L lectrophorse

Llectrophorse est avec la chromatographie la

principale des techniques utilises en biologie pour la
sparation et la caractrisation des molcules.
Elle a quelques applications en chimie, mais est
principalement utilise en biochimie ou biologie
molculaire pour la sparation des protines ou celle
des acides nucliques.

Le principe:
consiste soumettre un mlange de molcules
un champ lectrique ce qui entraine la migration des
molcules charges. En fonction de diffrents
paramtres (charge, masse, forme, nature du
support, conditions physico-chimiques) la vitesse de
migration va tre variable, ce qui permet la
sparation des diffrentes molcules.
Dans un milieu donn, la sparation des particules
se fait en fonction de leur charge et pour des charges
identiques, en fonction de leur taille.

Application dElectrophorse :
dterminer le nombre de sous-units et la masse molaire
des protines
sparer des protines (EPP ,Hmoglobine, Lipoproteines
,LDH..
sparer des acides nucliques

Facteurs influenant la migration

lctrophortique:

F=qE

E: champ lectrique
q:charge

1-La mobilit lectrique:

De cette relation, on peut tirer que la mobilit

dune particule dpend de 3 facteurs:
Elle est proportionnelle sa charge(q)PhPhi
Elle est inversement proportionnelle son rayon(r)
Elle est inversement proportionnelle la viscosit
du milieu()

2-des courants liquidiens :

le courant d'lectro-endosmose :
Dans les conditions exprimentales, le support se charge
ngativement; une couche mobile de charges positives se
forme dans le solvant, au contact du support et entrane
globalement la phase liquide vers la cathode.

les courants d'vaporation : le passage du courant

s'accompagne d'un chauffement du support (par effet Joule),
ce qui entrane l'vaporation de l'eau de la phase liquide; cet
effet est maximal au milieu de la bande
3-de facteurs lis la nature du support : adsorption, texture.

Diffrentes types dElectophorse :

a-L'lectrophorse en veine liquide
frontire mobile:
en veine liquide selon Tiselius (1937), est
ralise dans un tube en U de section carre.
la sparation n'est pas totale,

b) llectrophorse de zone, lectrophorse de support

nommes en fonction du type de support:
* Electrophorse sur papier ou actate de cellulose:
Pour les petites molcules qui migrent a une vitesse
proportionnelle leur charge sur le support
(hmoglobine).
* Electrophorse sur gel:
Permet de conjuguer la mobilit lectrophortique un
effet de filtration sur gel, la taille des pores limitant la
vitesse de migration. On utilise gnralement des gels
d'agarose ou de polyacrilamide qui se solidifient.

*lectrophorse capillaire
L'lectrophorse capillaire reprsente une
famille de techniques qui utilisent des
capillaires troits (diamtre interne de 10 200
mm) pour raliser avec une trs grande
efficacit la sparation lectrophortique de
molcules de tailles trs variables. Le domaine
d'application de cette technologie est trs vaste
et elle permet d'analyser des macromolcules
complexes telles que les protines et les acides
nucliques ou des soluts de petite taille comme
les mdicaments organiques, les anions et
cations inorganiques. Des voltages trs
importants (plusieurs dizaines de kV) sont
utiliss pour sparer les molcules sur la base
de leur diffrence de rapport charge/taille.

Mthodes de rvlation:
In situ, dpend de la nature et ce quon
veut rvler
protines:
Rouge ponceau
Bleu de coomassie
Nitrate dargent (AgNO3) bandes brun
orang noir

Lipoproteine:
Noir soudan
acides Nucliques:
BET (bromure dethidium)
Bisbenzimide
DA DAPI(diamidinophenylindole))