Université des sciences et de la technologie

Mohamed Boudiaf
Faculté des sciences de la nature et de la vie

Hybridation moléculaire
Présenter par :
Hammouche Hanane
Fidah Innes Tedj El Molk
Plan de travail
Introduction

Définition

Les étapes de l’hybridation moléculaire

Les types d’hybridation

Les factures influençant

 Introduction
La biologie moléculaire est une discipline scientifique de la vie au croisement
de la génétique, de la biochimie métabolique et de la physique, dont l'objet est
la compréhension des mécanismes de fonctionnement de la cellule au niveau
moléculaire.
 Les étapes de la hybridation moléculaire

L'hybridation peut être réalisée en phase liquide (les segments complémentaires

sont placés dans une solution) ou sur support solide (la séquence
complémentaire cible étant immobilisée pour faciliter la séparation).

La séquence ADN double brin est d'abord dénaturée, c'est-à-dire que les brins
sont séparés par la chaleur ou par un choc alcalin. On introduit alors une sonde
nucléotidique, un segment de nucléotides correspondant au moins en partie à la
séquence recherchée .
Lorsqu'on refroidit progressivement la solution, cette sonde (qui peut être de l'ADN ou de
l'ARN mais obligatoirement monobrin) va alors s'apparier avec le brin cible en formant des
liaisons hydrogène : deux liaisons entre l'adénine (A) et la thymine (T) (ou l'uracile U) et
trois entre la cytosine (C) et la guanine(G). La partie de la sonde non hybridée est ensuite
éliminée par lavage.

Pour repérer la séquence, on utiliser des sondes marquées avec un

radioisotope(marquage chaud), mais il existe aussi des sondes froides à marquage
enzymatique ou fluorescent. Les sondes peuvent être de longueur très variable, allant
de quelques centaines à quelques milliers de bases.
 Les types d’hybridation
Hybridation en phase liquide
Les segment complémentairesont
placés dans une solution contenant un
tampon et de la formamide ,
l’agitation thermique assure la liaison
entre les fragments complémentaires ,
cette température est généralement
inférieure de 15C° à la Tm de l’ADN
concerné .
Hybridation sur support solide
La séquence complémentaire cible est
fixée ( immobilisé) sur un support
solide cette méthode facilite la
séparation des fractions hybridés ce
celles non hybridées , cependant la
vitesse d’hybridation est nettement
inférieure à celle de la phase liquide
( jusqu’à 10 fois ) .
 Hybridation in situ (HIS)

C’est une technique qui permet , par

l’utilisation de sondes de mettre en évidence et
de repérer dans des cellules ou des tissus, des
séquence d’acide nucléiques connue , elle est
très proche dans son principe , du southern et
du northern blot et repose comme eux , sur
l’hybridation d’une sonde d’acide nucléiques
( ADN ou ARN ) marquée avec une séquence
complémentaire d’acide nucléiques que l’on
cherche à identifier et à localiser a la seule
différence que le southern et northern blot se
font sur des broyats de tissue alors que l HIS
s’effectue sur une coupe histologique de tissus
Facteurs influençant l'hybridation moléculaire
La température : elle favorise des deux séquences complémentaires
donc la vitesse d’hybridation , on note que les meilleurs vitesses
d’association sont observés pour des températures inférieures à 25%
de la Tm de la molécule considérée.

La taille de fragment nucléique : dans le cas où les deux séquences complémentaires

sont parfaitement identiques , la vitesse de réassociation dépend de ces deux brins
augmente proportionnellement avec la racine carré de la longueur des fragments
considérés.

La nature des acides nucléiques : la vitesse de la réassociation dépend à la fois de la

nature de l’hybride et de sa concentration , si l’hybridation concerne un mélange
ARN/ADN est 5 fois plus faible que la reassociation ADN/ARN an revanche si
l’ARN est en large excès la vitesse de réassociation sera identique à celle de
ADN/ARN .
 Conclusion
En conclusion, l’hybridation moléculaire est une technique
importante pour la biologie moléculaire qui peut apporter de
nombreux avantages elle nous à aider dans plusieurs dommage de la
biologie et de la médecine et de la pharmacie .