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Enzymologie
Introduction :
Les organismes vivants sont le sige d'un grand nombre de ractions biochimiques trs diverses. Ces ractions s'effectuent dans des conditions o, normalement, elles ne pourraient se faire. Si elles ont lieu, c'est parce qu'elles sont catalyses par des macromolcules biologiques : les enzymes. Le compos transform par une enzyme est nomm substrat et le compos obtenu est appel produit Le pouvoir de catalyse des enzymes est li, entre autre, la trs haute spcificit de reconnaissance des molcules sur lesquelles elles agissent.

A- les enzymes : nomenclature et types de raction

I- dfinition et proprits : Les enzymes sont des protines, de masse molculaire leve, thermolabiles, biocatalyseurs des ractions mtaboliques, elles agissent des concentrations trs faibles, et possdent une spcificit troite ou lche avec le substrat, elles augmentent la vitesse des ractions sans modifier leur tat dquilibre et elles sont rgnres la fin de la raction ou de la squence des ractions. II- nomenclature et classification : 1) La nomenclature : Elle prend en compte le nom du substrat de lenzyme et le type de raction catalyse. Pour dsigner une enzyme on indique : d'abord le nom du substrat puis le type de raction catalyse on ajoute enfin le suffixe ase. Par exemple : glucose-6-phosphate isomrase, Isocitrate lyase, pyruvate carboxylase, Lorsque l'enzyme utilise 2 substrats on les dsigne tous les deux en indiquant : le substrat donneur de radicaux puis le substrat accepteur du radical libr le radical chang le type de raction on ajoute enfin ase. Par exemple : ATP-glucose phospho-transfrase, UDP-glucose-fructose glucosyl-transfrase, Glutamate pyruvate amino-transfrase. Dans le cas d'une raction quilibre rversible, on peut former les noms partir des substrats ou des produits. 2) classification des enzymes : Toutes les enzymes actuellement connues sont rpertories sous un numro portant 4 nombres spars par des points et prcds de EC soit (EC x 1.x2.x3.x4). La signification des nombres est la suivante : X1 : Le premier nombre pouvant varier de 1 6 indique le type de ractions 1 : Oxydorductases (transfert d'lectrons, datomes dhydrogne ou fixation doxygne) 2 : Transfrases (transfert d'atomes ou de groupes d'atomes autres que ceux 1) 3 : Hydrolases (Coupure des liaisons avec fixation de radicaux H et OH issus de leau) 4 : Lyases (Coupure des liaisons par d'autres modes autres que l'hydrolyse). 5 : Isomrases (raction conservant la formule brute du compos) 6 : Ligases (formation des liaisons entre C et un autre mtallode en utilisant l'nergie de l'ATP) X2 : Le deuxime dsigne la sous-classe de l'enzyme qui est dfinie suivant son mcanisme d'action. Dans le cas des oxydorductases on distingue les dshydrognases, les monooxygnases et les dioxygnases.

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X3 : Le 3me nombre dsigne la nature de la molcule qui sert d'accepteur, lorsqu'il s'agit d'un transfert d'lectrons. X4 : Le 4me nombre est un numro d'ordre dans le groupe et dans le sous-groupe. Lorsqu'une enzyme se termine par 99, cela signifie qu'elle est incompltement caractrise. III- les types de ractions : 1) les enzymes doxydorduction et de fixation de loxygne : Les ractions, qui changent des lectrons ou des hydrognes, sont les plus frquentes en biochimie, celles de fixation doxygne sont rares. Les enzymes qui catalysent ces ractions sont appeles des dshydrognases. Lorsque les enzymes fixent prfrentiellement des lectrons ou des hydrognes sur des substrats elles sont appeles des dshydrognases ou des rductases. Exp : Malate dshydrognase (EC .1.1.37) HOOC-CH2-CHOH-COOH + NAD+ HOOC-CH2-CO-COOH + NADH,H+ 2) Les transfrases : Ces enzymes transfrent des radicaux ou des groupes d'atomes d'un substrat donneur un substrat accepteur. Leur nom complet comporte le donneur, l'accepteur, le radical transfr suivi de transfrase. Les groupes transports sont : (-CH3), (-CH2OH), (-COOH), groupement carbon comportant des fonctions aldhydes ou ctones (-CHO) ou (-CO-R), groupe acyle, groupe osidyle, amine, phosphoryle, etc... Exp : Glycogne phosphorylase (EC 2.4.1.1) Glycogne (n) + ATP glycogne (n-1) + glucose 1- + ADP 3) les hydrolases : Ce sont des enzymes de dgradation. Elles provoquent la coupure d'une molcule et fixent les radicaux H et OH de leau sur les valences libres. Ce sont des enzymes sans coenzymes. Exp : Glucose 6-phosphatase Glucose 6- + H2O Glucose + Pi 4) les lyases ou synthases : Ce sont des enzymes qui catalysent la rupture de diffrentes liaisons chimiques par des moyens autres que l'hydrolyse ou l'oxydation, formant ainsi souvent une nouvelle liaison double ou un nouveau cycle. On y trouve les enzymes suivantes : dcarboxylases, lyases proprement dites, synthases, hydratases, dshydratases, etc... Exp : l'nolase (4.2.1.11) 2-phosphoglycrate Phosphonolpyruvate + H2O 5) les isomrases : Elles catalysent des changements de structure dans une mme molcule sans changer sa formule globale (isomrisation Cis-trans, pimrisation, dplacement de radicaux, etc.) Exp : Ribulose 5P 3-pimrase (5.1.3.2) enzyme de la voie des pentoses phosphate D-ribulose 5- D-xylulose 5-phosphate 6) les ligases ou synthtases : Elles forment des liaisons C-C, C-N, C-S, C-O, O-P, grce l'utilisation de l'nergie fournie par l'hydrolyse concomitante d'un groupement phosphate ou pyrophosphate de l'ATP Exp : Pyruvate carboxylase (6.4.1.1) Pyruvate + CO2 + ATP Oxaloactate + ADP + Pi B- linteraction enzyme - substrat : I- Spcificit de l'association enzyme - ligand : le site actif Toutes les protines se replient dans une conformation dite native et c'est dans cette conformation qu'elles acquirent leur activit biologique. Ce repliement aboutit une structure tridimensionnelle unique de la protine, qui permet une rgion particulire, le site actif (souvent enfoui au sein de la protine), d'adopter elle aussi une structure spatiale qui est reconnue par le ligand spcifique de la protine (ou de molcules dont la structure est proche de celle du ligand). 2

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1) caractristiques du site actif : Le site actif est constitu d'un petit nombre d'acides amins qui le plus souvent ne sont pas contigus dans l'enchanement de la chane polypeptidique. Ces acides amins sont caractriss par une chane latrale dont la fois la nature chimique (groupement ionisable ou polarisable) et la structure (encombrement strique) sont spcifiquement adapts la reconnaissance du (ou des) ligand(s) : la strochimie qui rsulte de cet agencement unique des acides amins qui constituent le site actif est la cause de la strospcificit de reconnaissance entre ces acides amins et le (ou les) ligand(s). Les enzymes ne fixent pas seulement un ligand (qui dans ce cas s'appelle un substrat). Elles le transforment en un produit lors d'une raction chimique. Certains acides amins du site actif ont pour fonction, non pas de fixer le substrat, mais de fournir les groupements chimiques ncessaires la raction catalyse par l'enzyme. Dans ce cas on distingue donc au sein du site actif : les acides amins qui constituent le site de fixation (ces acides amins n'ont pas de fonction chimique impliques dans la raction). les acides amins qui constituent le site catalytique. acides amins qui participent au maintien de la conformation adquate du site actif. 2) le complexe enzyme-substrat : La formation initiale d'un complexe enzyme - substrat E-S, NON covalent, ft suggre d'aprs les observations suivantes : Le haut degr de spcificit de la reconnaissance d'un substrat par le site actif d'une enzyme. La forme de la courbe dite de saturation : vitesse initiale de la raction enzymatique en fonction de la concentration en substrat (vi = f([S]) Le fait que les substrats protgent souvent les enzymes de l'inactivation. Deux modles ont t proposs pour expliquer la spcificit des enzymes : Cl-serrure: la forme du site actif est complmentaire celle du substrat Forme induite: lenzyme change sa conformation lors de la liaison du substrat.

3) Etat de transition, nergie libre d'activation et nergie libre de la raction enzymatique : Les ractions chimiques rarrangent les atomes en brisant et formant des liaisons chimiques. L'nergie doit tre absorbe pour briser les liaisons chimiques et l'nergie est relche quand les liaisons sont faites. L'nergie d'activation ou l'nergie libre d'activation (GA) est l'nergie qui doit tre absorbe par les ractifs pour que leurs liaisons soient brises. Les ractifs doivent atteindre un tat de transition instable dans lequel les liaisons sont plus fragiles et plus faciles briser. La raction peut ensuite se faire partir de cet tat de transition. Mme une raction 3

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exergonique, o le G est ngatif, requiert l'absorption d'nergie pour atteindre l'tat de transition. L'tat de transition est atteint en ajoutant de l'nergie thermique (chaleur) de l'environnement, ce qui stimule plus de collisions entre les molcules de ractifs. La raction ne se fera que si les ractifs se heurtent avec suffisamment de force pour librer de lnergie capable de rompre les liaisons. L'nergie d'activation est une barrire essentielle puisqu'elle prvient la dgradation spontane des macromolcules cellulaires riches en nergie (telles que les graisses, les protines et les polysaccharides). Pour que le mtabolisme se fasse dans une cellule, il faut toujours que l'tat de transition soit atteint, autrement on ne pourrait jamais dgrader les macromolcules pour en retirer l'nergie dont on a besoin. La chaleur, une source typique d'nergie d'activation, sans contrle, elle serait videmment nocive une cellule et toutes les ractions se feraient tout le temps, (do sa rgulation). Les enzymes ont la capacit d'abaisser l'nergie d'activation pour des ractions spcifiques pour que ces ractions puissent se faire la temprature normale de la cellule. Elles ne changent pas le G de la raction, elles ne font qu'augmenter sa vitesse (B) qui autrement se ferait trs lentement (A). Elles permettent daccrotre le flux en produit dune raction, et dterminent le choix de la voie mtabolique suivre. II- la catalyse enzymatique : 1) La catalyse acide-base gnrale : Cest le mcanisme le plus courant de la catalyse enzymatique. L'acclration de la raction rsulte du transfert d'un proton. L'activit catalytique des enzymes de ce type est largement influence par le pH.

Groupes fonctionnels des protines qui peuvent agir en tant que catalyseur acide/base : groupement imidazole de His groupement : -amin ou -carboxylique groupement thiol de Cys groupement carboxylique de la chaine latrale de Glu et Asp groupement -amin de Lys groupement aromatique OH de Tyr groupement guanidino de lArg 4

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Exp : Raction catalyse par Ribonuclase A illustre la catalyse acide - base gnrale
La Ribonuclase A est un enzyme digestif qui hydrolyse lARN. Le profil pH de la raction dmontre un maximum vers pH de 6 et correspond en effet l'ionisation de deux groupements, His 12 et His 119. 2) la catalyse par covalence : Elle concerne essentiellement les ractions enzymatiques o plusieurs substrats sont impliqus (environ 20% des enzymes et toutes les enzymes mcanisme 2 substrats de type "pingpong"). Une partie du premier substrat est transfre l'enzyme via la formation d'une liaison covalente puis cette partie du substrat est transfre au second substrat.

La catalyse par la Ribonuclase A

3) catalyse mtallo-dpendante : Presque un tiers des enzymes connus sont dpendants des ions mtalliques pour leur catalyse. Les mtalloenzymes se divisent en deux classes qui sont distingues par la force des interactions protine - ion : - ceux possdant des ions mtalliques fortement lis comme Fe2+, Fe3+, Cu2+, Zn2+, Mn2+, ou Co2+. - ceux activs par des ions mtalliques faiblement lie en solution comme Na+, K+, Mg2+, ou Ca2+. Les ions de mtal participent la catalyse en orientant la liaison des substrats, en facilitant les ractions oxydation-rduction par leurs changements rversibles de leur tat d'oxydation, en stabilisant les charges ngatives, et en rendant les molcules deau plus acides et donc une source OH- des pH neutres.

Exp : lanhydrase carbonique

L'enzyme utilise le zinc pour catalyser en trois tapes la raction : CO2 + H2O HCO3- + H+ 1) coordination dune molcule de zinc par trois histidines et une molcule d'eau. 2) attaque nuclophile par le OH- du CO2 et la conversion en HCO3-. 3) rgnration du site catalytique par la liaison d'une autre molcule de H2O possiblement avant le dpart de HCO3- travers un intermdiaire du complexe de zinc penta coordonn.

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C- la cintique enzymatique : La cintique d'une raction enzymatique est la variation en fonction du temps (vitesse) de la quantit (concentration) d'une molcule. Il existe une relation entre la vitesse d'une raction catalyse par une enzyme et la concentration ou la disponibilit du substrat. L'activit enzymatique dpend du pH, de la temprature et souvent de la concentration des ions et des cofacteurs. La rgulation de cette activit peut tre assure par des composs appels effecteurs (gnralement de faible poids molculaire, activateurs ou inhibiteurs). I- Cintique des ractions enzymatiques un substrat : 1) Modle de Michalis-Menten : Partant de lquation gnrale de la cintique enzymatique qui scrit :

O E est l'enzyme, S le substrat, P le produit de raction et les ki sont les constantes de vitesse des ractions lmentaires. On suppose dans ce modle que : les mesures de cintique seront toujours faites pour des concentrations de produit trs faible : c'est la mesure de la vitesse initiale (vi) pour [P] 0 et [S] [S]0 o [S]0 est la concentration du substrat l'instant initial. Cette hypothse permet de ngliger la raction lmentaire : (1) la concentration totale du substrat [S]0 est trs grande devant celle de l'enzyme [E]0. (2) Ds l'addition de l'enzyme dans la solution de substrat, il s'tablit un quilibre rapide entre les formes libres de l'enzyme, du substrat et du complexe ES (appel complexe de Michalis), on parle d'hypothse du quasi-quilibre ou pr-quilibre. (3) Le schma ractionnel s'crit ainsi :

Pour calculer la vitesse d'apparition du produit, le systme d'quations rsoudre est :

En remplaant [E] tir de l'quation (d) dans l'quation (b), en simplifiant l'quation (c) en tenant compte des hypothses (1) et (2), (c) [S]0 [S], et en remplaant [S] toujours dans l'quation (b), nous obtenons une quation simplifie :

Do, en remplaant [ES] dans l'quation (a), le systme approxim (v est dans ce cas vi, vitesse initiale, hypothse (1)), se rduit :

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2) Les constantes cintiques : a- La signification des constantes cintiques : La vitesse maximale : VM VM = k2[E]0 est la vitesse maximale initiale v atteinte pour la concentration [E]0 et pour une concentration trs grande de [S]0 devant KM :

Constante de Michalis, constante de dissociation : KM Elle traduit l'affinit du substrat pour l'enzyme. L'affinit du substrat pour l'enzyme est d'autant plus grande que la valeur de la constante de Michalis est petite. Lorsque la valeur de [S]0 est gale la valeur de KM, la valeur de la vitesse initiale est gale :

b- Reprsentation hyperbolique (Michalis-Menten) : A partir des rsultats exprimentaux, mesure des vitesses initiales pour chaque concentration totale de substrat [S]0 , pour une concentration donne d'enzyme, nous pouvons tracer v=f([S]0) qui est une hyperbole : c- Reprsentation de Lineweaver-Burk : C'est la reprsentation la plus utilise, cest une reprsentation graphique en double inverse de V et [S] :

3) Activit enzymatique : Si nous nous plaons dans des conditions exprimentales o [S]0 >> [E]0 et [S]0 >> KM, la vitesse mesure est la vitesse maximum et elle est proportionnelle la concentration totale d'enzyme. C'est donc une mthode qui peut tre utilise pour doser la concentration et par suite la quantit d'enzyme prsente dans la solution. L'unit internationale d'activit enzymatique appele U, est la quantit d'enzymes capable de transformer 1 mole de substrat par minute 25C, dans les conditions optimales de dosage. dans le systme international (S.I.), l'unit officielle est le katal (kat) : quantit d'enzyme qui catalyse la transformation de 1 mole de substrat par seconde. L'activit molculaire (molaire) : si on connat le poids molculaire de l'enzyme et le degr de puret de la prparation, on peut calculer l'activit molculaire (ou molaire) de l'enzyme, elle correspond au nombre de molcules (moles) de substrats qu'une molcule (mole) d'enzyme peut transformer par unit de temps (minute ou seconde). Cette constante est exprime en min -1 ou sec-1. Elle est galement appele " Turn over number ". II- les facteurs influenant lactivit enzymatiques : 1) les inhibiteurs de lactivit enzymatiques : L'activit enzymatique peut-tre inhibe par des petites molcules spcifiques ou des ions. Cette inhibition est trs importante puisqu'elle joue le rle d'un mcanisme de contrle important des systmes biologiques. L'inhibition enzymatique peut tre soit rversible soit irrversible. 7

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Dans l'inhibition irrversible, l'inhibiteur (I) forme avec l'enzyme un complexe (EI) covalent stable. Il existe 3 types d'inhibition rversible : l'inhibition comptitive, non comptitive et incomptitive. a- l'inhibition comptitive : On parle d'inhibition comptitive si la fixation de l'inhibiteur (I) empche la fixation du substrat (S) l'enzyme, et rciproquement. Il y a comptition entre I et S pour le site actif de l'enzyme. Le complexe enzymeinhibiteur (EI) est inactif. Donc, en prsence de l'inhibiteur, l'affinit de S pour E est diminue. Si [S] est trs leve, le terme [I]/KI devient ngligeable et VM est la mme que pour la raction sans inhibiteur. b- linhibition non comptitive : L'inhibiteur se fixe "loin" du site actif, il n'empche plus l'approche de celui-ci par le substrat, mais il provoque une perturbation du fonctionnement de l'enzyme. L'inhibiteur se fixe l'enzyme libre E et au complexe ES ; de mme, le substrat se fixe e l'enzyme libre E et au complexe EI. Les inhibiteurs non comptitifs n'ont pas d'homologie structurale avec le substrat. c- linhibition incomptitive : Certaines substances inhibitrices qui ne possdent aucune affinit pour l'enzyme libre peuvent cependant se lier au complexe enzyme-substrat ; ceci suppose que la fixation du substrat induit un changement de conformation de l'enzyme. d- Autres types d'inhibiteurs : Dans certains systmes, quand le substrat est en excs, il entre en comptition avec luimme, en formant avec le rcepteur enzymatique des liaisons incompltes. Le produit, ou au moins l'un des produits d'une raction enzymatique, dont la structure est proche du substrat, va se comporter comme inhibiteur comptitif. Les ions de certains mtaux lourds : mercure, plomb, arsenic, non seulement inhibent mais inactivent les enzymes. 2) les activateurs : Ils sont de nature diverse. Les ions mtalliques, peuvent favoriser une bonne conformation de lenzyme. Lactivation par protolyse, par clivage dun ou de plusieurs liaisons peptidiques. Lactivation par modification covalente : lenzyme existe sous deux formes, lune phosphoryle lautre non phosphoryl, et la phosphorylation ou la dphosphorylation aboutit lune des formes. 3) effet des facteurs physicochimiques : a) la temprature : Elle a deux effets : elle acclre toutes les ractions chimiques en fournissant lnergie nces saire pour franchir la barrire de lnergie dactivation, elle entraine progressivement la dnaturation de la protine, les rsultantes de ces deux effets aboutissent une courbe qui traduit un max dactivit de lenzyme correspondant une temprature optimal de fonctionnement. b) effet du pH : Le pH du milieu intervient sur l'tat d'ionisation de nombreux sites internes de l'enzyme. L'action du pH se fait trois niveaux : sur la structure de l'enzyme (modification de la structure 3D de la protine) sur l'association Enzyme-Substrat sur le mcanisme ractionnel 8

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III- Cintique des ractions enzymatiques deux substrats : Ce sont des ractions catalyses par des oxydorductases, transfrases et ligases. Il y a deux grandes catgories en ce qui concerne des ractions deux substrats 1) Ractions impliquant la formation dun complexe ternaire : Ce sont des ractions enzymatiques impliquant la formation des complexes contenant l'enzyme et deux substrats. La raction : E + A + B E + P + Q procde par la formation des complexes ternaires de type EAB et EPQ de sorte que E + A + B EAB EPQ E + P + Q. Cette catgorie de raction se sous divise en deux classes : Ractions dans lesquelles le complexe ternaire se forme d'une faon ordonne ou obligatoire. Dans ce cas le deuxime substrat B se lie aprs que le premier substrat A est li :

Exp : malate dshydrognase

L'enzyme doit fixer le NAD+ en premier lieu pour donner le complexe binaire E - NAD+, avec lequel le malate se combine pour donner le complexe ternaire. Equation de la vitesse :

Avec les constantes de Michalis pour chacun des deux substrats :

Ractions dans lesquelles le complexe ternaire se forme de faon squentielle au hasard E + A EA EA + B EAB ou E + B EB EB + A EAB L'enzyme possde deux sites de fixation A et B, l'un ou l'autre peut se fixer en premier lieu sur l'enzyme. La formation du complexe ternaire est indispensable pour que la raction ait lieu.

Exp : cratinine kinase

Deux cas se prsentent : Fixation dpendante : les substrats A et B n'ont pas la mme affinit suivant qu'ils se fixent sur l'enzyme libre (EL) ou sur le complexe binaire (EA) ou (EB) en premier lieu :

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Fixation indpendante : Les substrats A et B ont la mme affinit qu'ils se fixent en premier lieu sur l'enzyme libre (EL) ou sur le complexe binaire (EA) ou (EB).

2) Ractions impliquant la formation des complexes binaires : Dans ce modle, l'un des produits est form et libr avant la fixation du second substrat sur l'enzyme. Le premier substrat ragit avec l'enzyme pour donner une forme modifie et ractive de l'enzyme, avec libration du premier produit. Cette forme modifie de l'enzyme E' ragit avec le second substrat pour former le deuxime produit. E + A E' + P puis E' + B E + Q

Lexpression de la vitesse pour ce modle est :

Exp : aspartate amino-transfrase

IV- cintique des enzymes non Michaliennes : lallostrie 1) Proprits Gnrales des Enzymes allostriques : Les enzymes allostriques se caractrisent par : La courbe Vi=f([S]) est sous forme sigmode : Quand [S] augmente Vi augment dabord de plus en plus vite jusquau point dinflexion (correspond KM mais appel K0,5) puis de moins au moins vite et plafonne Vmax. Cette allure sexplique par le fait que la fixation dune molcule de substrat sur lenzyme augmente laffinit de lenzyme pour le substrat, cest leffet coopratif. Leffet coopratif est un phnomne homotrope positif (homotrope : effet dun ligand sur sa propre fixation. Les enzymes allostriques ont une structure quaternaire : Souvent elles ont une structure oligomrique, leurs sous units sont disposes de manire ce que la molcule ait un axe de symtrie et chaque sous unit peut fixer une molcule de substrat. Lactivit est modifie par des inhibiteurs ou activateurs (effecteurs) : Outre le site catalytique o se fixe le substrat, lenzyme possde un ou plusieurs sites dits allostriques o peuvent se fixer des effecteurs dits allostriques (activateurs ou inhibiteurs) nayant aucune analogie structurale avec le substrat, cest leffet allostrique qui est un phnomne htrotrope (htrotrope : effet dun ligand sur la fixation dun autre ligand), lors de la fixation dun 11

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effecteur sur le site allostrique, il sensuit une lgre modification de la conformation de lenzyme ; une transition allostrique qui entraine une modification de la conformation au niveau du site actif avec laugmentation ou la diminution de laffinit de enzyme pour le substrat. 2) modles explicatifs de leffet coopratif des enzymes allostriques : Il y a deux modles qui ont t proposs pour expliquer la cooprativit homotrope des enzymes allostriques ; le modle concert et le modle squentiel. Les deux modles impliquent que lenzyme a deux conformations, lune dite T (tendue) faible affinit pour le substrat, lautre R forte affinit pour le substrat et laugmentation de la concentration du substrat entraine une augmentation de la proportion des molcules denzyme de conformation R. mais les deux modles sopposent sur la modalit de la transition entre les conformations T et R.

a- modle concert : Selon ce modle, toutes les sous units dune enzyme sont soit en conformation T ou en conformation R, et les deux conformations sont en quilibres. En absence de substrat lquilibre est en faveur de la conformation T en prsence du substrat, lquilibre est dplac vers R. Pour lenzyme la transition se fait en bloc. b- modle squentiel : En absence de substrat lenzyme est sous la conformation T, la fixation de la 1re molcule de substrat induit la transition TR de la 1re sous unit ce qui facilite la fixation dune 2me molcule de substrat et ainsi de suite. Pour lenzyme la transition TR se fait sous unit par sous unit. 3) effet des effecteurs allostriques : Un activateur allostrique dplace lquilibre TR vers R, laffinit de lenzyme pour le substrat augmente et la K0,5 diminue, la courbe Vi=f([S]) est dplace vers la gauche, la limite les formes R est dominantes est leffet coopratif est aboli ; la cintique allostrique devient Michalienne. Lactivateur un effet htrotrope positif. Un inhibiteur allostrique a les effets inverses, il dplace lquilibre vers T, laffinit de lenzyme pour le substrat diminue et le K0,5 augmente, la courbe est dplace vers la droite. Linhibiteur allostrique a un effet htrotrope ngatif. 4) importance du phnomne allostrique : Elle confre une enzyme une grande sensibilit de son activit aux variations de concentration de substrat et des effecteurs. Cest un mcanisme de rgulation des activits enzymatiques permettant dadapter loffre mtabolique la demande cellulaire, le plus souvent, lenzyme qui catalyse la premire raction limitante dune voie mtabolique est allostrique. Son activit peut tre contrle par plusieurs effecteurs positifs ou ngatifs appartenant cette voie ou dautres. 5) modulation allostrique de type K et de type V : enzymes allostriques du systme K (plus frquentes) :

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Ce sont des enzymes o l'effecteur ne peut modifier que l'affinit apparente (relative Km) de l'enzyme pour le substrat. L'affinit pour le substrat (S) diminue en prsence d'un inhibiteur allostrique (I). Elle augmente en prsence d'un activateur allostrique (A). Exp : Phosphofructokinase (PFK) enzymes allostriques du systme V (plus rares) : Ce sont des enzymes o l'effecteur agit sur la Vmax, va laugmenter ou la diminuer par simple dplacement de lquilibre RT. Si R est catalytiquement plus active la fixation d'un activateur sur cette forme entrane le dplacement de l'quilibre vers cette forme. Il en rsulte une augmentation de Vmax. Le raisonnement inverse est valable pour un inhibiteur allostrique se fixant sur la forme T.

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