Analyses en microbiologie

Environnement microbien (air, surfaces, eau)

par Fabien SQUINAZI
Docteur
Directeur du Laboratoire dHygine de la Ville de Paris

1. Contamination des surfaces : le biofilm ........................................... P 3 355 - 2

1.1 Mcanismes de la contamination des surfaces ........................................ 2
1.2 Mesurage de la contamination des surfaces............................................. 2
2. Contamination de leau .......................................................................... 2
2.1 Mcanismes de la contamination des circuits deau................................ 2
2.2 Flore microbienne de leau ......................................................................... 3
2.3 Mesurage de la contamination de leau .................................................... 3
3. Contamination de lair............................................................................ 3
3.1 Sources de contamination .......................................................................... 3
3.2 Amplification microbienne ......................................................................... 3
3.3 Dissmination arienne .............................................................................. 4
3.3.1 Vecteurs dorigine humaine............................................................... 4
3.3.2 Vecteurs environnementaux .............................................................. 4
3.4 Flore microbienne de lair ........................................................................... 4
3.5 Mesurage de la contamination de lair ...................................................... 4
4. Matrise de lenvironnement microbien............................................. 5
4.1 valuation des risques microbiologiques ................................................. 5
4.2 Matrise permanente des risques microbiologiques ................................ 5
Rfrences bibliographiques ......................................................................... 5

es milieux de lenvironnement (air, surfaces, eaux) prsentent une

L contamination microbiologique permanente mais variable dans le temps et
dans lespace. Les micro-organismes font partie de la flore saprophyte,
environnementale, et proviennent aussi de la flore commensale ou pathogne
des individus. Vecteurs de la contamination, les milieux de lenvironnement
dissminent, plus ou moins longue distance, les micro-organismes et
contribuent insidieusement la contamination progressive des divers supports
inertes de lenvironnement. Certains de ces micro-organismes sont lorigine
de laltration de produits dans diverses industries et dinfections noso-
comiales chez les patients fragiles dans les tablissements de sant.
Face cette contamination ubiquitaire, la protection des produits et des
individus fragiles ne peut tre envisage que dans un environnement microbien
matris. II savre ainsi ncessaire dvaluer les risques de contamination et de
grer ces risques de manire adapte et cohrente. Il sagit, en effet, de matriser
en permanence la qualit microbiologique de lensemble des milieux de
lenvironnement.

Nota : le dossier Analyses en microbiologie se compose de quatre parties :

Produits non striles [P 3 352] ;
Antibactriens [P 3 353] ;
Produits striles [P 3 354] ;
Contrles de lenvironnement [P 3 355].

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Techniques de lIngnieur P 3 355 1
ENVIRONNEMENT MICROBIEN (AIR, SURFACES, EAUX) ________________________________________________________________________________________
1. Contamination
des surfaces : le biofilm
Les bactries ont le pouvoir dadhrer et de se multiplier sur
divers supports inertes (sol, surfaces internes de canalisations
deau ou de conduits dair, matriel, quipements...) pour former
un biofilm, facteur cl de la contamination microbiologique de
lenvironnement (figure 1).
Les biofilms reprsentent des rservoirs importants de
micro-organismes, qui peuvent tre vhiculs dun point un
autre, aprs fragmentation du biofilm :
par contact par lintermdiaire de lhomme, des liquides sur-
tout par leau, des matriels et quipements utiliss, notamment
les textiles ;
par lair, sous forme darosols constitus de poussires, de
gouttelettes de liquides ou de noyaux de condensation, constitues
de particules inertes et viables, ou sous forme de gaz.
Le danger essentiel li la prsence de micro-organismes sur
une surface est la possibilit de contamination dun produit ou
dun individu.
Prvenir le biofilm, cest concevoir des matriaux dont ladhsi-
vit est la plus faible possible et dont lentretien est facile. Cest
aussi liminer rapidement toute salissure et toute trace dhumidit.
liminer le biofilm, cest recourir des procdures adaptes de
nettoyage. Le concept de bionettoyage combine un nettoyage des
surfaces, une vacuation des produits utiliss et des salissures
liminer et lapplication dun dsinfectant.
1.1 Mcanismes de la contamination
des surfaces
Ladhsion bactrienne dbute par lattachement des cellules
grce des forces physiques, relativement labiles, puis la cellule
bactrienne secrte des substances polymriques constituant le
glycocalyx qui lui permet dadhrer plus fortement la surface.
La prsence de molcules organiques est un facteur aggravant
car la surface devient alors une surface-substrat pour le dvelop-
pement des micro-organismes. Lorsque les conditions sont runies
(temprature, humidit), les bactries se dveloppent en
micro-colonies ou par plaques et forment progressivement un
biofilm, structure multicouche de bactries enrobes dans un mag-
mat de substances polymriques extracellulaires. Celui-ci est
compos de cellules bactriennes vivantes, de cadavres bactriens
et de diverses espces microbiennes recrutes en superficie.
Des cellules bactriennes naines (dwarff cells ), en conomie de
privation sont souvent retrouves dans le biofilm. Sous linfluence
du stress extrieur et/ou de la communaut bactrienne, ces
cellules ont une paroi densifie, une taille diminue et un mta-
bolisme ralenti. Elles deviennent plus rsistantes aux agents
dsinfectants, ont un pouvoir dadhsion accru et ont la possibilit
de traverser les filtres dits bactriologiques .
Sdimentation
Mouvements
Turbulence
Absorption Fixation Colonisation Biofilm
Figure 1 Adhsion dune bactrie un support inerte et formation
dun biofilm.
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1.2 Mesurage de la contamination
des surfaces
Le mesurage de la contamination microbiologique des surfaces
seffectue en rcuprant les micro-organismes viables, laide de
dispositifs de prlvement, par contact direct ou indirect, ou par
dpt sur une bote par sdimentation gravitationnelle. Il sexprime
en units formant colonies par surface chantillonne.
Des botes de contact prsentant un mnisque glos, ou tout
autre dispositif permettant un milieu glos contenu dans un
rcipient souple ou rigide dentrer en contact avec la surface
chantillonner, sont utiliss sur des surfaces lisses et plates. Ces
dispositifs permettent dobtenir, aprs incubation de milieux de
culture appropris, un dnombrement et une identification de la
flore microbienne dtachable et revivifiable . Pour le pr-
lvement de surfaces horizontales laide de botes de contact,
une standardisation est apporte grce lapplication dune pres-
sion constante et uniforme dune masse de 25 g/cm2 pendant 10 s
sur une surface glose de 20 cm2.
Lutilisation dcouvillons, dponges ou de tissus dessuyage
striliss humides est particulirement commode pour le pr-
lvement par couvillonnage de surfaces importantes, non-absor-
bantes, irrgulires et par consquent non accessibles aux
dispositifs de contact. Aprs le prlvement par passages succes-
sifs et perpendiculaires sur la surface chantillonner, le dispositif
est plac dans un volume de liquide de rinage appropri qui,
aprs agitation, est mis en culture. Ces dispositifs ne permettent
quune analyse qualitative.
Une autre mthode indirecte est le mesurage de lATP microbien
sur la surface.
Le nombre de micro-organismes se dposant sur une surface
donne pendant une priode dfinie peut tre dtermin laide
de botes de sdimentation de grand diamtre (14 cm) renfermant
un milieu de culture glos appropri.
2. Contamination de leau
La dgradation de la qualit microbiologique de leau peut
survenir tout moment entre le lieu de production et le robinet de
lutilisateur. Elle peut tre lie une prolifration de micro-orga-
n i s m e s n a t u r e l l e m e n t p r s e n t s d a n s l e a u , vo i r e u n e
contamination dans les rservoirs, dans les canalisations publiques
ou dans les rseaux intrieurs de distribution des btiments.
Ltendue et la complexit des rseaux intrieurs, la formation dun
biofilm lintrieur des canalisations, la prsence de points de
stagnation de leau (espaces morts, robinets et brise-jets,
pommeaux de douche, adoucisseurs, ballons de stockage...), la
ralisation de travaux en labsence dune dsinfection efficace,
contribuent la prolifration des micro-organismes prsents dans
leau. La contamination des quipements priphriques par des
micro-organismes apports par lusager participe galement la
contamination microbiologique de leau distribue.
2.1 Mcanismes de la contamination
des circuits deau
Dans une canalisation deau, les matires organiques dissoutes
dans leau se dposent sur les parois et forment un film
conditionnant compos de macromolcules nutritives. Les caract-
ristiques de surface ainsi que la rugosit du matriau peuvent
influencer la formation de ce film conditionnant.
Les bactries, apportes en permanence par le flux liquide,
entrent en contact avec la paroi grce aux mouvements, turbu-
lences et stagnation de leau. Ladhsion bactrienne dpend de la
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nature du matriau, de lespce bactrienne et des conditions
environnementales. Des forces physiques, de type Van der Waals
ou lectrostatiques, assurent ladhsion de la premire couche
bactrienne qui est renforce par la scrtion par les bactries de
polymres exocellulaires, composs de protines et de polysaccha-
rides, permettant ainsi de fixer les cellules bactriennes la paroi.
Lapport continu par le flux liquide doxygne et de substances
nutritives (Carbone Organique Dissous Biodgradable par la flore
bactrienne du rseau CODB) entrane la croissance bactrienne
sous forme de microcolonies.
Ce dveloppement bactrien et ladhsion dautres
micro-organismes sur la paroi de la canalisation aboutit un
biofilm, ensemble de micro-organismes, vivants et morts, enrobs
dans une matrice de polymres exocellulaires synthtiss par les
bactries et de particules organiques et minrales de leau.
Lpaisseur du biofilm augmente avec lge de celui-ci et lint-
gration dautres micro-organismes ; il dpend aussi des conditions
dcoulement dans la canalisation, de la temprature de leau, de
la concentration en CODB, de la saturation en oxygne et de larra-
chage par le flux deau circulant. Le biofilm permet de protger les
micro-organismes de la dsinfection. Des variations brutales de
pression, lrosion ou larrachage du biofilm contribuent la
contamination de leau distribue.
2.2 Flore microbienne de leau
Dans leau potable distribue dans un btiment, on peut
retrouver les micro-organismes suivants :
divers bacilles Gram ngatif : Pseudomonas sp. dont
Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas (Burkholderia ) cepacia,
Pseudomonas paucimobilis, Stenotrophomonas maltophilia,
Flavobacterium meningosepticum, Alcaligenes xylosoxydans,
Aeromonas, hydrophila, Acinetobacter sp., Achromobacter,
Xanthomonas sp., entrobactries dont Serratia marcescens,
Klebsiella pneumoniae, Enterobacter sp. ;
bactries Gram positif : staphylocoques coagulase
ngative, Bacillus sp., Clostridium sp. ;
bactries particulires : Legionella sp. dont Legionella
pneumophila, mycobactries atypiques, non tuberculeuses.
Les micro-organismes thermophiles, par exemple les Legionella,
sont, en outre, favoriss par une temprature de leau entre 25 et
42 oC, la duret de leau (concentrations leves de calcium et de
magnsium), de rsidus mtalliques comme le fer, le cuivre ou le
zinc, de certains matriaux tels que le caoutchouc, le chlorure de
polyvinyle, le polythylne ou le silicone, et la prsence
concomitante dautres micro-organismes des milieux aquatiques
comme les cyanobactries ou les amibes libres (Acanthamoeba,
Naegleria, Hartmanella ). La pntration et le dveloppement des
Legionella dans les amibes libres leur permettent de survivre dans
des conditions trs dfavorables et densemencer le milieu aprs
lyse des cellules amibiennes.
2.3 Mesurage de la contamination de leau
Les conditions de prlvement de leau dpendent des objectifs
fixs : valuation de la contamination du robinet et de leau ayant
stagn dans les canalisations par prlvement du premier jet avec
recueil dun volume de 200 ml, valuation de la contamination de
leau distribue par prlvement du deuxime jet aprs dconta-
mination du robinet et coulement avec recueil de 500 ml pour les
analyses de potabilit ou de 200 ml pour la flore hydrique, va-
luation de la contamination de leau traite par un dispositif (eau
bactriologiquement matrise) par recueil de 200 ml au point
dusage, valuation de la contamination de leau chaude sanitaire
ou rchauffe par prlvement au point dusage avec recueil dun
litre deau.
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Techniques de lIngnieur
ENVIRONNEMENT MICROBIEN (AIR, SURFACES, EAUX)
Si leau est chlore, le rcipient strile doit contenir 20 mg/ l de
thiosulfate de sodium pour neutraliser le chlore rsiduel.
Les mthodes danalyse conduisent un dnombrement et une
identification de la flore revivifiable en units formant colonies par
volume chantillonn ; elles peuvent comprendre une ou plusieurs
des techniques suivantes :
la culture directe, par exemple, avec talement sur la glose,
des dilutions en srie (mthode NPP) ;
la culture indirecte, par exemple, la concentration dun
chantillon laide dune mthode faisant appel une membrane
filtrante, avec culture ultrieure, ou avec lutilisation de substrats
radiomarqus et le mesurage de la radioactivit ;
le mesurage de lATP microbien ;
limpdancemtrie.
3. Contamination de lair
Elle dpend de trois conditions essentielles (prsence de sources
de contamination, amplification et dissmination microbiennes)
qui conduisent une contamination soit permanente, soit le plus
souvent transitoire de lair ambiant, ou flore microbienne de lair.
3.1 Sources de contamination
Les rservoirs microbiens sont classiquement distingus en
rservoirs vivants, cest--dire les personnes prsentes dans le
local, et en rservoirs inertes. Dans ces milieux de lenvironnement,
on retrouve les micro-organismes saprophytes, bactries et champi-
gnons microscopiques, qui sont trs rsistants dans le milieu ext-
rieur, et certains germes pathognes ou commensaux dorigine
humaine qui survivent bien en dehors de leur organisme-hte.
Les milieux secs comme les poussires et les supports inertes
agglomrent ou fixent les micro-organismes. Ceux-ci sont
composs de bactries Gram positif (Bacillus sp., staphylocoques,
entrocoques, actinomyctes...), de bactries Gram ngatif telles
quAcinetobacter sp., de spores de bactries anarobies Gram
positif et de champignons microscopiques.
Les milieux humides favorisent la survie des micro-organismes :
bactries Gram ngatif comme les entrobactries ou les pseu-
domonas et espces apparentes, Legionella sp., mycobactries
atypiques, champignons microscopiques, virus tels que les entro-
virus ou le virus de lhpatite A.
3.2 Amplification microbienne
La multiplication active des micro-organismes, prsents dans les
rservoirs, se produit lorsquil existe une infection chez un individu
ou lorsque sont runies, dans un rservoir environnemental, toutes
les conditions nutritives, physico-chimiques et (micro)biologiques
ncessaires la croissance de ces micro-organismes. Elle aboutit
une concentration leve de micro-organismes ou concentration
critique.
Les sites environnementaux de multiplication microbienne sont
nombreux, dautant plus si un entretien soigneux des installations
techniques nest pas assur. Tout milieu humide, tout support,
toute eau stagnante peuvent tre le sige de prolifrations
microbiennes, favorises encore par la prsence concomitante de
matriels biodgradables ou de divers micro-organismes (amibes
libres...). Il en est ainsi du rseau intrieur de distribution deau et
des quipements sanitaires, et en particulier de leau chaude
sanitaire, de leau des humidificateurs, des condensats de batteries
froides des climatiseurs, de leau des tours arorfrigrantes...
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3.3 Dissmination arienne
La perturbation mcanique, continue ou discontinue, des
rservoirs microbiens permet de librer les micro-organismes de
leurs sources et dtre lorigine dune dissmination arienne ou
arobiocontamination. Ceci se rencontre lors de la toux ou
dternuements dun patient infect. Ceci se rencontre aussi avec
certains systmes dhumidification par pulvrisation deau, lors du
fonctionnement de douches ou de robinets, des tours aro-
rfrigrantes, lors de la fragmentation du biofilm par une
diffrence brutale de pression ou par un nettoyage des surfaces
sans prcautions particulires, lors de la manipulation dun produit
ou dun matriel contamin. Les vecteurs de larobioconta-
mination sont multiples.
3.3.1 Vecteurs dorigine humaine
Les gouttelettes rhino-pharynges, dites gouttelettes de
Pflgge mises lors de la parole, de la toux ou de lternuement,
sdimentent plus ou moins vite selon leur diamtre, gnralement
compris entre 5 et 100 m. Au fur et mesure de leur sdimen-
tation, les gouttelettes perdent leur eau et diminuent en diamtre
jusqu 0,5 m, formant un noyau de condensation appel droplet
nuclei. Leur vitesse de sdimentation est alors pratiquement nulle.
Ces noyaux de condensation, en nombre trs important, sont
dautant plus dangereux quils contiennent un concentr de
germes, quils restent trs longtemps en suspension dans lair
(longs courriers de la contamination) et quils pntrent pro-
fondment dans les voies respiratoires.
Les squames cutanes (diamtre compris entre 5 et 30 m)
provenant de la desquamation permanente de la peau, les
phanres (diamtre compris entre 20 et 30 m) comprenant des
particules de poils, dongles et autres drivs protecteurs de
lpiderme, les particules et germes prinaux sont prsents dans
lair ou dans la poussire domestique.
La prsence dun rservoir humain conduit une contamination
inluctable de lenvironnement. Dans une chambre de malade
colonis par des bactries multi-rsistantes (par exemple,
Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline), celles-ci sont
retrouves sur le mobilier, le linge et les sanitaires. Le degr de
contamination de lenvironnement dpend toutefois du site
infectieux et du service hospitalier. Les infections urinaires, les
infections de plaies opratoires ou les brlures tendues sont des
facteurs de risque de contamination de lenvironnement du patient
ainsi que des blouses et des gants du personnel.
3.3.2 Vecteurs environnementaux
Les particules textiles se couvrent de micro-organismes en
raison de leur charge lectrostatique. Dun diamtre suprieur
10 m, elles vont sdimenter sur le sol avec remise en suspension
ventuelle par les mouvements du personnel ou les flux dair.
Les poussires extrieures dorigine minrale ou vgtale sont
autant de vecteurs potentiels de biocontamination arienne. Lors
de travaux de dmolition, construction et rnovation de btiments,
la teneur de lair en particules porteuses de spores dAspergillus
(diamtre de 2 3 m) est multiplie par un facteur 10 000. Ces
poussires saccumulent dans les endroits difficilement accessibles
au nettoyage : coffrages de fentres, caches de radiateurs, rampes
lumineuses, plinthes, grilles darrive ou dextraction dair, faux
plafonds... Un dysfonctionnement des systmes de ventilation,
surtout par dfaut de maintenance, favorise la colonisation des
conduits dair par des champignons filamenteux, notamment par
lAspergillus.
Les particules viables liquides, prsentes dans un bioarosol,
sont mises lors de la perturbation de tout milieu hydrique
contamin. Les gouttelettes dun diamtre infrieur 5 m
pntrent dans les voies respiratoires.
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P 3 355 4 Techniques de lIngnieur
La dimension de la particule vectrice conditionne le temps durant
lequel elle reste en suspension dans lair et la distance quelle peut
parcourir. Plus la particule est fine, plus longtemps elle persistera
dans lair et plus loin elle ira. La survie des Legionella dans un aro-
sol est de 2 h lorsque lhumidit relative est gale 65 %. Les sou-
ches virulentes et en phase stationnaire de croissance ont un taux
de survie suprieur celui des autres souches. Le bacille tubercu-
leux conserve son pouvoir pathogne sur de longues distances.
3.4 Flore microbienne de lair
Elle est constitue dune flore de base et dune flore accidentelle.
La flore de base comprend les micro-organismes saprophytes, les
plus rsistants aux agressions du milieu extrieur. Elle provient
essentiellement des milieux secs. Elle est compose de bactries
(Bacillus sp., staphylocoques, microcoques, Sarcina ) et de
champignons microscopiques filamenteux : Aspergillus sp.,
Cladosporium sp., Penicillium sp., Fusobacterium sp., Alternaria sp.,
etc. qui suivent des variations saisonnires.
La flore accidentelle est la fois dorigine humaine et hydro-
tellurique. Certains micro-organismes fragiles mis par lhomme
(mningocoque, streptocoque hmolytique, certains virus respiratoi-
res...) ne se transmettent que par contact direct dun individu
lautre, dautres sont plus rsistants dans le milieu extrieur et sont,
pour certains dentre eux, choisis comme indicateurs de contamina-
tion humaine (staphylocoques, Escherichia coli ). Des micro-organis-
mes de la flore hydro-tellurique peuvent aussi tre momentanment
prsents dans lair (Pseudomonas sp. et espces apparentes, Legio-
nella sp., mycobactries atypiques, champignons filamenteux...)
distance de la source de contamination, le pouvoir pathogne
de larosol microbien dpend la fois de la taille des particules
mises, du nombre de micro-organismes mis et de leur survie
dans le bioarosol.
3.5 Mesurage de la contamination de lair
Les particules viables en suspension dans lair sont aspires,
sous un volume connu et selon un dbit connu, et sont soit
recueillies dans un liquide, soit impactes directement sur un
milieu de prlvement ou filtres laide dune membrane filtrante
spcifique qui seront ensuite traits en laboratoire pour dnombre-
ment et identification des colonies microbiennes dveloppes sur
le milieu de culture. Les rsultats sexpriment en units formant
colonies par mtre-cube dair prlev.
Pour les dispositifs de prlvement par impact sur glose, on dis-
tingue les impacteurs cribles, un ou plusieurs tages, les impac-
teurs fentes ou les impacteurs par centrifugation. Le choix dun
dispositif dchantillonnage de lair dpend du type de particules
viables mesurer, de la sensibilit des micro-organismes, du niveau
de contamination attendu, de la capacit de dtecter dventuels
faibles niveaux de contamination, des conditions denvironnement,
de la prcision et de lefficacit du prlvement. Dautres facteurs
seront pris en compte : absence de perturbation dun flux dair
unidirectionnel, facilit de nettoyage et de dsinfection, absence de
contamination supplmentaire.
Les diffrents principes de fonctionnement des appareils ne
permettent pas de comparer les rsultats dun appareil lautre. II
convient donc deffectuer les prlvements avec toujours le mme
appareil qui a t valid par lutilisateur.
Dans les cas de faibles taux de contamination de lair, les pr-
lvements doivent tre effectus avec des appareils ayant un dbit
suffisant pour prlever 1 m3 dair dans un temps raisonnable, sans
desschement significatif du milieu glos (par exemple, 100 l/min
environ) et avec une vitesse dimpact modre sur le milieu (par
exemple infrieure 20 m/s). Dans des zones de contamination
leve, il est recommand de doubler les chantillonnages avec
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des volumes de prlvement diffrents pour obtenir des colonies
spares pour une meilleure interprtation des rsultats.
Les rsultats obtenus ne permettent pas de donner la
contamination microbiologique exacte de lair. Ils ne donnent que
des lments dapprciation qualitatifs et/ou quantitatifs sur les
micro-organismes les plus rsistants dans le milieu extrieur, qui
sont en suspension dans lair au moment du prlvement, et qui
sont viables, non stresss et revivifiables sur les milieux de
culture choisis.
4. Matrise de lenvironnement
microbien
La matrise de la contamination microbiologique de lenviron-
nement dun procd ou dun produit demande dtablir, mettre en
uvre et entretenir un systme formalis afin dvaluer et
matriser en permanence lensemble des facteurs susceptibles
davoir une incidence sur la qualit microbiologique de ce procd
ou de ce produit. Elle sappuie sur la norme NF EN ISO 14698-1 qui
dcrit les principes gnraux et les mthodes de la matrise de la
biocontamination dans les salles propres et environnements
matriss apparents.
4.1 valuation des risques
microbiologiques
Il convient didentifier le ou les dangers microbiologiques
potentiels associs au procd ou au produit, cest--dire toutes les
sources potentielles de contamination (air, eaux, surfaces...) qui
peuvent tre lorigine dlments biologiques responsables dun
effet indsirable.
Lquipe charge de lanalyse des risques devra valuer la pro-
babilit que le ou les dangers identifis se produisent, en prenant
en compte lensemble des facteurs de risques associs au procd
ou au produit protger.
Selon le niveau de risque attribu au procd ou au produit, il
est dtermin, au sein de lenvironnement, des zones risques trs
levs, risques levs, risques moyens ou risques faibles ou
ngligeables. Une zone risques est un espace dfini et dlimit,
o des indi vidus, des produits ou des matriels (ou une
combinaison quelconque de cet ensemble) prsentent une
vulnrabilit particulire la contamination.
Dans chacune des zones risques dfinies, on identifie les
mesures prventives, adaptes et cohrentes entre elles, pour
matriser les risques microbiologiques : le systme de matrise de
la contamination microbiologique. On dtermine les points
critiques de matrise, cest--dire les points, les procdures, les
tapes de lopration ou les conditions de lenvironnement que
lon peut matriser afin dliminer le ou les dangers microbiologi-
ques ou de rduire la probabilit quils se produisent.
4.2 Matrise permanente des risques
microbiologiques
La matrise permanente de la contamination dans une zone
risques repose sur la mise en uvre et la documentation dun
systme de surveillance et dobservation. Ce systme ncessite
dtablir des limites permettant dassurer la matrise, un plan
dessais et de contrles, et des actions correctives entreprendre
quand les rsultats de la surveillance indiquent quun point critique
nest plus matris. Cette surveillance porte sur des observations
du respect des mesures prventives (audits internes) mais aussi
sur des contrles physiques, chimiques et microbiologiques.
Afin de surveiller de manire approprie les actions mises en
uvre, il devra tre dfini trois niveaux :
le niveau cible : niveau dfini fix par lutilisateur comme un
objectif de ses propres oprations de routine ;
le niveau dalerte : niveau tabli par lutilisateur dans le
contexte dun environnement matris, donnant une premire
alerte en cas de drive par rapport aux conditions normales et qui,
lorsquil est dpass, devra donner lieu une attention accrue au
processus ;
le niveau daction : niveau tabli par lutilisateur dans le
contexte dun environnement matris qui, lorsquil est dpass,
ncessite une intervention immdiate, y compris la recherche de la
cause, et une action corrective.
Les autocontrles sont un outil de surveillance du systme de
matrise de la contamination microbiologique. Leurs rsultats
seront alors dune aide prcieuse pour sassurer du respect et du
fonctionnement correct des mesures prventives mises en uvre
et des actions correctives ncessaires. Les prlvements microbio-
logiques de lenvironnement doivent aider aussi dterminer les
sources, vecteurs et modes de transmission des agents biologiques.
Une vrification priodique du systme de matrise de la
contamination microbiologique simpose pour dterminer la fois
les carts par rapport aux dispositions du plan de prvention ou
leur non-application, et son aptitude garantir la matrise des
dangers microbiologiques (pertinence du plan de prvention,
validit de lanalyse des risques et des mesures prventives,
cohrence des niveaux cibles, validit des actions de surveillance
et des actions correctives).
Pour lensemble de ces actions, il faut tablir et maintenir des
procdures de formation du personnel ainsi quune documentation
et un enregistrement appropris de toutes les donnes.

Rfrences bibliographiques

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[9] Conseil suprieur dhygine publique de
France : Gestion du risque li aux lgionelles.
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Paris (2002).

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