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UNIVERSITE DE DOUALA THE UNIVERSITY OF DOUALA
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FACULTE DES SCIENCES FACULTY OF SCIENCE
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LICENCE PROFESSIONNELLE TECHNIQUES DE LABORATOIRES

SIP DE UTL 355 – TECHNIQUES DE BIOLOGIE MOLECULAIRE

Exposé sur le thème 1

ELECTROPHORESE EN CHAMP PULSE

Groupe 1 :
BOUTCHOUANG Rébecca
DJOUKANG DJOUMESSI Laurette
Année académique : 2020 – 2021

Enseignant : Pr KORO
 Exposé de Biologie moléculaire : électrophorèse en champ pulsé

PLAN DE L’EXPOSE
INTRODUCTION
I. L’ELECTROPHORESE

I.1. Définition

I.2. Principe

I.3. Les différents types d’électrophorèse

I.3.1. L’électrophorèse libre, en veine liquide selon Tisélius

I.3.2. L’électrophorèse sur supports poreux (électrophorèse de zone)

II. L’ELECTROPHORESE SUR CHAMP PULSE

II.1. Définition

II.2. Principe

II.3. Rôles

II.4. Avantages et inconvénients

II.4.1. Avantages

II.4.2. Inconvénients

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 Exposé de Biologie moléculaire : électrophorèse en champ pulsé

INTRODUCTION

En solution ou en suspension dans l’eau, dans les solutions aqueuses ou dans certains
autres liquides, des macromolécules (protéines, acides nucléiques), des particules, des grains
d’émulsion, ou même des bactéries, tendent à se déplacer sous l’effet d’un champ
électrique. C’est le phénomène d’électrophorèse, découvert en 1892 par Linder et Picton et
développé en tant que méthode analytique et préparative dans les années 30 par Tiselius
(Nobel 1949).

L’importance du phénomène d’électrophorèse, outre son intérêt théorique propre,

réside dans l’utilisation très large qu’on en fait, à des fins analytiques ou préparatives, plus
particulièrement pour l’étude et le fractionnement des protéines et des acides nucléiques.

L’électrophorèse constitue certainement la technique de fractionnement des

macromolécules la plus communément utilisée par les biochimistes et les biologistes
d’aujourd’hui. Les raisons de cette popularité sont multiples : il s‘agit d’une technique
analytique de haute résolution (elle peut fournir des informations sur la taille, la
conformation et la charge des molécules), mais qui peut aussi être préparative.

Elle est relativement facile à apprendre et à mettre en œuvre. Son coût d’utilisation est
généralement faible pour les laboratoires. C’est une technique polyvalente et qui peut être
utilisée en parallèle, ou en série, avec de nombreuses autres techniques biochimiques ou
biologiques.

On doit notamment à l’électrophorèse la découverte, la caractérisation, la purification de

nombreux constituants des tissus animaux et végétaux ; l’étude des sérums pathologiques,
de nouvelles classifications taxonomiques ; et, plus récemment, le contrôle de la
composition et de la qualité de nombreux produits alimentaires.

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 Exposé de Biologie moléculaire : électrophorèse en champ pulsé

I. L’ELECTROPHORESE

I.1. Définition

Le terme « électrophorèse » décrit la migration de particules chargées sous l’influence d’un

champ électrique. Le préfixe « électro » fait référence à l’électricité et la racine « phorèse »
vient du grec phoros, qui signifie « porter d’un côté à l’autre ».

L’électrophorèse est donc une technique d’analyse et de séparation basée sur les critères
de la charge électrique et la taille des molécules. La migration différentielle de particules
chargées électriquement, se fait sous l’influence d’un champ électrique. Seules les particules
chargées positivement ou négativement sont attirées par les pôles opposés du champ.

Figure 1 : Déplacement des particules chargées dans un

champ électrique

I.2. Principes

L’électrophorèse est une technique séparative. Le principe consiste à soumettre un mélange

de molécules à un champ électrique. Ce qui entraine la migration des molécules chargées. En
fonction des différents paramètres charge, masse, forme, nature du support, conditions
physico-chimiques, la vitesse de migration sera variable. Cela va permettre la séparation des
différentes molécules. A partir de ce principe général, il existe plusieurs variantes de cette
technique adaptées selon les situations.

I.3. Les différents types d’électrophorèse

Le choix du support est dicté par la nature des molécules à séparer et selon le support, on
distingue deux types d’électrophorèse : l’électrophorèse libre en veine liquide et
l’électrophorèse de zones.

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 Exposé de Biologie moléculaire : électrophorèse en champ pulsé

I.3.1. L’électrophorèse libre, en veine liquide selon Tisélius (1937)

Cette technique est réalisée dans un tube en U de section carrée. Ceci afin de pouvoir
réaliser des mesures optiques au travers du tube, comme avec une cuve de spectromètre. La
séparation n’est pas totale, mais les frontières qui se forment sont mises en évidence par
des méthodes optiques (absorption UV, indice de réfraction, fluorescence…). Cette méthode
est utilisée en recherche pour mesurer la mobilité électrophorétique et pour vérifier la
pureté des protéines.

I.3.2. L’électrophorèse sur supports poreux (électrophorèse de zone)

Ce type d’électrophorèse utilise un support poreux pour stabiliser la phase liquide. Le

support doit être homogène, poreux et inerte. Différents types de supports peuvent être
utilisés. Les différents types d’électrophorèse de zones sont souvent nommés en fonction du
support :
 Papier
 Acétate de cellulose
 Semi-solide (gels)
 Différents types d’électrophorèse sur gel :
 Electrophorèse sur gel d’agarose
 Electrophorèse en champ pulsé
 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE)
 Electrophorèse bi-dimensionnelle
 Les électrophorèses peuvent aussi être réalisées en conditions dénaturantes
(détergents type SDS ou urée)

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II. L’ELECTROPHORESE EN CHAMP PULSE

II.1. Définition

C’est une électrophorèse dans laquelle la direction du champ électrique est changée
périodiquement.

Figure 2 : Alternance de couples d'électrodes A ou B en électrophorèse en champ pulsé

Développées à partir de 1983, les techniques d’électrophorèse de l’ADN en champ pulsé

pourraient permettre de faire le lien entre l’étude de l’ADN au niveau ''macromoléculaire''
par analyse génétique classique (établissement de caryotypes et de groupes de liaison,
cytogénétique…) et la structure de nombreux gènes pris individuellement par les méthodes
du génie génétique. Ce type d’électrophorèse permet en effet de séparer des molécules
d’ADN de grandes tailles (pouvant aller actuellement jusqu’à quelques millions de bases)
avec une très bonne résolution, permettant l’établissement de cartes précises de régions
importantes de chromosomes à l’échelle de la mégabase, comme celles du complexe HLA
chez l’homme ou la séparation de petits chromosomes comme ceux de la levure.

Figure 3 : Comparaison entre une électrophorèse sur gel simple et une électrophorèse en champ pulsé

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II.2. Principe

Les techniques classiques d’électrophorèse sont fondées sur l’effet tamisant des supports
solides utilisés (gels d’agarose ou d’acrylamide). En effet, comme la charge de l’ADN
(conférée par la présence des groupes phosphates H3PO4 -) est proportionnelle à sa taille, la
densité de charge est constante et les fragments d’ADN linéaires migrent à la même vitesse
dans un champ électrique constant, quelle que soit leur taille. C’est au contraire l’effet
tamisant du support solide utilisé qui joue le rôle de différentiel de migration, les molécules
d’ADN étant d’autant plus freinées qu’elles sont plus grandes.

Cependant, au-delà de 50 000 paires de bases, la taille des fragments d’ADN est
supérieure au diamètre des plus larges pores des supports d’électrophorèse, annulant tout
effet de tamisage différentiel. L’utilisation de support à pores plus larges a permis de reculer
légèrement la limite supérieure de séparation, mais les gels correspondants sont
extrêmement fragiles et de maniement délicat. C’est la manipulation d’un tout autre
paramètre, la nature du champ électrique, qui a permis de réaliser les progrès les plus
spectaculaires, permettant la migration d’ADN de tailles pouvant aller jusqu’à quelques
milliers, voire quelques dizaines de milliers de bases.

Au lieu d’un champ électrique unidirectionnel, uniforme et continu, l’électrophorèse

pulsée utilise deux champs d’orientations différents, appliqués de façon alternative. Des
électrodes étant placées sur les divers côtés de l’appareil utilisé, un pulseur permet
d’alterner l’établissement des champs électriques et de choisir le temps d’application de
chacun d’eux (temps de pulse). Entre deux applications successives, les molécules subissent
un phénomène de réorientation lié à la différence de direction entre les champs.

Le principe de cette électrophorèse consiste à changer l’orientation et/ou la polarité du

champ électrique alternativement au cours du temps. A chaque modification du champ, la
molécule d’ADN doit se réorienter parallèlement au niveau champ. Le temps nécessaire à la
réorientation est proportionnel à la longueur de la molécule. Lorsque le champ est rétabli
dans son sens initial, la molécule doit une nouvelle fois se réorienter. Ces temps de
réorientation provoquent un retardement de la migration nette qui est proportionnel à la
taille de la molécule. Le support de migration est un gel d’agarose à 1% et la taille des
fragments séparés est de l’ordre de 50 kb à quelques mégabases.

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Equipements et conditions de l’électrophorèse en

champ pulsé :
- Chambre d’électrophorèse
- Gel d’agarose imprégné de tampon
- Paires d’électrodes disposés en hexagone
- Générateur de tension
- Module de refroidissement (14-15°C)
- Pulseur (module de contrôle) : temps de
début/temps d’arrêt d’une direction, durée
Figure 4 : Chambre d'électrophorèse
de la migration, angle d’électrophorèse
(120°) et tension appliquée (6V/cm).

II.3. Rôles

Les techniques d’électrophorèse en champ pulsé permettent, en alternant l’orientation du

champ électrique dans le gel, de faciliter la migration des molécules de grandes tailles. Ces
techniques sont largement utilisées, notamment dans le cadre des approches
d’épidémiologie moléculaire.

L’électrophorèse est un examen est prescrit en cas de suspicion de :

• Syndrome inflammatoire,
• Infection aiguë ou chronique,
• Problème hépatique ou rénal,
• Maladie auto-immune.
Dans le cas de l’électrophorèse de l’hémoglobine, l’intérêt recherché est de :
• Détecter les anomalies de forme et de concentration de l’hémoglobine (protéine des
globules rouges servant au transport de l’oxygène).
• Approfondir les tests en cas de résultats anormaux à la formule sanguine (globules
rouges, hémoglobine, VGM, etc.…)
• Approfondir les tests en cas de présence de symptômes d’anémie (fatigue, pâleur,
etc…)
• Identifier les plus communes des 700 formes anormales d’hémoglobine retrouvées
dans le monde. Toutes les formes anormales sont associées à des anémies de
sévérité variable. Dans les populations africaines, on retrouve plus fréquemment
comme désordre héréditaire affectant l’hémoglobine, l’hémoglobine S.

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II.4. Avantages et inconvénients

II.4.1. Avantages

Les principaux avantages sont :

 Séparation des molécules d’ADN de très grandes tailles (de 10 Kb à 10 Mb) ;

 Pouvoir discriminant important ;
 Grande résolution, bonne reproductibilité intra-laboratoire ;
 Applicable à un grand nombre d’espèces ;
 Séparation des chromosomes d’un grand nombre d’eucaryotes inférieurs cas des
levures

II.4.2. Inconvénients

Les principaux inconvénients sont :

 Technique longue : 4 à 5 jours en moyenne (plus le fragment d’ADN est grand, plus le

temps de pulse est longue, et en conséquence le temps de migration total sera long) ;
 Technique coûteuse : appareillage, logiciel, réactifs et temps ;
 Technique délicate, manuelle, nécessitant du personnel qualifié ;
 Résultats obtenus non standardisés (comparaison de profils limités à des souches
isolées dans le même temps et au sein d’un même laboratoire).

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Références

Bibliographie :

 Charlionet, R., Rivat, C. Electrophorèse : principes et concepts méthodologiques. Editions

INSERM, 1990.

Sites actualisés sur l’électrophorèse (Internet) :

 http://www.chu-rouen.fr/page/electrophorese-en-champ-pulse , du 14/12/2020 à 16h46

 https://www.em-consulte.com/article/61455/electrophorese-en-champ-pulse , du

16/12/2020 à 23h15

 https://www.universalis.fr/encyclopedie/electrophorese , du 16/12/2020 à 23h15

 (209) Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE) – YouTube

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