cardiovasculaires importants, car le TxA2 favorise l'activation plaquettaire et joue
un rôle dans la survenue de l'infarctus du myocarde.

Les deux types de COX ont des actions

similaires qui peuvent transformer
l'acide arachidonique en PGE2. Les
anti-inflammatoires traditionnels
peuvent se fixer dans la poche
réceptrice des COX-1 ou COX-2 pour
inhiber la transformation de l'acide arachidonique. Toutefois, les inhibiteurs sélectifs
de COX-2 peuvent se lier au site de la COX-2, mais ils sont trop gros pour lier le
site de la Cox-1.

Lorsque l'acide arachidonique est

transformé par les lipoxygénases, nous
retrouvons des molécules appelées
Image 6 Chimiotactisme et LTB4
leucotriènes. Les leucotriènes ont un
rôle chimiotactique pour les leucocytes
(attirent les leucocytes dans des
régions inflammatoires) ou provoquent la contraction des muscles lisses au niveau
bronchique (broncho-constriction). Vous voyez un exemple de cellules qui sont
attirées par le LTB4, qui est contenu dans la pipette.
Plusieurs des molécules métabolisées à partir de l'acide arachidonique induisent des
effets cellulaires via l'activation de récepteurs de la famille des récepteurs aux
protéines G.

17
 Récepteurs des eicosanoïdes

Complément : Histoire des coxibs

Comme la Cox-2 est impliquée dans l'inflammation et la douleur, des compagnies
ont travaillé à développer un inhibiteur de la Cox-2. Or ceci a mené à un scandale
au début des années 2000, car malgré des effets intéressants sur l'arthrite, le suivi
de la commercialisation a permis de démontrer que les gens qui utilisaient le Vioxx,
un inhibiteur de Cox-2, avaient un risque accru de développer un infarctus du
myocarde.
En fait, dès les premières études, il y avait des indications que le Vioxx provoquait
plus d'infarctus du myocarde, mais ces résultats ont souvent été passés sous
silence. Ceci a mené à des poursuites de plusieurs millions de dollars à travers le
monde contre la compagnie Merck Sharp & Dohme.
Comme les Cox-2 diminuent la production de prostacycline (PGI2) par les cellules
endothéliales, l'effet vasodilatateur est perdu et favorisait un effet prothrombotique.

Pour plus d'informations, je vous suggère le vidéo suivant (en anglais seulement)
5
https://www.youtube.com/watch?v=018PxnH702k

5 https://www.youtube.com/watch?v=018PxnH702k

18
F. Apoptose

Apoptose
L'apoptose est un processus de mort cellulaire qui est déclenché par une auto-
destruction de la cellule en réponse à un signal. C'est une voie essentielle pour que
le corps se développe correctement. Sans apoptose, les humains auraient des
"palmes" au lieu de mains avec des doigts.

Apoptose des mains

L'apoptose est donc hautement régulée et implique différents facteurs qui peuvent
la déclencher et qui requièrent de l'énergie. L'apoptose peut être initiée par une
perturbation de l'homéostasie cellulaire, par des signaux de stress qui activeront la
voie intrinsèque de l'apoptose ou par des signaux extracellulaires qui vont plutôt
activer la voie extrinsèque de l'apoptose. Ces deux voies déclenchent une case
d'activation d'enzymes appelées : caspases. Les caspases sont des protéines à
cystéine, exprimées à l'état zymogène, et qui, pour être activées, doivent être
clivées au niveau des résidus aspartates. Dans le cytoplasme, la forme active des
caspases peut être inhibée par des protéines inhibitrices d'apoptose (IAP). Chez
l'humain, 14 caspases sont répertoriées, dont certaines sont dites initiatrices
(caspases 2,8,9,10) et d'autres effectrices (caspases 3,6,7).

Voies de signalisation de l'apoptose

Voie extrinsèque de l'apoptose déclenchée par des signaux extracellulaires comme

le TNFa.
Les signaux de l'environnement sont perçus par des récepteurs de mort comme le
TNFR1 qui a un domaine extracellulaire riche en cystéine responsable de la liaison
du ligand et un domaine intracellulaire de mort (DD). La liaison du TNF avec son
récepteur conduira à la trimérisation du récepteur membranaire, puis au
recrutement de protéines adaptatrices dont TRADD et FADD via le domaine DD des
récepteurs. Celles-ci recruteront ensuite des initiateurs apoptotiques comme la
procaspase 8 qui sera activée, par clivage, en caspase-8 pour finalement activer la
caspase-3 (enzyme effectrice de l'apoptose. Une fois la caspase-3 activée, l'ADN est
dégradé, certaines protéines clivées et la cellule va finalement mourir.

19
 Voies extrinsèque et intrinsèque

Pour plus d'informations sur la voie extrinsèque(en anglais seulement)

6
https://www.youtube.com/watch?v=Rlk9ZzInzuA

6 https://www.youtube.com/watch?v=Rlk9ZzInzuA

20
21