1ère  STL  BTK  -­‐  10/09/2015  

 
TP  n°1  :  Mise  en  évidence  de  l’omniprésence  des  micro-­‐organismes  dans  notre  
environnement  de  travail  
 
Objectif  :  trouve-­‐t-­‐on  des  micro-­‐organismes  partout  dans  un  laboratoire  ?  
 
Contexte  :  
Nous   cherchons   à   montrer   que   les   micro-­‐organismes   sont   présents   partout   et   notamment   dans   le  
laboratoire,   notre   lieux   de   travail.   Les   manipulations   de   microbiologie   doivent   être   menées   dans   un  
environnement  contrôlé  où  la  flore  microbienne  de  contamination  est  réduite  à  son  maximum.  
 
Micro-­‐organisme  =    
 
 
 
Flore  microbienne  =    
 
 
 
Colonie  bactérienne  =    
 
 
 
 
JOUR  1  
 
I. Matériel  et  réactifs  :  
 
Ø Par  binômes  d’élèves  :  
ü 4  géloses  GTS  en  boite  de  Pétri,  
ü 1  écouvillon  stérile.  
 

Ø Pour  l’ensemble  de  la  classe  :  

ü Etuve  réglée  à  37°C  
 
II. Mode  opératoire  
 
1) Numéroter  les  boites  de  Pétri  de  1  à  4  sur  la  tranche.    
Indiquer  la  date  et  vos  initiales.    
 
 /!\  Remarque  :  ces  notations  se  font  sur  le  côté  de  la  boite  et  pas  sur  le  couvercle  !!  /!\  
 
2) Suivre  les  indications  fournies  par  le  tableau  :  
 
 

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Boites   Manipulation  
Recueillir  à  l’aide  d’un  chiffon  des  poussières  
Déposer  la  boite  ouverte  pendant  30  minutes  
1   du  laboratoire.  Secouer  le  au-­‐dessus  de  la  
sur  votre  paillasse  puis  refermer  la  boite.  
boite  ouverte  puis  refermer  la  boite.  
Déposer  la  boite  ouverte  en  face  de  la  bouche  
Déposer  3  cheveux  arrachés  sur  la  surface  de  
2   et  lire  3  fois  à  voix  basse  «  les  microorganismes  
la  gélose  puis  refermer  la  boite.  
sont  omniprésents  »  puis  refermer  la  boite.  
Déposer  l’empreinte  des  doigts  à  la  surface  de  la  gélose  puis  refermer  la  boite  (voir  technique  
3  
plus  bas)  
Appliquer  l’écouvillon  sur  un  vêtement  de  ville  (pantalon,  …)  pendant  10  secondes  puis  
4  
appliquer  le  sur  la  gélose.  Refermer  ensuite  la  boite.  
 
 
Pour  la  boîte  n°3  :  
 

- Retourner  la  boite  et  tracer  au  marqueur  un  trait  pour  délimiter  la  boîte  en  deux,  
- Inscrire  sur  le  fond  de  la  boîte  :  «  avant  décontamination  »  et  «  après  décontamination  »,  
- Appliquer   deux   de   vos   doigts   sur   la   première   moitié   de   gélose   notée   «  avant   décontamination  »  
pendant  10  à  20  secondes,  
- Bien  se  laver  les  mains  au  savon,  
- Appliquer  deux  autres  doigts  sur  la  deuxième  moitié  de  la  gélose  notée  «  après  décontamination  »  
pendant  10  à  20  secondes.  

 
 
3) Déposer  les  4  boites  COUVERCLE  VERS  LE  BAS  dans  l’étuve.  
4) Incuber  24h  à  37°C.  
 
è  Pourquoi  dépose-­‐t-­‐on  les  boites  dans  l’étuve  avec  le  couvercle  vers  le  bas  ?  
 
 
è  Donner  l’intérêt  de  l’incubation  à  37°C.  
 
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JOUR  2  
 
1) Sortir  les  boites  de  l’étuve.  
2) Observer  leur  contenu  sans  les  ouvrir.  
 
III. Compte  rendu  
 
3) Remplir  le  tableau  ci-­‐dessous  (FM  1)  
 
Description  des  observations  (présence  de  
N°  de  boite   Interprétation  
colonies,  aspect,  moisissure  présente  ?  …)  

1      

2      

3      

4      

 
Répondre  aux  questions  suivantes  :    
 
1. Quel  est  l’intérêt  de  l’incubation  ?  
 
 
 
 
 
2. Expliquer  ce  que  l’on  cherche  à  mettre  en  évidence.  
 
 
 
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3. Indiquer  quel  aurait  été  le  résultat  d’une  boite  qui  n’aurait  pas  subie  de  manipulation  et  qui  aurait  été  
incubée  comme  les  autres  ?  Expliquer  son  rôle  et  indiquer  quel  nom  lui  donner.  
 
 
 
 
 
 
 
4. Déduire  de  ces  observations  les  actions  correctrices  pour  limiter  l’impact  de  la  flore  microbienne  sur  
les  futures  manipulations  de  microbiologie.  
 

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