Rpublique Algrienne Dmocratique et Populaire

Ministre de lenseignement suprieur et de la recherche scientifique

Universit Mentouri-Constantine
Facult des Sciences de la Nature et de la Vie
Dpartement de Biochimie et de Microbiologie

N dordre : 001 / MAG / 2011

N de srie : 001 / SN / 2011

Mmoire
Prsent pour lobtention du diplme de Magister en Microbiologie
Applique et Biotechnologies Microbiennes.

Par : BELAHMADI MOHAMED SEDDIK OUSSAMA

Thme

Etude de la biodgradation du 2,4-dichlorophnol

par le microbiote des effluents dentre et de sortie
de la station dpuration des eaux uses dibn Ziad

Soutenu le : 16-01-2011

Devant le jury :
Prsident : BOULAHROUF A. Prof. Univ. Mentouri de Constantine
Rapporteurs : BOUSSEBOUA H. Prof. Univ. Mentouri de Constantine
Examinateurs : ARHAB R. Mc. Univ. Larbi Tbssi De Tbessa
HAMIDECHI A. Mc. Univ. Mentouri de Constantine

Anne universitaire 2009/2010

Ddicace

A la Mmoire de mes parents. ;

-3-
Remerciements

Je tiens dabord exprimer ma profonde gratitude monsieur BOUSSEBOUA H.

Professeur luniversit Mentouri de Constantine davoir accept dtre mon directeur de

mmoire. Je le remercie pour ses conseils, ses encouragements et sa patience.

Mes remerciements sadressent galement monsieur BOULAHROUF A. Professeur

luniversit Mentouri de Constantine qui me fait lhonneur de prsider le jury.

Je remercie sincrement monsieur ARHAB R. Matre de confrence luniversit Larbi

Tbessi de Tbessa davoir accept de faire partie de ce Jury.

Je remercie galement Monsieur HAMIDECHI A. Matre de confrence luniversit

Mentouri de Constantine davoir accept de juger ce modeste travail.

Enfin, je remercie vivement tous mes collgues qui ont contribu la ralisation de ce

mmoire.

-4-
 Liste des abrviations
2,4,5-T : Acide 2,4,5-trichlorophnoxyactique.

2,4-D : 2,4-dichlorophnoxyactique.

2,4-DCP : 2,4-dichlorophnol.

4-AAP : 4-aminoantipyrine.

ANOVA : Analyse de la variance.

DBO : Demande biochimique en oxygne.

DCO : Demande chimique en oxygne.

dl : degr de libert.

Kow : Coefficient de partage ( n-octanol/eau).

MES : Matire en suspension.

STEP : Stations dpuration.

TS : Tmoin strile.

UN-EPA : Agence de Protection de lenvironnement des Etats-Unis.

UE : Union europenne.

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 Table des matires

Introduction...10
Synthse bibliographique
1. Eaux uses..12
1.1. Dfinition et origine........12
Les eaux uses urbaines..12
Les eaux uses industrielles....12
1.2. Composition des eaux uses......12
1.2.1. Microorganismes.....12
- Les bactries...13
- Les protozoaires..13
- Les virus...13
- Les helminthes.....14
1.2.2. Matire en suspension ....14
Paramtre de mesure14
- Demande biochimique en oxygne(DBO).....14
- Demande chimique en oxygne (DCO..15
1.3. Pollution des eaux.......15
1.3.1. Elments traces et mtaux....15
1.3.2. Les composes organiques naturels....16
1.3.3. Les xnobiotiques..16
Dgradation des composes organiques xnobiotiques....17
- La biodgradation....17
- Le comtabolisme....18
1.4. Effets des eaux uses sur le milieu rcepteur....18
1.5. Lpuration des eaux uses....18
1.5.1. les prtraitements....19
Le dgrillage.....19
Le dessablage....19
Le dshuilage....19
1.5.2. Les traitements physiques....19
La Dcantation primaire......19
La dcantation secondaire20

-6-
1.5.3. Les traitements biologiques..20
Le traitement par boues actives.....20
lpuration sur lit bactrien......20
Le traitement anarobie....21
1.5.4. Les traitements physico-chimiques......21
1.6. le traitement des eaux uses au niveau de la STEP dIBN ZIAD.....21
1.7. La rutilisation des eaux uses.23

2. Le 2,4-dichlorophnol.....25
2.1. Gnralit..25
2.1.1. Proprits physiques.25
2.1.2. Structure et proprits chimiques du 2,4-dichlorophnol....25
2.2. Processus de production .....25
2.3. Utilisation......25
2.4. Toxicit......26
2.4.1. Toxicit aigue.....26
2.4.2. Toxicit chronique.....26
2.5. Pntration de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement....26
Dans lair......28
Dans leau ....28
Dans le Sol....28
2.6. Devenir de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement..29
Dans lair...29
Dans leau..29
Dans le sol..29
2.7. Bioaccumulation du 2,4-dichlorophnol dans les organismes vivants....30
2.7.1. Plantes........30
2.7.2. Organismes aquatiques.30
2.8. Dgradation 2,4-dichlorophnol........30
2.8.1. Dgradation abiotique......30
2.8.2. Biodgradation......32
Biodgradation arobie....32
Biodgradation anarobie....32

-7-
Matriel et mthodes
1. Prlvement de linoculum....35
2. choix de xnobiotique.....35
3. Milieu de culture.....35
4. technique de production de gaz in vitro....37
5. Prparation des diffrentes concentrations de la molcule.....37
6. Inoculation.......37
7. Tmoins et contrle.....37
8. Incubation, dosages et lectures......39
8.1. Suivi de la concentration de la molcule par dosage colorimtrique..39
8.1.1 Principe...39
8.1.2. Protocole de dosage...39
8.2. Dosage du chlore libre......40
9. Analyse statistique.......40

Rsultats et discussion
1. Qualit des chantillons utiliss pour linoculation...42
2. Cintique de biodgradation du 2,4-dichlorophnol....42
2. 1. Dbut de la biodgradation.....42
2. 2. La fin de la cintique de biodgradation...46
2.3. Effet de linoculum sur la biodgradation......49
2.4. Effet de la concentration de la molcule sur la biodgradation....49
3. Tmoin et contrle...51
4. Libration du chlore....53
5. Variation du pH du milieu......53
Discussion gnrale et conclusion...55
Rfrences.....59
Annexe ......72

-8-
Introduction

-9-
 La croissance alarmante de la pollution des eaux par des matires diverses, organiques ou
non : pesticides, dtergents, mtaux lourds et dautres substances toxiques, reprsente un rel
danger pour la flore et la faune aquatiques et cause de srieux problmes lhumanit.
Les phnols sont des composs majeurs de la pollution toxique de lenvironnement o leur
prsence rsulte deaux uses, pralablement pollues par de nombreuses activits domestiques
et industrielles : production dhuile, conversion du charbon, production du papier et autres (1).
Les chlorophnols sont des phnols chlors, communment prsents dans lenvironnement. Ils
sont utiliss comme agents de prservation pour le bois, les fibres vgtales et le cuir, de mme
que comme dsinfectants. La pollution de lenvironnement par les chlorophnols se caractrise
par leur rmanence dans le milieu et leur toxicit leve. Cest en particulier le cas du 2,4-
dichlorophnol (2,4-DCP), polluant chlorophnolique le plus rencontr dans lenvironnement et
inclus depuis fort longtemps dans la liste des polluants majeurs par lAgence de Protection de
lEnvironnement des Etats Unis (UN-EPA) et par lUnion Europenne (UE) (2).

Ltude de la biodgradation du 2,4-DCP dans les eaux uses est essentielle pour
dterminer son potentiel polluant et donc son impact sur lenvironnement. Un grand nombre de
mthodes physiques, chimiques et biologiques sont utilises pour liminer les chlorophnols
partir de sites pollus. Les mthodes physiques et chimiques ont prouv leur efficacit mais elles
peuvent gnrer des sous produits indsirables et sont pnalises par leurs cots. Par contre, les
mthodes biologiques sont gnralement plus efficaces et relativement moins chres.

Le travail entrepris dans ce mmoire a pour objectif : lvaluation de la biodgradation du

2,4-DCP par deux chantillons deaux uses de la station dpuration dIBN ZIAD, le premier
tant prlev partir du canal dentre et le second partir de celui de la sortie. Ce processus est
tudi en prsence de diffrentes concentrations du substrat, utilis comme seule source de
carbone et dnergie dans un milieu minimum adquat.
La mthodologie envisage pour lvaluation de la biodgradation consiste suivre les trois
paramtres suivants :

- La diminution des diffrentes concentrations du 2,4-DCP en fonction du temps.

- La libration de chlore inorganique au cours de la biodgradation.
- La mesure de la production de gaz.

- 10 -
Synthse bibliographique

- 11 -
1. Les eaux uses :
1.1. Dfinition et origine
Les eaux uses sont toutes des eaux souilles, charges de diffrents lments du fait
qu'elles ont dj t utilises dans une activit domestique ou industrielle. On distingue deux
grandes catgories deaux uses, selon leur origine.

Les eaux uses urbaines

Elles comprennent les eaux uses provenant des diffrents usages domestiques de l'eau.
Elles sont essentiellement porteuses de pollution organique. Elles se rpartissent en eaux
mnagres, qui ont pour origine les salles de bains et les cuisines, et sont gnralement charges
de dtergents, de graisses, de solvants, de dbris organiques, etc. et en eaux "vannes". Ces
dernires sont des rejets des toilettes, chargs de diverses matires organiques azotes ou non et
de germes fcaux. Les eaux uses urbaines comprennent aussi une autre catgorie deau, elle est
forme des eaux de ruissellement, gnres par les eaux pluviales notamment des priodes
orageuses, L'eau de pluie se charge d'impurets au contact de l'air (fumes industrielles), puis, en
ruisselant, des rsidus dposs sur les toits et les chausses des villes (huiles de vidange,
carburants, rsidus de pneus, mtaux lourds...). (3)

Les eaux uses industrielles

Elles sont trs diffrentes des eaux uses domestiques. Leurs caractristiques varient d'une
industrie l'autre. En plus de matires organiques, azotes ou phosphores, elles peuvent
galement contenir des produits toxiques, des solvants, des mtaux lourds, des micropolluants
organiques, des hydrocarbures. En raison de leur spcificit, certaines d'entre elles doivent faire
l'objet d'un prtraitement de la part des industriels avant d'tre rejetes dans les rseaux de
collecte. Elles ne sont mles aux eaux domestiques que lorsqu'elles ne prsentent plus de danger
pour les rseaux de collecte et ne perturbent pas le fonctionnement des stations dpuration ou du
milieu rcepteur (4).

1.2. Composition des eaux uses

Les eaux uses se composent de matires dissoutes et en suspension et de divers
microorganismes.

1.2.1. Les microorganismes

Les eaux uses contiennent tous les microorganismes excrts avec les matires fcales.
Cette flore entrique normale est accompagne d'organismes pathognes. L'ensemble de ces

- 12 -
organismes peut tre class en quatre grands groupes : les bactries, les protozoaires, les virus et
les helminthes.

- Les bactries : Les bactries sont les microorganismes les plus communment
rencontrs dans les eaux uses. Les eaux uses urbaines contiennent environ 106 107
bactries/100 ml dont la plupart sont des Proteus et des entrobactries, 103 104 des
Streptocoques et de 102 103 des Clostridium. La concentration en bactries pathognes est
trs variable et peut atteindre 104 germes par litre. Parmi pathognes les plus dtectes, les
Salmonelles, dont celles responsables de la typhode, des paratyphodes et des troubles
intestinaux. Les coliformes thermotolrants sont des germes tmoins de contamination
fcale communment utiliss pour contrler la qualit relative d'une eau. (5)
En plus de ces germes les eaux uses d'une station d'puration contient des espces
autochtones considres comme acteurs majeurs des biodgradations telles que :
Pseudomonas, Alcaligenes, Micrococcus, Flavobacterium et dautres. (6)

- Les protozoaires : Au cours de leur cycle vital, les protozoaires passent par une
forme de rsistance, les kystes, qui peuvent tre vhiculs par les eaux rsiduaires. Ces
parasites sont trs persistants. Ainsi, selon les conditions du milieu, ils peuvent survivre
plusieurs semaines, voire mme plusieurs annes (7). Plusieurs protozoaires pathognes ont
t identifis dans les eaux uses (8). Parmi les plus importants du point de vue sanitaire, il
faut citer Entamoeba histolytica, responsable de la dysenterie amibienne, Giardia lamblia
et Cryptosporidium parvum (9). Il est considr que seulement 10 30 kystes forment une
dose suffisante pour causer des troubles sanitaires (7).

- Les virus : Les virus sont des parasites intracellulaires obligatoires qui ne peuvent se
multiplier que dans leur cellule hte. Leur concentration estime dans les eaux uses
urbaines est comprise entre 103 et 104 particules par litre. Leur isolement et leur
dnombrement dans les eaux uses restent difficiles, ce qui conduit vraisemblablement
une sous estimation de leur nombre rel. Les virus entriques sont ceux qui se multiplient
dans le trajet intestinal. Parmi les virus entriques humains les plus nombreux il faut citer
les entrovirus, les rotavirus, les rtrovirus, les adnovirus et le virus de l'Hpatite A. Il
semble que les virus soient plus rsistants dans l'environnement que les bactries, du fait
quau cours de processus de traitement des eaux uses les virus sont plus difficiles

- 13 -
 liminer que les bactries classiques couramment utilises comme indicateurs de la qualit
bactriologique des eaux (9).

- Les helminthes : Les helminthes sont des parasites intestinaux, frquemment

rencontrs dans les eaux rsiduaires. Dans les eaux uses urbaines, le nombre d'oeufs
d'helminthes peut tre valu entre 10 et 103 germes/l. Beaucoup de ces helminthes ont des
cycles de vie complexes comprenant un passage obligatoire par un hte intermdiaire (10).
Le stade infectieux de certains helminthes est l'organisme adulte ou larve, alors que pour
d'autres, ce sont les oeufs. Les oeufs et les larves sont rsistants dans l'environnement et le
risque li leur prsence est considrer pour le traitement et la rutilisation des eaux
rsiduaires. En effet, la persistance de ces organismes diffrentes conditions
environnementales ainsi que leur rsistance la dsinfection permet leur reproduction, ce
qui constitue leur risque potentiel. Les helminthes pathognes rencontrs le plus
frquemment dans les eaux uses sont : Ascaris lumbricades, Oxyuris vermicularis,
Trichuris trichuria, Taenia saginata. (7)

1.2.2. Les matires en suspension

Les matires en suspension (MES) sont exprimes en mg/l. Ce sont les matires non
dissoutes contenues dans l'eau. Elles comportent la fois des lments minraux et organiques.
La plus grande part des microorganismes pathognes contenus dans les eaux uses, est associe
aux (MES) (11). Elles donnent galement leau une apparence trouble et, souvent, un mauvais
got et une mauvaise odeur. (4). La MES d'une eau use urbaine ne dpasse gure 200-300 mg/l
(6). La teneur des eaux uses en MES sanalyse par le biais de diverses mesures chimiques et
biologiques. Les analyses les plus frquentes sont la demande biochimique en oxygne (DBO) et
la demande chimique en oxygne (DCO).

Paramtres de mesure
- Demande biochimique en oxygne (DBO)
Sa dtermination consiste mesurer la quantit totale de loxygne consomm, par des
processus biochimiques, au cours de l'oxydation des matires organiques dans un
chantillon donn. La DBO a t standardise en DBO5, mesure au bout de 5 jours,
considre comme une priode significative du processus global de biodgradation qui
prend des semaines. Des appareils automatiss, tels que le Micro-Oxymax (Columbus),

- 14 -
 permettent de mesurer la DBO5 ainsi que la production de CO2. Ces mesures sont souvent
utilises pour vrifier le caractre biodgradable d'un compos. Elles permettent aussi
d'avoir indirectement une ide de la contamination organique globale d'un effluent. Une eau
potable doit avoir une DBO5 pratiquement nulle. Les eaux uses urbaines ont une DBO5
pouvant varier de 150 350 mg/L. Des valeurs bien plus leves sont enregistres la
sortie des laiteries, abattoirs, et surtout des distilleries (vinasses), pouvant parfois slever
plus de 30 000 mg/L. (6)

- Demande chimique en oxygne (DCO)

Cest la quantit doxygne ncessaire loxydation de lensemble des matires minrales
et organiques biodgradables ou non, prsentes dans un milieu. Soit donc la fois les
matires oxydables par les processus purement chimique et celles oxydables par les
processus biochimiques (12). La DCO est obtenue l'aide d'un agent oxydant puissant
comme le dichromate de potassium (K2Cr2O7). La valeur de la DCO est toujours plus
leve que celle de la DBO5, car de nombreuses substances organiques peuvent tre
oxydes chimiquement mais ne peuvent s'oxyder biologiquement (13). La DCO est
galement value en mg et mme en kg dans les eaux uses industrielles (6).

1.3. La pollution des eaux

1.3.1. Elments traces et mtaux

Les sources de mtaux pour les milieux aquatiques sont multiples. On diffrencie
principalement les sources dorigine naturelle et anthropique. Les principaux phnomnes
naturels conduisant la dissmination des mtaux dans les compartiments environnementaux
y compris les milieux aquatiques sont lactivit volcanique et lrosion des roches (14).

En plus des sources naturelles, les milieux aquatiques sont enrichis en mtaux par les activits
humaines. Les mtaux sont utiliss par lhomme comme matriaux mais galement comme
ractifs dans lindustrie (traitement de surface, intermdiaire ractionnel, etc.) et lagriculture
(phytosanitaires). Les activits industrielles, ainsi que le trafic automobile mettent de fines
particules mtalliques dans latmosphre, principalement dans les zones urbaines (15). Les
mtaux ainsi dissmins se dposent dans les divers compartiments environnementaux tels que
les plans deau et les sols. Les mtaux dposs sur les sols peuvent cependant atteindre les cours
deau par ruissellement au cours des vnements pluvieux. En effet les eaux uses urbaines sont

- 15 -
une des principales voies d'apport de mtaux vers les cosystmes aquatiques (16). A l'entre des
stations d'puration, une large partie des mtaux contenue dans les eaux uses se trouve
complexe avec la matire organique dissoute. Les mtaux qui peuvent tre prsents dans les
eaux rsiduaires sont : cadmium (Cd), cuivre (Cu), molybdne (Mo), nickel (Ni) et zinc (Zn)
(17).

1.3.2. Les composs organiques naturels

Ce sont en gnrale des composs compltement biodgradables, au moins dans des

conditions favorables. Il faut, toutefois, les considrer comme polluants lorsque leur
concentration est anormalement leve, et engendre un stress important dans la biocnose des
milieux aquatiques, ce qui peut conduire linactivation des mcanismes potentiels de la
biodgradation. Cest le cas, par exemple, des huiles ou des graisses qui, des concentrations
plus ou moins leves, engendrent la formation de films superficiels qui peuvent sopposer
laccs de loxygne dans les cours deau et provoquer des effets dintoxication sur les
microorganismes et les poissons (18).

1.3.3. Les xnobiotiques

Ce sont des composs artificiels, invents par lhomme, diffrents de par leurs structures
chimiques des composs synthtiss par les organismes vivants. On distingue entre autres :
- Des composs inertes, non biodgradables, non toxiques et qui ninteragissent pas avec les
organismes vivants. Ces le cas de la plupart des plastiques.
- Des composs plus ou moins dgradables, pouvant traverser la barrire cellulaire des
organismes vivants, se concentrer le long de la chane alimentaire et causer des dommages
physiologiques considrables, de graves intoxications, voire la mort (19).

Les phnols et leurs drives tels que les chlorophnols (mono-, di-, tri-, ttra- et penta-), les
nitrophnols, les crsols et les dimthylphnols, font partie de cette catgorie des xnobiotiques
plus ou moins dgradables. Ils sont utiliss dans lindustrie des matires plastiques, lindustrie
pharmaceutique ainsi que dans la fabrication de nombreux produits : adhsifs, explosifs, engrais,
gaz dclairage, peinture, caoutchouc, parfums, agents de prservation du bois et des textiles. Ils
servent aussi la fabrication des dtergents, des colorants, des pesticides (notamment les
chlorophnols) (20).

- 16 -
mobilit, plus ou moins limite par leur rtention, et de leur quantit, cette dernire est
dtermine par la dgradation de ces composs.

Dgradation des composs organiques xnobiotiques

La dgradation est une transformation chimique des molcules organiques dont le stade
ultime est la minralisation. Ainsi, un compos organique peut subir diverses transformations
physico-chimiques ou biologiques qui se droulent suivant un nombre dtapes plus ou moins
grand. Les transformations abiotiques (non biologiques) qui sont dorigine physico-chimique
conduisent toujours la formation dun ou deux mtabolites mais rarement plusieurs. Les
transformations biologiques conduisent, elles aussi, la formation des mtabolites mais
aboutissent le plus souvent au stade de la minralisation (21).

- la biodgradation : Le terme biodgradation signifie la transformation biologique dun

compos organique dune forme une autre. Ce procd peut donc convertir un compos
inoffensif en compos offensif toxique, altrer la toxicit dun compos donn, ou encore
changer une substance mtabolisable en substance difficile tre mtabolise. Cependant,
lorsquon juge un compos comme biodgradable, cela signifie quil peut tre minralis.
Le terme biodgradation primaire est utilis pour indiquer une simple transformation, alors
que le terme biodgradation partielle signifie une transformation qui arrive un stade entre
la biotransformation primaire et la minralisation (22).

Gnralement, les composs organiques serrent comme source de carbone et dnergie aux
microorganismes, ces derniers peuvent seulement raliser des activits pour lesquelles ils ont un
patrimoine enzymatique assur par une programmation gntique (23). Le succs de ce type de
mtabolisme dpend entre autre de la capacit des composs induire la synthse des enzymes
requises. Ces dernires peuvent se lier des substrats contenant des groupements fonctionnels
xnobiotiques analogues aux substrats naturels, cela dpend du degr de similarit de la structure
entre le compos xnobiotique et le substrat naturel (24). Si le compos xnobiotique est
incapable dinduire lenzyme ncessaire, alors la biodgradation se produira seulement en
prsence de linducteur naturel, et cela peut svrement limiter les applications de la capacit
enzymatique. Dans une situation pareille, la seule faon pour que le microorganisme puisse
dgrader constamment les composs xnobiotiques est lutilisation dune source additionnelle de
carbone ou laction dautres microorganismes dans une culture mixte (25).

- 17 -
 -Le comtabolisme : Le comtabolisme est souvent impliqu dans la dgradation de
composs xnobiotiques (26), il est dfini comme la transformation dun substrat ne servant
pas la division cellulaire en prsence obligatoire dun substrat de croissance ou dautres
composs assimilables (27).
Le comtabolisme rsulte du large spectre dactivit des enzymes impliques qui, en plus
de leur fonction normale dans le mtabolisme, sont capables de transformer dautres
composs (28). Dans certaines conditions, si ces systmes enzymatiques sont peu
spcifiques, ils pourront fonctionner gratuitement en modifiant dautres composs qui ne
sont pas impliqus dans le mtabolisme du microorganisme (29). Le caractre essentiel du
comtabolisme, qui peut revtir des formes multiples, est le caractre fortuit de la raction
qui napporte aucun gain identifi, nergtique, nutritionnel (source de carboneetc.), ou
autres, au microorganisme qui le met en uvre (30). Ce processus de dgradation est trs
frquent et beaucoup de microorganismes peuvent y participer. Les champignons sont
particulirement impliqus dans ce type de dgradation, en raison de labondance de leur
systme enzymatique large spectre dactivit (31).

1.4. Effets des eaux uses sur le milieu rcepteur

Les eaux uses contiennent des composs chimiques toxiques trs persistants et qui ont une
grande lipophylicit. Parmi ces composs, on peut citer les hydrocarbures polycycliques, les
alkyl-phnols, chlorophnols, phtalates, les pesticides et les rsidus pharmaceutiques actifs.
Certains composs ont un pouvoir de perturber le systme endocrinien tels que les hydrocarbures
polycycliques aromatiques et les alkylphnols (32). En effet plusieurs environnements aquatiques
ont t pollus par ces composs, notamment les mers et les rivires o on observe des mares
noires qui causent la mort des poissons, suite lintoxication due ces composs en plus des
autres substances pharmaceutiques dont les principales sources sont les eaux uses et les rejets
industriels (33). Ainsi, en 1975, le dversement de Cyanure dans la Moselle dtruit 40 tonnes de
poissons, alors que le rejet dans le Rhin dun insecticide entrana la mort de 50% des poissons
(34).

1.5. Lpuration des eaux uses

Pour recycler les eaux uses dans le milieu naturel et les rendre propres et scuritaires,
lpuration des eaux uses savre une ncessit primordiale. Elle est effectue au niveau des

- 18 -
stations dpuration (STEP) o les eaux uses subissent des prtraitements, et diffrents types de
traitements : physiques, biologiques et physico-chimiques.

1.5.1. Les prtraitements

Ils permettent dliminer la fraction la plus grossire, afin de ne pas gner les oprations
ultrieures. Ce sont le dgrillage, le dessablage, le dgraissage galement appel dshuilage.

Le dgrillage
Il sagit dliminer les lments de grandes dimensions qui se trouvent dans leau dgout
brute (chiffons, matires plastiques, etc.) et qui pourraient perturber le fonctionnement
hydraulique de la STEP. Pour ce faire, on intercale une grille, dont les barreaux ont un
cartement de lordre du centimtre (35).

Le dessablage
Aprs le dgrillage, il reste encore dans leau des fragments qui peuvent dcanter
facilement, mais dont la duret et la taille sont relativement importantes, suprieure 0,2 mm de
diamtre, et qui pourraient conduire labrasion de certains lments de la station et
particulirement les pompes, on limine ces matriaux facilement dcantables dans de petits
bassins rectangulaires ou circulaires (35).

Le dshuilage
Les eaux uses urbaines contiennent souvent des matires flottantes qui passent travers
les grilles (huiles, hydrocarbures, dbris de graisse, etc.). Les huiles et hydrocarbures forment
une couche mince en surface et gnent ainsi le processus daration dans le cas des boues
actives, il est donc ncessaire de piger ces substances au niveau du prtraitement par un
dispositif dcrmage.

1.5.2. Les traitements physiques

La Dcantation primaire
Permet dallger les traitements biologiques ou chimiques ultrieurs, en liminant une
partie des particules solides en suspension de diamtre infrieur 0,2mm. On fait circuler leau
lentement dans un bassin o on racle et aspire priodiquement les particules rassembles au fond.
Lefficacit de ce traitement dpend du temps de sjour et de la vitesse ascensionnelle. La
dcantation primaire permet dliminer, pour une vitesse ascensionnelle de 1,2 m3/h, 40 60 %
des MES, soit 10 30 % des virus, 50 90 % des helminthes et moins de 50 % des kystes de
protozoaires (36).

- 19 -
 La dcantation secondaire
Appele galement clarification, elle intervient aprs le traitement biologique ou chimique,
afin dliminer les flocs issus de ces derniers.

Lors des phases de dcantation, llimination des microorganismes et des micropolluants se fait
principalement par dcantation des MES (sur lesquelles ils sont adsorbs) (36).

1.5.3. Les traitements biologiques

Ces traitements consistent une consommation de la matire organique contenue dans les
eaux uses et dune partie des matires nutritives (azote et phosphore) par des microorganismes,
on trouve entre autres :

Le traitement par boues actives

Cest un traitement trs largement utilis. Il sagit dun racteur qui contient les eaux
traiter, dans lequel est injecte une boue charge de bactries. Les bactries consomment la
matire organique et contribuent llimination de lazote et du phosphate. A la sortie du
racteur, leffluent passe dans un clarificateur. La boue dcante est spare en deux flux : lun
rejoint le racteur (ensemencement) et lautre est vacu vers la filire des boues. Laction des
bactries dans le racteur ncessite de loxygne. Un traitement par boues actives limine 90 %
des bactries entriques, 80 99 % des entrovirus et des rotavirus, 90 % de Giardia et de
Cryptosporidium. Llimination a lieu grce la sdimentation des MES, la comptition avec les
micro-organismes non pathognes et la temprature. La part la plus importante est due la
sdimentation. (37)

Lpuration sur lit bactrien

Cest le plus ancien procd biologique utilis. Des bactries sont cultives sur un substrat
neutre ; de la pierre concasse, du pouzzolane (sable volcanique), du mchefer ou du plastique,
sur lequel On fait passer leffluent. La difficult consiste trouver la bonne vitesse du flux deau,
qui ne doit pas tre trop rapide (pour permettre la dgradation bactrienne) ni trop lent (pour une
bonne vacuation des MES en excs). Une puration sur lit bactrien est plus efficace quun
traitement boues actives car elle limine non seulement les virus et les bactries
(respectivement 30 40 % et 50 95 %) mais aussi les ufs dhelminthes (20 90 %) et les
kystes de protozoaires (83 99 % des kystes dEntamoeba histolytica) (32, 33).

- 20 -
 Le traitement anarobie
Dans ce genre de traitement on utilise essentiellement la fosse imhoff ou la fosse double
tage, qui consiste en une consommation des matires organiques par les microorganismes
prsents dans leau en absence dair. Il se produit une fermentation mthanique dans une
premire fosse et on recueille ainsi les eaux pures dans une seconde fosse place sous la
premire pour quelles puissent dcanter, ce traitement est de moins en moins utilis car il est
difficile conduire et son mauvais fonctionnement peut avoir de graves inconvnients (odeurs
nausabondes, risques dexplosion, etc.). En outre les quantits des gaz produites sont trop
faibles pour quon puisse penser les rcuprer (38).

1.5.4. Les traitements physico-chimiques

Ils sont gnralement utiliss dans les stations dpuration de grande capacit, ou dans
celles ayant faire face de grandes variations de charge dans lanne (zone touristique). Ils
comportent classiquement deux phases : une phase de coagulation par des sels de fer ou
daluminium, puis une floculation des collodes forms. La sparation du floc a lieu pendant la
phase de clarification (dcantation secondaire). Les procds les plus modernes utilisent du
microsable inject dans leffluent afin dacclrer la dcantation des flocs. On parle alors
dlimination flocs lests (39).

Les traitements physico-chimiques permettent un bon abattement des virus. Cependant, leur
utilisation, et notamment le dosage de sels de fer et daluminium, nest pas toujours bien
optimise, sinon matrise. Il y a donc un risque de surcot li une mauvaise utilisation, voire
un risque environnemental (37).

1.6. Le traitement des eaux uses au niveau de la STEP dIBN ZIAD

Les eaux uses de la ville de CONSTANTINE subissent, au niveau de la STEP dIBN ZIAD, des
prtraitements (dgrillage, dessablage, dshuilage), un traitement biologique par boues actives,
puis un traitement physique qui est la dcantation secondaire (clarification).

Une fois traites, les eaux sont vacues par le canal de sortie pour rejoindre leur milieu
rcepteur qui est le oued RHUMEL.

- 21 -
 Volume moyen journalier des eaux uses recycles (m3/j)

Figure 1 : Volume moyen journalier des eaux uses recycles en quelques pays. (42)

- 22 -
1.7. La rutilisation des eaux uses

Les nutriments se trouvent en grande quantit dans les eaux uses, et constituent un
paramtre de qualit important pour la valorisation de ces eaux en agriculture (40). Les lments
les plus frquents dans les eaux uses sont l'azote, le phosphore et parfois le potassium, le zinc, le
bore et le soufre. Ces lments se trouvent en quantits apprciables, mais en proportions trs
variables que ce soit, dans les eaux uses pures ou brutes. Une lame de 100 mm d'eau
rsiduaire traite peut apporter l'hectare de terre agricole : de 16 62 kg d'azote, de 2 69 kg de
potassium, de 4 24 kg de phosphore, de 18 208 kg de calcium, de 9 100 kg de magnsium,
de 27 182 kg de sodium (36).

Pendant les dernires annes, la rutilisation des eaux uses a connu un dveloppement trs
rapide avec une croissance des volumes deaux uses rutilises de lordre de 10 29 % par an,
en Europe, aux tats Unis et en Chine, et jusqu 41 % en Australie. Le volume journalier actuel
des eaux uses rutilises atteint le chiffre impressionnant de 1,5-1,7 millions de m3 par jour dans
plusieurs pays, comme par exemple la Californie, la Floride, le Mexique et la Chine (41).
Lampleur de la valorisation des eaux uses dans diffrents pays du monde est illustre dans la
figure 1.

- 23 -
Tableau1 : proprits physico-chimiques du 2,4-DCP

Paramtres Valeur Rfrences

Masse molaire g/mole 163 (48, 49)
Point dbullition (C) 210 (44, 48, 50)
Point de fusion (C) 45 (51)
Densit (50C) 1,388 (51)
Solubilit dans leau 20-25C (g/L) 4.5 (47, 51, 52)

Pression de vapeur (Pa) (25C) 16 (53)

(53C) 133 (53)
Constante de Henry (Pa.m3/mole) 4. 10-1 (48, 52)
20-25C
Log Kow 3.2 (54)
pka 7,6-7,85 (83)

Maximum dabsorption (nm) :

forme molculaire 282 (83)
forme anionique 304 (83)

Figure 2 : Structure chimique du 2,4-dichlorophnol (56).

- 24 -
2. Le 2,4-dichlorophnol :
2.1. Gnralit
2.1.1. Proprits physiques

A temprature ambiante, le 2,4-dichlorophnol est un solide incolore, blanc ou jaune pale,

en forme des cristaux ou daiguilles (43,44). Il a une forte odeur phnolique qui sert comme un
bon indicateur de sa prsence (45). Cette odeur peut tre sentie des taux de 0,35mg/L dans leau
(46) et de 1,4mg/m3 dans lair (47). Les proprits physico-chimiques du 2,4-dichlorophnol sont
mentionnes dans le tableau1.

2.1.2. Structure et proprits chimiques du 2,4-dichlorophnol

Le 2,4-dichlorophnol (2,4-DCP) est nomm aussi 2,4-dichlorohydroxybenzne, ou encore

4-Hydroxy-1,3-dichlorobenzene (55), sa formule brute est C6H4Cl2O. La structure est reprsente
dans la figure2.

2.2. Processus de production

Le 2,4-DCP est obtenu industriellement par chloration du phnol ou du monochlorophnol

(p-chlorophnol, o-chlorophnol) ou encore par un mlange de ces composs haute temprature
et dans un racteur en fente de fer (45,57). Dans le processus de production du
2,4-dichlorophnol, plusieurs impurets peuvent se former : 2,6-dichlorophnol (environ 80),
penoxyphnols chlors, diphnyl-esters chlors, chlorodibenzofuranes (45).

2.3. Utilisation

Le 2,4-dichlorophnol est utilis comme prcurseur chimique qui contribue

principalement la production de lacide 2,4-dichlorophnoxyactique (2,4-D) (58) et de ses
drivs comme lacide 2,4-dichlorophnoxypropionique (2,4-DP) (57), utiliss comme
germicides et strilisant des sols (54). Le 2,4-dichlorophnol est aussi utilis dans la production
des pentachlorophnol (PCP) et des chlorophnols mthyls qui sont utiliss comme antimites,
antiseptiques et dsinfectants (59)

- 25 -
2.4. Toxicit

Le 2,4-dichlorophnol pntre dans le corps humain par inhalation de ses arosols, par
ingestion et mme travers la peau (57).

Par voie orale, le 2,4-dichlorophnol est trs rapidement absorb par le tractus gastro-intestinal,
du fait de sa forte solubilit lipidique et sa faible ionisation au pH physiologique. Une fois
absorb il saccumule principalement au niveau du foie et des reins. 80% 90% du
2,4-dichlorophnol peut tre limins sous forme de glucuronates ou de sulfates par les urines.
Par ailleurs il a t montr que le caractre lipophile du 2,4-dichlorophnol lui permet de se lier
de manire rversible lalbumine srique humaine (43).

2.4.1. Toxicit aigue

Une solution de 2,4-DCP est aisment absorb par la peau et le contact avec de grandes
concentrations peut tre mortel (79). Les symptmes les plus frquents lexposition aigue,
accidentelle ou volontaire, au 2,4-DCP sont des convulsions, une ataxie, une diminution de la
temprature corporelle et des maux de tte (43). Par inhalation, la sensation de brlure
saccompagne dune toux avec irritation de la gorge. Lors de lingestion du 2,4-DCP des
douleurs abdominales intenses sont aussi frquemment ressenties (59).

2.4.2. Toxicit chronique

En milieu professionnel, quelques cas de chloracn et de porphyrie rsultent dune

exposition dermique au 2,4-DCP avec une augmentation de lexcrtion de coproporphyrines.
Dans une autre tude, ralise sur des travailleurs exposs non exclusivement au 2,4-DCP, une
augmentation significative de lincidence de cancers du poumon, du rectum et de tissu conjonctif
(sarcomes), chez les hommes et les femmes (43).

2.5. Pntration de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement

Le 2,4-DCP peut tre prsent naturellement dans lenvironnement, cest une substance
activit hormonale (61) ou antibactrienne (62), naturellement produite par certains
microorganismes comme Penicillium sp (63).

- 26 -
Figure 3. Transformation du 2,4-D en 2,4-DCP (73).

- 27 -
 Les chlorophnols y compris le 2,4-dichlorophnol, entrent aussi dans lenvironnement
travers un usage direct (domestique ou industriel) (64), renversement accidentel et/ou comme
produits de dgradation dautres composs. Cependant, ils sont communment dtects dans le
sol, les sdiments, les eaux de surfaces et les eaux uses (65).

Dans lair

La volatilisation de 2,4-DCP constitue son mcanisme majeur de dispersion dans

latmosphre. Cependant, une petite fraction (environ 5%) de 2,4-DCP est mise sous forme de
vapeur dans latmosphre partir du sol (66, 55, 53, 67) et mme de leau (68). Le 2,4-DCP se
forme aussi lors de la combustion de la matire organique, il est prsent dans les gaz mis lors de
lincinration des dchets municipaux, du charbon, des bois et des herbicides base de 2,4-DCP
(69).
Dans leau

Les dcharges industrielles constituent la source principale de pollution des eaux par les
monochlorophnols et les dichlorophnols (70). Le 2,4-DCP est prsent dans les effluents des
industries de production du fer, des composs lectriques, des quipements photographiques
(60), cokerie, de la distillation du bois, des industries pharmaceutique et textiles, de tannerie, des
raffineries ptrolire (71) et par la production de 2,4-D. Le 2,4-DCP est aussi gnr comme sous
produit pendant la dsinfection des eaux par chloration (66).

Dans le sol

Aprs utilisation des herbicides dans les sites agricoles, le 2,4-DCP est le produit majeur de
transformation du 2,4-D par photolyse solaire et/ou par les activits microbiennes dans les sols
(72).

Le 2,4-DCP se forme par oxydation de la chane latrale de lherbicide 2,4-D (figure3). Il peut
aussi tre prsent comme impuret dans la formulation de certains herbicides (74),
particulirement le 2,4-D, 2,4,5-T et le lindane (75). Le 2,4-DCP saccumule dans le sol par
lapport des eaux uses pollues qui les contaminent lors de leur rutilisation en irrigation (64).
Il est aussi prsent dans les lixivats, riches en composs organiques chlors, issus de

- 28 -
lenfouissement des dchets municipaux solides (76). En gnral, la concentration des
chlorophnols dans les sols contamins schelonnent entre 0,1 et 10mg/kg (77).

2.6. Devenir de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement

Le devenir des chlorophnols dans lenvironnement et leur transport sont contrls par
leurs proprits chimiques et physiques et par les conditions environnementales (55).

Dans lair

Compte tenu de sa pression de vapeur, le 2,4-dichlorophnol mis dans latmosphre nest

prsent que sous forme de vapeur. En cas de prcipitation, le 2,4-dichlorophnol peut tre
entran par la pluie et sintroduire dans les compartiments terrestres(sols, eau et sdiments) (43).

Dans leau

Dans les milieux aquatiques, les chlorophnols existent sous forme dissocie et non
dissocie. Ces formes dpendent du pH du milieu et des proprits physiques et chimiques des
molcules (65). Lorsquil atteint les eaux de surfaces, le 2,4-dichlorophnol a une forte tendance
sadsorber sur les particules en suspension (43). La phase demeurant libre dans leau se
volatilise dans latmosphre. La volatilisation de 2,4-DCP partir deau est faible, donc elle ne
constitue pas un processus majeur dans sa disparition des eaux de surfaces (55).

Dans le sol

Lorsquil est prsent dans le sol, le 2,4-DCP a une mobilit faible ou modre. Compte
tenu de sa constante de Henry (0.4) la volatilisation de 2,4-dichlorophnol partir de sols
humides constitue un processus de transfert important. Pour les mmes raisons, la volatilisation
partir dun sol sec est relativement faible (43). Ladsorption sur les particules de sol est
gouverne par le pourcentage dions oxyds et par le pH (ladsorption diminue lorsque le pH
augmente) (78).

Dans les sols alcalins, le 2,4-dichlorophnol est prsent sous forme principalement ionise donc
dissocie, ce qui rduit son adsorption. A linverse, dans des sols acides ladsorption sera plus
leve, ce qui limite sa mobilit et affecte sa biodisponibilit (47).

- 29 -
2.7. Bioaccumulation du 2,4-dichlorophnol dans les organismes vivants
2.7.1. Plantes

Le 2,4-dichlorophnol peut tre absorb par les plantes des concentrations

proportionnelles leurs stades de maturit. Une concentration de 0,001mg par gramme est
mesure dans les grains de soja et 0,003 mg par gramme dans les grains davoine (80).

2.7.2. Organismes aquatiques

La bioaccumulation du 2,4-dichlorophnol chez les organismes aquatiques est relativement

faible (68). Des facteurs de bioconcentration de 7,1 69 ont t calculs pour la carpe, 257 263
pour les algues planctoniques deau douce et de 10 pour la truite (43). Le 2,4-dichlorophnol
saccumule principalement dans la bile des poissons, une concentration de 240 7700 ng de
2,4-DCP est dtecte dans un gramme de la bile de perche (81). Laccumulation de 2,4-DCP
dans le tissu musculaire des poissons demeure cependant faible. La bioaccumulation des
chlorophnols travers la chane trophique est relativement faible (<10%), comparativement aux
autres rsidus transfrs directement dans lorganisme partir de leau (43).

2.8. Dgradation
2.8.1. Dgradation abiotique

Les chlorophnols, y compris le 2,4-DCP, peuvent tre dgrads par plusieurs processus
abiotique tels que la photodgradation ou lhydrolyse. La photodgradation rsulte dune
photolyse directe (la dcomposition par la lumire) ; Cest un phnomne de surface qui na de
lampleur quau niveau des eaux peu profondes et des zones ensoleilles, ou bien de la raction
du 2,4-DCP avec loxygne et les radicaux hydroxyles (82, 83). Lhydrolyse semble ne pas avoir
un effet significatif sur la dgradation du 2,4-DCP, cela est d au manque de groups
fonctionnels hydrolysables (84).

Le 2,4-DCP peut tre dgrad aussi par photocatalyse en prsence dun photocatalyseur comme

le dioxyde de titanium (Tio2) et le loxyde de zinc (ZnO). Sehili et al (85) ont trouv que
lirradiation dune solution aqueuse de 2,4-DCP (2 mol/l) avec une lampe fluorescente en
prsence de ZnO (2g/l) gnre des sous-produits de la dgradation du 2,4-DCP qui sont : le
chlorohydroquinone, le 4-chlorocatechol, le 4,6-dichlororesorcinol et le 3,5-dichlorocatechol.

- 30 -
Figure 4. Voie propose pour la dgradation du 2,4-dichlorophnol. 1, chlorophnols
hydroxylase, 2, chlorocatchol 1,2-dioxygnase, 3, chloromuconate cycloisomerase, 4,
dienelactone hydrolase, 5, maleylacetate rductase, 6, 3-oxoadipate thiolase. (91)

- 31 -
2.8.2. Biodgradation
Biodgradation arobie

Diffrents types de microorganismes arobies, Pseudomonas sp., Alcaligenes sp.,

Acinetobacter sp., Agrobacterium sp., Rhodococcus sp., Panus sp., Coriulus sp., Chrysosporium
sp., Aspergillus sp., Mucor sp., sont connus pour leur capacit dgrader les phnols et leurs
drivs, y compris le 2,4-dichlorophnol (56, 58).

En arobiose, les chlorophnols sont d'abord convertis en leurs chlorocatchols respectifs. Ces
derniers sont considrs comme mtabolites cls dans la dgradation de plusieurs composs
aromatiques (86). Aprs la transformation des chlorophnols, le clivage du cycle aromatique peut
avoir lieu. Il existe deux voies de clivage : la voie mta (appele aussi clivage extradiol du cycle
aromatique) et la voie ortho (appele aussi clivage intradiol du cycle aromatique) (73).

Les composs aromatiques simples tels que le phnol et le benzne sont typiquement dgrads
selon la voie mta tandis que les chlorophnols sont gnralement dgrads selon la voie ortho
(86, 87). Deux types dortho clivage existent : lortho clivage type 1 et lortho clivage type 2
modifi, spcifique la dgradation des composs aromatiques chlors via le chlorocatchol (73,
88).

La minralisation du 2,4-DCP (figure4) ncessite sa conversion par une 2,4-dichlorophnol

hydroxylase en 3,5-dichlorocatchol. Ce dernier est squentiellement converti en 3-oxoadipate
par les actions de quatre enzymes : chlorocatchol 1,2-dioxygenase, chloromuconate
cycloisomerase, dienelactone hydrolase, maleylacetate rductase. Le 3-oxoadipate est encore
dirig la voie 3-oxoadipate, menant la production du succinate et de l'actyle-CoA, qui peut
tre incorpore aux voies mtaboliques et/ou cataboliques fondamentales (89, 90, 91).

Biodgradation anarobie

Plusieurs composs aromatiques chlors rsistent au mtabolisme microbien arobie car les
atomes du chlore bloquent lattaque de loxygnase. Mais, ces composs halogns peuvent tre
dshalogns par des microorganismes anarobie (92, 93).

- 32 -
En anarobiose, la biotransformation de la plupart des composs aromatiques halogns est
initie par une dshalognation rductive. Llimination de substituant halogn savre
ncessaire avant le clivage du cycle aromatique (94, 73). Ainsi, la biodgradation anarobie des
chlorophnols se fait par dchloration rductive au cours de laquelle latome de chlore est
remplac par un hydrogne. Les microorganismes anarobies utilisent les chlorophnols comme
accepteurs terminaux dlectrons, cest pour quoi la dchloration rductive est inhibe par la
prsence dautres accepteurs dlectrons comme le sulfate, le nitrate, loxygne et le dioxyde de
carbone (95).

Dans le cas du 2,4-DCP Les produits majeurs de sa dgradation anarobie sont le 4-chlorophnol
et le phnol. Mais une biodgradation plus avance peut engendrer la production de mthane et
de dioxyde de carbone (50, 96).

- 33 -
Matriel et mthodes

- 34 -
1. Prlvement de linoculum

Linoculum est constitu du microbiote total des eaux uses de la ville de CONSTANTINE.
Deux prlvements sont effectus laide dun prleveur automatique, lun partir du canal
dentre de la station dpuration dIBN ZIAD qui collecte lensemble des eaux uses de la ville,
et lautre partir du canal de sortie travers lequel les eaux uses sont vacues aprs leurs
traitements.

Le premier chantillon est prlev le matin 8h 15 min partir du canal dentre, ses
proprits physico-chimiques sont les suivantes : pH : 7,84, T : 22,2C, Dbit : 225L/s,
Conductivit : 1655s/cm, MES : 157 mg/L, DBO5 : 140 mg/L, DCO : 320 mg/L.
.
Le deuxime chantillon est prlev 8h30 min partir du canal de sortie, il a les
proprits physico-chimiques suivantes : pH : 7,55, T : 21,3C, Dbit : 225L/s, Conductivit :
1623 s/cm, MES : 8mg/L, DBO5 : 7mg/L, DCO : 11mg/L.

Les deux chantillons sont prlevs dans des flacons en verre striles, il sont ensuite
transports dans une glacire maintenue 4C jusquau laboratoire (97), o il sont analyss et
utiliss pour inoculer les fermenteurs ds leur arrive.

2. choix de xnobiotique

La molcule retenue pour cette tude est le 2,4-dichlorophenol, elle est reconnue par sa
toxicit et sa persistance dans les milieux. La molcule utilise comme substrat dtude a un
degr de puret de 99 %.

3. Milieu de culture

Le milieu de culture est un milieu minimum o le 2,4-dichlorophenol est la seule source de

carbone et dnergie. Sa composition est la suivante : (NH4)2, So4 (0,04g/l), K2HPO4 (0,4g/l),
KH2PO4 (0,2g/l), NaCl (0,1g/l), MgSo4 (0,1g/l), MnSo4, H2o (0,01g/l), Fe2(So4)3,H2o (0,01g/l),
Na2Moo4, 2H2o (0,01g/l). Le pH est ajust 7,2 par lajout de quelques gouttes de NaOH (
30%) (98, 99, 100). Le milieu minimum est ensuite strilis par autoclavage 120 C pendant 20
minutes.

- 35 -
Figure 5. Dispositif du travail

- 36 -
4. technique de production de gaz in vitro

Les cultures sont ralises dans des fermenteurs miniaturiss formant un systme clos et
permettant de piger le gaz ventuellement produit suite la minralisation du substrat. Il sagit
de flacons en verre de 500 ml de capacit, ferms par des bouchons en polyester dans lesquels
des aiguilles de seringues striles sont introduites pour capturer dans ces dernires le gaz
fermentaire ventuellement produit. (figure5).

5. Prparation des diffrentes concentrations de la molcule

Diffrentes concentrations de 2,4-DCP sont prpares, le jour de lincubation, dans des

conditions dasepsie de microbiologie et ajoutes au milieu minimum strile dans les flacons de
fermentation afin davoir dans ces derniers des concentrations de 50, 100, 150, 200 mg/l du 2,4-
DCP.
Les fermenteurs sont standardiss aux mmes volumes dair et de milieu minimum : 1/3(V/V).

6. Inoculation

Les deux chantillons sont utiliss, ds leur arrive, pour inoculer les fermenteurs contenant
les diffrentes concentrations du 2,4-DCP, Trois rptition sont ralises pour chaque
concentration et pour chaque chantillon.

7. Tmoins et contrle

Deux tmoins sont raliss dans les mmes conditions dexprience :

Un tmoin strile o le 2,4-DCP est introduit sans le microbiote des eaux, pour la vrification de
la prsence dune ventuelle dgradation abiotique.

Un tmoin (blanc) est inocul par le microbiote des eaux uses en absence du 2,4-DCP

- 37 -
Figure 6 : Raction au 4-aminoantipyrine.

- 38 -
8. Incubation, dosages et lectures

Les flacons sont incubs lobscurit une temprature de 30C en mode statique (sans
agitation). La mesure du pH et le dosage de la molcule sont raliss au cours des premires
heures (4h et 8h) et des premiers jours (1er, 2me, 3me, 4me et 7me) ainsi quaprs 14 et 28 jours
dincubation. Le dosage des ions chlorure libres est effectu t = 0, 7, 14, et 28 jours (101). Le
dplacement ventuel des pistons est surveill durant toute la priode dincubation pour mesurer
les gaz ventuellement produits dans les fermenteurs

8.1. Suivi de la concentration de la molcule par dosage colorimtrique

Les concentrations du 2,4-DCP sont mesures par la mthode colorimtrique de la

4-aminoantipyrine dveloppe par Emerson en 1943 (102).

8.1.1 Principe

Cette mthode est dusage courant pour la dtermination colorimtrique des phnols dans
divers matriaux en raison de sa sensibilit, sa rapidit, labsence dtapes laborieuses et son cot
peu lev (103). Les composs phnoliques, y compris le 2,4-DCP, ragissent avec le 4-AAP en
prsence de potassium hexacyanoferrate (K3Fe (CN)6) comme oxydant dans des conditions
alcalines et donnent un complexe color en rose (figure 6) prsentant un maximum dabsorbance
510 nm (104, 105).

8.1.2. Protocole de dosage

-prlvement de 10ml du contenu de fermenteurs laide de seringues striles.

- Centrifugation 4C : 5000 tours/min pendant 10min.
- Rcupration du surnageant.
- Addition de 250 l de solution dhydroxyle dammonium (NH4OH) prpare 0,5N.
- Ajustement du pH 7,9 ( 0,1) avec 200 l du tampon phosphate (KH2PO4 / K2HPO4, pH=
6,80).
- Addition de 100 l de la solution de 4-aminoantipyrine prpare 2%.
- Addition de 100 l de la solution de potassium hexacyanoferrate (K3Fe (CN)6) prpare 8%.
- Une agitation est ncessaire aprs lajout de chaque solution.

- 39 -
-Incubation temprature ambiante pendant 15min.
- Lecture de labsorbance la longueur donde = 510 nm.

8.2. Dosage du chlore libre

Le chlore inorganique ventuellement libr est mesur par une mthode turbidimtrique
de la manire suivante : aprs centrifugation de lchantillon prlev, 1 ml de HNO3 (2mol/l) et
0.5 ml de solution de nitrate dargent prpare (annexe1) son ajouts 10 ml du surnageant de
lchantillon doser. Aprs agitation et incubation pendant 5 10 minutes lobscurit, les
densits optiques sont lues 365 nm (106)

Les concentrations sont calcules partir des courbes talons pr-tablies.

9. Analyse statistique

Une analyse statistique des rsultats de la cintique de biodgradation du 2,4-

dichlorophnol est ralise par lANOVA pour vrifier leffet de linoculum et de la dose.

Le test de Student est galement appliqu pour la comparaison de la dgradation du 2,4-

dichlorophnol par les deux processus : biologique et non biologique.
Ces analyses sont effectues laide dun logiciel informatique STATSTICA/ version 5 (1997).

- 40 -
Rsultats et discussion

- 41 -
1. Qualit des chantillons utiliss pour linoculation

La quantification de la charge polluante biodgradable ou non de linoculum est dtermine

par sa DCO et de sa DBO5. Le rapport DCO/DBO5 est souvent utilis comme index de
biodgradabilit des eaux, il donne une premire estimation de la biodgradabilit de la matire
organique de nos effluents. La valeur du rapport DCO/DBO5, situe entre 2 et 3 pour le premier
chantillon prlev partir du canal dentre, indique quil est moyennement charg en matire
organique biodgradable. Le deuxime chantillon, prlev partir du canal de sortie, a un
rapport DCO/DBO5 infrieur 2, ce qui indique que leffluent cette fois ci, est peu charg en
matire organique, certainement par effet du traitement subi (107).

La vrification de la prsence intrinsque de phnols dans nos chantillons dinoculation se

rvle positive, avec des concentrations initiales de : 3,72mg/L et 1,23mg/L, respectivement pour
le premier et le second chantillon des eaux uses prleves. Ces rsultats montrent donc que les
eaux uses contiennent dj des phnols, dont probablement le 2,4-dichlorophnol. Sachant que
la technique de dosage utilise ne permet pas de diffrencier les diffrents types de phnols,
puisque le complexe form entre le 4-AAP et les composes phnoliques absorbe la mme
longueur donde (510 nm).

La vrification de la prsence ventuelle des ions chlorure libres est galement ralise, elle se
rvle aussi positive, avec des concentrations initiales de : 6,7mg/L et 6,38mg/L, respectivement
pour le premier et le second chantillon.

Nos chantillons sont utiliss tels quils sont, c'est--dire sans acclimatation ni enrichissement de
leur microbiote, pour tudier une biodgradation refltant celle du milieu naturel pris
globalement et dans ses conditions naturelles dactivit ;

2. Cintique de biodgradation du 2,4-dichlorophnol

2. 1. Dbut de la biodgradation

La biodgradation des diffrentes concentrations du 2,4-DCP par le microbiote total des

eaux uses commence aprs une phase de latence (Figure 7 10), cette dernire correspond

- 42 -
Figure 7. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (50mg/l) dans leffluent
dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile

Figure 8. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (100mg/l) dans leffluent

dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile

- 43 -
une priode dadaptation du microbiote au nouveau substrat, ce qui est une situation commune.
La dure de cette priode est variable en fonction des espces et des concentrations de compos
phnolique (56). Plusieurs auteurs constatent que des concentrations leves de 2,4-DCP
prolongent la phase de latence (108, 109). Cette phase de latence semble ncessaire pour la
synthse des enzymes requises pour la biodgradation du 2,4-DCP.

Le catabolisme arobie des chlorophnols et des phnols en gnral est toujours initi par
leur hydroxylation (110), lenzyme qui intervient dans cette premire tape de biodgradation est
la phnol hydroxylase. Cette dernire est une enzyme intracellulaire dune spcificit largie, elle
peut tre donc induite par dautres composs apparents au phnol (111).

Dans notre tude la phase de latence est de 24 heures pour le microbiote de leffluent de sortie,
pour lensemble des concentrations du milieu en substrat. Elle est presque la mme que celle
constate par certains auteurs et qui atteint les 27 heures pour des boues actives cultives une
concentration de 100 mg/l du 2,4-DCP (112) et relativement courte par rapport dautres auteurs
travaillant avec des souches pures, elle atteint dans ce cas les 5 jours pour la biodgradation de 2-
chlorophnol par une souche de Rhodococcus erythropolis M1 (113). Cette diffrence indique
une synergie entre diffrentes populations du microbiote aquatique et probablement une
mtabolisation complexe. Cependant, la phase de latence pour leffluent dentre est un peu plus
prolonge et atteint les 48 heures, ce prolongement pourrait tre expliqu par la diffrence de la
quantit de matires en suspension dans leffluent dentre (157mg/l) et de sortie (8mg/l), ainsi
que la diffrence entre les DBO5 des deux effluents, qui sont 140 mg/l et 7 mg/l respectivement
pour leffluent dentre et de sortie. C'est--dire que la microflore de leffluent dentre a
commenc par la dgradation de la MES biodgradable plus aisment mtabolisable et abondante
dans lchantillon, avant de synthtiser les enzymes ncessaires la biodgradation de substrats
moins accessibles, tels que le 2,4-DCP.

Certains auteurs, pour rduire la phase de latence, procdent une activation des
microorganismes par aration pendant 24 heures (114), donc en plus de la DBO5 et de la quantit
de MES, la diffrence de temps entre les deux phases de latence peut tre aussi explique par
lactivation du microbiote de leffluent de sortie du fait de son passage travers le bassin
daration de la STEP, cette phase enrichissant considrablement sa teneur en oxygne dissous.
En plus, il faut tenir compte de ladaptation et de la capacit du microbiote

- 44 -
Figure 9. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (150mg/l) dans leffluent
dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile

Figure 10. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (200mg/l) dans leffluent

dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile.

- 45 -
de leffluent de sortie dgrader des composs phnoliques au niveau de la STEP, chose qui est
confirme par la diminution de concentration des composs phnoliques dans leffluent de sortie
par rapport celle apporte par leffluent dentre.

Aprs les phases de latence, la biodgradation du 2,4-DCP commence selon un profil

relativement rapide durant les premires 96 heures pour lensemble des concentrations du
substrat et pour les deux effluents, la vitesse moyenne de la biodgradation des diffrentes
concentrations du 2,4-DCP est de 0,502 mg/h pour leffluent dentre et de 0,572 mg/h pour
leffluent de sortie. Aprs ces 96 heures dincubation, les pourcentages de dgradation sont :
37,6%, 31,18%, 28,9% et 25,95% respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200
mg/l de la molcule. Les pourcentages de la biodgradation de la molcule par le microbiote de
leffluent de sortie sont : 41,94%, 30,80%, 29,36%et 23,2%, respectivement pour les
concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP.

Aprs cette priode qui semble correspondre la phase exponentielle de la croissance des
microorganismes, ce qui est confirm par lapparition dun trouble microbien significatif dans
tous les fermenteurs, le rythme de la biodgradation commence se ralentir et la vitesse de
biodgradation devient de plus en plus faible. Les vitesse moyennes de la biodgradation des
diffrentes concentrations de la molcule sont de : 0,108 mg/h et 0,085 mg/h, entre t = 96 heures
et t = 7 jours, et durant la deuxime semaine dincubation sont de : 0,04 mg/h pour leffluent
dentre et 0 ,03 mg/h pour leffluent de sortie.

Selon la littrature scientifique, les concentrations leves de chlorophnols inhibent toujours la

croissance microbienne, en agissant ngativement sur les oxygnases. Certains auteurs constatent
une inhibition de la croissance des concentrations de 50mg/l, 30mg/l et voire mme de 20mg/l
(115, 116). Dans notre tude le taux de la biodgradation constat, durant la priode dincubation
et ds les 96 Premire heures, indique que la croissance microbienne nest pas inhibe malgr
lutilisation de concentrations beaucoup plus leves. Cela dnote la rsistance du microbiote de
nos chantillons et surtout sa grande efficacit.

2. 2.La fin de la cintique de biodgradation

Vers la fin de la cintique de biodgradation, la vitesse de biodgradation tend sannuler,
elle est en moyenne de 0,012 mg/h pour leffluent dentre et 0,01 mg/h pour leffluent de sortie,
entre le 14me et le 28me jour.

- 46 -
 Couleur initiale

Couleur jaune

Figure 11. Le changement de la couleur du milieu en jaune

- 47 -
 Paralllement, lapparition dune couleur jaune, qui a t rapporte par certains auteurs
suite la dgradation des composs chloroaromatiques (117, 118), est note dans tous les
fermenteurs inoculs (figure 11). Cette couleur est probablement le rsultat dune polymrisation
par auto-oxydation du 3-chlorocatchol qui est un substrat intermdiaire du mta-clivage du 2,4-
DCP par lenzyme mta-pyrocatchase. Une fois le 3-chlorocatchol form, il saccumule dans le
milieu de culture et peut gnrer son tour un halognure dacyle qui est considr comme un
compos trs toxique qui ragit avec lenzyme en provoquant une inactivation suicide (119).
Dautre part, aucun changement de couleur nest constat dans le tmoin strile, ce qui indique
que la coloration du milieu en jaune est due a une activit microbienne, donc enzymatique, et
cest ce qui nous confirme notre interprtation prcdente de nos rsultats en ce domaine.

A la fin de lincubation (t = 28 jours), les diffrentes concentrations initiales du 2,4-DCP ne sont

pas totalement dgrades, des pourcentages de 36,2 %, 43,7 %, 57,82 % et 65,06 %,
respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP, persistent dans
les fermenteurs inoculs par leffluent dentre. Cependant, dans les fermenteurs inoculs par
leffluent de sortie, on note la Persistance de 42,52 %, 49,48 %, 61,82 % et 66,36 % de la
molcule pour les mmes concentrations initiales respectives.

Ce ralentissement remarquable de la biodgradation ne rsulte pas de lvolution dfavorable

des paramtres physico-chimiques du milieu de culture, car la temprature reste constante et le
pH varie lgrement et reste toujours dans la zone de neutralit. Ce ralentissement pourrait plutt
sexpliquer par la possibilit de production mtabolique de drives plus toxiques que la molcule
elle mme. En plus, il y a lieu de considrer un autre paramtre important de culture :
lpuisement de loxygne dissous dans le milieu, cause fort probable de larrt de la croissance
microbienne et de la biodgradation du 2,4-DCP.

En milieu naturel, larrt de la biodgradation constat dans notre tude ne se produit

probablement pas, car nos fermenteurs sont des milieux clos qui permettent laccumulation de
drivs mtaboliques inhibiteurs, alors que les eaux uses ou les autres milieu aquatiques sont
des milieux ouverts qui permettent une dilution permanente et importante de tous les produits
mtaboliques, dont les drivs inhibiteurs et/ou toxiques.

- 48 -
2.3. Effet de linoculum sur la biodgradation

La biodgradation du substrat par les deux inoculums ne suit pas le mme profil, pour
lensemble des diffrentes concentrations. Ds les premires heures dincubation, on note une
diffrence dans la dure des phases de latence. Aprs ces phases initiales, la cintique de
biodgradation suit un rythme diffrent pour chaque inoculum (figure 7 10). Lanalyse
statistique de la variance (annexe 4) montre quil existe une diffrence significative (p<0,05)
dans la biodgradation entre les deux effluents durant toute la priode dincubation.

Les pourcentages de biodgradation du 2,4-DCP la fin de ltude sont de : 63,8 %, 56,3 %,

42,18 % et 34,94 %, respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-
DCP, pour leffluent dentre. Ils sont de 57,48 %, 50,52 %, 38,18 % et 33,64 %, pour les mmes
concentrations initiales respectives biodgrades par leffluent de sortie. Cette diffrence peut
dtre explique par la diffrence da la charge microbienne et organique contenue dans les deux
effluents. Selon certains auteurs, une grande quantit de biomasse peut liminer des
concentrations leves de polluants car la concentration du polluant par cellule est alors faible
(120).

2.4. Effet de la concentration de la molcule sur la biodgradation

La concentration de la molcule semble avoir un effet sur sa biodgradation selon certains

auteurs (109). En fait, dans notre tude, plus la concentration de la molcule est leve plus le
taux de biodgradation de la mme concentration par le microbiote des deux effluents se
rapproche (figure 7 10). C'est--dire que la diffrence entre le pourcentage de biodgradation
diminue avec laugmentation de la concentration du 2,4-DCP, il est de 6,32 %, 5,68 %, 4 % et
1,3 %, respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP. Dautre
part, le pourcentage de biodgradation des diffrentes concentrations initiales du substrat par le
mme effluent nest pas le mme : il est inversement proportionnel la concentration de la
molcule.

Cela est confirm par lanalyse statistique de la variance (annexe 5) qui montre que leffet de la
dose est significatif aussi (p<0,05) durant toute la priode dincubation.

- 49 -
Figure 12. Libration du chlore 50mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie

Figure 13. Libration du chlore 100mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie

- 50 -
3. Tmoin et contrle

Dans les fermenteurs non inoculs et striliss, une perte de 31,76 %, 31,87 %, 31,26 % et
31,33%, respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP, est
enregistre aprs les 28 jours dincubation. Cette perte abiotique est note ds les premiers
intervalles de dosage et suit un profil graduel (figure 7 10).

Les chlorophnols, y compris le 2,4-DCP, peuvent tre dgrads par plusieurs processus
abiotique, tels que : loxydation, lhydrolyse et la photolyse. Dans nos conditions, la photolyse
est certainement limite car nos chantillons ne sont exposs la lumire du laboratoire que
durant leurs phases de manipulations et de mesures. Quant lhydrolyse et loxydation leur
effet pourrait aussi tre limit dans nos conditions. En effet, la liaison covalente dun substituant
sur le noyau aromatique est trs rsistante lhydrolyse cause de la densit de charge ngative
de ce dernier. De plus, lhydrolyse et loxydation des chlorophnols engendrent une coupure de
la liaison C-Cl, donc une libration de chlore dans le milieu. Or aucune libration de chlore nest
note dans les tmoins striles durant toute la priode dincubation (figure12 15). Dautre part
lhydrolyse semble ne pas avoir un effet significatif sur la dgradation du 2,4-DCP, cela pourrait
rsulter du manque de groupements fonctionnels hydrolysables (84). De ce fait, la
probabilit de leffet de loxydation et de lhydrolyse est probablement
limite sinon limine, alors que dautres processus de dgradation abiotique
ne sont pas exclure.

Le test de student effectu en fin dincubation, entre la dgradation abiotique et la biodgradation

la plus faible (mene par le microbiote de leffluent de sortie) montre que la diffrence entre les
deux processus de dgradation reste significative (p<0,05) (annexe 6).

4. Libration du chlore

Le dosage de chlore libre dans le milieu donne une indication sur le niveau de la
biodgradation de la molcule. La minralisation du 2,4-DCP est signale par une libration
stoechiomtrique de chlore, du CO2 et de leau dans le milieu

- 51 -
Figure 14. Libration du chlore 150mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie

Figure 15. Libration du chlore 200mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie.

- 52 -
 Les figures 12, 13, 14 et 15 rendent compte des concentrations dions chlore librs durant
la priode dincubation. A la fin de cette dernire, seulement 10,07 %, 8,23 %, 6,95 % et 5,12 %,
du chlore total sont librs respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du
2,4-DCP, pour leffluent dentre. Cependant, des pourcentages de 8,65 %, 6,67 %, 6,13 % et
4,28 %, respectivement pour les mmes concentrations, sont enregistrs pour leffluent de sortie.
La libration non stoechiomtrique des ions chlorure au cours de la biodgradation de la
molcule prouve sa dgradation incomplte. Au fait, les rsultats obtenus dmontrent que la
molcule nest pas minralise mais probablement seulement biotransforme en mtabolites
intermdiaires chlors ou non, ultrieurement polymriss et visualiss par lapparition dans le
milieu dune coloration jaune caractristique du phnomne. Aucune libration de chlore nest
enregistre pour les tmoins striles de la molcule, ce qui limine, l aussi, toute minralisation
par un mcanisme abiotique. La libration de chlore est donc le rsultat de laction des
microorganismes sur notre molcule.

5. Variation du pH du milieu

La biodgradation est accompagne par une lgre variation du pH. La quantit des ions
chlorure librs au cours par la biodgradation est faible et par consquent la formation dacide
chlorhydrique (HCl) dans le milieu lest aussi, ce qui explique la faible baisse du pH dans les
fermenteurs inoculs. Cette volution est pratiquement nulle dans le tmoin strile (annexe 7).

6. Production de gaz in vitro

Quel que soit lchantillon considr, aucune production de gaz nest enregistre sur toute
la priode dincubation par la technique de rcupration des gaz en seringues, pour toutes les
concentrations. Ce rsultat corrobore nos conclusions prcdentes et confirme pleinement
labsence de toute minralisation du substrat dans tous nos essais.

- 53 -
Discussion gnrale
et conclusion

- 54 -
 Notre travail avait pour objet ltude de la biodgradation de diffrentes concentrations de
2,4-DCP par le microbiote total des eaux uses de la ville de CONSTANTINE, recueilli en
amont et en aval de la station dpuration dIbn Ziad, au niveau de son canal dentre et de son
canal de sortie. Les chantillons deaux uses sont utiliss pour inoculer un milieu minimum
adquat o le 2,4-DCP est la seule source de carbone et dnergie des concentrations initiales
de 50, 100, 150 et 200 mg/L. Les cultures, de type batch, sont menes en arobiose dans des
fermenteurs miniaturiss. Ils sont incubs 30C, en mode statique, pendant une priode
dincubation de 28 jours. Ltude intgre le suivi de divers paramtres de culture dont les
mesures sont cintiques et concernent la fois lvaluation de la dgradation biotique et de la
biodgradation du substrat.

Les rsultats globaux montrent que le 2,4-DCP est dgrad aussi bien par le microbiote
dentre que par le microbiote de sortie de la station dIbn Ziad. Les mesures cintiques de la
biodgradation du 2,4-DCP indiquent une diffrence dans le rythme et le pourcentage de sa
mtabolisation, constate ds la phase de latence et continuelle jusqu la fin de lincubation,
mais diffremment pour le microbiote des deux effluents, comme le confirme la variance o
leffet inoculum se rvle significatif (p<0,05). Cette diffrence pourrait sexpliquer de diverses
manires non tablies, dont une diffrence qualitative de charge microbienne des deux types
deffluents qui ont une nature diffrencie par le traitement.

La majeure partie de la biodgradation se ralise au cours des 96 premires heures

dincubation. Au-del, le processus de biodgradation dclre avec le temps jusqu atteindre
des vitesses remarquablement faibles jusqu presque sannuler. Cette dclration est
probablement due leffet toxique quexercent les sous produits gnrs par le mtabolisme de
biodgradation du substrat. Ces mtabolites saccumulent dans le milieu et produisent des drivs
qui induisent le changement de la couleur du milieu de culture en jaune, caractristique du
phnomne. Leffet limitant engendr par lpuisement de loxygne dans les fermenteurs peut
tre aussi pris comme explication fortement probable. La concentration du 2,4-DCP semble avoir
un effet sur sa biodgradation car celle-ci est inversement proportionnelle la concentration de la
molcule. Leffet dose est clairement confirm par lanalyse de la variance (p<0,05).

A la fin de lincubation (t = 28 jours), et toutes les concentrations initiales du 2,4-DCP, le

substrat nest pas totalement dgrad, comme le montrent les pourcentages de dgradation
mesurs : 36,2 %, 43,7 %, 57,82 % et 65,06 %, respectivement pour les concentrations de 50,

- 55 -
100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP. Des rsidus significatifs persistent donc dans les fermenteurs
inoculs par leffluent dentre. Alors que dans les fermenteurs inoculs par leffluent de sortie,
on note la persistance de 42,52 %, 58,1 %, 61,82 % et 66,36 % du substrat pour les mmes
concentrations initiales respectives.

Le dosage du chlore libr au cours de la biodgradation donne aussi une indication sur le
niveau de la biodgradation du substrat. La minralisation du 2,4-dichlorophnol est signale par
une libration stoechiomtrique de chlore, de CO2 et deau dans le milieu. Dans notre tude la
libration non stoechiomtrique des ions chlorure au cours de la biodgradation du substrat
prouve sa dgradation incomplte. En fait, les rsultats obtenus dmontrent que la molcule nest
pas minralise mais probablement biotransformes en drivs mtaboliques intermdiaires,
chlors ou non.

Aucune production de gaz nest enregistre sur toute la priode dincubation par la
technique de rcupration de gaz en seringues, quel que soit lchantillon et la concentration de
substrat considrs, pour toutes les concentrations et pour les deux effluents. Ce qui confirme
clairement quaucune minralisation du substrat ne se produit et corrobore le profil de libration
du chlore.

Une perte abiotique de substrat est releve dans les fermenteurs striles et non inoculs,
aprs les 28 jours dincubation. Elle est relativement identique, variant entre de 31,26 % et 31,87
%, quelle que soit la concentration du milieu en 2,4-DCP. Cette perte abiotique est note ds les
premiers intervalles de dosage et suit un profil graduel. La diffrence entre les deux processus de
dgradation (biotique et abiotique) est significative (p<0,05).

Notre travail montre le rle prpondrant que jouent les microorganismes dans la
dtoxification des milieux naturels pollus par le 2,4-DCP qui est aussi sensible aux processus
physico-chimique de dgradation abiotique. En perspective, on peut prvoir comme tudes
complmentaires notre travail :

Lidentification des mtabolites intermdiaires et terminaux de la biodgradation du

substrat.

- 56 -
 La ralisation de cultures continues dans des fermenteurs qui assurent un
approvisionnement continu en oxygne.

Lidentification des espces microbiennes responsables de cette biodgradation.

- 57 -
 Rfrences
bibliographiques

- 58 -
1. Haggblom M. M. & Young L. Y., (1990). Chlorophenol degradation coupled to sulfate
reduction. Applied and Environmental Microbioligy, 56 : 3255-3260.

2. Monferran M., Echenique J. R., & Wunderlin D., A., (2005). Degradation of
chlorobenzenes by a strain of Acidovorax avenae isolated from a pollued aquifer. Chemosphere,
61 : 98-106.

3. Vaillant J.R., (1974). Perfectionnement et nouveauts pour lpuration des eaux rsiduaires.
Edition Eyrolles, Paris: 21-24, 236-237.

4. Baumont S., Camard J.P., Lefranc A. & Francon A., (2002). Rutilisation des eaux uses
pures : risques sanitaire et faisabilit en Ile-de France, Paris: 12-13, 27-29

5. Toze S., (1999). PCR and the detection of microbial pathogens in water and wastewaters.
Water Resources. 33 : 35453556.

6. Pelmont J., (2005). Biodgradations et mtabolismes : Les bactries pour les technologies de
lenvironnement. EDP Sciences Editions, 10, 11.

7. Campos C., (2008). New perspectives on microbiological water control for wastewater reuse.
Dsalination, 218 : 3442.

8. Gennaccaro A.L., McLaughlin M.R., Quintero-Betancourt W., Huffman D.E. & Rose
J.B., (2003). Infectious Cryptosporidium parvum oocysts in final reclaimed effluent. Applied
and Environmental Microbiology, 69: 49834984.

9. Toze S., (2006). Reuse of effluent water-benefits and risks, Agricultural Water Management,
80: 147159.

10. Aulicino E. A., Mastrantonio A., Orsini E, Bellucci C., Muscillo M. & Larosa G., (1996).
Enteric viruses in a wastewater treatment plant in Rome. Water, Air, and Soil Pollution, 91: 327-
334.

11. F.A.O., (2003). L'irrigation avec des eaux uses traites : Manuel d'utilisation, 73p.

- 59 -
12. Bousseboua H., (2005). Elments de microbiologie. 2me dition, Campus-Club, Constantine,
Algrie, 304p.

13. Metiche M., (2004). Environnement : phnomnes de pollution et techniques de protection.

Centre Universitaire de Bechar, 48p.

14. Doelsch E., Saint H., Virginie M. & Kerchove V., (2006). Sources of very high heavy
metal content in soils of volcanic island (La Runion). Journal of Geochemical Exploration, 88:
194-197

15. Azimi S., Rocher V., Muller M., Moilleron R. & Thevenot D.R., (2005). Sources,
distribution and variability of hydrocarbons and metals in atmospheric deposition in an urban
area. Science of the Total Environment, 337: 223-239.

16. Buzier R., Tusseau-Vuillemin M.H. & Mouchel J.M., (2006). Evaluation of DGT as a
metal speciation tool in wastewater. Science of the Total Environment, 358: 277 285.

17. Kunz A. & Jardim W.F., (2000). Complexation and adsorption of copper in raw sewage
Water Resources. 34: 20612068.

18. Vincent M., (2003). Aquaculture environnement, institut franais de lenvironnement, 216-
220.

19. Perry J.J., Staley J.T. & lory S., (2004). Microbiologie. Edition Dunod (France), 848.

20. Boucheseiche C., Cremille E., Peltet T. & Projer K., (2002). Pollution toxique et
cotoxicologique. Notion de base. Guide technique N7. Agence de leau Rhne-mditerrane et
Corse. Montpellier (France).

21. Calvet R., (2003). Le sol. Proprits et fonctions, phnomnes physiques et chimiques.
Applications agronomiques et environnementales. Tome 2. dition France agricole- Dunod, 381-
386.

- 60 -
22. Labrecque M. H., (2003). Etude de la capacit de deux souches de levures dgrader le
xylne. Mmoire magistre. Universit Laval (Qubec).

23. Bending G.D. & Rodriguez-Cruz M.S., (2007). Microbial aspects of the interaction
between soil depth and biodegradation of the herbicide isoproturon. Chemospher,. 66: 664-671.

24. Alexander M. H., (1973). No biodegradable and other recalcitrant molecules. Biotechnology
and Bioengineering, 15:611-615.

25. Aislabie J. & Loyd-jones G., (1995). A review of bacterial degradation of pesticide.
Australian Journal of Soil Research, 33: 925-942.

26. Martinelli I., (1999). Infiltration des eaux de ruissellement pluvial et transfert de polluants
associs dans le sol urbain. Thse de doctorat. INSA de Lyon (France).

27. Bocard C., (2006). Mares noires et sol pollus par des hydrocarbures. Enjeux
environnementaux et traitement des pollutions. 1re dition TECHNIP, 94.

28. Nex F., (2004). Modlisation numrique de la biodgradation des composs organochlors
dans les aquifres fondes sur des exprimentation in situ. Le cas des chlorothnes. Thse de
doctorat. Universit Louis Pasteur, Strasbourg (France).

29. Vandecasteele J. P., (2005). Microbiologie ptrolire. Implications environnementales -

Application industrielle. 1re dition TECHNIP, 441.

30. Han Y. L., Kuo M. C. T., Tseng I. C. & Lu C. J., (2007). Semi continuous microcosm
study of aerobic cometabolism of trichloroethylene using toluene. Journal of hazardous
materials, 148: 583-591.

31. Clavet R., Barriuso E., Bedos C., Benoit P., Charnay M. P. & Coquet Y. (2005).
Consquences agronomiques et environnementales : dgradation des pesticides dans le sol.
Edition France Agricole, 255-299.

- 61 -
32. Belgiorno V., Rizzo L., Fatta D., Della Rocca C., Lofranoa G., Nikolaou A., Naddeo V.
& Meric S., (2007). Review on endocrine disruptingemerging compounds in urban wastewater:
occurrence and removal by photocatalysis and ultrasonic irradiation for wastewater reuse.
Desalination, 215:166176.

33. Kimura K., Toshima S., Amy G., Watanabe Y., (2004). Rejection of neutral endocrine
disrupting compounds (EDCs) and pharmaceutical active compounds (PhACs) by R.O.M.
Journal of Membrane Science, 245: 7178.

34. Vincent M., (2003). Aquaculture Environnement, institut franais de lenvironnement: 216-
220.

35. BRAME V., (1986). Les procds physico-chimiques dpuration des eaux uses urbaine.
Srie de documents techniques A.F.E.E. (France).

36. Faby J.A. & Brissaud F., (1997). Lutilisation des eaux uses pures en irrigation. Office
International de lEau, 76.

37. Asano T., (1998). Wastewater reclamation and reuse. Water quality management library,
911-923.

38. Jaroz J., (1985). Le traitement des boues des stations dpuration, centre de formation et de
documentation sur lenvironnement industriel, Paris 06- France.

39. Lazarova V., Gaid A., Rodriguez-Gonzales J. & Ansola J., (2003). Lintrt de la
rutilisation des eaux uses : analyses dexemples mondiaux., Sciences et Mthodes, 9: 64-85.

40. Hamoda M.F., (2004). Water strategies and potential of water reuse in the south
Mediterranean countries. Desalination, 165 : 31-41.

41. Lazarova V. & Brissaud F., (2007). Intrt, bnfices et contraintes de la rutilisation des
eaux uses en France. L'eau, l'industrie, les nuisances N 299.

- 62 -
42. Jimenez B. & Asano T., (2008). Water reuse - An international survey of current practice,
issues and needs, International Water Association (IWA) Publishing (London).

43. Puhatica J.A & Jarvine K., (1992). Aerobic fluidized-bed treatment of polychlorinated
phenolic wood preservative constituents. Water Resources, 26: 765-770.

44. International Uniform chemical Information Database (IUCLID), (2002). 2,4-

Dichlorophenol sodium salt, data set. The Dow Chemical Company.

45. Dow AgroSciences, (1999). 2,4-dichlorophenol-Safe handing guide. Dow AgroSciences

limited liability company (LLC), USA.

46. Hoak R.D., (1957). The cause of tastes and odors in drinking water. Water and Sewage
Works, 104: 243-247.

47. Ruth J.H., (1986). Odor thresholds and irritation levels of several chemical substances.
American Industrial Hygiene Association journal, 47: 141-151.

48. Hempfling R., Doetsch P., Stubenrauch S., Mahr A., Bauer D., Koschmieder H.J. &
Grnhoff D., (1997). USM-System zur Atlastenbeurteilung, instrumente fr die
pfadbergreifende Abschtzung und Beurteilung von atlasverdchtigen Flchen. Institut
Fresenius. Erlangen & Focon-Ingenieurgesellschaft, Aachen (Allemagne).

49. Merck, (1996). The Merk Index, an encyclopedia of chemicals, Drugs and Biologicals.12th
edition. Ralway, N.J., merck and Co., Inc (USA).

50. Gujer W. & Zehnder A.J.b., (1983). Conversion process in anaerobic digestion. Water
Science and Technology, 15: 127-167.

51. ULLMANNS., (1991). Encyclopedia of industrial chemistry. 5th edition. VCH

Verlagsgesellschaft (Germany), 415-419.

52. United States Environmental protection Agency (US EPA), (1996). Soil Screening
Guidance: Technical Background Document. Washington (USA).

- 63 -
53. Agency for Toxic Substances and Disease Registry (ATSDR), z(1999). Toxicological
profile for chlorophenols. Departement of health and human services, public health service.
Atlanta (USA).

54. Pichard A., Bisson M., Bureau J., Dujardin R., Lacroix G., Lefevre J.P.,Oberson-
Geneste D., Strub M.P. & Tissot S., (2005). 2,4-dichlorophenol. Fiche de donnes
toxicologiques et environnement des substances chimiques. Version N 3. INE RI S (France), 1-
35.

55. Hazardous Substances Data Bank (HSDB), (1994). National Library of Medicine, National
Toxycology Information Program, Bethesda, MD (USA).

56.Vroumsia T., Steiman R., Siegle-Murandi F. & Benoit-Guyod J.L., (2005). Fungal
bioconversion of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 2,4-dichlorophenol (2,4-DCP).
Chemosphere, 60: 1471-1476.

57. Contreras Iglesias S., (2002). Degradation and biodegrability enhancement of nitrobenzene
and 2,4-dichlorophenol by means of advanced oxidation processes based on ozone. Thse de
Doctorat. Universit de Barcelone (Espagne).

58. Chu W., Kwan C.Y., Chan K.H. & Kam S.R., (2005). Kinetics modeling and reaction
pathway of 2, 4-dichlorophenol transformation by photo-fenton-like oxydation. Journal of
Hazardous Materials, 121: 119-126.

59. Ziagova M. & Liakopoulo-Kyriakides M., (2007). Kinetics of 2,-dichlorophenol and 4-

Cl-m-creol degradation by Pseudomonas sp. Culture in the presence of glucose. Chemosphere,
68 (5), 921-927.

60. Intrnational Pogramme on Chemical Safety (IPCS), (1987). Pentachlorophenol.

Environmental health criteria 71. World Health Organisation. Geneva (Suise).

61. Ando K., Kato A. & Suzuki S., (1970). Isolation of 2,4-dichlorophenol from a soil fungus
and its biological significance. Biochemical and Biophysical research Communication, 39: 1104-
1107.

- 64 -
62. Sithole B.B. & Williams D.T., (1986). Halogenated phenols in water at forty canadian
potable water treatment facilities. Journal of association of analytical chemistry, 69: 807-810.

63. Soulas G., Codaccioni P. & Fournier J. C., (1983). Effect of crosstreatment on the
subsequent breakdown of 2,4-D, MCPA and 2,4,5-T in the soil. Behaviour of the degrading
microbial population. Chemosphere, 12: 1101-1106.

64. Essam T., Zilouei H., Amin Magdy A., Eltayed O., Mattiasson B. & Guieyesse B.,
(2006). Sequential UV-biological degradation of chorophenols. Chemosphere, 63: 277-284.

65. Czaplicka M. & Kaczmarczyk B., (2006). Infrared study of chlorophenols and products of
their photodegradation. Talanta, 70: 940-949.

66. Moreira J.L., Polidoro A. M., Heitor C., Nunes O. C., Alves A. & Santos L., (2006).
Biodegradation of 2,4-dichlorophenol in an aerobic reactor. Fresenius Anvironmental Bulletin,
15: 289-294.

67. Nakagawa A., Osawa S., Hirata T., Yamagishi Y., Hosoda J. & Horikoshi T., (2006).
2,4-dichlorophenol degradation by the soil fungus Mortirella sp. Bioscience of Biotechnology and
Biochemestry, 70: 525-527.

68. Calvet R., (2000). Le sol proprits et fonctions, constitution et structure, phnomnes aux
interfaces. Tome 1.Edition France Agricole. Paris (France), 83-90.

69. Paasivirta 3, Heinola K. & Humppi T., (1985). Polychorinated phenols, guaiacols and
catechols in environment. Chemosphere, 14: 469-491.

70. Krijgsheld K.R. & Van der Gen A., (1986). Assessment of the impact of the emission of
certain organochloride compounds on the aquatic environment. Part I: Monochlorophenols and
2,4-dichlorophenol. Chemosphere, 15: 825-860.

71. Crosby D.K., (1981). Environment chemistry of pentachlorophenol. Pure Applied

Chemestry, 53: 1051-1080.

- 65 -
72. Crespin M.A., Gallego M. & Valcarel M., (2001). Study of the degradation of the
herbicides 2,4-D and MCPA at different depths in contaminated agriculture soil. Environment
Science and Technology, 35: 4265-4270.

73. Pelmont J., (2005). Biodgradations et mtabolismes : les bactries pour les technologies de
lenvironnement. Edition EDP Science(France), 593.

74. Jensen J., (1996). Chlorophenols in the terrestrial environment. Environmental

contamination, and Toxicology, 146: 25-51.

75. Jones P.A., (1981). Chlorophenol and their impurities in the Canadian environment.
Environment Protection Service (Repot No. EPS-3-EC-81-2). Ottawa (Canada), 434.

76. Manoharan R., Harper S.C., Mavnic D.S., Randal C.W., Wang G. & Marickovch D.C.,
(1992). Inferred metal toxicity during the biotreatment of high ammonia landfill leachate. Water
and Environmental Research, 64: 858-865

77. Wtthulum B., Klauth P., Klumpp E., Narres H.D. & martinius H., (2005). Sorption and
biodegradation of 2,4-diclorophenol in the presence of organoclays. Applied clay science, 28:
55-66.

78. Artiola-Fortuny J. & Fuller W.H., (1982). Adsorption of some mono-hydroxybenzene

derivatives by soils. Soil Science, 133: 218-227.

79. Kintz P., Tracqui A. & Mangin P., (1992). Accidental death caused by the absorption of
2,4-dichlorophenol through the skin. Archives of Toxicology, 66: 298229.

80. Isensee A. R. & Jones G. E., (1971). Absorption and translocation of root and foliage
applied 2,4-dichlorophenol, 2,7- dichlorodibenzo-p-dioxin and 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo-p-
dioxin. Journal of environmental, Agricultural and Food Chemistry, 19: 1210-1214.

81. Soderstrom M., Wachtmeister C. A. & Forlin L., (1994). Analysis of chlorophenolics
from bleach kraft mill effluent (BKME) in bile of perch (Perca fluviatilis) from the batlic also
measuring chlorocatchol. Chemosphere, 28: 1701-1719.

- 66 -
82. Bunce N. J. & Nakai J. S., (1989). Atmospheric Chemistry of chlorinated phenols. Journal
of air pollution control association, 63: 820-823.

83. Nkagawa S. & Shimokawa T., (2002). Degradation of halogenated carbons in alkaline
alcohol. Radiation physics and Chemistry, 63: 151-156.

84. Battersby N.S. & Wilson V., (1989). Survey of the anaerobic biodegradation potential
of organic chemicals in digesting sludge. Applied and Environmental Microbiology, 55:
433-439.

85. Sehili T., Boule P. & Lemaire J., (1991). Photocatalysed transformation of chloroaromatic
derivatives on zinc oxide: 2,4-dichlorophenol, Chemosphere, 22: 1053-1062.

86. Hollender J. & Hopp W., (1997). Degradation of 4-chlophenol via the meta cleavage
pathway by Comamonas testosteroni JH5. Applied and Environmental Microbiology, 63: 4567-
4572.

87. Hollender J., Hopp W., (1994). Regulation of chloro- and methylphnol degradation in
Comamonas testosteroni JH5. Applied and Environmental Microbiology, 60: 2330-2338.

88. Dorn E. & Knackmuss H. J., (1978). Chemical structure and biodegradability of
halogenated aromatic compounds. Two catechol 1,2-dioxygenase from a
3- chlorobenzoate-grown Pseudomonad. Biochemical Journal, 174: 73-84.

89. Reineke W., (1998). Development of hybrid strains for the mineralization of chloroaromatics
by patchwork assembly. Annual Review of Microbiology. 52: 287331

90. Perkins E.J., Gordon M.P., Caceres O. & Lurquin P. F., (1990). Organization and
sequence-analysis of the 2,4-dichlorophenol hydroxylase and dichlorocatechol oxidative operons
of plasmid Pjp4. Journal of Bacteriology, 172: 23512359.

91. Liao Y., Zhou X., Yu J., Cao Y., Li X., Kuai B., (2006). the key role of chlorocatechol 1,2-
dioxygenase in phytoremoval and degradation of catechol by Transgenic Arabidopsis. Plant
physiology, 142: 620-628.

- 67 -
92. Bouchard B., Beaudet R., Villemur R.,Mcsween G., Lepine F., Bisaillon J. G., (1996).
Isolation and characterization of Desulfitobacterium frappieri sp. nov., an anaerobic bacterium
which reductively dechlorinates pentachlorophenol to 3- chlorophnols. International Journal of
Systematic and Evolutionary Microbiology, 46: 1010-1015.

93. Madsen T. & Licht D., (1992). Isolation and characterization of an anaerobic chlorophnols-
transformation bacterium. Applied and Environmental Microbiology, 58: 2874-2878.

94. Mohn W. & Tiedje J. M., (1992). Microbial reductive dshalognation. Microbiological
Reviews, 56: 482-507.

95. Farroukhi M. & Mesdaghinia A. R., (2007). Removal of 3-monochlorophenol in anaerobic

baffled reactor. Journal of Applied Science, 7: 1652-1655.

96. Xiaoming Z. & Wiegel J., (1990). Sequential anaerobic degradation of 2,4-dichlorophenol
in freshwater sediments. Applied and Environmental Microbiology, 56: 1119-1127.

97. Rodier J., (2005). Lanalyse de leau naturelle. 8me dition. Dunod, Paris: 535-540.

98. Jing B., Jian-Ping W., Hong-Mei L. & Yan J., (2006). Kinetic modelling of growth and
biodegradation of phenol and m-cresol using Alcaligens faecalis. Process Biochemistry, 8: 1-8.

99. Herrera Y., Okoh A., Alvarez L., Roobledo N. & Trejo-Hernandez M. R., (2007).
Biodegradation of 2,4-dichlorophenol by a Bacillus consortium, World journal of microbiology
& biotechnology, 24: 55-60.

100. Yan J., Jianping W., Hongmeia L., Suliang Y. & Zongding H., (2005). The
biodegradation of phenol at high initial concentration by the yeast Candida tropicalis.
Biochemical Engineering Journal , 24 : 243247.

101. Yan J., Jianping W., Jing B., Xiaoqang J. & Zongding H., (2007). Biodegradation of
phenol at high initial concentration by Alcaligenes faecalis, Journal of Hazardous Materials,
147 : 672-676.

- 68 -
102. Emerson, E. (1943). The condensation of 4-aminoantipyrine. A new color test for phenolic
compounds. The Journal of Organic Chemistry, 8: 417-428.

103. Svobodova D. & Gasparie J., (1971). Investigation of the colour reaction of phenols with
4-aminoantipyrine. Mikrochimica acta, 59: 384- 390.

104. Tyler J. E. & Finn R. K., (1974). Growth rates of Pseudomonas on 2,4-
dichlorophenoxyacetic acid and 2,4-dichlorophenol. Applied Microbiology, 28: 181-184.

105. Maeda M., Itoh A. & Kawase Y., (2005). Kinetics for aerobic biological treatment of
o-cresol containing wastewaters in slurry bioreactor: biodegradation by utilizing waste activated
sludge. Biochemical Engineering Journal,.22: 97-103.

106. Lang E. & Viedt H., (1994). Degradation by and toxicity to bacteria of chlorinated phenols
and benzenes, and hexachlorocyclohexane isomers. Microbial Ecology. 28: 53-65.

107. Anonyme., (2006). La biodgradabilit des affluents urbains. Memotec., 19.

108. Steirt J. G. & Crawford R. L., (1985). Microbial degradation of chlorinated phenols.
Trends in Biotechnologie, 3 : 300-305.

109. Kargi F. & Erker S., (2004). Toxicity and batch biodegradation kinetics of
2,4-dichlorophenol by pure Pseudomonas putida culture, Process Biochemistry, 40 : 21052111.

110. Martnkov L., Uhnkov B., Ptek M, Nevera J. & Ken V., (2009). Biodegradation
potential of the genus Rhodococcus. Environment International, 35 : 162177.

111. Hofrichter M., Bublitz F. & Fritsche W., (1994). Uspecific degradation of halogenated
phenpls by the soil fungus Penicillium frequentans Bi 7/2. Journal of Basic Microbiology, 34 :
163-172.

112. Sahinkaya E. & Dilek F. B., (2002). Effects of 2,4-dichlorophenol on activated sluge.
Applied Microbiological Biotechnology, 59 : 361-367.

- 69 -
113. Goswami M., Shivaraman N. & Singh R. P., (2002). Kinetics of chlorophenol degradation
by benzoate induced culture of Rhodococcus erythropolis M1. World Journal of Microbiology
and Biotechnology, 18 :779-783 ;

114. LU G., WANG C. & SUN Z., (2009). Biodegradation of complex cacteria on phenolic
derivativesin river water. BiomedicalI and environmental sciences, 22 : 112-117.

115. Ren, S. & Frymier, P.D., (2002). Estimating the toxicities of organicchemicals to
bioluminescent bacteria and activated sludge. Water Ressource. 36 : 44064414.

116. Wang C. C., Lee C. M. & Kuan C. H., (2002). Removal of 2,4-dichlorophenol by
suspended and immobilized Bacillus insolitus. Chemosphere, 41: 447-452.

117. Knackmus H. J., (1982). xenobiotic degradation in industrial swage : Haloaromotics as

traget substance. Biochemical Society Symposia, 48: 173-190.

118. Adams R. H., Huang C. M., Higson F. K., Brenner V. & Focht D., (1992). Construction
of a 3-chlorobiphenyl-utilizing reconbinant form of an intergeneric matting. . Applied and
Environmental Microbiology, 58: 647-654.

119. Reineke W. & Knackmus H. J., (1980). Hybrid pathway of chlorobenzoate metabolism in
Pseudomonas sp. Journal of Bacteriology, 142 : 467-473.

120. Fackurddin A. N. M. & Quilty B., (1994). The influence of glucose and fructose on the
degradation of 2-chlorophenol by Pseudomonas putida CP1. World Journal of Microbiology and
Biotechnology, 21: 1541- 1548.

- 70 -
Annexe

- 71 -
 Annexe 1 : prparation de solution de nitrate dargent

- 4,25 g AgNO3, 1 ml HNO3 (65%), et 0,05 g NaCl sont dissous dans 100 ml deau distille.
- chauffage 80C sous agitation, jusqu lapparition dun prcipit de couleur grise.
- La solution est utilise aprs filtration.

Annexe 2 : Courbe talon de 2,4-dichlorophnol

Concentration de 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5

2,4-DCP (mg/l)
Absorbance 0.044 0.075 0.106 0.143 0.179 0.210 0.249 0.279 0.306 0.351
510nm

- 72 -
 Annexe 3 : Courbe talon de lion chlorure

Concentration du 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
chlorure (mg/l)
Absorbance 0.049 0.089 0.139 0.192 0.233 0.263 0.307 0.343 0.380 0.413
365nm

- 73 -
 Annexe 4 : ANOVA pour leffet de linoculum sur la biodgradation du 2,4-DCP diffrents
intervalles de temps dincubation.
T = 48 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 135,3750 16 4,430279 30,55676 0,00046

T = 72 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 28,2970 16 3,012038 9,39463 0,027237

T = 96 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 34,6320 16 5,011066 6,91111 0,018237

T = 7jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 138,4801 16 1,876621 73,7923 0,000000

T = 14 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 248,1337 16 3,786854 65,5250 0,000000

T = 28 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 259,9758 16 1,216854 213,6454 0,000000

(dl) : Degr de libert, (MC) : Somme des carrs moyens, (F) : Statistique du test Fischer,
(P) :Probabilit attache la valeur de Fischer.

- 74 -
 Annexe 5 : ANOVA pour leffet de la dose sur la biodgradation du 2,4-DCP diffrents
intervalles de temps dincubation.
T = 48 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 194,3478 16 4,430279 43,86807 0,000000

T = 72 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 204,3907 16 3,012038 67,85794 0,000000

T = 96 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 322,9554 16 5,011066 64,44843 0,000000

T = 7jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 388,3912 16 1,876621 206,9631 0,000000

T = 14 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 601,2314 16 3,786854 158,7680 0,000000

T = 28 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 789,2813 16 1,216854 648,6243 0,000000

(dl) : Degr de libert, (MC) : Somme des carrs moyens, (F) : Statistique du test Fisher,
(P) :Probabilit attache la valeur de Fischer.

- 75 -
 Annexe 6 : Test de Student (t) pour la comparaison de la dgradation biotique et abiotique la
fin dincubation

Moyenne Ec-type Diffrence t p

BD 42,8 23,84

DA 31,58 0,54
11,22 1,9869 0,00002

(B D) : Biodgradation, (D A) : Dgradation abiotique, (t) : Statistique du test Student, (p) :

Probabilit attache la valeur de Student.

- 76 -
 Annexe 7 : Courbe des variations du pH

Figure16. Variation de pH concentration de 50mg/l dans le T.S., leffluent dentre

et leffluent de sortie

Figure17. Variation de pH concentration de 100mg/l dans le T.S., leffluent dentre

et leffluent de sortie

- 77 -
Figure18. Variation de pH concentration de 150mg/l dans le T.S., leffluent dentre
et leffluent de sortie

Figure19. Variation de pH concentration de 150mg/l dans le T.S., leffluent dentre

et leffluent de sortie

- 78 -
 Annexe 8 : Les rsultats de mesures des concentrations de la molcule.

Tableau 1 : effluent dentre

[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 50 48,14 43,8 42,72 37,58 31,2 26,5 21,26 18,1
100 99,78 99,22 97,56 94,33 80,92 71,1 60,23 49,66 43,7

150 149,7 146,1 135,95 128,66 113,98 103,22 95,7 90,23 86,72

200 200,05 197,33 193,05 184,98 156,95 148,1 139,88 133,7 130,12

Tableau 2: effluent de sortie

[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j

50 49,95 48,03 43,7 38,92 33,1 29,03 26,33 23,82 21,26

100 100,13 99,85 97,03 84,45 76,02 69,2 60,96 53,7 49,48

150 149,8 145,98 135,33 123,1 114,22 105,95 99,86 96,3 92,72

200 199,97 197,42 192,2 179,03 164,33 153,6 146,06 139,2 132,72

Tableau 3: Tmoin strile

[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j

50 50,02 48,1 43,82 42,74 41,93 40,07 38,94 36,88 34,12

100 100,32 99,26 97,02 94,12 89,94 86,12 80,23 72,86 68,13

150 149,72 145,98 135,2 128,7 123,05 119,97 113,92 108,86 102,96

200 199,93 197,26 192,12 184,76 177,92 171,2 157,21 145,96 137,33

Les rsultats mentionns dans les tableaux sont des moyennes de trois rptitions.

- 79 -
.

Annexe 9 : Les rsultats de mesures des variations de pH.

Tableau 1 : effluent dentre

pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j

50 7,17 7,17 7,17 7,17 7,14 7,11 7,06 7 6,96

100 7,18 7,18 7,18 7,18 7,15 7,11 7,08 7 6,95

150 7,17 7,17 7,17 7,18 7,15 7,12 7,07 6,99 6,96

200 7,17 7,17 7,17 7,17 7,14 7,11 7,06 7 6,96

Tableau 2 : effluent de sortie

pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 7,17 7,17 7,18 7,16 7,14 7,12 7,07 7,04 6,99

100 7,18 7,18 7,18 7,17 7,15 7,11 7,09 7,03 6,99

150 7,18 7,18 7,17 7,16 7,15 7,11 7,08 7,03 6,98

200 7,17 7,17 7,18 7,16 7,14 7,12 7,07 7,04 6,99

Tableau 3: Tmoin strile

pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17

100 7,18 7,18 7,17 7,18 7,18 7,18 7,17 7,18 7,17

150 7,18 7,18 7,19 7,18 7,18 7,19 7,18 7,17 7,18

200 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17

Les rsultats mentionns dans les tableaux sont aussi des moyennes de trois rptitions.

- 80 -
 Abstract

The capacity of biological breakdown of various concentrations of 2,4-dichlorophenol, by the

microbiote of the effluents of entry and exit of the station of purification of worn water of the
town of CONSTANTINE, is studied in kinetics of time The cultures are carried out of fermentors
miniaturized, are carried out in batch and incubated to 30C during 28 days, where the 2,4-
dichlorophnol is the only source of carbon and energy of a minimum medium. The follow-up of
the biological breakdown of the 2,4-dichlorophenol is carried out by proportioning of the
concentration of the substrate, the measurement of the pH of the medium, the proportioning of
the ion chloride and the measurement of the possible production of gas. The concentration of the
2,4-dichlorophnol is measured with the spectrophotometer at 510 nm by the method of 4-aap
and the ion chloride by turbidimetry at 365nm.

The kinetics of biological breakdown of the 2,4-dichlorophnol by the microbiote of the effluent
of entry generates a phase of 48 hours latency and percentages of biological breakdown at the
end of incubation of:63,8%, 56,3%, 42,18% and 34,94%, respectively for the initial
concentrations of:50, 100, 150, 200mg/l.While the kinetics of biological breakdown of the 2,4-
dichlorophenol by the microbiote of the effluent of exit generates a phase of 24 hours latency
with percentages of biological breakdown of:57,48%, 41,9%, 38,18% and 33,64% for the same
respective concentrations and the same duration of incubation. The inoculum effect and the effect
proportion substrate, during the biological breakdown, is significant (p<0,05).An abiotic
degradation is also noted, with a percentage which does not reach the 32% for the whole of the
concentrations. However, the difference between the biological breakdown and abiotic
degradation are very significant (p<0,05). No production of gas is recorded in the whole of the
fermentors, whereas the nonstoehiometric release of ions chloride is very weak during the
biological breakdown of the 2,4-dichlorophenol.These two elements indicate that its biological
breakdown is incomplete.

Key words: Wastewater, Biodegradation, 2,4-dichlorophenol.

- 82 -


2.4:
2.4
. .
28 30
.

2.4
42.18 56.3 63.8 34.94 150 100 50 200
57.48
38.18 41.9 33.64 .
.

: 2.4 .

- 83 -
Nom : BELAHMADI Date de soutenance : 16/01/2011
Prnom : MOHAMED SEDDIK OUSSAMA
Titre : Etude de la biodgradation de 2,4-dichlorophnol par le microbiote des effluents
dentre et de sortie de la station dpuration des eaux uses dibn Ziad
Rsum

La capacit de biodgradation de diffrentes concentrations de 2,4-dichlorophnol,

par le microbiote des effluents dentre et de sortie de la station dpuration des eaux uses
de la ville de CONSTANTINE, est tudie en cintique de temps. Les cultures sont
effectues en fermenteurs miniaturiss, menes en batch et incubs 30C pendant 28
jours, o le 2,4-dichlorophnol est la seule source de carbone et dnergie dun milieu
minimum. Le suivi de la biodgradation du 2,4-dichlorophnol est effectu par dosage de la
concentration du substrat, la mesure du pH du milieu, le dosage de lion chlorure et la
mesure de lventuelle production de gaz. La concentration du 2,4-dichlorophnol est
mesure au spectrophotomtre 510 nm par la mthode de 4-AAP et lion chlorure par
turbidimtrie 365nm.
La cintique de biodgradation du 2,4-dichlorophnol par le microbiote de leffluent
dentre engendre une phase de latence de 48 heures et des pourcentages de biodgradation
la fin dincubation de : 63,8%, 56,3%, 42,18% et 34,94%, respectivement pour les
concentrations initiales de : 50, 100, 150, 200mg/l. Tandis que la cintique de
biodgradation du 2,4-dichlorophnol par le microbiote de leffluent de sortie engendre une
phase de latence de 24 heures avec des pourcentages de biodgradation de : 57,48%, 41,9%,
38,18% et 33,64% pour les mmes concentrations respectives et la mme dure
dincubation. Leffet inoculum et leffet dose du substrat, au cours de la biodgradation, est
significatif (p<0,05). Une dgradation abiotique est galement constate, avec un
pourcentage qui natteint pas les 32% pour lensemble des concentrations. Cependant, la
diffrence entre la biodgradation et la dgradation abiotique est trs significative (p<0,05).
Aucune production de gaz nest enregistre dans lensemble des fermenteurs, alors que la
libration non stoehiomtrique dions chlorure est trs faible au cours de la biodgradation
du 2,4-dichlorophnol. Ces deux lments indiquent que sa biodgradation est incomplte.

Mots cls : Eaux uses, biodgradation, 2,4-dichlorophnol.

Laboratoire de recherche : Laboratoire de Gnie Microbiologique et Application.

Directeur de recherche : Pr. BOUSSEBOUA H.

Membre de jury :

BOULAHROUF A. Prsident : Prof. Univ. Mentouri de Constantine

BOUSSEBOUA H. Rapporteur : Prof. Univ. Mentouri de Constantine
ARHAB R. Examinateur : - Mc.
84 - Univ. Larbi Tbssi De Tbessa
HAMIDECHI A. Examinateur : Mc. Univ. Mentouri de Constantine