REACTIFS BIOLABO BILIRUBINE TOTALE

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Méthode DCA
FABRICANT :
BIOLABO SA, Réactif pour le dosage quantitatif de la bilirubine totale
02160, Maizy, France dans le plasma ou le sérum humains

2 x 200 mL Total Bilirubin

REF 97443 :
1 x 10 mL Nitrite Solution

CODE CNQ : BX

|
SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) PREPARATION DES REACTIFS

Au moins quatre sortes de bilirubines coexistent dans le sérum : la Le réactif R1 est prêt à l’emploi.
bilirubine directe (BD) correspond à la bilirubine dite mono et Préparation du réactif de travail : Mélanger 50 volumes de R1 avec
di-conjuguée ( et Bilirubine) ainsi qu’à la fraction qui est liée très 1 volume de R2 et maintenir à 2-8°C pendant 15 minutes avant
fortement à l’albumine ; la bilirubine , non conjuguée ou bilirubine utilisation.
indirecte, qui est transportée par l’albumine. La bilirubine totale (BT)
est la somme de ces différentes formes.
On distingue les ictères où prédomine la bilirubine indirecte (ictères STABILITE ET CONSERVATION
hémolytiques, maladie de Biermer, Thalassémie...etc) des ictères où Stocker à 2-8°C, à l’abri de la lumière.
prédomine la bilirubine directe (obstruction des voies biliaires extra ou • Avant ouverture, les réactifs sont stables jusqu'à la date de
intra-hépatiques, hépatites virales..etc). Enfin, les ictères où les deux péremption indiquée sur l’étiquette.
formes de bilirubine sont présentes sans prédominance (cirrhoses,
• Après ouverture, les réactifs sont stables au mois 6 mois en l’absence
maladie de Dubin-Johnson).
de contamination.
• Le réactif de travail est stable : 5 jours à 18-25°C.
PRINCIPE (4) (5) 3 semaines à 2-8°C.
Méthode basée sur le principe de Rand et Di Pasqua automatisée par Ne pas utiliser les réactifs s’ils sont troubles ou si le réactif de travail a
Golub et al. une absorbance > 0.100 à 550 nm.
La réaction entre la BT et la dichloroaniline diazotée en présence d’un Ce réactif peut voyager 1 semaine à température ambiante.
détergent ou d’un solvant conduit à un composé, l’azobilirubine dont
l’absorbance, directement proportionnelle à la concentration en BT dans
le spécimen, est mesurée à 550 nm (540-560). PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2) (6)
Sérum ou plasma (non hémolysés).
La bilirubine est photolabile. Stocker le spécimen à l’abri de la lumière.
REACTIFS • Stabilité dans le spécimen : 4 à 7 jours à 2-8°C.
2 jours à température ambiante.
flacon R1 BILIRUBINE TOTALE Spécimens pédiatriques ou ictériques : voir § MODE OPERATOIRE.
Brij 35 49 g/L
2-4 Dichloroaniline 2,7 mmol/L
Acide chlorhydrique 290 mmol/L INTERFERENCES (3) (4)
La réaction de formation de la diazobilirubine est sensible aux variations
flacon R2 SOLUTION NITRITE de température et doit être menée à température constante.
L’hémolyse entraîne une sous évaluation des résultats.
Nitrite de sodium 2,3 mmol/L Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le dosage.

PRECAUTIONS
Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
usage in vitro.
• Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes).
• Ne pas pipetter avec la bouche.
• En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
l’eau et consulter un médecin.
• La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple
demande.
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES
1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales.
2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques
CALIBRATION
• Utiliser le facteur expérimental indiqué au § CALCUL (Procédure n°1
et n°2).
• Ou BIOLABO Multicalibrator REF 95015 (Procédure n°1 uniquement)
• Ou tout calibrant raccordé sur une méthode ou un matériau de
référence (Procédure n°1 uniquement).
La fréquence de calibration dépend des performances de l’analyseur et
des conditions de conservation du réactif.
Il est recommandé de calibrer à nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de réactif.
2. Après opérations de maintenance sur l’analyseur.
3. Les valeurs de contrôle obtenues sortent des limites de confiance
indiquées, même après utilisation d’un deuxième flacon de sérum de
contrôle fraîchement reconstitué.

Version : FT 97443 21 06 2007

CONTRÔLE DE QUALITE CODE CNQ : BX MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
• BIOLABO EXATROL-N (valeurs normales) REF 95010.
Ramener les réactifs et spécimens à température ambiante.
• BIOLABO EXATROL-P (valeurs pathologiques) REF 95011.
• BIOLABO PAEDIATRIC CONTROL (valeurs pédiatriques)
REF 95403 Procédure n°1 :
• Ou tout autre sérum de contrôle titré pour cette méthode et pour le
mode opératoire sélectionné. BILIRUBINE TOTALE
• Programme externe de contrôle de la qualité. Mesurer dans des tubes à essais :
Blanc Essai
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants :
• Au moins un contrôle par série. Réactif R1 1 mL
• Au moins un contrôle par 24 heures.
Réactif de travail 1 mL
• Changement de flacon de réactif.
• Après opération de maintenance sur l’analyseur. Spécimen 100 QL 100 QL
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de
confiance indiquées, appliquer les actions suivantes : Mélanger et lire les absorbances à 550 nm (540-560) contre le blanc après 5
1. Répéter l’opération en utilisant le même contrôle. minutes d’incubation à 37°C.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un
sérum de contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test.
Procédure n°2 : Spécimens pédiatriques ou ictériques
3. Avec facteur : Vérifier les paramètres de l’analyse : longueur
d’onde, température, volume spécimen/volume réactif, temps de
mesure et facteur de calibration. BILIRUBINE TOTALE
Mesurer dans des tubes à essais :
4. Utiliser un autre flacon de réactif et répéter le test. Blanc Essai
3. Avec calibrant : Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, Réactif R1 1 mL
utiliser un autre calibrant ou un calibrant fraîchement reconstitué et
répéter le test. Réactif de travail 1 mL
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer à nouveau
en utilisant un autre flacon de réactif et répéter le test. Spécimen 20 QL 20 QL
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le Mélanger et lire les absorbances à 550 nm (540-560) contre le blanc après 5
service technique BIOLABO ou le revendeur local. minutes d’incubation à 37°C.

Remarques :
INTERVALLES DE REFERENCE (2)
1. La coloration développée par la réaction de la bilirubine est stable 1
Bilirubine heure à l’abri de la lumière.
Totale (mg/L) [Cmol/L]
2. Faire un blanc réactif pour tenir compte de la coloration éventuelle du
Nouveau-né Prématuré à terme Prématuré à terme réactif de travail.
3. Des procédures spécifiques sont disponibles pour les analyseurs
Dans le cordon < 20 < 20 [< 34] [< 34] automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
0-1 jour < 80 14-87 [< 137] [24-149]
1-2 jours < 120 34-115 [< 205] [58-197]
CALCUL

3-5 jours < 160 15-120 [< 274] [26-205] Le résultat est déterminé d’après la formule suivante :

Adulte Bilirubine Totale Avec calibrant (Procédure n°1 uniquement) :

(et enfant > 5 jours) mg/L [Qmol/L]

Abs (Essai - Blanc) spécimen
> 5 jours-60 ans 3-12 [5-21] Résultat = x concentration du calibrant
Abs (Essai - Blanc) calibrant
60-90 ans 2-11 [3-19]
> 90 ans 2-9 [3-15]
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres valeurs Avec facteur :
de référence pour la population concernée. Procédure n°1 : mg/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc] x 148*
Qmol/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc] x 253*

LIMITE DE LINEARITE Procédure n°2 : mg/L = [Abs. Essai – Abs. Blanc] x 686*
Mode opératoire n°1 : jusqu’à 200 mg/L (342 Qmol/L). Cmol /L =[Abs. Essai – Abs. Blanc] x 1173*
* Ces facteurs sont donnés à titre indicatif et peuvent varier légèrement
Au-delà, ne pas diluer le spécimen : appliquer le mode opératoire n°2.
suivant l'appareillage utilisé et le lot de réactif. Il est conseillé de les
Mode opératoire n°2 : jusqu’à 1000 mg/L (1710 Qmol/L) vérifier à l'aide d'un sérum de contrôle à taux élevé (Procédure n°1 :
Spécimen pédiatrique : appliquer le mode opératoire n°2 utiliser BIOLABO EXATROL-P, Procédure n°2 : utiliser BIOLABO
PAEDIATRIC CONTROL).
PERFORMANCES ( PROCEDURE N°1)
REFERENCES
Intra-série Taux moyen Taux élevé Inter-série Taux moyen Taux élevé (1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
N = 20 N = 20 W.B. Saunders (1999) p. 1133-1137.
Moyenne mg/L 12,3 52,8 Moyenne mg/L 12,0 54,8 (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 88-91.
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
S.D. mg/L 0,18 0,9 S.D.mg/L 0,59 1,52
p.3-90 à 3-110
C.V. % 1,5 1,7 C.V. % 4,87 2,79 (4) RAND R. N. and DI PASQUA A. A new diazo method for determination of
bilirubin. Clin. Chem. (1962) 8, n°6, p,570-578
Limite de détection : environ 1 mg/L
(5) GOLUB M. : An automated method for determination of serum bilirubin. Clin.
Sensibilité pour 10 mg/L : 70 mAbs à 550 nm. Chem. (1964) 10, p.399-405
Comparaison avec un réactif de la concurrence : (6) Henry RJ, Clin Chem : Principles and technics. Harper and Row,p.592 (1965).
y = 1,0042 + 0,15 r = 0,9980
Made in France

Version : FT 97443 21 06 2007

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