GENETIQUE ET PRODUCTION DE SEMANCES ET

PLANTS

L’UTILISATION DES NUCLÉASES

À DOIGTS DE ZINC (ZFN) EN
GÉNIE GÉNÉTIQUE VÉGÉTAL

Présenté par:
Hamza BELMIR
INTRODUCTION
De quoi s’agit-il?
 les protéines de fusion ZFN sont
utilisées pour modifier spécifiquement
un gène en insérant, enlevant ou
remplaçant certaines sections d'ADN.
Pour couper l’ADN, deux modules ZFN
Principe doivent se placé de chaque côté de la
séquence d’ADN cible - les ZFN
et s'arrimant en diagonale face à face sur
le double brin d'ADN. Ce mode de
fonctionnement? coupure n’est pas toujours effectif et,
même en conditions optimales, la
réparation du gène coupé en diagonale
active deux mécanismes de réparation
de l’ADN différents, ce qui donne lieu à
une série de résultats possibles.
APPLICATION
EN
AGRONOMIE :
 MUTAGENÈSE CIBLÉE À HAUTE
FRÉQUENCE CHEZ ARABIDOPSIS
THALIANA À L'AIDE DE NUCLÉASES À
DOIGT DE ZINC
Pour réaliser cette méthode, les chercheurs ont transformé des plantes Arabidopsis thaliana en utilisant
la méthode d'immersion florale. Les graines transformées ont été placées sur un milieu solide
contenant de l'hygromycine pour sélectionner les transformants et de l'estradiol pour induire
l'expression des ZFN. Les plantules ont ensuite été cultivées sous des conditions de lumière et de
température spécifiques. Pour évaluer les mutations somatiques, l'ADN génomique a été préparé à
partir de plantules âgées de 7 jours. Une PCR à haute fidélité a ensuite été réalisée pour amplifier les
sites cibles, et les produits PCR ont été clonés et séquencés pour évaluer les mutations.
Autres
 Recherche fondamentale : Les ZFN sont utilisées pour étudier
les mécanismes de réparation de l'ADN et les voies de
signalisation moléculaire, ce qui permet de mieux comprendre

applications 
le fonctionnement cellulaire et les maladies génétiques.
Thérapie génique : Les ZFN ont été explorées pour leur
potentiel dans le traitement de maladies génétiques en
corrigeant les mutations responsables de ces maladies. Elles
peuvent être utilisées pour insérer des gènes fonctionnels ou
pour remplacer des gènes mutés par des versions saines.
 Bioproduction : Les ZFN peuvent être employées dans la
production de protéines recombinantes en améliorant
l'expression génétique dans des organismes hôtes.
 Modèles animaux pour la recherche sur les maladies humaines :
Les ZFN peuvent être utilisées pour générer des modèles
animaux présentant des mutations spécifiques qui imitent les
maladies humaines, ce qui permet d'étudier la pathogenèse et de
tester de nouveaux traitements.
L’application des ZFN dans
l’agriculture reste très limitée !
■ Les ZF présentent des imprécisions dues à leur variabilité de spécificité lorsqu'ils
sont combinés. Par conséquent, la protéine de fusion ZFN résultante, composée
de multiples domaines ZF, peut reconnaître plusieurs séquences d'ADN,
engendrant ainsi un nombre considérable de mutations non désirées dans le
génome. Dans le cas spécifique de ZFN-2 & -3, il est probable que la matrice
d'ADN ajoutée soit intégrée de manière aléatoire, tout ou en partie, dans le
génome, provoquant des insertions transgéniques. Ces dernières pourraient altérer
des gènes et des séquences régulatrices, entraînant des effets incontrôlés sur la
plante résultante. Par ailleurs, les procédés de transformation et de transfection, y
compris la culture tissulaire, impliqués dans la production de plantes
génétiquement modifiées par ZFN, sont également susceptibles de générer
d'autres mutations.
 L'article décrit la méthode de mutagenèse ciblée à
l'aide de nucléases à doigt de zinc (ZFN) pour
étudier les fonctions des gènes chez Arabidopsis

Conclusion : thaliana.Les résultats de cette étude montrent que

les ZFN peuvent être utilisées pour induire des
mutations somatiques à haute fréquence chez
Arabidopsis thaliana, ce qui permet d'étudier les
fonctions des gènes avec une grande précision.
Cette méthode est très précise et peut être utilisée
pour étudier les fonctions des gènes dans différents
processus biologiques